Su co va khac phuc he thong HPLC

BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC YÊU CẦU CHUNG: Để hệ thống HPLC luôn được hoạt động tốt, ổn định cần phải đáp ứng các yêu cầu: 1- Vị trí lắp đặt hệ thống trong điều kiện môi trường tốt : Nhiệt độ,[r]

CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG PHÂN TÍCH HPLC ThS Phan Hiền Lương CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Pump – Áp suất pump không lên nguyên nhân Cách sử lý Do đường dung môi Kiểm tra độ kín khơng kín đường dung mơi vào có bọt khí nhỏ Đuổi dung mơi cho đường dung đến hết bọt môi Tắc nghẽn check vane Tháo Check vane in in check vane out rửa,siêu âm acid kết tủa ,bẩn HNO3 10->15% Sau rửa lại nhiều lần nước cất lọc qua 0.45 m CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Pump nguyên nhân – Áp suất pump không lên Cách sử lý - Đường dẫn dung Kiểm tra đường dẫn mơi đến cột khơng kín dung môi sau pump đến cột -Hết dung môi ,pha động Thay dung mơi - Hỏng đầu dị áp suất Thay đầu dị áp suất 2- Áp suất khơng ổn định - Dung môi pha động Kiểm tra dung môi cịn bọt khí pha động ,Degare đường dẫn dung đường dẫn mơi đến column khơng kín CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Pump nguyên nhân Cách sử lý - Vane chia dung mơi khơng kín - Kiểm tra vane chia dung môi (nghe tiếng dịng dung mơi) 3- Bơm khơng hoạt động -Cài đặt thông số áp suất max,min -Column tắc nghẽn Vượt áp suất 4- Đường không ổn -Dung môi cịn bọt khí -Vane chia dung mơi khơng kín Kiểm tra lại thơng số method,pump,column -Đuổi lại khí cho dung mơi,Degass -Kiểm tra vane chia mẫu (có thể có bọt khí vane làm cho vane đóng khơng kín) CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Pump nguyên nhân 5- Bơm rửa hoạt động liên tục -Hết nước rửa sau piton pump cao áp -Hở, tuột rách đường dẫn pump nhu động -Hỏng cảm ứng Cách sử lý -Kiểm tra thường xuyên bổ sung đầy đủ nước rửa (rất quan trọng) -Kiểm tra chắn kín thay cần thiết bị rách -Nhờ Kỹ thuật háng kiểm tra thay CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Autosample Nguyên nhân Cách sử lý 1- Diện tích mẫu tiêm khơng lặp lại - Syring bơm mẫu cịn bọt -Vịng chắn kim tiêm khơng kín -Piston xylanh tiêm q mịn , khơng kín -Hết dung mơi rửa kim tiêm mẫu vịng loop -Vịng loop khơng -Nồng độ mẫu cao nên rửa sau bơm không hết - Đuổi bọt xilanh - Thay vòng chắn kim tiêm -Thay đầu piston xy lanh - Kiểm tra dung môi rửa kim tiêm mẫu (MeOH) 2- Autosample không chạy Hoặc báo lỗi -Rửa lại vòng loop cho -Pha lại mẫu để giảm nồng độ tiêm thể tích nhỏ -Khơng có mẫu vị trí - Kiểm tra vị trí để dung mơi rack rack có với -Kẹt đầu kim bơm mẫu vị bảng sample khơng trí rửa kim CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Autosample Nguyên nhân Cách sử lý 3- Autosample không khởi động -Rack bị kênh chưa vào khớp - Khai báo loại Rack cấu hình chưa -Kiểm tra lại rack cho vị trí khớp -Khai báo cấu hình loại Rack 4- Autosample khơng lấy mẫu Treo phần mềm -Khơng có mẫu vị trí tiêm mẫu - Các lọ đựng mẫu khơng qui cách, nắp đậy mẫu không - Lệch hẳn vị trí tồn khay đựng mẫu -Đặt mẫu đầy đủ vị trí khay chứa mẫu - sử dụng lọ nắp qui định - Phải calibration (hiệu chỉnh) lại vị trí kim tiêm khay đựng mẫu (thường kỹ thuật viên hãng thực hiện) CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Detector Nguyên nhân Cách sử lý 1- Lỗi giới hạn hấp thu làm treo phần mềm điều khiển (monitor) -Bước sóng thấp hệ pha động có độ hấp thu cao -VD pha động acid acetic - Điều chỉnh lại bước sóng đo -Thay hệ pha động có độ hấp thu nhỏ - Đèn hết lượng (D2 W) - Thay đèn hết lượng tương ứng 2- Treo toàn hệ - Tắc nghẽn đường thống, áp suất vượt ống Detector qui định (Nguy hiểm) -Phải rửa kỹ đường dẫn theo qui trình rửa sau lần phân tích CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Detector Nguyên nhân Cách sử lý 2- Treo toàn hệ thống, áp suất vượt qui định (nguy hiểm) - Tắc nghẽn đường ống Detector -Phải làm phản ứng thử nghiệm sau cột bên trước thực chương trình tự động Autosample (xem có bị đục, tủa không) - Phải kiểm tra đoạn xem khả tắc đoạn để khắc phục Lưu ý đặc biệt: Luôn phải kiểm tra bật pump xem pha động có ngồi đường dung mơi thải hay khơng? Nếu khơng có phải kiểm tra Tồn hệ thống đường dẫn tránh tình trạng tắc nghẽn ống dẫn sau Detector Có thể gây vỡ Flowcell CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Phần mềm 1- Lỗi làm treo phần mềm điều khiển (monitor) Nguyên nhân Cách sử lý -Lỗi khai báo phần cứng không -Lỗi phương pháp phân tích (khai báo khơng điều kiện mà phần mềm chấp nhận được.) -Khai báo Detector khơng (vd đèn,bước sóng)và cấu hình khác - Khai báo lại phần cứng cho -Khai báo phương pháp phân tích theo điều kiện có -Khai lại thơng số đèn bước sóng,khai cấu hình - Đèn hết lượng (D2 - Thay đèn hết lượng tương W) ứng CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Phần mềm 1- Lỗi làm treo phần mềm điều khiển (monitor) Nguyên nhân Cách sử lý -Autosample tiêm mẫu khơng có mẫu -Bộ kim tiêm bị kẹt trình di chuyển -Kiểm tra lại vị trí mẫu -kiểm tra phận autosample - Pump có áp suất nằm khoảng qui định - Kiểm tra đường dung mơi, độ kín đường dẫn, column sử dụng, áp suất cài đặt phương pháp CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố column 1-Áp suất column lên cao 2- Column chảy dung môi Nguyên nhân -Cột bị tắc nghẽn Cách sử lý -Pha động không phù hợp với column ( Tỷ lệ pha động, Tốc độ dịng Flow/phút) -Rửa , hoạt hố lại column,theo SOP hướng dẫn sử dụng column sắc ký - Thay đổi pha động, điều kiện phân tích phù hợp -Lắp column chưa kỹ -vịng đệm khơng cân xứng -Lắp lại Column -Thay vòng đệm dụng cụ chuyên dùng CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Cách sử lý Các thông số peak Nguyên nhân -Peak không đối xứng 2- Các Peak khơng tách giống bình thường 3- Peak bị chẻ ,gãy thành 02 peak -Column không tương ứng -Hệ pha động chưa đạt yêu cầu -Thay đổi column cần thiết điều kiện (vd R188CN ) -Thay đổi tỷ lệ hệ pha động(ACN,MeOH, đệm .) -Điều chỉnh pH pha động -Tạo cặp Ion pha động -Column bị nhớp rửa -Rửa lại column hay khơng sạch,cịn nhiều hoạt hố lại column tạp chất chứa - Thay column column CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Các thông số peak Nguyên nhân Cách sử lý -Peak không đối xứng 2- Các Peak khơng tách giống bình thường 3- Peak bị chẻ ,gãy thành 02 peak -Nồng độ phân tích cao (gây bão hịa cột) - Thể tích tiêm mẫu lớn (nhưng nồng độ nhỏ) -Giảm nồng độ phân tích -Giảm thể tích tiêm mẫu (thường khoảng 10-20 µl) BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC YÊU CẦU CHUNG: Để hệ thống HPLC hoạt động tốt, ổn định cần phải đáp ứng yêu cầu: 1- Vị trí lắp đặt hệ thống điều kiện môi trường tốt : Nhiệt độ, độ ẩm, môi trường bụi, đặc biệt độ rung 2- Điều kiện điện áp ổn định, có lưu điện online, đủ dung lượng hoạt động 30 phút có cố điện 3- Người vận hành phải đào tạo vận hành có kiến thức HPLC 4- Mẫu phải chuẩn bị qui định, lọc qua fill lọc phù hợp với column sử dụng Sử dụng dung mơi hóa chất tinh khiết cho HPLC 5- Hệ thống HPLC phải bảo trì hiệu chuẩn theo qui định để đẩm bảo hệ thống hoạt động tốt cho kết xác, có độ tin cậy cao Hệ thống phải sử dụng thường xuyên BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC: Việc bảo trì hệ thơng HPLC quan trọng để thiết bị ln tình trạng hoạt động tốt sử dụng lâu dài theo thời gian I- BẢO TRÌ PUMP 1- Vệ sinh bên ngồi pump hàng tháng Bên pump năm/ lần (thơng thường nhờ kỹ thuật viên bảo trì hãng) để đảm bảo mạch của, phận giải nhiệt không bám bụi bẩn q nhiều 2- Các đường dẫn dung mơi, bình đựng hệ đệm, nước rửa phải chắn khơng đóng cặn, mốc (trong trường hợp bị bẩn phải vệ sinh cách gỡ đường ống đem lắc siêu âm với dung mơi chứa bên thích hợp) 3- Không để dung dịch rửa piton pump hết dung môi rửa dung dịch đóng cặn BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC II- BẢO AUTOSAMPLER 1- Vệ sinh bên Autosampler hàng tháng Bên năm/ lần (thông thường nhờ kỹ thuật viên bảo trì hãng) để đảm bảo mạch của, phận giải nhiệt không bám bụi bẩn nhiều 2- Phải tra dầu máy vaseline vào trục cách tay tiêm mẫu kim tiêm mẫu, syringe tiêm để máy chạy nhẹ nhàng êm Thường tháng 01 lần 3- Dùng vải khơng sơ lau nhẹ nhàng kim tiêm vịng bên ngồi vịng đệm kim tiêm cho (Trong trường hợp cần thiết gỡ vịng đệm kim tiêm để siêu âm cho sạch, sau lắp lại) 4- Lau tồn khoang, khay chứa mẫu 5- Khơng để dung dịch rửa syringe, loop hết dung mơi rửa dung dịch đóng cặn BẢO TRÌ HỆ THỐNG HPLC III- BẢO TRÌ AUVENCOLUMN 1- Vệ sinh bên ngồi Auvencolumn hàng tháng Bên năm/ lần (thơng thường nhờ kỹ thuật viên bảo trì hãng) để đảm bảo mạch của, phận giải nhiệt không bám bụi bẩn nhiều 2- Lau toàn khoang chứa cột, cảm ứng rị rỉ IV- BẢO TRÌ DETECTOR Thường Detector cần vệ sinh kiểm tra đường ống nối đầu hệ sắc kí Lưu ý : Không mở nắp đậy đèn, đường kết nối vào, detector khơng có dẫn ... môi Tắc nghẽn check vane Tháo Check vane in in check vane out rửa,siêu âm acid kết tủa ,bẩn HNO3 10->15% Sau rửa lại nhiều lần nước cất lọc qua 0.45 m CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố Pump... Pump có áp su? ??t nằm ngồi khoảng qui định - Kiểm tra đường dung môi, độ kín đường dẫn, column sử dụng, áp su? ??t cài đặt phương pháp CÁC SỰ CỐ THƯỜNG GẶP TRONG HPLC Sự cố column 1-Áp su? ??t column lên... Cách sử lý - Vane chia dung mơi khơng kín - Kiểm tra vane chia dung mơi (nghe tiếng dịng dung mơi) 3- Bơm không hoạt động -Cài đặt thông số áp su? ??t max,min -Column tắc nghẽn Vượt áp su? ??t 4- Đường