Định lượng ergosterol peroxide trong một số loại nấm thuộc chi ganoderma bằng phương pháp hplc

TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐỊNH LƢỢNG ERGOSTEROL PEROXIDE TRONG MỘT SỐ LOẠI NẤM THUỘC CHI GANODERMA BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC Giáo viên hƣớng dẫn: PGS.TS Trần Đình Thắng Sinh viên thực hiện: Lê Thị Hoa Lớp: 49K - Công nghệ Thực phẩm Vinh, 12/2012 LỜI CẢM ƠN Đồ án thực phịng thí nghiệm mơn Cơng nghệ Thực phẩm chuyên đề hóa Hữu cơ- khoa Hóa học, trung tâm kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường Đại học Vinh Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Trần Đình Thắng, mơn Cơng nghệ Hóa Thực phẩm - Khoa Hóa học trường Đại học Vinh giao đề tài tận tình hướng dẫn suốt q trình thực đồ án Tơi xin chân thành cảm ơn Ths.Chu Thị Thanh Lâm - Trung tâm kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường - Trường Đại học Vinh Cơ Trương Thị Bình Giang tận tình giúp đỡ trình làm đồ án Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy cô cán khoa Hóa, bạn sinh viên, gia đình người thân động viên giúp đỡ tơi hồn thành tốt đồ án Vinh, tháng 12 năm 2012 Sinh viên Lê Thi Hoa MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Nấm Linh Chi (Ganoderma) .3 1.1.1 Khái quát chung 1.1.2 Vị trí phân loại 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Phân bố, sinh thái 1.1.5 Thành phần hóa học nấm Linh Chi 1.1.6 Tác dụng trị liệu nấm Linh Chi 1.1.7 Ứng dụng lâm sàng Linh Chi 12 1.1.8 Các chế phẩm từ Linh Chi 13 1.2 Steroid 19 1.2.1 Khái niệm 19 1.2.2 Công dụng .19 1.2.3 Phân loại 20 1.3 Egrosterol peroxide 22 1.3.1 Khái niệm 22 1.3.2 Ứng dụng .22 1.4 Phương pháp sắc khí lỏng hiệu cao(HPLC) 23 1.4.1 Khái niệm 23 1.4.2 Phân loại 23 1.4.3 Các đại lượng đặc trưng sắc ký đồ 24 1.4.5 chọn điều kiên sắc ký 30 1.4.6 Chuẩn bị dụng cụ máy móc 33 1.4.7 Chuẩn bị dung môi pha động 33 1.4.8 Chuẩn bị mẫu đo HPLC 33 1.4.9 Cách đo HPLC 33 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 34 2.1 Phương pháp lấy mẫu .34 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất sử dụng .34 2.2.1 Thiết bị 34 2.2.2 Dụng cụ 34 2.2.3 Hóa chất 34 2.3 Kỹ thuật thực nghiệm .34 2.3.1 Xây dựng đường chuẩn 34 2.3.2 Kỹ thuật chuẩn bị mẫu 35 2.4 Tiến hành phân tích máy HPLC .36 2.5 Khảo sát đánh giá phương pháp .36 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .37 3.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn ergosterol peroxide 37 3.2 Phương pháp xử lý kết 38 Bảng 3.2: Kết phân tích hàm lượng ergosterol peroxide nấm 39 3.2 Đánh giá phương pháp .39 3.3 Sắc đồ .42 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1: Thuốc viên nang 14 Hình 1.2 Trà Linh chi 16 Hình 1.3 Nước cốt linh chi 17 Hình 3.1: Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ chuẩn ergosterol peroxide 38 Hình 3.3: Sắc đồ chuẩn nồng độ 5ppm 42 Hình 3.4: Sắc đồ chuẩn nồng độ 10ppm 43 Hình 3.5: Sắc đồ mẫu nấm 650 43 Hình 3.6: Sắc đồ mẫu nấm 660 44 Hình3.7: Sắc đồ mẫu nấm 662 44 Hình 3.8: Sắc đồ mẫu nấm 663 45 DANH MỤC BẢNG BIỂU Trang Bảng 1.1: Thành phần hóa dược nấm Linh chi Bảng 1.2: Các hoạt chất sinh học dẫn xuất nấm Linh Chi Bảng 1.3: Lục bảo linh chi theo thời Lý Trần (1590) Bảng 3.1: Diện tích peak ergosterol peroxide tương ứng với nồng độ chuẩn 37 Bảng 3.2: Kết phân tích hàm lượng ergosterol peroxide nấm 39 Bảng 3.3: Giá trị LOD LOQ 39 Bảng 3.4: Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm khô 40 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ ngàn xưa đến nay, đời bình thường người phải trải qua bốn giai đoạn mặc định tạo hóa, chu trình sinh - lão - bệnh - tử Để khắc phục phần bệnh tật, bảo toàn mạng sống trước ngưỡng cửa chết kéo dài tuổi thọ, nhà khoa học khơng ngừng cố gắng tìm cách can thiệp vào chu trình sống mặc định Từ kinh nghiệm lưu truyền dân gian, nhà nghiên cứu sử dụng nhiều loại thuốc, từ dạng sơ chế đến tinh chế, đặc, trích xuất từ loại thảo dược có sẳn tự nhiên để điều trị bệnh Ngày xu hướng sử dụng thảo dược thiên nhiên để trị bệnh trở nên phổ biến, việc tìm kiếm khả chữa trị từ loại thảo dược tiến hành nhiều nơi giới: Nhật Bản, Trung Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan,… Trong đó, nấm Linh Chi đối tượng nghiên cứu nhiều quốc gia Đặc biệt nước vùng Châu Á có Việt Nam, có nhiều tiềm nguồn dược liệu Các nghiên cứu dược học đại chứng minh Linh Chi chứa tới 120 chất, bao gồm hợp chất hữu cơ, nguyên tố vi lượng vitamin Linh Chi có tác dụng đặc biệt triệu chứng suy giảm miễn dịch, căng thẳng thần kinh suy sụp tinh thần, giải độc kém, ngủ, triệu chứng hệ tim mạch, ăn không ngon, da xấu nhiều nếp nhăn Linh Chi có tác dụng việc ngăn ngừa bệnh AIDS làm chậm trình phát bệnh bệnh nhân mắc phải bệnh Họ sử dụng phương pháp bào chế thông thường ngâm rượu, cắt lát nấu lấy nước, nghiền bột để uống, bào chế thành viên nang, viên hồn thuốc tiêm Ở Nhật Bản, người ta sử dụng nấm nguồn thực phẩm dược phẩm hàng đầu, họ có sức khỏe tốt tuổi thọ cao Không dùng đơn dạng nấm tươi mà Nhật nấm sản xuất thành nhiều dạng sản phẩm như: nước tương, bột nấm, súp nấm, thực phẩm chức bổ, loại, thuốc, trà để điều trị số bệnh như: viêm phế quản mãn tính, bệnh tim mạch, viêm gan cấp, viêm khớp, viêm phổi Hiện nhà khoa học xác định nhiều steroid có tác dụng phịng chữa trị bệnh hiểm nghèo thấp khớp, suy tim, ung thư Mà số steroid lại tồn nấm Linh Chi.Do việc xác định định lượng hợp chất nấm để tìm phương pháp chữa bệnh cần thiết Xuất phát từ thực tế tơi chọn đề tài luận văn là: “Xác định định lượng ergosterol peroxide nấm Linh Chi” Nhiệm vụ nghiên cứu Trong khóa luận này, chúng tơi có nhiệm vụ sau: - Tổng quan Nấm, steroid, ergosterol peroxide - Tách ergosterol peroxide mẫu nấm - Định lượng ergosterol peroxide phương pháp HPLC - Kiểm tra, đánh giá phương pháp điều kiện phân tích với q trình thực kết thu - Kết thực nghiệm Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu nấm thu thập từ rừng địa bàn Nghệ An rừng Pù Mát CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Nấm Linh Chi (Ganoderma) 1.1.1 Khái quát chung Hơn 4000 năm trước (từ thời Hoàng đế 2550 - 2140 trước Công nguyên), giá trị dược liệu nấm Linh Chi ghi chép thư tịch cổ, Linh Chi xếp vào “Thượng dược” sách “Thần Nông Bản Thảo” cách khoảng 2000 năm thời nhà Châu sau nhà y dược tiếng Trung Quốc thời Lý Trần phân thành “Lục Bảo Linh Chi” thời nhà Minh với khái quát công dụng dược lý khác nhau, ứng theo màu Từ đến nay, trải qua bao thăng trầm lịch sử, bao biến động thời tiết, khí hậu, mơi trường, Linh Chi trường tồn thể giá trị “Siêu dược liệu” Trong số tên gọi: Bất lão thảo, Vạn niên nhung, Thần tiên thảo, Chi linh, Mộc Linh Chi, Hổ nhũ Linh Chi, Đoạn thảo, Nấm Lim,…tên gọi Linh Chi có lẽ tiêu biểu mang tính lịch sử cần thống sử dụng Đó bắt nguồn từ tên phiên âm tiếng Trung Quốc: Lingzhi, hay theo tiếng Nhật: Reishi Mannentake Ở nước Đông Á Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc, Đài Loan,… việc nghiên cứu, phát triển sử dụng Linh Chi cơng nghiệp hóa với quy mô rộng lớn, phân loại học, thu hái tự nhiên, nuôi trồng chủ động, chế biến bào chế dược phẩm, đồng thời nghiên cứu hóa dược hoạt chất, tác dụng dược lý phương pháp điều trị lâm sàng Ở Việt Nam, Hải Thượng Lãn Ông Lê Hữu Trác nói Linh Chi từ lâu Lê Q Đơn rõ “nguồn sản vật quý đất rừng Đại Nam” Linh Chi ni trồng thành cơng phịng thí nghiệm năm 1978 vào thập niên 90, Linh Chi “bùng nổ” Thành Phố Hồ Chí Minh, sản lượng hàng năm đạt khoảng 10 1.1.2 Vị trí phân loại Nấm Linh Chi có vị trí phân loại thừa nhận rộng rãi nay: Ngành: Eumycota Ngành phụ: Basidiomycotina Lớp: Hymenomycetes Lớp phụ: Hymenomycetidae Bộ: Aphyllophorales Họ: Ganodermataceae Họ phụ: Ganodermoidae Chi: Ganoderma Tên khoa học: Ganoderma lucidum 1.1.3 Đặc điểm hình thái Linh Chi thuộc nhóm nấm lớn đa dạng chủng loại Từ xác lập thành chi riêng Ganoderma Karst (1881), đến tính có 200 lồi ghi nhận, riêng Ganoderma lucidum có 45 lồi Nấm Linh Chi loại nấm phá gỗ Nấm xuất nhiều vào mùa mưa, thân gốc Ở Việt Nam Nấm Linh Chi gọi nấm Lim phát miền Bắc Patouillard N.T (1890 đến 1928) Nấm Linh Chi (quả thể) nấm gồm phần cuống nấm mũ nấm (phần phiến đối diện với cuống nấm) Cuống nấm dài ngắn, đính bên có hình trụ đường kính 0.5-3cm Cuống nấm phân nhánh, đơi có uốn khúc cong Lớp vỏ cuống màu đỏ, nâu đỏ, nâu đen, bóng, khơng có lơng, phủ suốt lên mặt tán nấm Mũ nấm non có hình trứng, lớn dần có hình quạt Trên mặt mũ có vân gạch đồng tâm màu sắc từ vàng chanh- vàng nghệ- vàng nâu - vàng cam - đỏ nâu - nâu tím nhẵn bóng láng vecni Mũ nấm có đường kính 2-15cm, dày 0.8-1.2cm, phần đính cuống thường gồ lên lõm Khi nấm đến tuổi trưởng thành phát tán bào tử từ phiến có màu nâu sẫm 1.1.4 Phân bố, sinh thái Nấm Linh Chi thuộc nhóm nấm lớn, thường hoại sinh gỗ mục, thuộc đại diện họ Caesalpiniaceae (lim, lim xẹt, muồng đen, me…) Fagaceae (một số loài thuộc chi Quercus, Lythocapus, Castanopsis…) Môi trường sống nấm thường rừng kín xanh ẩm, độ cao từ vài chục mét đến 1500 m Có thể tìm thấy nấm Linh Chi hầu hết tỉnh vùng núi, từ Lào Cai (SaPa) đến Lâm Đồng (Lang Biang) Ở vùng rừng trước có nhiều Lim bị khai thác, gốc phần thân CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Phƣơng pháp lấy mẫu Các mẫu nấm lấy rừng Pù Mát huyện Con Cuông, tỉnh Nghệ An, đưa rửa sạch, sấy khô bảo quản túi nilon nhiệt độ phòng.Thời gian lấy vào tháng năm 2012 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất sử dụng 2.2.1 Thiết bị - Hệ thống máy sắc ký lỏng hiệu cao HPLC - Cân phân tích xác 0.0001g - Máy nghiền mẫu - Máy siêu âm - Máy ly tâm 2.2.2 Dụng cụ - Các bình định mức: 10ml, 100ml - Ống đong 10ml, 20ml - Bình tam giác loại - Pipet: 5ml, 10ml, 20ml, 50ml - Vial - Ống ly tâm dung tích 10ml - Màng lọc 13mm, 0.45µm 2.2.3 Hóa chất Các loại hóa chất dùng nghiên cứu thuộc loại tinh khiết (meck) - Methanol (Me0H) - Nước cất lần 2.3 Kỹ thuật thực nghiệm 2.3.1 Xây dựng đường chuẩn Để xác định hàm lượng ergosterol peroxide mẫu người ta dựa vào mối quan hệ nồng độ tỷ lệ diện tích peak đường chuẩn thiết lập sẵn Dựa vào đường chuẩn diện tích peak đo ta tính hàm lượng ergosterol peroxide 34 Chuẩn bị: Để xây dựng đường chuẩn ta chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn biết xác nồng độ Cụ thể chúng tơi chuẩn bị mẫu có nồng độ là: 2.5ppm; 5ppm; 10ppm Bơm vào máy HPLC cài đăt chương trình 2.3.2 Kỹ thuật chuẩn bị mẫu Nguyên tắc xử lý mẫu: tách chất cần phân tích ergosterol peroxide khỏi tạp chất Chuẩn bị mẫu: Tiến hành mẫu nấm 660, 661, 662, 663, 650 Cân 2g mẫu cho vào 20ml methanol, siêu âm 30 phút sau ly tâm vịng 10 phút tốc độ 3500 vòng / phút thu mẫu lọc qua giấy lọc, tiếp tục lọc qua màng lọc 0.45µm, bơm vào vial đưa vào máy HPLC đo Quá trình chuẩn bị mẫu theo sơ đồ sau: Mẫu nấm Nghiền nhỏ MeOH Siêu âm (30 phút) Ly tâm (10 phút) Lọc (giấy lọc) Lọc (màng lọc) Vial HPLC 35 2.4 Tiến hành phân tích máy HPLC - Cột sắc ký: RP18 - Nhiệt độ cột: 35cC - Tốc độ dịng: 1ml/ - Thể tích bơm: 20µl - Bước sóng: 290nm - Áp suất: 77 bar - Pha động: Me0H 100% 2.5 Khảo sát đánh giá phƣơng pháp Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn xác định (LOQ) phương pháp Giới hạn phát (LOD) định nghĩa nồng độ nhỏ chất phân tích mà có tín hiệu sắc ký lớn gấp lần tín hiệu đường Đây thông số đặc trưng cho độ nhạy phương pháp LOD = tín hiệu chiều cao pic/nhiễu đường ≥ Giới hạn định lượng (LOQ) (limit of quantitation) nồng độ nhỏ đo phương pháp, nồng độ tối thiểu chất mẫu xác định mà thiết bị đo với RSD% quy định nồng độ chất phân tích mà cho tín hiệu gấp 10 lần tín hiệu đường - Độ lặp lại dùng để đánh giá định lượng độ phân tán kết Đại lượng đặc trưng cho độ gần giá trị trung bình hai hay nhiều phép đo nhận điều kiện giống - Đánh giá độ lặp dựa độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) 36 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Xác định khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn ergosterol peroxide Dãy chuẩn ergosterol peroxide khảo sát có nồng độ sau: 2.5ppm; 5ppm; 10ppm Phân tích chuẩn nói xác định phương trình hồi quy tuyến tính dựa vào diện tích pic Bảng 3.1: Diện tích peak ergosterol peroxide tƣơng ứng với nồng độ chuẩn Nồng độ chuẩn diện tích pic đo đƣợc Nồng độ chuẩn Diện tích pic Nồng độ chuẩn Diện tích pic Nồng độ chuẩn R2 9.18851 1.39275 0.99998 tích pic 23.05513 5.005 46.45211 10.001 91.85735 2.503 23.15513 4.998 46.44347 9.996 91.85435 2.498 23.05000 4.997 46.43393 10.003 91.86035 Ctb:5 b Diện 2.499 Ctb:2.5 m Ctb:10 Phương trình hồi quy đường chuẩn theo diện tích peak có dạng: y = mx +b đó: x nồng độ, y diện tích pic m = 9.18851, b = 1.39275 Sử dụng chương trình Microsoft Excel để xây dựng đường chuẩn, ta có phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng ergosterol peroxide sau: 37 Hình 3.1: Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ chuẩn ergosterol peroxide 3.2 Phƣơng pháp xử lý kết Từ giá trị diện tích peak đo ta tính hàm lượng ergosterol peroxide (C0 ppm) Sau ta tính hàm lượng ergosterol peroxide (mg/100g) có mẫu nấm theo cơng thức sau: X  C0  V 100  ( mg / 100 g ) m 1000 Trong đó: V: Thể tích dịch cuối (ml) X: Hàm lượng ergosterol peroxide mẫu thử (mg/100g, mg/100ml) C0: Nồng độ ergosterol peroxide dung dịch mẫu bơm máy (g/ml) m: Khối lượng mẫu phân tích (g) 38 Bảng 3.2: Kết phân tích hàm lƣợng ergosterol peroxide nấm Mẫu C0(ppm) 660 10.87641 661 Khối lƣợng Diện tích pic C(mg/100g) 100.07723 10.87641 0 662 4.78637 44.11888 4.78637 663 2.51408 23.23994 2.51408 650 4.58543 42.27253 4.58543 mẫu (g) Như mẫu nấm 661 khơng có ergosterol peroxide 3.2 Đánh giá phƣơng pháp Giá trị LOD LOQ phương pháp qua lần đo nồng độ khác 2.5ppm, 5ppm, 10ppm ta đươc kết bảng sau: Bảng 3.3: Giá trị LOD LOQ Với: LOD = Giá trị Chuẩn vitamin C(ppm) LOD 0.0010 LOQ 0.0034 3*Sy 10*LOD LOQ = m LOQ = m: hệ số góc phương trình hồi quy Độ lệch chuẩn Sy: Σ( Xi – Xtb )2 Sy = ΣXi Xtb = n-1 39 n Qua bảng số liệu ta thấy phương pháp có khoảng giới hạn phát khoảng định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát hàm lượng vitamin C dạng vết có mẫu phân tích Bảng 3.4: Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu nấm khô Mẫu nấm 650 Khố TT lượng Mẫu nấm 660 Khối Nồng độ Nồng độ lượng Mẫu nấm 662 Khối lượng Nồng độ Mẫu nấm 663 Khối lượng Nồng độ 4.58543 10.87641 4.78637 2.51408 2 4.58564 10.87682 4.78640 2.51418 4.58522 10.87600 4.78634 2.5398 Xtb 4.58543 10.87641 4.78637 2.51408 S 0.00021 0.00041 0.0003 0.0001 CV(%) 0.0046 0.0038 0.0063 0.004 - Giá trị trung bình hàm lượng ergosterol peroxide mẫu 650 là: Xtb = n  x = 4.58543 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s   (x i 1 i  xtb ) = 0.00021 n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0.00021 S  100 =  100 = 0.0046 % 4.58543 xtb - Giá trị trung bình hàm lượng ergosterol peroxide mẫu 660 là: Xtb = n  x = 10.87641 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s   (x i 1 i  xtb ) n 1 = 0.00041 40 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0.00041 S  100 =  100 = 0.0038% 10.87641 xtb - Giá trị trung bình hàm lượng ergosterol peroxide mẫu 662 là: Xtb = n  x = 4.78637 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s   (x i 1 i  xtb ) = 0.00003 n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0.00003 S  100 =  100 = 0.0063% 4.78637 xtb - Giá trị trung bình hàm lượng ergosterol peroxide mẫu 663 là: Xtb = n  x = 2.51408 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s   ( xi  xtb ) i 1 n 1 = 0.0001 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0.0001 S  100 =  100 = 0.004% 2.51408 xtb Trong đó: Xi nồng độ ergosterol peroxide lần chạy thứ i Xtb nồng độ trung bình n lần chạy n số lần chạy lặp lại Nhận xét: Kết tính tốn cho thấy, phương pháp có lặp lại cao cho độ tốt đáp ứng yêu cầu định lượng 41 3.3 Sắc đồ Hình 3.2: Sắc đồ chuẩn nồng độ 2.5ppm Hình 3.3: Sắc đồ chuẩn nồng độ 5ppm 42 Hình 3.4: Sắc đồ chuẩn nồng độ 10ppm Hình 3.5: Sắc đồ mẫu nấm 650 43 Hình 3.6: Sắc đồ mẫu nấm 660 Hình3.7: Sắc đồ mẫu nấm 662 44 Hình 3.8: Sắc đồ mẫu nấm 663 45 KẾT LUẬN Đồ án hoàn thành nhiệm vụ đề ra, tìm hiểu trình bày vấn đề sau: - Tổng quan Nấm Linh Chi, tổng quan steroid,ergosterol peroxide tổng quan phương pháp HPLC - Nghiên cứu phương pháp xác định ergosterol peroxide - Chiết, tách, định lượng ergosterol peroxide mẫu nấm phương pháp HPLC - Kiểm tra, đánh giá phương pháp điều kiện phân tích với q trình thực kết thu - Kết thực nghiệm thu sau phân tích: + Hàm lượng ergosterol peroxide có nấm 650 là: 4.58543(mg/100g) + Hàm lượng ergosterol peroxide có mẫu nấm 660 10.87641(mg/100g) + Hàm lượng ergosterol peroxide có nấm 661 là: 0(mg/100g) + Hàm lượng ergosterol peroxide có nấm 662 là: 4.78637(mg/100g) + Hàm lượng ergosterol peroxide có nấm 663 là: 2.51408(mg/100g) - Đã xác định giới hạn phát phương pháp LOD = 0.0010ppm - Đã xác định giới hạn xác định phương pháp LOQ = 0.0034ppm Kiến nghị Qua phần tìm hiểu thấy rõ giá tri siêu dược liệu nấm Linh Chi.Hầu chất, hợp chất loại nấm có tác dụng định đến việc phịng chứa bệnh người Vì tơi nghĩ cần sâu nghiên cứu chất, hợp chất nấm Linh Chi để tìm phương pháp chữa bệnh tối ưu cho người Ngồi với điều kiên khí hậu nhiệt đới gió mùa điều kiên thuận lợi cho nghành trồng nấm phát triển quanh năm.Nên việc mở rộng ngành trồng nấm phương pháp chiến lược để phát triển kinh tế 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hồng Kim Anh, Hóa học thực phẩm, NXB Khoa Học Kỹ Thuật PGS.TS Trần Thị Xơ, Hóa sinh I, Khoa Hóa Trường ĐH Bách khoa Đà Nẵng Phạm Luân (1999), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu suất cao, Đại học quốc gia Hà Nội Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng cộng (1985), Các phương pháp sắc ký, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hoàng Minh Châu, Từ Vọng Nghi, Từ Văn Mặc, Cơ sở hóa học phân tích Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật Dược điển Việt Nam Phạm Văn Sổ, Bùi Thị Như Thuận Kiểm nghiệm Lương thực - Thực phẩm, Khoa Hóa học thực phẩm, Trường ĐH Bách khoa Hà Nội, 1991 Hoàng Văn Lựu, Các phương pháp sắc ký, ĐH Vinh PGS.TS Nguyễn Khắc Nghĩa, Xử lí số liệu thống kê, ĐH Vinh 10 Hoàng Minh Châu, Từ Vọng Nghi, Từ Văn Mặc, Cơ sở hóa học phân tích, Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật Tiếng Anh Celluar and Molecular Life Sciences Chinese Journal of Chromatography 1995/01 Medical Center Diabetes Care Center, Seattle, Washington Also reviewed by David Unitat de Nutricio'i Bromatologia, Facultat de Farmacia, ĐH de Barcelona,Av Joan XXIII, Spain Updated by: Alison Evert, MS, RD, CDE, Nutritionist, University of Washington Zieve, MD, MHA, Medical Director, A.D.A.M., Inc 47 Trang Web 1) http://www.cvg.ca 2) http://www.sciencedirect.com 3) http://tusach.thuvienkhoahoc.com 4) http://www.hoahocvietnam.com 5) http://www.hoahoc.org 6) http://www.chemvn.net 7) http://www.khoahoc.com.vn/doisong/ung-dung 8) http://www.Tài liệu VN - Thư viện eBook 9) http://www Y học cổ truyền 10) http://www Nguyen Anh LTD 48 ... thư Mà số steroid lại tồn nấm Linh Chi. Do việc xác định định lượng hợp chất nấm để tìm phương pháp chữa bệnh cần thiết Xuất phát từ thực tế tơi chọn đề tài luận văn là: “Xác định định lượng ergosterol. .. ergosterol peroxide nấm Linh Chi? ?? Nhiệm vụ nghiên cứu Trong khóa luận này, chúng tơi có nhiệm vụ sau: - Tổng quan Nấm, steroid, ergosterol peroxide - Tách ergosterol peroxide mẫu nấm - Định lượng ergosterol. .. Linh Chi khái qt tác dụng trị liệu chúng Bảng 1.3: Lục bảo linh chi theo thời Lý Trần (1590) TÊN GỌI Thanh chi (Long chi) Hồng chi (Xích chi, Đơn chi) Hồng chi (Kim chi) Bạch chi (Ngọc chi) Hắc chi