THỨC ĂN CHĂN NUÔI – XÁC ĐỊNH MADURAMICINAMMONIUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC PHA ĐẢO KẾT HỢP TẠO DẪN XUẤT SAU CỘT

TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA Dự thảo TCVN:2018 Xuất lần THỨC ĂN CHĂN NUÔI – XÁC ĐỊNH MADURAMICINAMMONIUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC PHA ĐẢO KẾT HỢP TẠO DẪN XUẤT SAU CỘT Animal feeding stuffs – Determination of maduramicin-ammonium by reversed-phase HPLC using post-column derivatisation HÀ NỘI – 2018 Lời nói đầu TCVN :2014 xây dựng dựa theo EN 15781:2009; TCVN :2018 Viện Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN :2018 Dự thảo Thức ăn chăn nuôi – Xác định hàm lượng maduramicinammonium phương pháp HPLC pha đảo kết hợp với tạo dẫn xuất sau cột Animal feeding stuffs – Determination of maduramicin-ammonium by reversed-phase HPLC using post-column derivatisation Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để xác định hàm lượng maduramicin thức ăn chăn nuôi thức ăn bổ sung (premix) Hàm lượng maduramicin thông thường thức ăn chăn nuôi mg/kg, premix 500 mg/kg Giới hạn định lượng mg/kg Giới hạn phát 0,5 mg/kg CHÚ THÍCH: Có thể có giới hạn định lượng thấp cần người sử dụng xác nhận Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987), Nước dùng để phân tích phịng thí nghiệm – u cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Chiết mẫu bằng metanol Tiến hành xác định maduramicin bằng phương pháp HPLC pha đảo kết hợp sử dụng tạo dẫn xuất hậu cột với vanillin phát 520 nm Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại phân tích công nhận, trừ có quy định khác CẢNH BÁO - Sử dụng tất dung môi dung dịch tủ hút Đeo kính an tồn, mặc quần áo bảo hộ tránh tiếp xúc với da 4.1 Nước, theo loại tiêu chuẩn ISO 3696, 4.2 Metanol (CH3OH), loại dùng cho HPLC 4.3 1,5-dimetylhexylamin (CH3(CH2)4CH2N(CH3)2) 4.4 Axit sulfuric (H2SO4), độ tinh khiết 95 % đến 97 % theo thể tích 4.5 Ortho-phosphoric axit, (H3PO4), độ tinh khiết khoảng 85 % theo thể tích 4.5.1 Axit o-phosphoric pha lỗng Hồ tan 10 ml axit ortho-phosphoric (4.5) với nước (4.1) đủ 100 ml 4.6 Kali dihydrogen phosphate (KH2PO4) 4.7 Dung dịch đệm phosphate, (KH2PO4) = 10 mmol/l, pH 4,0 Hòa tan 1,36 g kali hydri phosphate (4.6) vào 500 ml nước (4.1) Thêm 3,0 ml axit orttho-phosphoric (4.5) 10 ml 1,5-dimethylhexylamine (4.3) Điều chỉnh độ pH lên 4,0 bằng axit ortho-phosphoric pha loãng (4.5.1) dùng nước hoàn thành đủ 1000 ml Các dung dịch có thể bảo quản vài tuần, nễu thấy có nấm phát triển chuẩn bị dung dịch 4.8 Pha động Hòa tan 100 ml dung dịch đệm phosphate (4.7) với metanol (4.2) đủ 000 ml 4.9 Vanillin, 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde, độ tinh khiết tối thiểu 98 % tính theo thể tích (loại sử dụng cho HPLC) 4.9.1 Thuốc thử vanillin Hoà tan 10 g vanillin (4.9) hỗn hợp gồm 250 ml metanol (4.2) 5,0 ml axit sulfuric (4,4) Trộn kỹ xử lý bằng siêu âm vài chân không nhiệt độ phòng Dung dịch phải chuẩn bị hàng ngày trước sử dụng phải làm mát bằng nước đá q trình sử dụng CHÚ THÍCH: Dimethylaminobenzaldehyde (DMAB) phù hợp để sử dụng làm thuốc thử tạo dẫn xuất sau cột (Chi tiết đưa Phụ lục B) nhiên, chưa có việc kiểm tra đầy đủ loại thuốc thử 4.10 Maduramicin CẢNH BÁO – Maduramicin chất độc Tránh hít phải dung dịch của 4.11 Các dung dịch chuẩn 4.11.1 Dung dịch chuẩn gốc, 100 µg/ml Cân 10 mg maduramicin chính xác tới 0,1 mg gần (4.10) cho vào vào bình định mức 100 ml Hòa tan metanol (4.2) haonf thành đủ đến vạch Bảo quản nhiệt độ 4°C Chuẩn bị tươi tháng 4.11.2 Dung dịch ch̉n, 10 µg/ml Pha lỗng 10 ml dung dịch chuẩn gốc (4.11.1) đến 100 ml với metanol (4.2) bình định mức 100 ml Bảo quản nhiệt độ 4°C Chuẩn bị tươi tuần 4.11.3 Các dung dịch hiệu chuẩn Nghiên cứu liên phòng thí nghiệm thực với dung dịch hiệu chuẩn Cho vào loạt bình định mức dung tích 50 ml: 1,0 ml, 2,0 ml, 3,0 ml, 4,0 ml, 5,0 ml, 6,0 ml, 8,0 ml 10,0 ml dung dịch chuẩn trung gian (4.11.2) Thêm metanol (4.2) vào bình vạch trộn Hàm lượng dung dịch tương ứng với: 0,2 μg, 0,4 μg, 0,6 μg, 0,8 μg, 1,0 μg, 1,2 μg, 1,6 μg 2,0 μg maduramicin ml dung dịch Ngoài ra, có thể sử dụng dung dịch hiệu chuẩn với nồng độ maduramicin lần lượt là: 0,4 μg, 0,7 μg, 1,0 μg, 1,5 μg 2,0 μg ml dung dịch Các dung dịch hiệu chuẩn nên chuẩn bị vào ngày phân tích Thiết bị, dụng cụ Sử dụng trang thiết bị thí nghiệm thông thường, thiết bị sau: 5.1 Máy ly tâm 5.2 Bể siêu âm 5.3 Hệ thống HPLC bao gồm: 5.3.1 Bơm không xung, tốc độ 0,4 ml/min 5.3.2 Hệ thống bơm mẫu, bơm bằng tay tự động, có vòng bơm thích hợp để bơm 50 μl lần 5.3.3 Detector UV/VIS, phù hợp để đo 520 nm CHÚ THÍCH: Nhiễu tốt < 1.10-5 AU (250 nm, 600 nm) 5.3.4 Máy tích phân máy tính 5.3.5 Bộ phản ứng sau cột, bao gồm CHÚ THÍCH: Tránh sử dụng ống thép không rỉ phản ứng sau cột detector 5.3.5.1 Buồng trộn PEEK 5.3.5.2 Cuộn phản ứng PTFE, 1,5 ml đến 2,0 ml hoạt động 95 °C Cuộn phản ứng có thể cuộn bán sẵn nó có thể làm bằng cách sử dụng đoạn ống 316 SS, đường kính 0,5 mm, dài từ 7,5 m đến 10 m, phù hợp với phản ứng (gợi ý: quấn đoạn ống quanh nhôm nó vừa khít với lò phản ứng bảo đảm truyền nhiệt tốt đến cuộn dây) Nên sử dụng cuộn dây có vỏ bọc bằng vải bán sẵn Để đảm bảo pha trộn hiệu thuốc thử với dung môi cột, nên sử dụng trộn nhánh (chữ T) tĩnh tạo xốy (khơng phải trộn thơng thường) trước cuộn phản ứng CHÚ THÍCH 1: Nếu gặp vấn đề bọt khí hệ, tối ưu hóa chiều dài ống polytetrafluoroethylene (PTFE) (ví dụ: m ID 0,25 mm) đặt giữa bơm thuốc thử buồng trộn chiều dài ống Teflon (ví dụ: m ID 0,17 mm) đặt giữa lò phản ứng detector CHÚ THÍCH 2: Có thể sử dụng nhiệt độ khoảng từ 92°C đến 98°C, đảm bảo độ ổn định cao (1 °C) 5.3.5.3 Lò phản ứng hoặc nồi cách thủy dùng cho cuộn phản ứng PTFE, phù hợp để vận hành 95 °C 5.3.6 Bơm thuốc thử sau cột, không tạo xung, dung tích lưu lượng 0,4 ml/min 5.3.7 Cột sắc ký lỏng, 250 mm x 4,6 mm, vật liệu μm, Hypersil BDS C18 tương đương 5.3.8 Lò cột, phù hợp để vận hành 40 °C 5.4 Máy lắc, máy quay máy lắc rung 5.5 Tủ đông lạnh 5.6 Màng lọc, PTFE, kích thước lỗ lọc khoảng 0,20 μm đến 0,45 μm Lấy mẫu Điều quan trọng phòng thí nghiệm phải nhận mẫu thật đại diện không bị hư hỏng thay đổi trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu phần phương pháp nêu tiêu chuẩn Phương pháp lấy mẫu thực hiện theo TCVN (ISO 6497) Chuẩn bị mẫu thử Việc chuẩn bị mẫu phần phương pháp quy định tiêu chuẩn Phương pháp chuẩn bị mẫu thử khuyến cáo TCVN ( ISO 6498) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu kiểm tra chất lượng 8.1.1 Thử mẫu trắng Để thực thử nghiệm đánh giá thu hồi (8.1.2) cần phân tích mẫu trắng bảo đảm rằng chất maduramicin chất gây nhiễu không có mặt Mẫu thử trắng phải tương tự mẫu thử thể loại chất maduramicin chất gây nhiễu không phát thấy 8.1.2 Phép thử độ thu hồi Cần thực phép thử nghiệm thu hồi bằng cách phân tích mẫu trắng chủ ý cho thêm vào lượng maduramicin tương đương với lượng maduramicin có mẫu thử Để tăng cường mức mg/kg, lấy 500 μl dung dịch chuẩn (4.11.1) cho vào bình bình Thêm 10 g mẫu trắng, trộn để tĩnh 10 min, sau đó trộn lại vài lần trước tiếp tục tiến hành bước chiết (8.2) Ngồi ra, khơng có mẫu trắng tương tự mẫu thử (8.1.1), phép thử nghiệm thu hồi có thể thực bằng phương pháp thêm chuẩn Trong trường hợp này, mẫu thử (mẫu cần phân tích) cho thêm vào lượng maduramicin tương đương với lượng maduramicin có mẫu thử Mẫu sẽ phân tích với mẫu không cho thêm maduramicin lượng thu hồi sẽ tính bằng phép tính trừ Khả thu hồi chấp nhận từ 90 % đến 110 % 8.2 Chiết 8.2.1 Thức ăn chăn nuôi Cân lấy 10 g chính xác tới 0,01 g mẫu nghiền nhỏ (với hạt ≤ mm) cho vào bình định mức 250 ml thêm 50 ml metanol (4.2) Đậy kín bình bằng cách phù hợp đặt bình vào máy phá mẫu siêu âm (5.2) 50 °C 20 Lắc mạnh bình bằng máy (5.4), bảo quản để nguội đến nhiệt độ phòng khoảng 15 min, chắt lấy lớp chất lỏng xuốt bên cho vào tủ đá lạnh (5.5) h đến h để lắng chất béo Sau đó, lấy phần mẫu cho chạy ly tâm đến Sau lọc qua màng (5.6), lấy 50 μl dung dịch bơm vào máy HPLC 8.2.2 Premix Cân g mẫu nghiền nhỏ (với hạt ≤ 1mm) chính xác đến 0,01 g, cho vào bình định mức 250 ml thêm 50 ml metanol (4.2) Đậy kín bình bằng cách phù hợp, đặt bình vào máy phá mẫu siêu âm (5.2) 50 °C 20 Để nguội đến nhiệt độ phòng, lắc mạnh bình bằng máy (5.4), bảo quản vài phút, chắt lấy phần lớp chất lỏng xuốt bên pha loãng với metanol theo ty lệ 1:10 cho vào tủ đá lạnh (5.5) h đến h để lắng chất béo Sau đó, lấy phần mẫu cho chạy ly tâm đến Sau lọc qua màng (5.6), lấy 50 μl dung dịch bơm vào máy HPLC CHÚ THÍCH: Có thể sử dụng lượng mẫu nhiều hơn, sẽ xác nhận người sử dụng Trong trường hợp số dùng lượng mẫu nhiều phải điều chỉnh lượng dung môi để chiết cho phù hợp CẢNH BÁO – Maduramicin chất độc Tránh hít phải tránh tác động của độc tố của chất nghiền mẫu 8.3 Xác định HPLC 8.3.1 Điều kiện chạy HPLC Các điều kiện sau đưa hướng dẫn, điều kiện khác có thể sử dụng miễn chúng cho kết tương đương Cột phân tích Như 5.3.7 Pha động Như 4.8 Nhiệt độ lò cột 40°C Tốc độ dòng 0,4 ml/phút Bước sóng phát 520 nm Thể tích bơm mẫu 50 µl Chất phản ứng sau cột vanillin (4.9.1) Tốc độ bơm thuốc thử 0,4 ml/phút Nhiệt độ lò phản ứng 95°C Thời gian lưu Khoảng 25 phút Thời gian chạy sắc ký 30 đến 35 phút Kiểm tra tính ổn định hệ thống sắc ký, bơm vài lần dung dịch chuẩn (4.11.3) chứa 1,0 μg/ml vào hệ, đạt độ ổn định diện tích pic thời gian lưu Làm việc điều kiện mô tả sẽ thu phân biệt rõ giữa đường sở với thể mang ion (ionophores) salinomycin, narasin, monensin semduramycin 8.3.2 Dựng đồ thị hiệu chuẩn Bơm dung dịch chuẩn (4.11.3) vài lần vào hệ sắc ký xác định giá trị trung bình diện tích pic nồng độ Vẽ đồ thị hiệu chuẩn bằng cách thể trục tung giá trị trung bình diện tích pic dung dịch chuẩn, trục hoành nồng độ tương ứng, μg/ml, dung dịch chuẩn 8.3.3 Dung dịch mẫu thử Bơm mẫu chiết (8.2) ít lần vào hệ sắc ký, thể tích mẫu bơm tương tự thể tích dung dịch chuẩn xác định diện tích giá trị trung bình diện tích pic maduramicin Tính kết Từ giá trị trung bình 1) diện tích pic maduramicin mẫu thử, xác định nồng độ dung dịch mẫu thử, μg/ml, tìm giá trị tương ứng đồ thị hiệu chuẩn (8.3.2) 1) Chỉ lấy diện tích phép tính Sử dụng công thức sau để tính toán khối lượng maduramicin (wm) mẫu, tính bằng mg/kg Trong đó: ρm nồng độ khối lượng maduramicin dịch chiết mẫu (8.2) μg/ml; m khối lượng phần mẫu thử, g; fd hệ số pha lỗng theo (8.2) 10 Giải thích về khẳng định liệu Việc nhận biết (nhận diện) maduramicin có thể khẳng định bằng phương pháp đồng sắc ký Dịch chiết mẫu (8.2) tăng cường bằng cách cho thêm lượng định dung dịch chuẩn Lượng maduramicin cho thêm phải tương đương với lượng maduramicin tìm thấy dịch chiết mẫu Chỉ có chiều cao pic maduramicin tăng cao sau tính lượng thêm vào dịch chiết mẫu Chiều rộng pic trung điểm chiều cao pic phải nằm khoảng ± 10% so với chiều rộng ban đầu pic maduramicin dịch chiết mẫu chưa tăng cường 11 Độ chụm 11.1 Nghiên cứu cộng tác Chi tiết nghiên cứu hợp tác phương pháp tóm tắt Phụ lục A Các giá trị thu từ nghiên cứu hợp tác có thể không áp dụng cho dải nồng độ mẫu khác với dải nồng độ mẫu cho 11.2 Độ lặp lại Sự khác biệt tuyệt đối giữa hai kết thử độc lập, thu bằng cách sử dụng phương pháp, chất liệu thử, phòng thí nghiệm kỹ thuật viên thực hiện, sử dụng thiết bị khoảng thời gian ngắn, sẽ không vượt 5% trường hợp vượt giới hạn lặp lại r 11.3 Độ tái lập Sự khác biệt tuyệt đối giữa hai kết thử độc lập, thu bằng cách sử dụng phương pháp chất liệu thử nghiệm phòng thí nghiệm khác với kỹ thuật viên khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác sẽ không vượt % trường hợp vượt giới độ tái lập R 12 Báo cáo kết thử nghiệm Báo cáo kết thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để xác định đầy đủ mẫu; b) Phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, có tham chiếu đến tiêu chuẩn này; d) Kết kiểm tra thu được, tính lặp lại kiểm tra, kết cuối được, e) chi tiết không nêu tiêu chuẩn coi tùy chọn, với chi tiết cố có thể ảnh hưởng đến kết thử nghiệm PHỤ LỤC A (tham khảo) Kết nghiên cứu liên phịng thí nghiệm Nghiên cứu liên phòng thí nghiệm châu Âu gồm 10 phòng thí nghiệm quốc gia thực mẫu khác nhau: Mẫu A: thức ăn cho gà, % chất béo, hàm lượng maduramicin 2,5 mg/kg Mẫu B: thức ăn cho gà, % chất béo, hàm lượng maduramicin 4,5 mg/kg Mẫu C: thức ăn cho gà tây, hàm lượng maduramicin mg/kg Mẫu D: thức ăn cho gà, % chất béo, hàm lượng maduramicin mg/kg Mẫu E: Premix cho gà, hàm lượng maduramicin 450 mg/kg CHÚ THÍCH 1: Thức ăn dành cho gà thịt có chứa bột mì, gạo vỡ, khơ đậu nành ép, thức ăn gluten ngô mỡ lợn với khối lượng cơng nghiệp thơng thường CHÚ THÍCH 2: Thức ăn Thổ Nhĩ Kỳ chứa lúa mì, ngơ, khơ đậu nành ép, hạt cải, đậu Hà Lan, protein khoai tây mỡ lợn với khối lượng thông thường Phép thử nghiệm Viện Kiểm định Chất lượng Sản phẩm Nông nghiệp Chính phủ Hà Lan (RIKILT) tổ chức thực năm 2002 kết thu phân tích thống kê theo ISO 5725-1 ISO 5725-2 để cung cấp dữ liệu chính xác trình bày Bảng A.1 Bảng A.1 – kết nghiên cứu liên phịng thí nghiệm maduramicin Các chỉ tiêu Mẫu A B C D E Số phòng thí nghiệm tham gia 10 10 10 10 10 Số phòng thí nghiệm sau trừ ngoại lệ 10 10 10 Số kết thử nghiệm từ phòng thí 20 20 18 20 17 Giá trị trung bình maduramicin, mg/kg 2,62 4,44 5,05 9,37 464 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, mg/kg 0,22 0,36 0,17 0,58 14,6 Hệ số biến thiên lặp lại, r,% 8,53 8,19 3,29 6,18 3,15 Giới hạn lặp lại r (2,8 x sr), mg/kg 0,63 1,02 0,47 1,62 40,9 Độ lệch chuẩn độ tái lập, sR, mg/kg 0,40 1,13 0,81 1,57 52,9 Hệ số biến thiên tái lập, R,% 15,3 25,4 16,1 16,8 11,4 Giới hạn độ tái lập R (2,8 x sR), mg/kg 1,12 3,16 2,28 4,41 148 Giá trị HorRat a 1,10 1,98 1,29 1,47 1,80 nghiệm còn lại HorRat hệ số giữa RSDR xác lập RSDR dự đoán trước Phụ lục B (tham khảo) Điều kiện để tạo dẫn xuất sau cột với DMAB B.1 Thuốc thử B.1.1 Metanol, CH3OH, dùng cho HPLC B.1.2 Axit sulfuric, H2SO4, 95 % đến 97 % B.1.3 4-(dimetylamino) benzaldehyde, DMAB, C9H11NO B.1.4 Metanol - axit sulfuric Lấy 40 ml axit sulfuric (B.1.2) khuấy cẩn thận vào 950 ml metanol (B.1.1) Khử bọt khí dung dịch nồi siêu âm (5.2) 15 trước sử dụng B.1.5 Dung dịch DMAB Hoà tan 60,0 g 4-(dimetylamino) benzaldehyde (B.1.3) 950 ml metanol (B.1.1) Khử bọt khí dung dịch nồi siêu âm (5.2) 15 trước sử dụng B.2 Thiết bị, dụng cụ B.2.1 Lò phản ứng sau cột (một bơm kép hai máy bơm đơn) có buồng trộn, cuộn phản ứng bằng vật liệu trơ (ví dụ Teflon® Peek®) để hoạt động 95 °C, dài 7,0 m với đường kính 0,33 mm nòi cách thủy lò phản ứng hoạt động 95 oC Tốc độ hỗn hợp metanol-axit sulfuric (B.1.4) 0,4 ml /min Lưu lượng dung dịch DMAB (B.1.5) 0,4 ml /min Nhiệt độ phản ứng sau cột 95 °C Detector VIS lắp sau phản ứng sau cột 600 nm Thể tích bơm: 100 μl CHÚ THÍCH: Nếu có máy bơm sử dụng cho phản ứng sau cột, thuốc thử B.1.4 B.1.5 có thể trộn lẫn với ty lệ (1/1 v/v) Vì DMAB sẽ bị oxy hóa tự động nhanh gây cho dung dịch bị tối màu, nên dung dịch phải bảo vệ khỏi ánh sáng bồn nước đá phải sử dụng vòng 24 h B.3 Các điều kiện khác Các điều kiện khác không thay đổi so với việc sử dụng thuốc thử vanillin (xem 5.3.5 8.3.1) Thư mục tài liệu tham khảo [1] J.J.M Driessen, M.J.H Tomassen and J de Jong, CANFAS – Collaborative study for the determination of maduramicin in feedingstuffs and premixtures by HPLC, Report 2002.016, State Institute for Quality Control of Agricultural Products (RIKILT), 2002 [2] EU project 'Development and validation of HPLC methods for the official control of coccidiostats and antibiotics used as feed additives', CANFAS-SMT4-CT98-2216 [3] Jacob de Jong et al., Determination of maduramicin in feedingstuffs and premixtures by liquid chromatography: Development, validation, and interlaboratory study, J of AOAC Int., 87, 5, 1033 – 1041, 2004 [4] EN ISO 6497, Animal feeding stuffs – Sampling (ISO 6497:2002) [5] ISO 6498, Animal feeding stuffs – Preparation of test samples [6] ISO 5725 (all parts), Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results BSI - British Standards Institution BSI is the independent national body responsible for preparing British Standards It presents the UK view on standards in Europe and at the international level It is incorporated by Royal Charter Revisions British Standards are updated by amendment or revision Users of British Standards should make sure that they possess the latest amendments or editions It is the constant aim of BSI to improve the quality of our products and services We would be grateful if anyone finding an inaccuracy or ambiguity while using this British Standard would inform the Secretary of the technical committee responsible, the identity of which can be found on the inside front cover Tel: +44 (0)20 8996 9000 Fax: +44 (0)20 8996 7400 BSI offers members an individual updating service called PLUS which ensures that subscribers automatically receive the latest editions of standards Buying standards Orders for all BSI, international and foreign standards publications should be addressed to Customer Services Tel: +44 (0)20 8996 9001 Fax: +44 (0)20 8996 7001 Email: orders@bsigroup.com You may also buy directly using a debit/credit card from the BSI Shop on the Website http://www.bsigroup.com/shop In response to orders for international standards, it is BSI policy to supply the BSI implementation of those that have been published as British Standards, unless otherwise requested Information on standards BSI provides a wide range of information on national, European and international standards through its Library and its Technical Help to Exporters Service Various BSI electronic information services are also available which give details on all its products and services Contact Information Centre Tel: +44 (0)20 8996 7111 Fax: +44 (0)20 8996 7048 Email: info@bsigroup.com Subscribing members of BSI are kept up to date with standards developments and receive substantial discounts on the purchase price of standards For details of these and other benefits contact Membership Administration Tel: +44 (0)20 8996 7002 Fax: +44 (0)20 8996 7001 Email: membership@bsigroup.com Information regarding online access to British Standards via British Standards Online can be found at http://www.bsigroup.com/BSOL Further information about BSI is available on the BSI website at http:// www.bsigroup.com Copyright Copyright subsists in all BSI publications BSI also holds the copyright, in the UK, of the publications of the international standardization bodies Except as permitted under the Copyright, Designs and Patents Act 1988 no extract may be reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means – electronic, photocopying, recording or otherwise – without prior written permission from BSI This does not preclude the free use, in the course of implementing the standard, of necessary details such as symbols, and size, type or grade designations If these details are to be used for any other purpose than implementation then the prior written permission of BSI must be obtained Details and advice can be obtained from the Copyright and Licensing Manager Tel: +44 (0)20 8996 7070 Email: copyright@bsigroup.com BSI Group Headquarters 389 Chiswick High Road, London, W4 4AL, UK Tel +44 (0)20 8996 9001 Fax +44 (0)20 8996 7001 www.bsigroup.com/ standards