Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

108 642 1
Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

      Drosera burmanni Vahl N    2003-2007  U  9/2007   C **************************  Drosera burmanni Vahl     PGS.TS.   TS.  ThS.  T 9/2007 iii   , . : PGS., .                       , , ,   ,  . HCM. .  , .  29 . ,  ,  , , , . 9/2007  iv   ,  Drosera burmanni   h,  ,  ,  : - M   D. burmanni Vahl  B5 : NAA (0,2 mg/l)/2,4-D (0,2 mg/l), 20 g/l, PVP (1,25 mg/l) 5,8, . -  ,  D. burmanni in vitro.  Drosera burmanni Vahl. -  : 3,03% so , (2,78%);  2,8%  0,78%;  0,02% (  ), trong khi . v SUMMARY The thesis         Drosera burmanni  was carried out at Plant Biotechnology lab, University of Natural Sciences; and Chromatography room, Research Institute for Biotechnology and Enviromental Technology, University of Agriculture and Forestry, HCM city from March to August, 2007. Results: - Callus of D. burmanni Vahl was cultured successfully by using Gamb 2,4-D (0,2 mg/l), succrose (20g/l), PVP (1,25 mg/l), pH was adjusted to 5,8 before autoclaving. - Column Chromatography and Thin Layer Chromatography were used to purify anthraquinone compound in D. burmanni. This compound was used as authentic sample for HPLC technique. - Roots of D. burmanni contained 3,01% dry weight (DW) of anthraquinone, larger than 2,78% in leaves. - Anthraquinone content of red-leaf D. burmanni Vahl took 0,78% of DW, compared with 2,78% DW in green-leaf trees. - Biomass of D. burmannis suspension contained 0,02% of fresh weight of anthraquinone, while no quantifiable amounts of anthraquinone has been found in spent medium. Ho Chi Minh city, September, 2007. Hoang Thi Thu vi    . .i  . iii  . iv Summary . v  . vi  ix  . x  xii  xiii  1 1.1.  . 1 1.2.  2 1.3.  2 1.4.  2  3 2.1. Drosera burmanni Vahl 3 2.1.1.  3 2.1.2.  . 3 2.1.3.  . 4 2.1.4.  6 2.1.5.  7 2.1.6.  . 8 2.1.7.  11 2.1.8.  12 2.1.8.1.  12 2.1.8.2.  . 12 2.1.8.3.  . 12 2.1.8.4.  14 2.1.8.5.  15 2.1.9.  16  h 17 2.2.1.  . 17 2.2.2.  . 18 2.2.2.1.   . 18 2.2.2.2.  19 2.2.3.  19 2.2.3.1.  . 19 2.2.3.2.  19 vii 2.2.3.3.  . 20 2.2.3.4.  . 20 2.2.3.5.   22 2.2.4.   . 22 2.2.4.1.  . 22 2.2.4.2.  . 22 2.2.4.3.  . 22 2.2.4.4. o . 23 2.2.4.5.  23 2.2.4.6.  23 2.3.  24 2.3.1.   24 2.3.1.1.  24 2.3.1.2.  . 26 2.3.1.3.  . 27 2.3.2.  . 28   31  31 3.1.  . 31 3.1.1.  31 3.1.2.  33 3.1.2.1.  33 3.1.2.2.  . 34 3.1.2.3. 3: 2,4- . 35 3.1.2.4.  . 36 3.1.2.5.   37 3.2.  D. burmanni 38 3.2.1.  38 3.2.2.  39 in vitro  40  40  . 40  . 40  . 41 viii ong  . 41 in vitro 43   . 44  45  . 45 -  46 4.1.  . 46  46   . 48 4.1.3. 3: 2,4- . 49  . 54 4.1.5. 5:  56 4.2.  D. burmanni 58 4.3.  . 59  . 59  . 61 in vitro 62  64  . 66   . 68 5.1.  . 68 5.1.1.   68 5.1.2.  . 68 5.2.  69  . 70  ix  2,4-D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid BAP : 6-benzylaminopurine CRD : Completely Randomized Design ()  HPLC : High Performane Liquid Chromatography () IAA : 3-indolyl-acetic acid IBA : 3-indolebutyric acid MS : Murashige & Skoog, 1962 NAA : naphthalene acetic acid PVP : poly vinyl pyrrolidone TCL : Thin Cell Layer () TLC : Thin Layer Chromatography () x  TRANG Drosera burmanni  4 nh  Drosera burmanni Vahl 4 D. burmanni 5 nh 2.4. D. burmanni Vahl  . 7  10 2.6. Drosera  . 15  . 21  . 21 2.9.  . 24 2.10.  . 26  . 27 2.12.  29 D. burmanni in vitro 31 4.1. D.burmanni  5 (0,2 mg/l) 2,4- i . 52 4.2.  D. burmanni 5  (0,2 mg/l) 2,4-D  . 53  55   . 55  55 4.4.   D. burmanni 57 pm . 60  . 60 [...]... bằng tạo chồi trực tiếp 2 Do đó để hƣớng tới tự động hóa việc thu nhận và chủ động tăng sinh lƣợng chất quinone đã đƣợc nghiên cứu thành công, đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THU T NUÔI CẤY SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE ” đã ra đời 1.2 Mục tiêu  Khảo sát khả năng tạo sẹo từ cây Drosera burmanni Vahl  Khảo sát. .. Vahl  Khảo sát khả năng tạo dịch huyền phù tế bào cây Drosera burmanni Vahl  Khảo sát hàm lƣợng hợp chất quinone thu đƣợc từ nuôi cấy dịch huyền phù 1.3 Yêu cầu  Tạo đƣợc sẹo và khởi đầu tạo dịch huyền phù cây D burmanni Vahl  Phân tích định tính và định lƣợng đƣợc hàm lƣợng anthraquinone trong từng thành phần khác nhau và trong dịch huyền phù cây D burmanni bằng máy... khoa học: đây là một bƣớc tiến quan trọng và cần thiết trong qui trình ứng dụng kỹ thu ̣t nuôi cấy tế bào D burmanni Vahl để thu nhận hợp chất quinone Ý nghĩa thực tiễn: cung cấp quy trình tạo sẹo, dịch huyền phù D burmanni Vahl cho mục tiêu thu nhận quinone 3 Chƣơng 2 ̉ TÔNG QUAN TÀ I LIỆU 2 2.1 Tổng quan về Drosera burmanni Vahl 2.1.1 Vị trí phân loại Theo hệ thống phân loại thực... nuôi cấy mô, nuôi cấy tế bào in vitro không những góp phần vào việc sản xuất và thu nhận mà còn giúp ta đảm bảo đƣợc một cách chủ động số lƣợng các hợp chất có giá trị trị liệu Ở Việt Nam, ngƣời ta đã thu thập đƣợc 3 loài Drosera trong đó Drosera burmanni Vahl gần đây đã đƣợc nghiên cứu về việc thu nhận hợp chất quinone từ nuôi cấy in vitro, khảo sát hoạt tính sinh học của hợp. .. hoạt tính sinh học của hợp chất naphthoquinone có hoạt tính sinh học đƣợc tách chiết từ cây [12] Hồ Thu y Bích Tuyền (2006) ly trích và khảo sát hoạt tính sinh học của hợp chất quinone từ cây Drosera burmanni Vahl nuôi cấy in vitro [3] Nguyễn Đa ̣i Hải (2006) đã n uôi cấ y cây bắ t ruồ i (Drosera burmanni Vahl) và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của hợp chất chiết thô plumbagin... ngập trong đất nhƣng không phủ lên các lông tuyến Bọc chậu đất lại và giữ trong điều kiện sáng Sự phát triển của cây xảy ra trong vài tuần Nhân giống bằng cây mầm Vào mùa thu, cây sẽ sản sinh ra những cây bé xíu (cây mầm) Thu thập những cây mầm này và trồng thành những cây mới Một cách để thu thập cây mầm là giữ những chậu chứa cây trút ngƣợc xuống 1 tờ giấy và dùng tăm gạt cây. .. Bình, Bình Thu ̣n 4 h Ghi chú Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl Khu vực không có sự hiện diện của Drosera burmanni Vahl Hình 2.1: Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl trên thế giới [30] 2.1.3 tả hình thái Drosera burmanni Vahl là loài cây cỏ, cao 5 - 30 cm, có nhiều màu sắc khác nhau: xanh lá, xanh đậm, xanh có ánh vàng với lông tuyến màu đỏ hay toàn cây màu đỏ... Nahálka và cộng sự đã tạo sẹo và nuôi cấy thành công dịch huyền phù để thu nhận plumbagin từ cây Drosophyllum lusitanicum trên môi trƣờng MS bổ sung 1 mg/l IBA và 0,5 mg/l NAA [28] 2.2 Tổng quan về kỹ thu t nuôi cấy huyền phù tế bào để thu nhận hợp chất thứ cấp 2.2.1 Khái niệm hợp chất thứ cấp Hợp chất thứ cấp hay sản phẩ m trao đổi bậc hai là những sản phẩm đƣợc tạo ra trong tế bào nhờ... ngoài nƣớc  Trong nƣớc Đỗ Đăng Giá p (2003) đã khảo sát, thu thập, thu n dƣỡng và thử nghiệm in vitro những loài cây bắt mồi ở khu bảo tồn thiên nhiên Bình Châu - Phƣớc Bửu [1] Trần Thị Bích Chiêu (2004) khảo sát vòng đời và tái tạo chồi từ phát hoa cây Drosera burmanni Vahl [13] Quách Ngô Diễm Phƣơng (2006) hoàn thiện qui trình nuôi cấy in vitro cây Drosera indica L và khảo sát hoạt... huyền phù tế bào Huyền phù tế bào là một môi trƣờng lỏng đƣợc lắc liên tục, trong đó có sự hiện diện của các tế bào soma cô lập hoặc những cụm nhỏ các tế bào có khả năng sinh phôi có thể tái sinh thành một thực vật nguyên vẹn [7] 2.2.3.2 Nguyên tắc tạo huyền phù Huyền phù đƣợc tạo ra từ những mảnh sẹo trong một môi trƣờng lỏng đƣợc lắc liên tục Muốn cho huyền phù .  Drosera burmanni Vahl TRONG   1.2.    Drosera burmanni.       Drosera burmanni Vahl        Drosera burmanni Vahl A F E D C B 5  

Ngày đăng: 19/11/2012, 15:14

Hình ảnh liên quan

Hình 2.1: Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl trên thế giới [30]. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.1.

Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl trên thế giới [30] Xem tại trang 18 của tài liệu.
2.1.3. Mô tả hình thái - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

2.1.3..

Mô tả hình thái Xem tại trang 18 của tài liệu.
 Lá (Hình 2.3) - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.3.

Xem tại trang 19 của tài liệu.
Hình 2.4: D.burmanni Vahl ngoài tự nhiên [3], [40]. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.4.

D.burmanni Vahl ngoài tự nhiên [3], [40] Xem tại trang 21 của tài liệu.
Bảng 2.1: Các loài Drosera thiên nhiên chứa plumbagin và 7-methyljuglone [21] - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Bảng 2.1.

Các loài Drosera thiên nhiên chứa plumbagin và 7-methyljuglone [21] Xem tại trang 22 của tài liệu.
Bảng 2.2: Các Naphthoquinone vi lƣợng đƣợc tách chiết từ Drosera [21] - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Bảng 2.2.

Các Naphthoquinone vi lƣợng đƣợc tách chiết từ Drosera [21] Xem tại trang 23 của tài liệu.
R1 R2 R3 R4 R5 - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

1.

R2 R3 R4 R5 Xem tại trang 24 của tài liệu.
Hình 2.5: Cấu trúc hóa học của một số flavonoid và flavonoid glucoside [29]. R4 O  - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.5.

Cấu trúc hóa học của một số flavonoid và flavonoid glucoside [29]. R4 O Xem tại trang 24 của tài liệu.
Bảng 2.3: Dƣợc tính và các hoạt tính ứng dụng khác của dịch chiết Drosera [29] - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Bảng 2.3.

Dƣợc tính và các hoạt tính ứng dụng khác của dịch chiết Drosera [29] Xem tại trang 27 của tài liệu.
Hình các nhóm hợp chất thứ cấp chính trong thực vật - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình ca.

́c nhóm hợp chất thứ cấp chính trong thực vật Xem tại trang 32 của tài liệu.
Hình 2.7: Hệ thống nuôi cấy gián đoạn qui mô nhỏ trên các máy lắc [44]. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.7.

Hệ thống nuôi cấy gián đoạn qui mô nhỏ trên các máy lắc [44] Xem tại trang 35 của tài liệu.
Hình 2.9: Sắc ký cô ̣t [47]. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.9.

Sắc ký cô ̣t [47] Xem tại trang 38 của tài liệu.
Hình 2.10: Mô hình sắc ký nhanh cô ̣t khô [8]. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.10.

Mô hình sắc ký nhanh cô ̣t khô [8] Xem tại trang 40 của tài liệu.
Hình 2.11: Sắc ký lớp mỏng [46]. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 2.11.

Sắc ký lớp mỏng [46] Xem tại trang 41 của tài liệu.
Hình 3.1: Cây D.burmanni Vahl nuôi cấy in vitro. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 3.1.

Cây D.burmanni Vahl nuôi cấy in vitro Xem tại trang 45 của tài liệu.
3.1.2.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát sự kết hợp 2 loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mô sẹo  - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

3.1.2.2..

Thí nghiệm 2: Khảo sát sự kết hợp 2 loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mô sẹo Xem tại trang 48 của tài liệu.
Bảng 4.1: Tỷ lệ mẫu sống ở các nghiệm thức sau 14 ngày nuôi cấy Loại môi trƣờng Nồng độ đƣờng (g/l)  - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Bảng 4.1.

Tỷ lệ mẫu sống ở các nghiệm thức sau 14 ngày nuôi cấy Loại môi trƣờng Nồng độ đƣờng (g/l) Xem tại trang 60 của tài liệu.
Bảng 4.3: Ảnh hƣởng của nồng độ đƣờng lên sự phát triển của mẫu cấy lớp mỏng Nồng đồ đƣờng Nghiệm thức Tỷ lệ mẫu sổng  - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Bảng 4.3.

Ảnh hƣởng của nồng độ đƣờng lên sự phát triển của mẫu cấy lớp mỏng Nồng đồ đƣờng Nghiệm thức Tỷ lệ mẫu sổng Xem tại trang 62 của tài liệu.
Hình 4.1: Mô sẹo đƣợc hình thành từ mẫu lớp mỏng cây - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.1.

Mô sẹo đƣợc hình thành từ mẫu lớp mỏng cây Xem tại trang 66 của tài liệu.
Hình 4.4: Ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mô sẹo cây D - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.4.

Ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mô sẹo cây D Xem tại trang 71 của tài liệu.
4.3. Định lƣợng hợp chất anthraquinne trong các nguyên liệu nuôi cấy in vitro - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

4.3..

Định lƣợng hợp chất anthraquinne trong các nguyên liệu nuôi cấy in vitro Xem tại trang 73 của tài liệu.
Hình 4.10: Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni đƣợc xử lý theo quy trình A. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.10.

Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni đƣợc xử lý theo quy trình A Xem tại trang 75 của tài liệu.
Hình 4.11: Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni đƣợc xử lý theo quy trình B.anthraquinone  - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.11.

Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni đƣợc xử lý theo quy trình B.anthraquinone Xem tại trang 75 của tài liệu.
Hình 4.12: Sắc ký đồ HPLC của mẫu rễ cây D.burmanni Vahl. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.12.

Sắc ký đồ HPLC của mẫu rễ cây D.burmanni Vahl Xem tại trang 77 của tài liệu.
Hình 4.15: Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni Vahl không có sắc tố đỏ. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.15.

Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni Vahl không có sắc tố đỏ Xem tại trang 79 của tài liệu.
Hình 4.14: Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni Vahl có sắc tố đỏ. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.14.

Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D.burmanni Vahl có sắc tố đỏ Xem tại trang 79 của tài liệu.
Hình 4.16: Sắc ký đồ HPLC của mẫu dịch môi trƣờng sau khi lọc sinh khối tế bào. - Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone

Hình 4.16.

Sắc ký đồ HPLC của mẫu dịch môi trƣờng sau khi lọc sinh khối tế bào Xem tại trang 80 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan