Đánh giá tỷ lệ nhiễm aspergillus flavus trên hạt giống lạc tại nghi lộc, vùng phụ cận vụ xuân 2011 và phòng trừ bằng trichoderma spp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH H TH NHUNG ĐáNH GIá Tỷ Lệ NHIễM Aspergillus flavus TR£N H¹T L¹C GIèNG T¹I NGHI LéC, VïNG PHơ CËN Vụ XUÂN 2011 Và PHòNG TRừ BằNG Trichoderma spp Chuyên ngµnh: TRåNG TRäT M· sè: 60.62.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN NGỌC LÂN VINH - 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị, cơng trình nghiên cứu Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn Trong luận văn tơi có sử dụng thông tin từ nhiều nguồn khác nhau, thơng tin trích dẫn sử dụng ghi rõ nguồn gốc, xuất xứ Tác giả luận văn HỒ THỊ NHUNG i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn thạc sĩ này, nỗ lực phấn đấu thân tơi cịn nhận nhiều nhiều giúp đỡ quý báu khác Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Trần Ngọc Lân tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô đồng nghiệp Khoa Nông Lâm Ngư tạo điều kiện, giúp đỡ suốt thời gian thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới tập thể, cá nhân, bạn bè người thân động viên khích lệ tơi thời gian học tập trường thực đề tài tốt nghiệp Vinh, tháng 12 năm 2011 Tác giả luận văn Hồ Thị Nhung ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1.1 Lý chọn đề tài 1.2 Mục đích nghiên cứu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Những nghiên cứu thành phần bệnh hại lạc hạt giống lạc giới Việt Nam 1.2 Độc tố aflatoxin phương pháp chẩn đoán .11 1.3 Biện pháp sinh học sử dụng nấm Trichoderma spp phòng trừ bệnh hại lạc giới Việt Nam .30 1.4 Tình hình sản xuất lạc Nghệ An 35 CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Đối tượng nghiên cứu 37 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 37 2.3 Vật liệu nghiên cứu 37 2.4 Nội dung nghiên cứu 38 2.4.1 Đánh giá tỷ lệ nhiễm A flavus lạc giống thu Nghi Lộc phụ cận .38 2.4.2 Đánh giá hiệu phòng trừ A flavus Trichoderma spp điều kiện chậu vại đồng ruộng 38 2.5 Phương pháp nghiên cứu .38 2.6 Các công thức sử dụng tiêu theo dõi 46 2.7 Xử lý số liệu 46 iii CHƢƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Đánh giá tỷ lệ mẫu nhiễm Aspergillus flavus lạc vùng Nghi Lộc phụ cận .47 3.1.1 Thành phần nấm hại hạt lạc thu thập vùng Nghi Lộc vùng phụ cận vụ xuân 2011 47 3.1.2 Tỷ lệ nhiễm nấm hạt giống lạc điểm điều tra huyện Nghi Lộc phụ cận 51 3.1.3 Tỷ lệ nhiễm Aspergillus flavus hạt lạc thu từ chợ vùng Nghi Lộc phụ cận 53 3.1.4 Tỷ lệ nhiễm Aspergillus flavus hạt lạc giống thu từ nông hộ huyện Nghi Lộc phụ cận 55 3.1.5 Chẩn đoán chủng Aspergillus flavus phân lập từ hạt giống sinh độc tố aflatoxin môi trường thạch nước cốt dừa (CAM) .57 3.1.6 Khả sinh độc tố aflatoxin môi trường CAM chủng Aspegillus flavus phân lập từ hạt giống lạc thu thập chợ vùng Nghi Lộc phụ cận .60 3.2 Khả phòng trừ Aspergillus flavus hại lạc Trichoderma harzianum (Tr.011NL) Trichoderma atroviride (Tr.020NC) 61 3.2.1 So sánh cách xử lý hạt giống thông thường dùng Trichoderma .61 3.2.2 Khả hạn chế Trichoderma đến xâm nhiễm Aspergillus flavus lên hạt giống lạc 62 3.2.3 Xác định khả hạn chế số lượng mầm bệnh Aspergillus flavus đất trồng lạc Trichoderma điều kiện chậu vại mức nồng độ khác .64 3.2.4 Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng Trichoderma harzianum (Tr.011NL) A flavus ruộng lạc .67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT A flavus Aspergillus flavus A nomius Aspergillus nomius A niger Aspergillus niger A paraciticus Aspergillus paraciticus CAB Centre for Agricultural Bioscience International International CAM Coconut agar medium cs Cộng ICRISAT International Crops Research Institute for the Semi-Arid Tropics F oxysporum Fusarium oxysporum F solani Fusarium solani PDA Potato Dextro Agar T atroviride Trichoderma atroviride T harzianum Trichoderma harzianum R solani Rhizoctonia solani S rolfsii Sclerotium rolfsii UV Ultraviolet v DANH MỤC BẢNG TT Bảng 1.1 Tên bảng Trang Sự có mặt A flavus Aflatoxin mẫu lạc (từ 19671983 Philippin) 13 Bảng 1.2 Tính chất lý hóa Aflatoxin 19 Bảng 1.3 Mối quan hệ tỷ lệ ung thư gan với hấp thu Aflatoxin vào thể 21 Bảng 1.4 Những quy định tạm thời cho phép thức ăn chăn nuôi nguyên liệu làm thức ăn chăn nuôi Việt Nam 22 Bảng 1.5 Hàm lượng cho phép tối đa Aflatoxin thực phẩm thức ăn chăn nuôi 23 Bảng 1.6 Tình hình sản xuất lạc Nghệ An năm gần 36 Bảng 3.1 Thành phần nấm hại hạt lạc vùng Nghi Lộc phụ cận 48 Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm nấm hạt giống lạc điểm điều tra vùng Nghi Lộc phụ cận 52 Bảng 3.3 Tỷ lệ nhiễm A flavus lạc giống thu từ chợ 54 Bảng 3.4 Tỷ lệ nhiễm A flavus lạc giống thu từ kho bảo quản nông hộ vùng Nghi Lộc phụ cận 56 Bảng 3.5.1 Khả sinh aflatoxin môi trường CAM chủng A.flavus phân lập từ hạt giống lạc thu từ nông hộ vùng Nghi Lộc phụ cận 57 Bảng 3.5.2 Khả sinh aflatoxin môi trường CAM chủng A flavus phân lập từ hạt giống lạc từ nông hộ vùng Nghi Lộc phụ cận 59 Bảng 3.6.1 Khả sinh độc tố aflatoxin môi trường CAM chủng A flavus phân lập từ mẫu lạc giống chợ vùng Nghi Lộc phụ cận 60 vi Bảng 3.6.2 Khả sinh độc tố aflatoxin môi trường CAM chủng A flavus phân lập từ mẫu lạc giống chợ vùng Nghi Lộc phụ cận 60 Bảng 3.7 So sánh cách xử lý hạt giống thông thường Trichoderma 61 Bảng 3.8 Ảnh hưởng T atroviride (Tr.020NC) T harzianum (Tr.011NL) đến khả xâm nhiễm A flavus 63 Bảng 3.9 Xác định khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc chủng T harzianum (Tr.011NL) T atroviride (Tr.020NC) điều kiện chậu vại mức nồng độ khác 65 Bảng 3.10 Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống 68 Bảng 3.11 Hiệu lực phòng trừ T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống tưới giai đoạn sinh trưởng 69 Bảng 3.12 Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus tưới giai đoạn sinh trưởng 71 vii DANH MỤC HÌNH TT Tên hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc hoá học Aflatoxin (Jones, 1977) 17 Hình 1.2 Kết hợp phương pháp để đánh giá chủng sinh độc tố aflatoxin loài Aspergillus spp 24 Hình 2.1 Mầu sắc A flavus mơi trường CAM theo thứ tự: vàng sậm (có độc tố aflatoxin), vàng nhạt (có thể có khơng có độc tố aflatoxin) trắng (khơng có aflatoxin) 42 Hình 2.2 Hình ảnh quan sát độc tố Aflatoxin sinh chủng nấm A flavus ánh sáng đèn UV (huỳnh quang màu xanh: có độc tố aflatoxin, màu tím: khơng chứa độc tố aflatoxin) 42 Hình 3.1 A flavus phân lập từ nơng sản (a,b); A niger phân lập từ nông sản (c, d) 51 Hình 3.2 Tỷ lệ nhiễm A flavus lạc giống thu từ chợ 54 Hình 3.3 Tỷ lệ nhiễm Aspergillus flavus lạc giống thu từ nông hộ vùng Nghi Lộc phụ cận 56 Hình 3.4 Khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc Trichoderma điều kiện chậu vại mức nồng độ khác 66 Hình 3.5 Hiệu lực phịng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống 68 Hình 3.6 Hiệu lực phịng trừ T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống tưới giai đoạn sinh trưởng 70 Hình 3.7 Hiệu lực phịng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus tưới giai đoạn sinh trưởng 72 viii MỞ ĐẦU 1.1 Lý chọn đề tài Cây Lạc (Arachis hypogaea L.) công nghiệp ngắn ngày có giá trị kinh tế cao dùng làm thực phẩm xuất Hạt lạc chứa nhiều prôtêin, lipit, nhiều loại vitamin loại axit amin không thay Cây lạc trồng có khả thích ứng rộng với điều kiện đất đai có khả cố định đạm Do lạc loại trồng luân canh cải tạo đất tốt Trong năm qua trồng lạc cho hiệu kinh tế cao cho thu nhập ổn định Do lạc nhiều địa phương khuyến khích phát triển Theo Tổng cục thống kê (2004), tổng diện tích lạc nước đạt 258,7 nghìn ha, suất trung bình 17,4 tạ/ha, tổng sản lượng đạt 451,1 nghìn Dự kiến giai đoạn 2005 - 2010 đưa diện tích trồng lạc lên 330 nghìn ha, sản lượng đạt 550-560 nghìn Nghệ An coi vùng trồng lạc có truyền thống lâu đời Hiện nay, Nghệ An địa phương có diện tích gieo trồng lạc lớn nước (24,1 nghìn sản lượng 48,5 nghìn tấn) chủ yếu tập trung số huyện ven biển Nghi Lộc (4300 ha), Diễn Châu (3800 ha), chủ yếu sản xuất vụ Xuân Theo ủy ban nhân dân tỉnh Nghệ An, thời gian tới tiếp tục đầu tư thâm canh, mở rộng sản xuất lạc để đến năm 2010 đưa diện tích gieo trồng lạc tỉnh lên đến 35 nghìn ha, suất bình quân đạt 20 tạ/ha Tuy nhiên, hạt lạc nơi tiềm ẩn nhiều loài nấm gây bệnh, đặc biệt lồi nấm có nguồn gốc đất truyền qua hạt giống Aspergillus, Sclerotium, Pennicilium, Fusarium… chúng gây thiệt hại suất, làm chết đồng ruộng nguyên nhân gây bệnh nguy hiểm cho người vật ni Nhóm nấm sinh độc tố phổ biến Aspergillus spp (A flavus, A parasiticus A nomius) sản sinh aflatoxin, độc tố nguy 3.2.4.2 Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng Trichoderma harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống tưới giai đoạn sinh trưởng Chúng tơi tiến hành thí nghiệm dùng biện pháp xử lý hỗn hợp trộn chế phẩm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) với hạt giống lạc đem trồng, đồng thời tưới chế phẩm nấm đối kháng giai đoạn trưởng khác cây: mọc đều, thời điểm hoa rộ thời điểm lạc có củ non Biện pháp có tác dụng cung cấp lượng nấm đối kháng Trichoderma từ ban đầu bắt đầu trồng, mà nấm đối kháng Trichoderma có tác dụng ức chế nấm bệnh có nấm bệnh phát sinh, đồng thời tưới vào thời điểm trồng bổ sung thêm số lượng nấm Trichoderma vào đất giai đoạn phát triển cây, thời điểm lúc nấm bệnh phát sinh gây hại gia tăng Trichoderma vừa có tác dụng đối kháng vừa ức chế phát triển nấm bệnh, kết thí nghiệm thu bảng 3.11 hình 3.6 Bảng 3.11 Hiệu lực phòng trừ T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống tưới giai đoạn sinh trưởng Công thức CT1 CT2 CT3 CT4 (ĐC) CV% LSD0,05 Tỷ lệ bệnh (%) 5,54 6,82 8,06 11,12 Hiệu lực phòng trừ (%) 50,13a 46,22a 34,53b 5,4 5,85 Ghi chú: Các giá trị trung bình cột mang chữ khác khác có ý nghĩa mức α=0,05 CT1:Trộn 2,5g T harzianum (Tr.011NL) 0,25kg hạt 25m2+tưới 7,5g T.harzianum (Tr.011NL)/25m2 lạc mọc CT2:Trộn 2,5g T harzianum (Tr.011NL) 0,25kg hạt 25m2+tưới 7,5g T.harzianum (Tr.011NL)/25m2 lạc hoa 69 CT3:Trộn 2,5g T harzianum (Tr.011NL) 0,25kg hạt 25m2+tưới 7,5g T.harzianum (Tr.011NL)/25m2 lạc có non CT4 (đối chứng): Khơng xử lý T harzianum (Tr.011NL) Hình 3.6 Hiệu lực phịng trừ T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống tưới giai đoạn sinh trưởng Từ kết bảng 3.11 hình 3.6 chúng tơi có nhận xét sau: Nếu xử lý chế phẩm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) phương pháp trộn với hạt lạc tiến hành tưới chế phẩm T harzianum (Tr.011NL) vào giai đoạn nảy mầm lạc cho hiệu phòng trừ cao nấm A flavus (50,13%) Khi xử lý trộn chế phẩm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) với hạt giống tưới vào giai đoạn lạc mọc đều, T harzianum (Tr.011NL) ức chế phát triển nấm bệnh từ ban đầu đồng thời tưới chế phấm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) vào giai đoạn nảy mầm giai đoạn xung yếu dễ bị bệnh hại vùng rễ công đặc biệt bệnh A flavus Công thức xử lý hạt giống tưới T harzianum (Tr.011NL) lạc hoa cho hiệu lực phòng trừ A flavus cao 46,22% sai khác khơng có ý nghĩa so với cơng thức tưới dung dịch bào tử T harzianum (Tr.011NL) 70 lạc mọc Đến giai đoạn lạc có non bổ sung thêm T harzianum (Tr.011NL) vào đất hiệu tiêu diệt nấm bệnh A flavus thấp 34,53% Như vậy, với phương pháp xử lý trộn chế phẩm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) với hạt giống tưới vào giai đoạn lạc mọc đảm bảo thời gian đủ lớn cho Trichoderma nhân lên đất, tăng hiệu diệt trừ loài nấm bệnh đất nói chung, lồi A flavus nói riêng 3.2.4.3 Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus tưới giai đoạn sinh trưởng Đa số bệnh hại vùng rễ lạc thường gây hại từ giai đoạn mọc đến giai đoạn bắt đầu hình thành củ, thu hoạch Đây sở để chúng tơi tiến hành phương pháp sử dụng chế phẩm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) tưới vào giai đoạn sinh trưởng khác làm giảm phát triển gây bệnh nấm bệnh hại vùng rễ loài A flavus đồng thời tạo nguồn vi sinh vật đối kháng đất giúp sinh trưởng tốt Kết thí nghiệm thể bảng 3.12 hình 3.7 Bảng 3.12 Hiệu lực phịng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus tưới giai đoạn sinh trưởng Công thức CT1 CT2 CT3 CT4(ĐC) CV% LSD0,05 Tỷ lệ bệnh (%) 5,12 6,02 7,83 10,96 Hiệu lực phòng trừ (%) 49,09a 40,12b 32,86c 7,1 7,03 Ghi chú: Các giá trị trung bình cột mang chữ khác khác có ý nghĩa mức α=0,05 CT1: Tưới 7,5g T harzianum (Tr.011NL)/25m2 lạc mọc CT2: Tưới 7,5g T harzianum (Tr.011NL)/25m2 lạc hoa CT3: Tưới 7,5g T harzianum (Tr.011NL)/25m2 lạc non CT4: Đối chứng tưới nước, không tưới T harzianum (Tr.011NL) 71 Hình 3.7 Hiệu lực phịng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus tưới giai đoạn sinh trưởng Kết bảng 3.12 hình 3.7 cho thấy tưới chế phẩm nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) vào giai đoạn sinh trưởng khác lạc cho hiệu lực phòng trừ A flavus khác nhau, đạt cao tưới Trichoderma vào giai đoạn lạc mọc Xử lý T harzianum (Tr.011NL) sớm vào giai đoạn mọc, lúc nấm chưa xâm nhập vào cây, hiệu phịng trừ đạt 49,09% cao so với xử lý Trichoderma lạc hoa hình thành củ non Như vậy, so sánh kết thí nghiệm xử lý T harzianum (Tr.011NL) phòng trừ A flavus ruộng lạc theo ba cách khác thấy rằng: đạt hiệu phòng trừ A flavus cao 58,45% với cách xử lý trộn chế phẩm T harzianum (Tr.011NL) với hạt giống lạc liều lượng 12,5g/0,45kg hạt/25m2 Cách xử lý: trộn chế phẩm T harzianum (Tr.011NL) với hạt giống tưới dung dịch bào tử nấm đối kháng lạc mọc cho hiệu phòng trừ A flavus 50,13% Hiệu phòng trừ A flavus đạt thấp 49,09% với cách xử lý T harzianum (Tr.011NL) tưới giai đoạn lạc mọc 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Có lồi nấm gây hại hạt giống lạc Nghi Lộc có tỷ lệ nhiễm loài nấm bệnh hạt lạc cao huyện điều tra Tỷ lệ số mẫu lạc nhiễm nấm A flavus chợ khảo sát Nghi Lộc số vùng phụ cận từ 33,3 – 66,7% Hạt giống thu từ nông hộ có tỷ lệ nhiễm A flavus 17,1-72% Xác định tỷ lệ chủng A flavus phân lập từ lạc giống sinh độc tố aflatoxin môi trường thạch nước cốt dừa: từ nơng hộ có 71,6%; từ chợ có 69,6% tỷ lệ chủng A flavus sinh độc tố aflatoxin Sử dụng Trichoderma để xử lý hạt giống hạn chế số mầm dị dạng so với cách xử lý thông thường Khả hạn chế Trichoderma xâm nhiễm A flavus lên hạt giống đạt cao sau ngày xử lý hạt giống Trichoderma Chủng T harzianum (Tr.011NL) có khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc điều kiện chậu vại cao so với T atroviride (Tr.020NC) Hiệu phòng trừ cao Trichoderma nồng độ 109 bào tử/ml Trộn chế phẩm T harzianum (Tr.011NL) với hạt giống lạc liều lượng 12,5g/0,45kg hạt/25m2 cho hiệu phòng trừ A flavus ruộng trồng lạc đạt cao 73 Kiến nghị Sử dụng môi trường thạch nước cốt dừa kết hợp với quan sát huỳnh quang đèn tia cực tím để xác định định tính chủng A flavus sinh độc tố aflatoxin Xử lý hạt giống lạc Trichoderma harzianum (Tr.011NL) để giảm thiểu mầm dị dạng Xử lý chế phẩm T harzianum (Tr.011NL) 8,7 x 107 với hạt giống lạc liều lượng 12,5g/0,45kg hạt/25m2 cho hiệu phòng trừ A flavus ruộng trồng lạc đạt cao 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Thuỳ Châu, Nguyễn Thị Hồ Bình, Nguyễn Minh Tâm (1995), “Mức nhiễm aflatoxin Ngô số tỉnh Việt nam”, Tạp chí Nơng nghiệp, Cơng nghiệp Thực phẩm, 9: 396-397 Nguyễn Thuỳ Châu, Nguyễn Thị Hồ Bình, Nguyễn Minh Tâm (1997), “Mức độ nhiễm nấm mốc ngô miền Bắc Việt nam thu hoạch năm 1995-1996”, Tạp chí Nơng nghiệp, Cơng nghiệp Thực phẩm, 139-141, 3/1997 Lê Như Cương (2004), "Tình hình bệnh héo rũ lạc kết nghiên cứu số biện pháp phòng trừ tỉnh Thừa Thiên Huế”, Tạp chí BVTV, số 1/2004, tr – 14 Đỗ Tấn Dũng (2001), Bệnh héo rũ trồng cạn, Nxb Nông Nghiệp 2001 Đỗ Tấn Dũng (2006), "Nghiên cứu bệnh héo rũ gốc mốc trắng Sclerotium rolfsii Sacc, hại số trồng cạn khu vực Hà Nội phụ cận năm 2005 - 2006", Tạp chí BVTV, số 4, Tr 20 – 24 Đậu Ngọc Hào, Lê Thị Ngọc Diệp, (2003), Nấm mốc độc tố Aflatoxin thức ăn chăn nuôi, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Ngơ Bích Hảo (2004), “Tình hình nhiễm nấm Aspergillus spp hạt giống số trồng ảnh hưởng nấm gây bệnh đến nảy mầm sức sống con”, Tạp chí KHKT Nơng nghiệp,Tập (số 1/2004), tr.9-12 Ngơ Bích Hảo (2007), Bài giảng môn học bệnh hại hạt giống Nguyễn Xuân Hồng, Nguyễn Thị Xuyến (1991), Kết nghiên cứu bệnh hại lạc Việt Nam, NXB Nông nghiệp 1991 10 Nguyễn Xuân Hồng cộng (1998), "Bệnh Việt Nam số đề xuất chiến lược phòng trừ", Kết nghiên cứu khoa học 1988, Viện khoa học nông nghiệp Việt Nam 1999 11 Nguyễn Thị Ly, Phan Bích Thu (1993), “Nguyên nhân gây bệnh chết héo lạc miền Bắc Việt Nam”, Hội nghị khoa học BVTV, 3-1993, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 1993, tr.15-16 12 Nguyễn Thị Ly (1996), Nghiên cứu thành phần bệnh héo lạc nấm Aspergillus flavus sinh độc tố Aflatoxin lạc miền bắc Việt Nam 75 13 Đặng Trần Phú, Lê Trường, Nguyễn Hồng Phi, Nguyễn Xuân Hiền (1977), "Tài liệu lạc (Đậu phộng)", Cây Công nghiệp lấy dầu, tập II, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 55 – 65 14 Lê Minh Thi, Lê Bích Thủy, Dương Thị Hồng (1989), "Thơng báo kết bước đầu khảo nghiệm tính đối kháng nấm Trichoderma spp", Thông tin BVTV, số 2, tr 39-42 15 Trần Thị Thuần (1997), Nghiên cứu nấm đối kháng Trichoderma ứng dụng phòng trừ bệnh hại trồng, Luận văn thạc sỹ nông nghiệp 16 Lê Văn Tố Trần Văn An, (1994), “Vấn đề mycotoxin cách quản lý ngũ cốc Việt nam”, Báo cáo hội thảo Quốc tế: Công nghệ sau thu hoạch sản phẩm nông nghiệp, 8-9/12/1994, Hà Nội 17 Nguyễn Kim Vân cộng (2001), Bệnh nấm đất hại trồng, nguyên nhân biện pháp phịng trừ, Chương trình AusAID, NXB Nơng nghiệp 18 Dương Hoa Xơ (2006), Vai trị nấm đối kháng Trichoderma kiểm soát sinh vật gây bệnh đất TÀI LIỆU TIẾNG ANH 19 Aronoff, Stephen (2004), 2001- 2003 Mold Aspergillus http://www mold-.help.org/Aspergillus.htm 20 Arseculeratne, S N., L M De Silva, S Wijesundera, and C H S R Bandunatha (1969), “Coconut as a Medium for the Experimental production of aflatoxin”, Applied Microbiology, Vo.18, No.1: p.88-94 21 Cleveland, T E., and D Bhatnagar (1990),Evidence for de novo synthesis of an aflatoxin pathway methyltransferase near the cessation of active growth and the onset of aflatoxin biosynthesis in A paraciticus mycelia, Can J Microbio 32: 1.5 22 Compendium of Crop Protection (2001), CAB International Press 23 D.J Allen and J.M Lenne (1998), “The Pathology of Food and Pasture Legumes, ICRISAT for the Semi – Arid Tropics”, CAB International, pp.1-109 24 Davis, N D, S.K IYER and U L Diener (1987), “Improved method of screening for Aflatoxin with a Coconut agar medium”, Applied and Environmental Microbiology, p 1593-1595 76 25 Dewa Ngurat Suprapta, Made Sudana and Nyoman Arya, Application of plant extracts to control Ceratocystis fruit rot in Snake fruit, June 2001 26 Dutton, M F (1988), “Enzymes and aflatoxin biosynthesis”, Microbiol, Rev 53: 274 – 295 27 G A Payne et al., (1993), “Cloning of the afl-2 gene involved in aflatoxin biosynthesis from Aspergillus flavus”, Applied and Environmental Microbiology, Vol 59, No.1:p.156-162 28 H K Abbas, R.M Zablotowicz, and M.A Locke (2004), “Spatial variability of Aspergillus flavus soil populations under different crops and corn grain colonization and aflatoxin”, Can J Bot 82 (12): 1768 – 1775 29 Hamed K Abbas, W T shier, B.W.Horn and M A weaver (2004), “Cultural Methods for Aflatoxin Detection”, Journal of Toxicology, Vol 23, Nos 2&3, pp 295-315 30 Keller, N P., H C Dischinger, Jr., D Bhatnagar, T E., Cleveland, and A H J Ullah, (1993), Purification of a 40 kilodalton methyltransferase active in the aflatoxin biosynthetic pathway, Appl Environ Microbiol 59: 479 – 484 31 Kulwant Singh, Jens C Frisvad, Ulf Thrane and S.B Mathur (1991), “An Illustrated Manual on Indentification of some Seed-borne Aspergilli, Fusaria, Penicillia and their Mycotoxins, DGISP for Developing Countries”, ISBN 877026-3175, 133p 32 Kurtzman C P., et al (1987), “Aspergillus flavus and Aspergillus tamari”, Antonie Leeuwenhoek 53:147-157 33 Lin, M T., and J C Dianese (1976), “A coconut-agar medium for rapid detection of aflatoxin production by Aspergillus spp.” Phytopathology 66:1466-1469 34 M.J Richardson (1990), An Annotated list of seed – borne diseases, 4th Edi.,Published by International Seed Test Association (ISTA), Switzerland, pp.23-26 35 N Kokalis-Burelle, D M Porter, R Rodríguez -K Bana, D H Smith, P.Subrahmanyam eds (1997), Compendium of peanut diseases, 2nd editor, The APS press, 94p 36 Score, A.J, J.W Palfreyman, (1994), Biological control of the dry rot fungus 77 Serpula larymans by Trichoderma species 37 Shapira R., N Paster, M Menasherov, O Eyal, A Mett, T Meiron, E Kuttin, and R Salomon (1997), “Development of Polyclonal Antibodies for Detection of Aflatoxigenic Molds Involving Culture Filtrate and Chimeric Proteins Expressed in Escherichia coli”, Applied and Environmental Microbiology, Mar 1997, p 990-995 38 Stroka J., Van Otterdijk R and Anklam E (2000), “Immunoaffinity column clean-up prior to thin-layer chromatography for the determination of aflatoxins in various food matrices”, J Chromatogr A Dec 29; 904 (2): 251-6 39 Trichoderma spp online 40 Yu J et al (2004), “Minnireview:Clustered pathway genes in aflatoxin biosynthesis”, Applied and Environmental Microbiology, Vol 70, No.3: p 125362 78 CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ [1] Trần Ngọc Lân, Hồ Thị Nhung, Nguyễn Thị Thúy, Nguyễn Thị Thanh, Nguyễn Thị Kim (2011), Khả đối kháng chủng Trichoderma harzianum (Tr.011NL) Trichoderma atroviride (Tr.020NC) nấm mốc hại lạc Aspergillus flavus, Tạp chí khoa học Đại học Vinh (Giấy nhận đăng) 79 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU 1) Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng Trichoderma A flavus đất trồng lạc chậu vại SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE TNCVT 14/11/11 22:47 :PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang Trichoderma doi voi A flavus tren dat lac chau vai ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TRI011NL 0.30234E+08 15092 12 2003.31 0.000 TRI020NC 0.32715E+08 22844 12 1432.11 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNCVT 14/ 11/11 22:47 :PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang Trichoderma doi voi A flavus tren dat lac chau vai MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 NOS 3 3 3 TRI011NL 13959.3 11223.3 10980.0 9047.67 6673.33 5357.67 TRI020NC 13959.3 12243.3 12075.0 10558.3 6956.67 5503.67 SE(N= 3) 70.9272 87.2621 5%LSD 12DF 218.551 268.884 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNCVT 14/ 11/11 22:47 :PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang Trichoderma doi voi A flavus tren dat lac chau vai F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 18) NO OBS TRI011NL 18 TRI020NC 18 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 9540.2 2983.8 122.85 1.3 0.0000 10216 3104.5 152.14 1.5 0.0000 2) Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL_AF FILE TNOL1 14/ 11/11 6:23 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tron che pham voi hat giong VARIATE V003 HL_AF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NLAI 33.9088 16.9744 5.24 0.048 CT$ 1680.87 561.200 172.20 0.000 * RESIDUAL 19.4437 3.24001 * TOTAL (CORRECTED) 11 1737.06 157.903 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNOL1 14/ 11/11 6:23 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tron che pham voi hat giong MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 4 HL_AF 42.1400 40.0300 44.2300 SE(N= 4) 0.900035 5%LSD 6DF 4.51854 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 NOS 3 3 HL_AF 27.2800 39.2600 49.5600 58.4100 SE(N= 3) 1.03133 5%LSD 6DF 4.04511 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNOL1 14/ 11/11 6:29 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum doi voi A flavus tron che pham voi hat giong F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HL_AF GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 42.140 STANDARD DEVIATION C OF V |NLAI SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 12.527 1.8502 4.8 0.0455 |CT$ | | | 0.0000 | | | | 3) Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus trộn chế phẩm với hạt giống tưới giai đoạn sinh trưởng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL_AF FILE TNOL2 14/ 11/11 6:29 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tron che pham voi hat giong va tuoi o cac giai doan sinh truong VARIATE V003 HL_AF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NLAI 4.21407 2.10643 0.27 0.780 CT$ 462.524 216.237 28.61 0.006 * RESIDUAL 31.6361 7.95903 * TOTAL (CORRECTED) 425.453 61.0559 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNOL2 14/ 11/11 6:29 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tron che pham voi hat giong va tuoi o cac giai doan sinh truong MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 3 HL_AF 44.7233 46.0200 44.4227 SE(N= 3) 1.62262 5%LSD 4DF 6.36248 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 NOS 3 HL_AF 50.1300 46.2200 34.5300 SE(N= 3) 1.62398 5%LSD 4DF 5.85048 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNOL2 14/ 11/11 6:29 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tron che pham voi hat giong va tuoi o cac giai doan sinh truong F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HL_AF GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 45.057 STANDARD DEVIATION C OF V |NLAI SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.8236 2.8023 5.4 0.7775 |CT$ | | | 0.0054 | | | | 4) Hiệu lực phòng trừ nấm đối kháng T harzianum (Tr.011NL) A flavus tưới giai đoạn sinh trưởng lạc BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL_AF FILE TNOL3 14/ 11/11 6:31 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tuoi o cac giai doan sinh truong cua cay lac VARIATE V003 HL_AF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NLAI 101.191 50.8457 6.13 0.062 CT$ 309.997 154.994 17.66 0.001 * RESIDUAL 33.2021 8.30004 * TOTAL (CORRECTED) 414.813 55.6119 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNOL3 14/ 11/11 6:31 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tuoi o cac giai doan sinh truong cua cay lac MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 3 HL_AF 41.9933 46.0020 43.7657 SE(N= 3) 1.66113 5%LSD 4DF 6.52110 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 NOS 3 HL_AF 49.0900 40.1300 32.8500 SE(N= 3) 1.66323 5%LSD 4DF 7.03020 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNOL3 14/ 11/11 6:31 PAGE Hieu luc phong tru cua nam doi khang T harzianum (Tr.011NL)doi voi A flavus tuoi o cac giai doan sinh truong cua cay lac F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HL_AF GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 41.927 STANDARD DEVIATION C OF V |NLAI SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.4532 2.8912 7.1 0.0718 |CT$ | | | 0.0117 | | | | ... NGHI? ?N CỨU VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Đánh giá tỷ lệ mẫu nhiễm Aspergillus flavus lạc vùng Nghi Lộc phụ cận .47 3.1.1 Thành phần nấm hại hạt lạc thu thập vùng Nghi Lộc vùng phụ cận vụ. .. vụ xuân 2011 47 3.1.2 Tỷ lệ nhiễm nấm hạt giống lạc điểm điều tra huyện Nghi Lộc phụ cận 51 3.1.3 Tỷ lệ nhiễm Aspergillus flavus hạt lạc thu từ chợ vùng Nghi Lộc phụ cận. .. Aspergillus flavus hạt lạc giống Nghi Lộc, vùng phụ cận vụ xuân 2011 phòng trừ Trichoderma spp 1.2 Mục đích nghi? ?n cứu đề tài Ứng dụng nấm Trichoderma spp kiểm soát A flavus sinh độc tố aflatoxin hạt giống