Đang tải... (xem toàn văn)
Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone
Drosera burmanni Vahl N 2003-2007 U 9/2007 C ************************** Drosera burmanni Vahl PGS.TS. TS. ThS. T 9/2007 iii , . : PGS., . , , , , . HCM. . , . 29 . , , , , , . 9/2007 iv , Drosera burmanni h, , , : - M D. burmanni Vahl B5 : NAA (0,2 mg/l)/2,4-D (0,2 mg/l), 20 g/l, PVP (1,25 mg/l) 5,8, . - , D. burmanni in vitro. Drosera burmanni Vahl. - : 3,03% so , (2,78%); 2,8% 0,78%; 0,02% ( ), trong khi . v SUMMARY The thesis Drosera burmanni was carried out at Plant Biotechnology lab, University of Natural Sciences; and Chromatography room, Research Institute for Biotechnology and Enviromental Technology, University of Agriculture and Forestry, HCM city from March to August, 2007. Results: - Callus of D. burmanni Vahl was cultured successfully by using Gamb 2,4-D (0,2 mg/l), succrose (20g/l), PVP (1,25 mg/l), pH was adjusted to 5,8 before autoclaving. - Column Chromatography and Thin Layer Chromatography were used to purify anthraquinone compound in D. burmanni. This compound was used as authentic sample for HPLC technique. - Roots of D. burmanni contained 3,01% dry weight (DW) of anthraquinone, larger than 2,78% in leaves. - Anthraquinone content of red-leaf D. burmanni Vahl took 0,78% of DW, compared with 2,78% DW in green-leaf trees. - Biomass of D. burmannis suspension contained 0,02% of fresh weight of anthraquinone, while no quantifiable amounts of anthraquinone has been found in spent medium. Ho Chi Minh city, September, 2007. Hoang Thi Thu vi . .i . iii . iv Summary . v . vi ix . x xii xiii 1 1.1. . 1 1.2. 2 1.3. 2 1.4. 2 3 2.1. Drosera burmanni Vahl 3 2.1.1. 3 2.1.2. . 3 2.1.3. . 4 2.1.4. 6 2.1.5. 7 2.1.6. . 8 2.1.7. 11 2.1.8. 12 2.1.8.1. 12 2.1.8.2. . 12 2.1.8.3. . 12 2.1.8.4. 14 2.1.8.5. 15 2.1.9. 16 h 17 2.2.1. . 17 2.2.2. . 18 2.2.2.1. . 18 2.2.2.2. 19 2.2.3. 19 2.2.3.1. . 19 2.2.3.2. 19 vii 2.2.3.3. . 20 2.2.3.4. . 20 2.2.3.5. 22 2.2.4. . 22 2.2.4.1. . 22 2.2.4.2. . 22 2.2.4.3. . 22 2.2.4.4. o . 23 2.2.4.5. 23 2.2.4.6. 23 2.3. 24 2.3.1. 24 2.3.1.1. 24 2.3.1.2. . 26 2.3.1.3. . 27 2.3.2. . 28 31 31 3.1. . 31 3.1.1. 31 3.1.2. 33 3.1.2.1. 33 3.1.2.2. . 34 3.1.2.3. 3: 2,4- . 35 3.1.2.4. . 36 3.1.2.5. 37 3.2. D. burmanni 38 3.2.1. 38 3.2.2. 39 in vitro 40 40 . 40 . 40 . 41 viii ong . 41 in vitro 43 . 44 45 . 45 - 46 4.1. . 46 46 . 48 4.1.3. 3: 2,4- . 49 . 54 4.1.5. 5: 56 4.2. D. burmanni 58 4.3. . 59 . 59 . 61 in vitro 62 64 . 66 . 68 5.1. . 68 5.1.1. 68 5.1.2. . 68 5.2. 69 . 70 ix 2,4-D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid BAP : 6-benzylaminopurine CRD : Completely Randomized Design () HPLC : High Performane Liquid Chromatography () IAA : 3-indolyl-acetic acid IBA : 3-indolebutyric acid MS : Murashige & Skoog, 1962 NAA : naphthalene acetic acid PVP : poly vinyl pyrrolidone TCL : Thin Cell Layer () TLC : Thin Layer Chromatography () x TRANG Drosera burmanni 4 nh Drosera burmanni Vahl 4 D. burmanni 5 nh 2.4. D. burmanni Vahl . 7 10 2.6. Drosera . 15 . 21 . 21 2.9. . 24 2.10. . 26 . 27 2.12. 29 D. burmanni in vitro 31 4.1. D.burmanni 5 (0,2 mg/l) 2,4- i . 52 4.2. D. burmanni 5 (0,2 mg/l) 2,4-D . 53 55 . 55 55 4.4. D. burmanni 57 pm . 60 . 60 [...]... bằng tạo chồi trực tiếp 2 Do đó để hƣớng tới tự động hóa việc thu nhận và chủ động tăng sinh lƣợng chất quinone đã đƣợc nghiên cứu thành công, đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THU T NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE ” đã ra đời 1.2 Mục tiêu Khảo sát khả năng tạo mô sẹo từ cây Drosera burmanni Vahl Khảo sát. .. Vahl Khảo sát khả năng tạo dịch huyền phù tế bào cây Drosera burmanni Vahl Khảo sát hàm lƣợng hợp chất quinone thu đƣợc từ nuôi cấy dịch huyền phù 1.3 Yêu cầu Tạo đƣợc mô sẹo và khởi đầu tạo dịch huyền phù cây D burmanni Vahl Phân tích định tính và định lƣợng đƣợc hàm lƣợng anthraquinone trong từng thành phần khác nhau và trong dịch huyền phù cây D burmanni bằng máy... khoa học: đây là một bƣớc tiến quan trọng và cần thiết trong qui trình ứng dụng kỹ thu ̣t nuôi cấy tế bào D burmanni Vahl để thu nhận hợp chất quinone Ý nghĩa thực tiễn: cung cấp quy trình tạo mô sẹo, dịch huyền phù D burmanni Vahl cho mục tiêu thu nhận quinone 3 Chƣơng 2 ̉ TÔNG QUAN TÀ I LIỆU 2 2.1 Tổng quan về Drosera burmanni Vahl 2.1.1 Vị trí phân loại Theo hệ thống phân loại thực... nuôi cấy mô, nuôi cấy tế bào in vitro không những góp phần vào việc sản xuất và thu nhận mà còn giúp ta đảm bảo đƣợc một cách chủ động số lƣợng các hợp chất có giá trị trị liệu Ở Việt Nam, ngƣời ta đã thu thập đƣợc 3 loài Drosera trong đó Drosera burmanni Vahl gần đây đã đƣợc nghiên cứu về việc thu nhận hợp chất quinone từ nuôi cấy in vitro, khảo sát hoạt tính sinh học của hợp. .. hoạt tính sinh học của hợp chất naphthoquinone có hoạt tính sinh học đƣợc tách chiết từ cây [12] Hồ Thu y Bích Tuyền (2006) ly trích và khảo sát hoạt tính sinh học của hợp chất quinone từ cây Drosera burmanni Vahl nuôi cấy in vitro [3] Nguyễn Đa ̣i Hải (2006) đã n uôi cấ y mô cây bắ t ruồ i (Drosera burmanni Vahl) và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của hợp chất chiết thô plumbagin... ngập trong đất nhƣng không phủ lên các lông tuyến Bọc chậu đất lại và giữ trong điều kiện sáng Sự phát triển của cây xảy ra trong vài tuần Nhân giống bằng cây mầm Vào mùa thu, cây sẽ sản sinh ra những cây bé xíu (cây mầm) Thu thập những cây mầm này và trồng thành những cây mới Một cách để thu thập cây mầm là giữ những chậu chứa cây trút ngƣợc xuống 1 tờ giấy và dùng tăm gạt cây. .. Bình, Bình Thu ̣n 4 h Ghi chú Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl Khu vực không có sự hiện diện của Drosera burmanni Vahl Hình 2.1: Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl trên thế giới [30] 2.1.3 Mô tả hình thái Drosera burmanni Vahl là loài cây cỏ, cao 5 - 30 cm, có nhiều màu sắc khác nhau: xanh lá, xanh đậm, xanh có ánh vàng với lông tuyến màu đỏ hay toàn cây màu đỏ... Nahálka và cộng sự đã tạo mô sẹo và nuôi cấy thành công dịch huyền phù để thu nhận plumbagin từ cây Drosophyllum lusitanicum trên môi trƣờng MS bổ sung 1 mg/l IBA và 0,5 mg/l NAA [28] 2.2 Tổng quan về kỹ thu t nuôi cấy huyền phù tế bào để thu nhận hợp chất thứ cấp 2.2.1 Khái niệm hợp chất thứ cấp Hợp chất thứ cấp hay sản phẩ m trao đổi bậc hai là những sản phẩm đƣợc tạo ra trong tế bào nhờ... ngoài nƣớc Trong nƣớc Đỗ Đăng Giá p (2003) đã khảo sát, thu thập, thu n dƣỡng và thử nghiệm in vitro những loài cây bắt mồi ở khu bảo tồn thiên nhiên Bình Châu - Phƣớc Bửu [1] Trần Thị Bích Chiêu (2004) khảo sát vòng đời và tái tạo chồi từ phát hoa cây Drosera burmanni Vahl [13] Quách Ngô Diễm Phƣơng (2006) hoàn thiện qui trình nuôi cấy in vitro cây Drosera indica L và khảo sát hoạt... huyền phù tế bào Huyền phù tế bào là một môi trƣờng lỏng đƣợc lắc liên tục, trong đó có sự hiện diện của các tế bào soma cô lập hoặc những cụm nhỏ các tế bào có khả năng sinh phôi có thể tái sinh thành một thực vật nguyên vẹn [7] 2.2.3.2 Nguyên tắc tạo huyền phù Huyền phù đƣợc tạo ra từ những mảnh mô sẹo trong một môi trƣờng lỏng đƣợc lắc liên tục Muốn cho huyền phù . Drosera burmanni Vahl TRONG 1.2. Drosera burmanni. Drosera burmanni Vahl Drosera burmanni Vahl A F E D C B 5