Hoa Dã yến thảo rũ hồng đậm (Petunia hybrida Hort. ex Vilm.-Andr.) là loài hoa đẹp, có giá trị kinh tế cao. Việc nhân giống in vitro là phương pháp hữu hiệu để tăng cường số lượng, giúp bảo tổn nguồn gen. Đỉnh sinh trưởng 01 tháng tuổi là mẫu cấy tối ưu được sử dụng là vật liệu khởi đầu cho nuôi cấy in vitro. Đỉnh sinh trưởng được khử trùng bằng dung dịch Javen 7,5% trong 10 phút cho tỷ lệ sống và mẫu sạch cao nhất đạt 53,23%.
BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM - HỘI NGHỊ KHOA HỌC QUỐC GIA LẦN THỨ DOI: 10.15625/vap.2020.000104 NHÂN NHANH GIỐNG HOA DÃ YẾN THẢO RŨ HỒNG ĐẬM (Petunia hybrida Hort ex Vilm.-Andr.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ * Phạm Phương Thu , Phan Thị Thu Hiền* Tóm tắt: Hoa Dã yến thảo rũ hồng đậm (Petunia hybrida Hort ex Vilm.-Andr.) lồi hoa đẹp, có giá trị kinh tế cao Việc nhân giống in vitro phương pháp hữu hiệu để tăng cường số lượng, giúp bảo tổn nguồn gen Đỉnh sinh trưởng 01 tháng tuổi mẫu cấy tối ưu sử dụng vật liệu khởi đầu cho nuôi cấy in vitro Đỉnh sinh trưởng khử trùng dung dịch Javen 7,5% 10 phút cho tỷ lệ sống mẫu cao đạt 53,23% Chồi nhân nhanh mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg/L BAP cho tỷ lệ nhân chồi cao đạt 67,5 chồi/mẫu Chồi chuyển sang môi trường rễ mơi trường thích hợp để tạo rễ MS có bổ sung 0,1 mg/L NAA Cây chuyển sang huấn luyện nhà lưới 04 tuần trồng giá thể gồm đất thịt, cát, tro trấu phân xanh đạt tỉ lệ sống sót 45% Quy trình hiệu với việc nhân nhanh lượng lớn nhằm bảo tồn nguồn giống in vitro giống hoa Dã yến thảo rũ hồng đậm (Petunia hybrid L.) Từ khóa: Petunia hybrid L., Dã yến thảo, ex vitro, in vitro, nhân nhanh MỞ ĐẦU Hoa Dã yến thảo (Petunia hybrid L.) loài thực vật thuộc họ Cà Cây Dã yến thảo có hạt nhỏ cho kết nhân giống phương pháp hữu tính khơng cao Đối với nhân giống cành hệ số nhân thấp, khơng đồng nên chưa đáp ứng nhu cầu cần trồng số lượng lớn, đồng loạt (Phạm Hoàng Hộ, 2000) Trong đó, ni cấy mơ kỹ thuật hiệu để nhân nhanh số lượng chất lượng giống, giống bệnh giảm giá thành sản phẩm Hiện nay, số giống hoa thương phẩm phát triển nhân nhanh in vitro phục vụ thị trường với thị hiếu ngày đa dạng (Phan Thị Thu Hiền nnk., 2017) Đã có nhiều loài hoa đẹp, giá trị thương phẩm tốt nhân nhanh in vitro hoa lan, hoa hồng, hoa đồng tiền (Trần Thị Hồng Thúy nnk., 2015; Nguyễn Thị Phương Thảo nnk., 2015; Dương Tấn Nhựt, 2013) Cây hoa Dã yến thảo tiến hành nuôi cấy in vitro chọn tạo số dòng biến dị soma qua ni cấy in vitro có ý nghĩa chọn giống (Hassan et al., 2010) Trong điều kiện stress có bổ sung NaCl, Sara & Naglaa (2015) nghiên cứu khả nhân nhanh hoa Dã yến thảo Tiếp đó, Natalija cộng nghiên cứu tái sinh đa chồi từ yến thảo, tìm số điều kiện tối ưu để thực trình Trường Đại học Sư phạm Hà Nội *Email: hienphandt87@gmail.com PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 839 tái sinh chồi từ giống hoa (Natalija et al., 2015) Gần nhất, Bùi Thị Cúc cộng nghiên cứu tìm cơng thức tối ưu nhân nhanh Dã yến thảo hoa hồng sọc tím từ đoạn thân mang mắt ngủ, nghiên cứu xác định môi trường thích hợp cho việc tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ Dã yến thảo mơi trường MS có bổ sung 0,25 mg/L TDZ Trên mơi trường tối ưu có bổ sung 0,75 mg/L BAP, 0,1 mg/L αNAA, hệ số nhân chồi đạt cao 73,11 lần (Bùi Thị Cúc nnk 2017) Nghiên cứu sử dụng đoạn thân ex vitro vật liệu khởi đầu để nuôi cấy Dã yến thảo in vitro tìm điều kiện nhân nhanh tối ưu giống Dã yến thảo rũ hồng đậm VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nuôi cấy Vật liệu nuôi cấy ban đầu đoạn thân Dã yến thảo rũ hồng đậm thu tự nhiên 2.2 Phương pháp nghiên cứu Phương pháp khử trùng mẫu Đoạn thân rửa vịi nước, sau rửa mẫu với xà phịng, rửa lại vòi nước lần Mẫu đưa vào tủ cấy vô trùng, rửa nước cất vô trùng lần, khử trùng kép dung dịch Javen cồn 70 o, thấm khô mẫu cấy mẫu môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962).Mẫu khử trùng CT1: Javen 10%, CT2: Javen 10% + cồn 70%, CT3: Javen 10% + cồn 70% + HgCl 0,1%, tất khử trùng kép 10 phút Phương pháp nhân nhanh Dã yên thảo tạo cụm chồi in vitro Chúng bổ sung BAP với nồng độ từ 0-0,5 mg/L kinetin nồng độ 0,1 mg/L, 0,3 mg/L, 0,5 mg/L Ngoài ra, chúng tơi cịn kết hợp chất điều hịa sinh trưởng nồng độ khác nhau: BAP với nồng độ 0,1mg/L kết hợp với kinetin với nồng độ 0,1 mg/L, 0,3 mg/L, 0,5 mg/L BAP với nồng độ 0,1 mg/L kết hợp với NAA với nồng độ 0,1 mg/L, 0,3 mg/L, 0,5 mg/L vào môi trường MS để tiến hành nghiên cứu nghiên cứu mẫu theo tuần Chúng sử dụng công thức nhân nhanh Bùi Thị Cúc nnk có cải biến (Bùi Thị Cúc nnk.,2017) Ảnh hưởng NAA đến khả rễ Cắt chồi sau tuần nuôi cấy môi trường nhân nhanh chồi (các chồi loại bỏ bớt đoạn già phần gốc chồi), cấy chuyển sang môi trường bổ sung NAA với nồng độ khác theo dõi theo tuần Ảnh hưởng thời gian huấn luyện giá thể lên khả sống sót, sinh trưởng Sử dụng Dã yến thảo in vitro hồn chỉnh có đầy đủ rễ, thân, để rèn luyện Chúng sử dụng giá thể khác để theo dõi sống Dã yến thảo với giá thể Trong tuần đầu, sử dụng lưới đen để che kín giúp không bị nước nhanh hay héo ánh sáng mặt trời Khi cứng cáp bỏ lưới tránh trường hợp bị thối rễ thiếu ánh sáng quang hợp Tưới nước BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM 840 đặn ngày không tưới trực tiếp vào gốc cây, thực tưới nhỏ giọt Sau tuần nuôi cấy, theo dõi số sống số chết Tỷ lệ sống Dã yến thảo = (cây sống/cây cấy) ×100% 2.3 Xử lý số liệu Số liệu thu được trình bày MEAN ± SE Các kết thu được xử lý phần mềm Excel Số mẫu đem nghiên cứu ≥ 30 mẫu/lơ thí nghiệm KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khử trùng mẫu Đây xem giai đoạn then chốt q trình ni cấy in vitro việc lựa chọn dung dịch khử trùng thích hợp việc quan trọng Kết khử trùng thể Bảng Bảng Hiệu khử trùng mẫu Dã yến thảo công thức Công thức CTĐC CT1 CT2 CT3 CT4 Thành phần Xử lí sơ Javen 5%/5 phút Javen 10%/10 phút Javen 7,5%/5 phút Javen 7,5%/10 phút Tỷ lệ mẫu sống (%) 10,52 ± 0,33 4,43 ± 0,58 24,25 ± 0,58 52,23 ± 0,33 Tỷ lệ mẫu chết (%) 18,23 ± 0,58 52,24 ± 0,36 32,33 ± 0,54 28,21 ± 0,28 14,23± 0,35 Hình Tạo vật liệu khởi đầu in vitro thông qua khử trùng đỉnh sinh trưởng hoa Dã yến thảo a: Vật liệu khởi đầu, b: Chồi Dã yến thảo nuôi cấy in vitro từ đỉnh sinh trưởng Kết khử trùng mẫu cho thấy khử trùng mẫu với dung dịch Javen 7,5% 10 phút cho tỉ lệ mẫu sống, 52,23% Đây công thức khử trùng tối ưu Trong điều kiện khử trùng này, vật liệu khởi đầu nuôi cấy in vitro- khỏe mạnh nấm bệnh (Hình 1a, b) 3.2 Nhân nhanh Dã yến thảo phương pháp tạo cụm chồi in vitro Sau tạo vật liệu khởi đầu in vitro thông qua q trình khử trùng, chúng tơi tiến hành cấy chuyển chồi Dã yến thảo in vitro vào môi trường có PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 841 chứa chất kích thích sinh trưởng để tăng cường khả tạo đa chồi, thực nhân nhanh số lượng hoa Dã yến thảo điều kiện ống nghiệm 3.2.1 Ảnh hưởng BAP lên khả tạo đa chồi Theo Sakakibara nhóm cytokinin có vai trị quan trọng phân chia tế bào kích thích hình thành chồi, BAP chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin có tác dụng kích thích hình thành đỉnh sinh trưởng sử dụng phổ biến nuôi cấy mô thực vật (Sakakibara et al., 2006) Chính vậy, thí nghiệm sử dụng BAP với nồng độ từ 0,1-0,5 mg/L để bổ sung vào môi trường nuôi cấy Kết thu cho thấy, bổ sung BAP vào mơi trường ni cấy thấy xuất mơ sẹo sau 02 tuần Từ mô sẹo tiếp tục phát triển tạo thành cụm chồi sau 05 tuần Kết thể Bảng Hình 2a Bảng Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Dã yến thảo sau tuần nuôi cấy Công thức Thành phần Hệ số nhân chồi Số lá/chồi Chiều cao chồi (mm) ĐC MS 55,0 ± 6,28 2,50 ± 0,5 10,00 ± 1,22 CT1 MS + 0,1 mg/L BAP 67,5 ± 4,82 16,25 ± 1,47 45,0 ± 6,04 CT2 MS + 0,2 mg/L BAP 33,25 ± 3,69 10,75 ± 0,82 30,75 ± 4,91 CT3 MS + 0,3 mg/L BAP 59,25 ± 3,34 15,25 ± 0,82 43,75 ± 4,54 CT4 MS + 0,4 mg/L BAP 25,25 ± 4,43 10,5 ± 1,11 23,75 ± 3,49 CT5 MS + 0,5 mg/L BAP 21,0 ± 3,16 9,75 ± 0,82 27,25 ± 3,89 Khi mẫu cấy mơi trường MS (đối chứng) cho hệ số nhân chồi thấp (hệ số nhân 2,5) mẫu có xu hướng phát triển thành hoàn chỉnh, mẫu tăng nhanh chiều cao số chồi Tuy nhiên, thân mảnh, mỏng, bé màu xanh nhạt Trong đó, mơi trường bổ sung BAP hệ số nhân chồi tăng cách rõ rệt Sau tuần theo dõi, kết thu cho thấy chênh lệch hệ số nhân chồi rõ rệt môi trường có nồng độ BAP khác Cụ thể, CT2 (BAP 0,2 mg/L), CT3 (BAP 0,3 mg/L), CT4 (BAP 0,4 mg/L), CT5 (BAP 0,5 mg/L) hệ số nhân chồi thấp 32,25; 59,25; 25,25; 21, kích thước chồi khơng đồng đều, mỏng màu xanh nhạt, có tượng héo Khi môi trường bổ sung 0,1 mg/L BAP (CT1), công thức tối ưu với hệ số nhân chồi 67,5; chất lượng chồi tốt, thân màu xanh đồng đều, to, dày (Hình a, b, c, d, e) Hình Cụm chồi Dã yến thảo sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung BAP a-Môi trường bổ sung 0,1 mg/L BAP; b-Môi trường bổ sung 0,2 mg/L BAP, c-Môi trường bổ sung 0,3 mg/L BAP; d-Môi trường bổ sung 0,4 mg/L BAP, e-Môi trường bổ sung 0,5 mg/L BAP 842 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM Kết thấp so với kết Bùi Thị Cúc nghiên cứu in vitro Dã yến thảo Cụ thể, theo Bùi Thị Cúc, môi trường MS có bổ sung 0,75 mg/L BA, 0,1 mg/L αNAA, hệ số nhân đạt 73,11 lần Nguyên nhân khác đặc tính di truyền giống hoa khác thành phần môi trường nuôi cấy khác 3.2.2 Ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yến thảo Để đánh giá khả tạo cụm chồi, BAP sử dụng kinetin để bổ sung vào môi trường nuôi cấy MS với nồng độ 0,1 mg/L, 0,3 mg/L 0,5 mg/L Kết thể Bảng Hình Bảng Ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dã yến thảo sau tuần nuôi cấy Công thức Thành phần Hệ số nhân chồi Số lá/ chồi Chiều cao CT1 MS 2,50 ± 0,5 10,00 ± 1,22 55,00 ± 6,28 CT2 MS + 0,1 mg/L kinetin 9,75 ± 1,47 16,75 ± 1,29 57,75 ± 1,78 CT3 MS + 0,3 mg/L kinetin 5,75 ± 1,08 13,50 ± 1,11 45,00 ± 3,93 CT4 MS + 0,5 mg/L kinetin 4,00 ± 0,70 13,50 ± 0,86 41,50 ± 4,50 Sau tuần nuôi cấy, hệ số nhân chồi môi trường bổ sung kinetin có chênh lệch nồng độ khác Ở mơi trường có nồng độ kinetin 0,1 mg/L có hệ số nhân chồi cao 9,75 (Hình 3b) Khi tăng dần nồng độ kinetin đến 0,5 mg/L hệ số nhân chồi giảm dần, nồng độ 0,5 mg/L kinetin hệ số nhân chồi (Hình 3d) Chất lượng chồi môi trường tốt, chồi mập, khỏe, thân màu xanh đậm Tuy nhiên, môi trường bổ sung kinetin có hệ số nhân chồi thấp so với mơi trường có bổ sung BAP Cụ thể, mơi trường bổ sung 0,1 mg/L BAP có hệ số nhân chồi 67,5 (Hình 3a) cịn mơi trường bổ sung 0,1 mg/L kinetin có hệ số nhân chồi 9,75 (Hình 3b) Tuy nhiên, bổ sung kinetin vào môi trường ni cấy MS mẫu ni cấy tái sinh tạo thành chồi đơn phát triển tốt (Hình 3a, b, c, d) Hình Cụm chồi Dã yến thảo sau tuần ni cấy mơi trường có bổ sung kinetin a: Môi trường đối chứng MS, b: Môi trường bổ sung kinetin với nồng độ 0,1 mg/L, c: Môi trường bổ sung kinetin với nồng độ 0,3 mg/L, d: Môi trường bổ sung kinetin với nồng độ 0,5 mg/L PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 843 Như vậy, môi trường bổ sung kinetin cho hiệu nhân nhanh chồi in vitro thấp Kết phù hợp với nghiên cứu Bùi Thị Cúc cộng nhân chồi in vitro Dã yến thảo cho thấy môi trường bổ sung kinetin không cho hệ số nhân chồi nhanh Nhóm tác giả nhận thấy, bổ sung kinetin làm ức chế khả tạo đa chồi Dã yến thảo 3.2.3 Ảnh hưởng tổ hợp BAP kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dã yến thảo in vitro BAP kinetin chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin có vai trị kích thích tạo chồi thông qua việc tăng tốc độ phân chia tế bào Việc kết hợp chất có tác dụng nhân nhanh chồi phát triển cao so với riêng rẽ (Phan Thị Thu Hiền nnk., 2015).Nghiên cứu sử dụng kết hợp nồng độ tốt BAP 0,1 mg/L với kinetin có nồng độ từ 0,1 mg/L đến 0,5 mg/L bổ sung vào môi trường MS) Kết thể Bảng Hình Bảng Ảnh hưởng BAP kinetin đến khả nhân nhanh Dã yến thảo in vitro sau tuần nuôi cấy Công thức CTĐC CT1 CT2 CT3 Thành phần MS MS + 0,1 mg/L BAP + 0,1 mg/L kinetin MS + 0,1 mg/L BAP + 0,3 mg/L kinetin MS + 0,1 mg/L BAP + 0,5 mg/L kinetin Hệ số nhân chồi Số lá/ chồi Chiều cao 2,50 ± 0,5 10,00 ± 1,22 55,00 ± 6,28 5,00 ± 1,58 11,50 ± 2,38 26,50 ± 6,94 2,25 ± 2,23 10,75 ± 2,68 27,50 ± 8,2 1,75 ± 2,04 8,25 ± 2,04 22,50 ± 5,26 Sự kết hợp BAP kinetin lại không làm tăng hiệu cho nhân chồi Dã yến thảo Các chồi tạo nên từ mơi trường có bổ sung kinetin có chất lượng chồi thấp, không mập, mỏng Cụ thể, CT1 công thức tốt mà cho hệ số nhân chồi (Hình 4a) Ở CT2 CT3 cho hệ số nhân chồi thấp 2,25 1,75 (Hình 4b,c) Kết luận phù hợp với nghiên cứu Bùi Thị Cúc nnk Dã yến thảo hoa hồng sọc tím Kết nhóm nghiên cứu đưa bổ sung tổ hợp BAP kinetin chồi tạo thành nhỏ, thấp, khơng tạo thành chồi riêng rẽ, khơng xác định hệ số nhân chồi (Bùi Thị Cúc nnk., 2017) BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM 844 Hình Chồi Dã yến thảo rũ hồng đậm môi trường MS bổ sung BAP kinetin sau tuần nuôi cấy a:Môi trường bổ sung 0,1 mg/LBAP + 0,1 mg/L kinetin, b: Môi trường bổ sung 0,1 mg/L BAP + 0,3 mg/L kinetin, c: Môi trường bổ sung 0,1 mg/L BAP + 0,5 mg/L kinetin Như thấy bổ sung thêm kinetin vào môi trường có BAP ức chế khả nhân chồi Dã yến thảo rũ hồng đậm Kết trái ngược với số nông nghiệp khác, số mía, khoai lang cho thấy hiệu tăng hệ số nhân nhanh bổ sung BAP kinetin q trình ni cấy (Phan Thị Thu Hiền nnk., 2015) 3.3 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ chồi in vitro Dã yến thảo Mục tiêu thí nghiệm tìm mơi trường tối ưu kích thích tạo rễ chồi in vitro Dã yến thảo Chúng nghiên cứu môi trường MS (đối chứng) mơi trường MS có bổ sung NAA nồng độ khác Kết thí nghiệm sau tuần ni cấy thể Bảng Hình Bảng Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Dã yến thảo in vitro Công thức Thành phần Số rễ/ mẫu Chiều dài rễ MS MS 4,75 ± 1,78 32,25 ± 10,35 CT1 MS + 0,1 mg/L NAA 21,25 ± 2,58 14,50 ± 2,29 CT2 MS + 0,2 mg/L NAA 9,25 ± 3,03 6,00 ± 4,09 CT3 MS + 0,3 mg/L NAA 7,00 ± 2,23 4,00 ± 0,7 CT4 MS + 0,5 mg/L NAA 8,25 ± 2,27 4,25 ± 1,47 Kết bảng cho thấy chồi Dã yến thảo rễ môi trường MS (đối chứng) với chiều dài rễ lên tới 3,8 cm Tuy nhiên, chất lượng rễ lại thấp, rễ mảnh, yếu có màu trắng nhạt Ở mơi trường có bổ sung thêm NAA số rễ/chồi lớn so với môi trường không bổ sung NAA PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 845 Hình Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Dã yến thảo in vitro sau tuần a: Môi trường MS bản, b: Môi trường bổ sung 0,1 mg/L NAA, c: Môi trường bổ sung 0,2 mg/L NAA, d: Môi trường bổ sung 0,3 mg/L NAA, e: Môi trường bổ sung 0,5 mg/L NAA Chất lượng rễ môi trường tốt hơn, rễ mập, màu trắng đục Trong đó, mơi trường bổ sung NAA với nồng độ 0,1 mg/L có kết tốt với hệ số rễ 21,25 Khi tăng dần nồng độ NAA tỉ lệ rễ giảm đáng kể môi trường bổ sung NAA nồng độ 0,3 mg/L hệ số rễ Điều thú vị kết tương đương với Bùi Thị Cúc cộng nghiên cứu rễ dã yên thảo hoa hồng sọc tím Cụ thể, nhóm nghiên cứu đưa môi trường bổ sung 0,1 mg/L NAA cho kết tốt với tỉ lệ rễ đạt 100%, số rễ/chồi 51,87 chiều dài rễ trung bình 0,96 cm (Bùi Thị Cúc nnk., 2017) Nguyên nhân dẫn tới khác biệt đặc điểm di truyền giống Dã yến thảo khác Như vậy, mơi trường thích hợp cho rễ dã yên thảo rũ hồng đậm môi trường bổ sung 0,1 mg/L NAA 3.4 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện giá thể lên khả sống sót, sinh trưởng Ở thí nghiệm mục đích chúng tơi tìm giá thể tốt để phù hợp với Dã yến thảo in vitro điều kiện tự nhiên để dễ dàng thích nghi Bảng Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Dã yến thảo in vitro Công thức Loại giá thể Số trồng Số chết Số sống Tỷ lệ sống CT1 Đất thịt + cát 20 20 0% CT2 Đất hữu 20 14 30% CT3 Đất thịt + cát + trấu 20 11 45% hun + phân xanh Từ kết cho thấy, CT1 (đất thịt + cát) khơng thể sống đất thịt rắn, chất dinh dưỡng, cát lại dễ bị rửa trôi nên nhanh bị héo, thối khơng nhận chất dinh dưỡng từ mơi trường Ở giá thể cịn lại tỉ lệ sống cao, giá thể tơi xốp, giàu chất dinh dưỡng giúp dễ hấp thụ nên phát triển tương đối tốt (Hình 6) BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM 846 Hình Cây Dã yến thảo rũ hồng đậm giai đoạn rèn luyện Như vậy, giá thể thích hợp cho Dã yến thảo rũ hồng đậm đất thịt, cát, tro trấu, phân xanh, tỷ lệ sống sót cao đạt 45% KẾT LUẬN Đã tạo vật liệu khởi đầu in vitro giống hoa Dã yến thảo rũ hồng đậm thông qua bước khử trùng tạo mẫu sạch, có khả tái sinh chồi cao cách xử lí sơ khử trùng Javen 7,5% vòng 10 phút cho hiệu khử trùng đạt 52,23% Mơi trường thích hợp để nhân nhanh chồi in vitro MS có bổ sung 0,1 mg/L BAP, hệ số nhân chồi đạt cao 67,5 Mơi trường thích hợp để tạo rễ MS có bổ sung 0,1 mg/L NAA, tỷ lệ tạo rễ đạt 50,67% Giá thể thích hợp để rèn luyện hoa Dã yến thảo rũ hồng đậm cho ngồi mơi trường tự nhiên đất thịt, cát, trấu hun, phân xanh với tỷ lệ sống 45%, thời gian huấn luyện trước cho nhà lưới 04 tuần Lời cảm ơn: Nghiên cứu sử dụng máy móc, hóa chất Phịng thí nghiệm Di truyền học, Trường ĐHSP Hà Nội TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Thị Cúc, Đồng Huy Giới, Bùi Thị Thu Hương, 2017 Nhân nhanh in vitro Dã yến thảo hoa hồng sọc tím (Petunia hybrida L.) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ lâm nghiệp, 2(3): 3-9 Murashige T.and Skoog F., 1962 Plant growth Substamces in commercial uses of tissue culture In: Plant growth Substances 1979, ed By F.Skoog Springer - Verag, Berlin Heidelberg New York: 426-434 Hassan A.Q., Rayya A.A., and Sami Yaish, 2010 In vitro regeneration and somaclonal variation of Petunia hybrida Journal of Fruit and Ornamental Plant Research, 18.1: 71-81 Nguyễn Thị Phương Thảo, Đặng Quang Bích, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Thùy Linh, Phạm Thị Thu Hằng, Đặng Thị Thanh Tâm, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Lâm Hải, Nguyễn Thanh Hải, 2015 Nhân nhanh cảm ứng hoa in vitro hồng cơm (Rosa sericea Lindl.) Tạp chí Khoa học Phát triển 2015, 13(4) : 606-613 Nguyễn Thị Kim Yến, Nguyễn Phúc Huy, Hoàng Văn Cương, Nguyễn Thị Nhật Linh, Nguyễn Bá Nam, Vũ Quốc Luận, Dương Tấn Nhựt, 2013 Ảnh hưởng than hoạt tính ni cấy thống khí lên khả sinh trưởng phát triển hoa đồng tiền (Gerbera jamesonii) Vietnam Journal of Science and Technology, 51(4) : 435-446 PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 847 Phan Thị Thu Hiền, Phạm Bích Ngọc, Chu Hồng Hà, 2015 Hệ thống tái sinh từ phơi soma số giống mía cao sản (Saccharum officinarum L.) phục vụ cơng tác chuyển gen Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 13(3): 907-917 Phạm Hoàng Hộ, 2000 Cây cỏ Việt Nam, Quyển II Nxb Trẻ Phan Thị Thu Hiền, Nguyễn Văn Đính, 2017 Nhân giống lan đai châu đỏ Rhynchostylis gigantean kỹ thuật nuôi cấy in vitro Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Đại học Quốc gia Hà Nội, 2(3): 215-223 Sara E.G., Naglaa M.E., 2015 In vitro preliminary study on Petunia hybrida breeding under Sodium Chloride stress conditions Middle East Journal of Agriculture Research, 04(04): 867-872 Sakakibara H., Takei K., Hirose N.,2006 Interactions between nitrogen and cytokinin in the regulation of metabolism and development Trends in plant Science, 11(9): 440-448 Trần Thị Hồng Thúy, Đỗ Thị Gấm, Nguyễn Khắc Hưng, Phạm Bích Ngọc, Chu Hồng Hà, 2015 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) thông qua cảm ứng tạo protocorm like bodies Tạp chí Sinh học, 37(1), 76-83 MICROPARAGATION OF THE DARK PINK WILD DRAFT Petunia hybrida Hort ex Vilm.-Andr * Pham Phuong Thu, Phan Thi Thu Hien* Abstract: Petunia hybrida Hort ex Vilm.-Andr is a beautiful flower with high economic value Micropropagation is an effective way to increase their numbers, and help to preserve genetic resources The one month peak was the optimal point for explant used as the starting material for in vitro culture about 52.23% The growth peak was sterilized with 7.5% Javen solution for 10 minutes for the highest survival rate and clean sample Shoots were multiplied on MS medium supplemented with 0.1 mg/L BAP so that the highest rate of shoot multiplication reached 67.5 Shoots were transferred to the rooting medium and the rooting medium was MS supplemented with 0.1 mg/L NAA Plants were transferred to net house training for weeks and planted in media containing soil, sand, rice husk ash and green manure with a survival rate of 45% This process is effective for the rapid multiplication of large seedlings to conserve in vitro sources in the dark pink wild draft Petunia hybrid Hort ex Vilm.-Andr Keywords: Petunia hybrida Hort ex Vilm.-Andr., ex vitro, in vitro, propagation Hanoi Pedagogical University *Email: hienphandt87@gmail.com ... thân ex vitro vật liệu khởi đầu để ni cấy Dã yến thảo in vitro tìm điều kiện nhân nhanh tối ưu giống Dã yến thảo rũ hồng đậm VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nuôi cấy Vật liệu nuôi. .. (Hình 6) BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM 846 Hình Cây Dã yến thảo rũ hồng đậm giai đoạn rèn luyện Như vậy, giá thể thích hợp cho Dã yến thảo rũ hồng đậm đất thịt,... αNAA, hệ số nhân đạt 73,11 lần Nguyên nhân khác đặc tính di truyền giống hoa khác thành phần môi trường nuôi cấy khác 3.2.2 Ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yến thảo Để đánh