Đánh giá hiệu quả hấp phụ Aflatoxin B1 của chế phẩm T5X ở điều kiện in vitro

Bài viết nhằm đánh giá hiệu quả hấp phụ aflatoxin B1 (AFB1) của chế phẩm T5X ở điều kiện in vitro cho thấy sử dụng T5X với lượng khuyến cáo của nhà sản xuất (20 mg/10g thức ăn) cho hiệu quả hấp phụ aflatoxin B1 là 88,01%. Ở các mức độc tố 100 ppb, 200 ppb, và 500 ppb của AFB1 hiệu quả hấp phụ của T5X có xu hướng giảm dần. Mời các bạn cùng tham khảo!

ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ HẤP PHỤ AFLATOXIN B1 CỦA CHẾ PHẨM T5X Ở ĐIỀU KIỆN IN VITRO Nguyễn Thị Lan Anh, Nguyễn Văn Khanh Viện Khoa học Ứng dụng, trường Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh (HUTECH) TĨM TẮT Các loại thức ăn hỗn hợp tự trộn (dạng bột) sử dụng heo thịt bị nhiễm aflatoxin (AF) 92% với nồng độ 60,93±116,66 ppb cao thức ăn công nghiệp (dạng viên) Kết đánh giá hiệu hấp phụ aflatoxin B1 (AFB1) chế phẩm T5X điều kiện in vitro cho thấy sử dụng T5X với lượng khuyến cáo nhà sản xuất (20 mg/10g thức ăn) cho hiệu hấp phụ aflatoxin B1 88,01% Ở mức độc tố 100 ppb, 200 ppb, 500 ppb AFB1 hiệu hấp phụ T5X có xu hướng giảm dần Ở mức pH = hiệu hấp phụ AFB1 T5X tốt pH = Ở mức độc tố 500ppb, hiệu hấp phụ AFB1 T5X thấp, 80,51% Sử dụng T5X với lượng 40mg/10g thức ăn hấp phụ 98,7% lượng AFB1 hàm lượng 500 ppb với điều kiện mơi trường pH = Từ khóa: Chế phẩm hấp phụ, aflatoxin, T5X EVALUATE THE EFFECTIVE ADSORPTION OF AFLATOXIN B1 BY T5X IN VITRO Nguyen Thi Lan Anh, Nguyen Van Khanh Institute for Applied Sciences, Ho Chi Minh city University of Technology SUMMARY The title of evaluate the effective adsorption of aflatoxin B1 by T5X was designed with treatments, six replications The complete feed (powder) that was used for meat pig being contaminated by AF was 92% with 60.93±116.66ppb, which was higher than industrial feed (pellet) The experimental results showed that using T5X at level recommended by the manufacturer (20 mg/10 g feeds) gave the effective adsorption of AFB1 was 88.01% The effectiveness of adsorption of AFB1 at the pH = was better than pH = At the level 500 ppb, T5X gave the effective adsorption of AFB1 was not good, 80.51% T5X at level 40 mg/10g feeds adsorbed 98.7% AFB1 of 500 ppb levels at the pH = Keywords: Adsorption, aflatoxin, T5X 1063 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước có điều kiện khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, thuận lợi cho loài nấm mốc phát sinh sản sinh độc tố Các loại độc tố aflatoxin, ochratoxin A, fumonisin, zearalenone, trichothecene, v.v tìm thấy phổ biến loại thức ăn chăn nuôi thực phẩm tự nhiên, sản sinh chủ yếu nấm Aspergillus, Fusarium Penicillium (Griessler cs., 2010) Aflatoxin chất chuyển hóa thứ cấp sản sinh lồi Aspergillus, loài A flavus A parasiticus biết đến nhiều Độc tố nấm mốc độc tố sinh từ nấm mốc, độc tố hợp chất sẵn có nguyên liệu thức ăn, mà tổng hợp lồi nấm mốc có nguyên liệu trình thu hoạch, bảo quản chế biến (Griessler cs., 2010) Hiện nay, loại độc tố gồm aflatoxin, deoxynivalenol, zearalenone, ochratoxin fumonisin cho nguy hiểm nhất, aflatoxin quan tâm (Osweiler Ensley, 2012) Aflatoxin đến ruột non nhanh chóng hấp thu vào tĩnh mạch ruột non khối lượng phân tử nhỏ Sau hấp thu qua đường tiêu hóa, độc tố vận chuyển hệ tuần hoàn nhờ liên kết với tế bào máu protein huyết tương (albumin) chuyển vào gan, quan xảy q trình chuyển hóa (Gratz, 2007) Ở Việt Nam, giải pháp nhiều nhà chăn nuôi lựa chọn để ngăn ngừa tác hại AF sử dụng chế phẩm hấp phụ độc tố trộn vào thức ăn Trên thị trường có nhiều sản phẩm hấp phụ độc tố nấm mốc Klinofeed, Clean Tox, Farmavet, Mycofix secure, Mycofix select 3,0,…và gần sử dụng số sản phẩm chiết xuất từ thành tế bào nấm men T5X, Captoxin premium, Mycosorb (Eter-Gluco-Manan),… VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu: – Thức ăn hỗn hợp tự trộn thức ăn công nghiệp cho heo thu thập Tp Hồ Chí Minh – Chất chuẩn Aflatoxin B1 5mg (Romer Labs, Inc Union, MO, USA) – Chất hấp phụ T5X (INVIVO NSA Neovia A & D, France) – Dung dịch đệm pH = gồm NaCl 3,1g; KCl 1,1g; CaCl2 0,15g; NaHCO3 0,6g vào lít nước cất acid hố HCl 1M, sau chuẩn độ để pH = máy đo pH (Avantaggiato cs., 2003) – Dung dịch đệm pH=7 tương đương với pH ruột gồm KH2PO4 3,4g; Na2HPO4 3,53g vào lít nước cất kiềm hóa NaOH 0,15 M sau chuẩn độ để pH = máy đo pH (Stippler cs., 2004) 2.2 Phƣơng pháp tiến hành: – Mẫu khảo sát tỷ lệ mức độ nhiễm AF thức ăn công nghiệp (53 mẫu) thức ăn hỗn hợp tự trộn (25 mẫu) cho heo thịt (60 ngày tuổi đến xuất chuồng) lấy theo TCVN số 4325.2007 – Thí nghiệm 1: Đánh giá hiệu hấp phụ aflatoxin B1 T5X thức ăn hỗn hợp tự trộn heo thịt theo nồng độ khuyến cáo (20 mg/kg thức ăn) bố trí theo nồng độ aflatoxin B1 có mức: 100 ppb, 200ppb, 500ppb, mức pH thí nghiệm (3 7), nghiệm thức, lần lặp lại Tổng số mẫu xét nghiệm AFB1 36 mẫu – Thí nghiệm 2: Đánh giá hiệu hấp phụ aflatoxin B1 tăng nồng độ T5X thức ăn hỗn hợp tự trộn heo thịt tiến hành với nồng độ AFB1 500 ppb điều kiện pH=7 tương đương 1064 pH ruột heo với nồng độ chất hấp phụ theo khuyến cáo nhà sản xuất (20 mg/ 10 g thức ăn) tăng lên gấp (40 mg/ 10 g thức ăn), gấp lần (60 mg/10 g thức ăn), tổng số mẫu xét nghiệm AFB1 18 mẫu – Tạo dung dịch chuẩn mẹ AFB1 nồng độ 1mg/ml: Hoà tan 5mg tinh thể độc tố 5ml methanol, hút 800µl dung dịch chuẩn mẹ chứa 800 µg aflatoxin B1 cho vào 99,2 ml dung dịch đệm (pH = 3±0,2 hay pH = 7±0,2) để tạo lơ dung dịch chuẩn 100ml có nồng độ 8µg/ml AFB1 tương đương ppm Tiếp tục pha dung dịch có nồng độ độc tố AFB1 100 ppb, 200 ppb, 500ppb Nồng độ AFB1 pha kiểm tra điều chỉnh máy HPLC Cách tiến hành: Cân 10g mẫu thức ăn, 40ml dung dịch chuẩn cho vào ống nghiệm điều kiện pH = pH = Tiếp tục thêm chất hấp phụ theo liều lượng khuyến cáo 20 mg T5X/ 10 g thức ăn (thí nghiệm 1) gấp (40 mg/10 g thức ăn), lần (60 mg/10 g thức ăn) (thí nghiệm 2), đậy nắp đem lắc (400 vòng/phút) ủ 390C 4h (Gallo Masoero, 2010), tiếp tục lắc Sau đó, ly tâm 10 phút (4000 vòng/phút), hút 4ml dịch chiết pha loãng với 8ml dung dịch đệm PBS – Phân tích HPLC: Sử dụng cột sắc ký Zorbax SB C18, 5µm, 250 x 4,6mm Aflatoxins phát đầu dò fluorescence máy HPLC Agilent 1100 bước sóng kích thích 365 nm bước sóng phát quang 410 nm – Khảo sát tỷ lệ mức độ nhiễm AF: + Tỷ lệ nhiễm AF (%) = (số mẫu chứa AF/ ∑ số mẫu phân tích) × 100 + Tỷ lệ vi phạm AF (%) = (số mẫu chứa AF vượt mức quy định/ ∑ số mẫu phân tích) × 100 + Tỷ lệ nhiễm theo dạng thức ăn (%) = (số mẫu chứa AF dạng/ ∑ số mẫu phân tích dạng) × 100 + Mức độ nhiễm AF (ppb) = (∑ hàm lượng AF mẫu nhiễm/ ∑ số mẫu nhiễm AF) + Mức độ nhiễm AF vi phạm (ppb) = (∑ hàm lượng AF tổng số mẫu nhiễm vi phạm/∑ số mẫu nhiễm AF vi phạm) + Mức độ nhiễm theo dạng thức ăn (ppb) = (∑ hàm lượng AF mẫu dạng/∑ số mẫu nhiễm phân tích dạng) – Đánh giá hiệu hấp phụ: Chỉ tiêu phần trăm hấp phụ tỷ lệ lượng độc tố bị hấp phụ với lượng độc tố có ống nghiệm ban đầu Xử lý số liệu: Sử dụng phần mềm Minitab 16.0, Trắc nghiệm Tukey để so sánh trung bình trắc nghiệm χ2 để so sánh tỷ lệ Số liệu mức nhiễm chuyển đổi sang dạng log (x) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tỷ lệ mức nhiễm aflatoxin (AF) thức ăn hỗn hợp tự trộn (dạng bột) thức ăn công nghiệp (dạng viên) heo thịt Kết khảo sát tỷ lệ mức nhiễm AF 78 mẫu thức ăn chăn nuôi cho heo thịt Tp Hồ Chí Minh ghi nhận Bảng cho thấy thức ăn dạng bột có tỷ lệ nhiễm AF tổng số 92% với mức nhiễm trung bình 60,93 ± 116,66 ppb cao tỷ lệ nhiễm AF tổng số thức ăn dạng viên 77,36% với mức nhiễm trung bình 14,29 ± 24,08 ppb mức nhiễm AF khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Như vậy, tỷ lệ mức nhiễm AF tổng số thức ăn dạng bột cao dạng viên Kết tương tự kết khảo sát Trần Huỳnh Bảo Ngọc (2008) Bà Rịa - Vũng Tàu báo cáo 90% (18/20 mẫu) thức ăn dạng bột nhiễm AF cao thức ăn dạng viên 87,5% (14/16 mẫu) 1065 Trong loại thức ăn sử dụng cho heo thịt khảo sát, thức ăn dạng bột có tỷ lệ nhiễm AF vượt mức quy định (VMQĐ) 16% mức nhiễm AF tổng số VMQĐ 253,18 ± 195,87 ppb cao so với thức ăn dạng viên (1,89%) mức nhiễm AF tổng số VMQĐ 149,4 ppb tỷ lệ VMQĐ khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Kết cao so với kết Lâm Thị Kim Loan (2012) lấy mẫu Tp HCM có 13,3% thức ăn dạng bột VMQĐ 100% thức ăn dạng viên đạt chuẩn Điều cho thấy người chăn ni heo thịt chưa có điều tốt để tiếp cận nguồn nguyên liệu chất lượng cao làm thức ăn chăn nuôi tự trộn Mức nhiễm loại AF hai dạng thức ăn dạng bột dạng viên khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Trong loại AF khảo sát, tỷ lệ mức độ nhiễm AFB1 thức ăn dạng bột cao có ý nghĩa thống kê so với thức ăn dạng viên (P = 0,001) Kết thấp Trần Thụy Phương Trúc (2008), tác giả ghi nhận tỷ lệ nhiễm AFB1 mẫu thức ăn dạng bột 39,29% với mức nhiễm 97,19 ppb cao 12,5 % với mức nhiễm 78,68 ppb mẫu thức ăn dạng viên TP Hồ Chí Minh 3.2 Hiệu hấp phụ AFB1 T5X thức ăn (TĂ) hỗn hợp tự trộn heo thịt Kết thí nghiệm đánh giá hiệu hấp phụ AFB1 T5X ghi nhận Bảng cho thấy hiệu hấp phụ AFB1 T5X trung bình mức độc tố 88,01% Ở mức độc tố 100 ppb, 200 ppb, 500 ppb hiệu hấp phụ T5X có xu hướng giảm dần tương ứng mức trung bình 96,09%, 87,43%, 80,51% khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Hiệu hấp phụ trung bình mức độc tố pH = 89,36% cao có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với hiệu hấp phụ mức pH = 86,65% Kết khảo sát cho thấy hiệu hấp phụ AFB1 T5X cao Kết phù hợp với nghiên cứu Fruhauf cs (2011), chế phẩm Microbond (chiết xuất từ thành tế bào nấm men) cho hiệu hấp phụ AFB1 100% 3.3 Hiệu hấp phụ AFB1 nồng độ 500 ppb pH = tăng nồng độ T5X thức ăn hỗn hợp tự trộn heo thịt Khả hấp phụ AFB1 nồng độ 500 ppb T5X mức 20 mg, 40 mg 60 mg 10g thức ăn ghi nhận Bảng Qua bảng cho thấy hiệu hấp phụ AFB1 T5X mức 40 mg 98,70% tương đương với mức 60 mg cao có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với mức 20mg (81,25%) Kết thí nghiệm cho thấy hiệu hấp phụ AFB1 trung bình mức chất hấp phụ 92,89%, nhiên, mức ≥ 40 mg hiệu hấp phụ AFB1 T5X khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Bảng Tỷ lệ mức nhiễm AF thức ăn hỗn hợp tự trộn (dạng bột) thức ăn công nghiệp (dạng viên) cho heo thịt Tp Hồ Chí Minh Chỉ tiêu G1 (N+) B1 (N+) G2 (N+) B2 (N+) AF tổng số VMQĐ (N+) 25 12,00 88,00 12,00 44,00 92,00 16,00 53 3,77 60,38 5,66 43,40 77,36 1,89 N+ > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 Bột 23 21,64 (3) 28,89 (22) 3,80 (3) 6,60 (11) 60,93 ± 116,66 (1,54-521,13) 253,18± 195,87 (4) Viên 41 0,52 (2) 7,17 (32) 0,48 (3) 6,12 (23) 14,29 ± 24,08 (0,54-149,40) 149,4 (1) > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 Dạng TĂ n Bột Viên Tỷ lệ nhiễm (%) Ptỷ lệ Loại aflatoxin Mức nhiễm (ppb) Pmức nhiễm 1066 Ghi chú: Trong ngoặc đơn khoảng giá trị từ nhỏ đến lớn nhất; mức AFB1, AF tổng số tối đa cho phép thức ăn heo thịt thức tự 50ppb, 100 ppb (QCVN 01-12, 2009) n số mẫu khảo sát, N+ số mẫu có AF Bảng Phần trăm hấp phụ AFB1 T5X mức độc tố khác pH=3 pH=7 Nồng độ AFB1 500ppb 200ppb 100ppb Tổng 79,76 ± 1,78 85,39 ± 0,79 94,81 ± 0,39 86,65b 81,25 ± 0,78 89,47 ±1,13 97,37 ± 0,27 89,36a Tổng 80,51c 87,43b 96,09a 88,01 pH Ghi chú: Có khác biệt có nghĩa thống kê (P= 0,000) mức độc tố mức pH, khơng có tương tác CHP*MĐT (p = 0,655), CHP*Mức pH (p = 0,837), MĐT*Mức pH (p = 0,569), CHP*MĐT*PH (p=0,884 ) với CHP: chất hấp phụ, MĐT: mức độc tố Bảng Phần trăm hấp phụ AFB1 nồng độ 500 ppb pH = mức T5X Nồng độ Loại AF AFB1 P 20mg 81,25b ± 1,56 40mg 60mg 98,70a ± 0,10 98,72a ± 0.13 0,000 Ghi chú: Các giá trị trung bình cột theo sau ký tự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê qua trắc nghiệm Tukey mức p > 0,05 Như vậy, tăng nồng độ chất hấp phụ từ 20mg lên 40mg khả hấp phụ AFB1 T5X tăng, mức 40mg T5X có khả hấp phụ hầu hết độc tố AFB1 đạt hiệu hấp phụ tương đương mức 60mg KẾT LUẬN Sử dụng T5X với lượng khuyến cáo nhà sản xuất (20mg/ 10g thức ăn) cho hiệu hấp phụ AFB1 điều kiện pH = thấp điều kiện pH = Sử dụng T5X với lượng 40mg/10g thức ăn có khả hấp phụ 98,7% lượng AFB1 điều kiện môi trường pH = (tương đương pH ruột) TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đậu Ngọc Hào Lê Thị Ngọc Điệp, 2004 Nấm mốc độc tố aflatoxin thức ăn chăn nuôi NXB Nông nghiệp [2] Fruhauf S., Schwartz H., Ottner F., Krska R and Vekiru E., 2011 Yeast cell based feed additives: Studies on aflatoxin B1 and zearalenone Food Additives and Contaminants: pp 1-30 [3] Gallo A and Masoero F., 2010 In vitro models to evaluate the capacity of different sequestering agents to adsorb aflatoxins Italian Journal of Animal Science (1): 20 1067 [4] Gratz S., 2007 Aflatoxin binding by probiotics: Experimental studies on intestinal aflatoxin transport, metabolism and toxicity Medical Sciences 404 85 [5] Griessler K., Rodrigues I., Handl J and Hofstetter U., 2010 Occurrence of mycotoxins in Southern Europe World Mycotoxin Journal 301 - 309 [6] Lâm Thị Kim Loan., 2012 Khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh họ tetracycline diện aflatoxin thức ăn gia súc số trại chăn nuôi heo địa bàn Tp.HCM LVTN Khoa CNTY trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM [7] Osweiler G.D and Ensley S.M., 2012 Mycotoxins in grains and feeds Diseases of Swine (Eds Zimmerman J.J., Karriker L.A., Ramirez A., Schwartz K.J and Stevenson G.W.) Ames, Iowa, USA: 938 – 942 [8] Trần Huỳnh Bảo Ngọc, 2008 Khảo sát tình hình nhiễm AFB1 thức ăn hỗn hợp heo thị xã Bà Rịa, tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu LVTN Khoa CNTY trường Đại học Nơng Lâm Tp.HCM [9] Trần Thụy Phương Trúc, 2008 Tình hình nhiễm độc tố AF sử dụng β-agonist, diethylstilbestrol thức ăn heo thịt số sở chăn nuôi heo địa bàn Tp.HCM LVTN Khoa CNTY trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM 1068 ... Minh 3.2 Hiệu hấp phụ AFB1 T5X thức ăn (TĂ) hỗn hợp tự trộn heo thịt Kết thí nghiệm đánh giá hiệu hấp phụ AFB1 T5X ghi nhận Bảng cho thấy hiệu hấp phụ AFB1 T5X trung bình mức độc tố 88,01% Ở. .. sản xuất (20mg/ 10g thức ăn) cho hiệu hấp phụ AFB1 điều kiện pH = thấp điều kiện pH = Sử dụng T5X với lượng 40mg/10g thức ăn có khả hấp phụ 98,7% lượng AFB1 điều kiện môi trường pH = (tương đương... tăng nồng độ chất hấp phụ từ 20mg lên 40mg khả hấp phụ AFB1 T5X tăng, mức 40mg T5X có khả hấp phụ hầu hết độc tố AFB1 đạt hiệu hấp phụ tương đương mức 60mg KẾT LUẬN Sử dụng T5X với lượng khuyến