Xác định các đột biến trên gen katG liên quan đên tính kháng thuốc isoniazid của một số chủng vi khuẩn lao tại Việt Nam

Xác định các đột biến trên gen katG liên quan đên tính kháng thuốc isoniazid của một số chủng vi khuẩn lao tại Việt Nam

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 MỞ ĐẦ U 1. L do chn đ ti Nhiễ m vi khuẩ n lao (Mycobacterium tuberculosis) l mt trong nhng nhiễ m trù ng phổ biế n nhấ t ở loà i ngườ i . Hiệ n nay tỷ lệ nhiễ m vi khuẩ n lao đượ c xá c đị nh là chiế m 1/3 dân số thế giớ i . C khong 9 triệ u ngườ i mắ c lao mớ i và hơn 3 triệ u ngườ i chế t do lao mỗ i năm . Tuy vậ y tỷ lệ phá t hiệ n chỉ đạ t 37% số bệ nh nhân ướ c tính . V vy cn rt nhiu bnh nhân lao không đưc chữ a trị và đang tiế p tụ c là m lây lan bệ nh cho c ng đng. Hiệ n nay, bệ nh lao đang trở nên nghiêm trọ ng hơn vớ i đặ c trưng là khá ng đa thuố c. Trong cá c trườ ng hợ p bệ nh lao khá ng đa thuố c, kh khăn không ch l điề u trị thấ t bạ i cao , dẫ n đế n lan truyề n nhanh chó ng vi khuẩ n lao khng đa thuố c mà cò n chưa tì m ra đượ c nhữ ng thuố c thay thế hiệ u quả và hợ p lý , trong khi cá c thuố c chố ng lao thự c sự có hiệ u quả chỉ tậ p trung có 5 thuố c. Nhữ ng bệ nh nhân bị nhiễ m cá c chủ ng vi khuẩ n lao khá ng đa thuố c rấ t kh điu tr. Do đó việ c phá t hiệ n sớ m cá c chủ ng vi khuẩ n lao khá ng đa thuố c s gp phn đng k trong điu tr bnh lao . Để ch n đon vi khun lao khng thuc , hiệ n nay cá c cơ sở trong nướ c vẫ n phả i dự a và o nuôi cấ y vi khuẩ n và là m khá ng sinh đồ . Thờ i gian chuẩ n đoá n lao khá ng thuố c cầ n í t nhấ t 4 – 6 tuầ n. Vớ i thờ i gian dà i như vậ y sẽ khó khăn cho công tá c điề u trị , kh đp ng yêu cu gim st v thanh toá n bệ nh lao . Khắ c phụ c nhữ ng nhượ c điể m đó , việ c ứ ng dụ ng sinh họ c phân tử đang to ra nhng đt ph trong chn đon vi khun lao khng thuc . Thờ i gian chẩ n đoá n có thể rú t ngắ n xuố ng cò n và i ngà y , vớ i độ nhậ y và độ đặ c hiệ u cao, to điu kin cho việ c kiể m soá t bệ nh lao dễ dà ng hơn . Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2 Cc nghiên cu v sinh hc phân t trong chn đon vi khun lao khng thuc đ ch ra rng mi loi khng thuc l do cc gen tương ng chu trch nhim. Ví dụ, nế u chỉ ra đượ c độ t biế n ở gen KatG cng c ngha l chng lao đó khá ng isoniazid. Xuấ t phá t từ nhữ ng lý do trên , chng tôi tin hnh đ ti : "Xc đnh cc đt bin trên gen katG liên quan đế n tí nh khá ng thuố c i soniazid củ a mộ t số chủ ng vi khuẩ n lao tạ i Việ t Nam". 2. Mc tiêu nghiên cu 1. Nhân bả n đoạ n gen katG từ cá c chủ ng vi khuẩ n lao nghiê n cu. 2. Pht hin đt bin trên gen katG liên quan đế n tnh khng isoniazid ở cc chng vi khuẩ n lao nghiê n cứ u. 3. Nộ i dung nghiên cƣ́ u - Nhân bả n đoạ n gen katG từ cá c chủ ng vi khuẩ n lao nghiên cứ u . - To vector ti t hp v bin np vector ti t hp vo t bo vi khun E. coli. - Tch dng gen katG. - Gii trnh t gen katG. - Pht hiệ n, phân tch độ t biế n trên gen katG liên quan đế n tí nh khá ng thuố c isoniazid ở cá c chủ ng vi khuẩ n lao nghiên cứ u . Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3 CHƢƠNG 1 TỔ NG QUAN TI LIU 1.1. Tnh hnh bnh lao 1.1.1. Tnh hnh bnh lao trên th gii Bnh lao gắn lin với s pht trin x hi loi người từ hng ngn năm nay, trên th giới chưa bao giờ v không c mt quc gia no, mt khu vc no, mt dân tc no không c người mắc bnh lao v cht do lao [1]. Do s pht minh cc thuc ha hc chng lao khin vic cha lao đơn gin hơn v hiu qu hơn, đng thời đ pht sinh tâm trng ch quan ca y giới, đ lm lng quên căn bnh nguy him ny. Ngy nay, bnh lao đang xut hin trở li v cùng với đi dch HIV/AIDS trở thnh mt trong nhng căn nguyên gây mắc bnh v t vong ch yu, đặc bit ti cc nước đang pht trin. Năm 1993, T chc Y t th giới (TCYTTG) đ tuyên b tnh trng khn cp ton cu ca bnh lao v mi him ho ca n trong tương lai l bnh lao khng thuc [22]. Hin nay, trên th giới c khong 2,2 tỷ người đ nhiễm lao (chim 1/3 dân s th giới). Theo s liu công b ca TCYTTG (2004), ước tnh trong năm 2003 c thêm khong 9 triu người mắc lao mới v 2 triu người cht do lao. Khong 95% s bnh nhân lao v 98% s người cht do lao ở cc nước c thu nhp vừa v thp, 75% s bnh nhân lao c nam v n ở đ tui lao đng. Trong đ, c khong 80% s bnh nhân lao ton cu thuc 22 nước c gnh nặng bnh lao cao [1,22]. Hin nay, tỷ l điu tr thnh công trên ton cu đt 82%, nhưng tỷ l pht hin ch đt 37% s bnh nhân ước tnh. Như vy, cn rt nhiu bnh nhân lao không đưc cha tr đang tip tục lây bnh cho cng đng, v theo Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 4 ước tnh ca TCYTTG, mi năm c thêm 1% dân s th giới b nhiễm lao (65 triu người) [22]. Hơn 33% s bnh nhân lao ton cu ti khu vc Đông nam Châu Á. Dưới đây l ước tnh bnh nhân lao mới mắc năm 2002 theo khu vc [22]. Bng 1.1: Ƣc tính bnh nhân lao mi mắc năm 2002 theo khu vực Khu vực Số BN (nghn) Tỷ l/100 000 Tử vong do lao (bao gồm cả nhiễm HIV) Các thể AFB (+) Các thể AFB (+) SL (nghìn) TL/100000 Châu Phi 2354 (26%) 1000 350 149 556 83 Châu Mỹ 370 (4%) 165 43 19 53 6 Trung Đông 622 (7%) 279 124 55 143 28 Châu Âu 472 (5%) 211 54 24 73 8 Đông nam Châu Á 2890 (33%) 1294 182 81 625 39 Tây Thi Bnh Dương 2090 (24%) 939 122 55 373 22 Ton cu 8797 (100%) 3887 141 63 1823 29 Mc đ nặng n ca bnh lao đ nh hưởng tới thu nhp quc dân v ch s pht trin con người ca cc quc gia. Cc nghiên cu v kinh t y t cho thy, mi bnh nhân lao s mt trung bnh 3-4 thng lao đng, lm gim 20-30% thu nhp bnh quân ca gia đnh. Nhng gia đnh c người cht sớm v bnh lao c th s mt tới 15 năm thu nhp. Bnh lao đ tc đng mnh Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 5 tới 70% đi tưng lao đng chnh ca x hi, lm lc lưng sn xut b gim sút, năng sut lao đng gim v mùa mng, ch ba s không tham gia đưc. Diễn đn cc đi tc chng lao ln th nht diễn ra năm 2001 ti trụ sở ca ngân hng th giới ở Washington D.C với s c mặt ca đi din cp B trưởng từ cc quc gia c tnh hnh bnh lao nặng n đ nhn đnh, bnh lao l nguyên nhân ch yu lm nghèo đi dai dẳng v l trở ngi đi với s pht trin kinh t x hi [22]. Bnh lao l bnh ca người nghèo, lây lan nhanh trong cng đng c điu kin sng cht chi, thiu v sinh, thông kh v dinh dưỡng kém. Trên 95% s bnh nhân lao, 98% s cht do lao trên ton cu thuc cc nước c thu nhp vừa v thp, 75% s người mắc bnh lao ở cc la tui 14-55, là tui lm ra nhiu ca ci nht trong cuc đời [1, 22]. Bnh lao l kt qu ca nghèo đi v nghèo đi li l nguyên nhân lm cho bnh lao pht trin. 1.1.2. Tnh hnh bnh lao  Vit Nam Ở nước ta, bnh lao cn ph bin v ở mc đ trung bnh cao. Vit Nam đng th 13 trong 22 nước c s bnh nhân lao cao trên ton cu (TCYTTG, 2004). Trong khu vc Tây Thi Bnh Dương, Vit Nam đng th ba sau Trung Quc v Philipinnes v s lưng bnh nhân lao lưu hnh cng như bnh nhân lao mới xut hin hng năm [1]. Năm 1995, trước nhng bin đng xu đi ca tnh hnh dch tễ bnh lao ton cu, công tc chng lao thc s bắt đu phi đi mặt với nhng thch thc mới l bnh lao khng thuc v Lao/HIV, Nh nước v B Y t Vit Nam đ quyt đnh đưa Chương trnh chng lao thnh mt trong nhng Chương trnh y t quc gia trng đim. Cùng với s đu tư pht trin các Chương trnh y t quc gia ni chung, B Y t v Chnh ph đ ưu tiên đu tư đng b lưng rt lớn cn b, kinh ph v trang thit b cho Chương trnh Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 6 chng lao. Ban ch đo Chương trnh chng lao v chnh quyn đa phương cc cp đ tham gia tch cc trin khai công tc ny, cùng với s hp tc v gip đỡ c hiu qu v ti chnh v kỹ thut ca cc t chc quc t [4]. Năm 1996, Chương trnh chng lao quc gia (CTCLQG) với s h tr v kỹ thut v ti chnh ca Chnh ph H Lan, hip hi chng lao hoàng gia Hà Lan, uỷ ban hp tc y t H Lan - Vit Nam, CTCLQG đ hnh thnh v xây dng k hoch phng chng lao giai đon 1996-2000. Đn năm 1999, chin lưc DOTS (điu tr bng ho tr liu ngắn ngy c kim sot trc tip) đ đưc bao ph 100% s huyn trên c nước [4]. Trong giai đon 1997-2002, CTCLQG đ pht hin đưc 532.703 bnh nhân lao cc th, tỷ l pht hin đt 82% s bnh nhân ước tnh (so với mục tiêu ca TCYTTG l 70%), CTCLQG đ điu tr 260.698 bnh nhân lao phi AFB (+) với tỷ l khỏi l 92% [3]. Năm 2002, khu vc Tây Thi Bnh Dương pht hin 806.460 bnh nhân lao cc th, 372.220 bnh nhân lao phi AFB (+) mới. Trong đ, s bnh nhân do CTCLQG Vit Nam pht hin chim 12% bnh nhân cc th v 15% s bnh nhân lao phi AFB (+) mới [1]. Với nhng kt qu đt đưc trong ch tiêu pht hin v điu tr bnh nhân, năm 1996, Vit Nam l nước đu tiên ở Châu Á đ đt đưc mục tiêu ca TCYTTG. Vit Nam đ đưc TCYTTG v ngân hng th giới đnh gi cao thnh tch đt đưc trong mi hot đng chng lao. Từ năm 1997, TCYTTG và hip hi bài lao và bnh phi quc t cùng phi hp với CTCLQG Vit Nam t chc 8 kho hc v qun lý Chương trnh chng lao cho cc hc viên quc t ti Vit Nam. Mô hnh hot đng chng lao ở Vit Nam đưc xem l mô hnh đ hc viên cc nước hc tp [4]. V l mt trong s t nước sớm nht đt đưc cc mục tiêu phng chng lao do TCYTTG đ ra, nhng kt qu đt đưc c tnh bn vng, nên thng 10 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 7 năm 2003 vừa qua CTCLQG Vit Nam đ nhn đưc gii thưởng ca hi chng lao hoàng gia Hà Lan (KNCV) nhân lễ kỷ nim 100 năm ngy thnh lp t chứ c này. Nhân ngày th giới chng lao, 24/3/2004, ti diễn đn cc đi tc chng lao ln th 2 do TCYTTG t chc ti New Dehli, CTCLQG Vit Nam l mt trong 6 nước trên th giới (bao gm: Vit Nam, Peru, Madives, Cuba, Tunisia v Morocco) v l nước duy nht trong 22 nước c gnh nặng bnh lao cao đưc nhn gii thưởng ca TCYTTG v thnh tch đ đt đưc mục tiêu ca TCYTTG v kt qu c tnh bn vng trên 4 năm [4]. Hin nay nguy cơ nhiễm lao hng năm ở nước ta ước tnh l 1,5% (ở cc tnh pha nam l 2%, ở cc tnh pha bắc l 1%). Ước tnh với dân s 70-80 triu, hng năm ở nước ta c mộ t s  lưng lớ n người b mắ c lao mớ i . S lưng người mắc lao mớ i đưc th hiệ n qua bng 1.2. Bng 1.2: Bng ƣc tính s bnh nhân mắc lao mi qua mi năm  Vit Nam S mới mắc lao (mi th): 130.000 S lao phi BK dương tnh mới: 60.000 Tng s trường hp lao: 260.000 Tng s lao phi BK dương tnh: 120.000 Nước ta thuc loi trung bnh v dch tễ lao so với cc nước vùng Tây Thi Bnh Dương, vùng dch tễ lao vo loi trung bnh trên th giới. Trên thc t c th ch s nguy cơ nhiễm lao hng năm c th cao hơn 1,5% như vy cc con s nêu trên c th cn lớn hơn. Điu đ s tăng thêm s kh khăn đi với công tc chng lao không nhng trong nhng năm tới m c th cn trong thời gian kh di, ngay c khi đ bước sang thiên niên kỷ mới. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 8 1.1.3. Tnh hnh lao khng thuc Theo bo co da trên thăm d lớn v lao khng thuc ton cu ca TCYTTG công b ngy 26/2/2008, tỷ l nhiễm lao khng nhiu thuc hin nay ở mc cao chưa từng c. Mi năm c khong na triu ca lao kháng đa thuc, theo ước tnh ca TCYTTG, chim khong 5% trong s 9 triu ca nhiễm lao hng năm. Cng trong bo co ny, ln đu tiên lao khng thuc cc mnh đưc đ cp, đây l mt dng gn như không cha lnh đưc [5]. Theo TCYTTG, hin nay bnh lao khng thuc l mt vn đ ton cu, đặc bit nghiêm trng l tnh hnh khng đa thuc. Bnh lao khng thuc xut hin khi c vi khun lao khng với mt hoặc nhiu loi thuc chng lao, nguyên nhân l do bnh nhân không hp tc, không tuân th đng nguyên tắc điu tr đưc quy đnh ca chương trì nh chố ng lao , mt nguyên nhân khc hay gặp l do thy thuc kê đơn không đng do không phi hp đy đ cc thuc chng lao, liu lưng thuc không đ, hướng dẫn bnh nhân không đng cch, điu tr không đ thời gian . Kt qu điu tr với bnh nhân khng thuc thường không cao, nht l đi với bnh nhân khng đa thuc. Chi ph điu tr bnh nhân lao khng đa thuc tăng lên 100 ln so với bnh nhân lao không khng thuc v thm ch không điu tr đưc ở mt s trường hp. Tỷ l khng đa thuc trong bnh nhân lao mới ở khu vc Tây Thi Bình Dương dao đng trong khong 1% đn 10,8% (theo mt s nghiên cu trong khu vc) [4]. Dự á n nghiên cứ u khá ng t huố c lao trên cơ sở toà n c u đượ c thự c hiệ n từ năm 1995 vớ i mụ c tiêu là xá c đị nh đượ c tổ ng số bệ nh nhân lao khá ng thuố c trên thế giớ i bằ ng nhữ ng phương phá p thố ng nhấ t thử độ nhạ y vớ i thuố c lao ca vi khun . Năm 1998, TCYTTG đã công bố kế t quả khả o sá t tình hình vi khuẩ n lao khá ng thuố c ở 35 nướ c và khu vự c trên thế giớ i [6]. Theo công bố nà y, tỷ l khng thuc tiê n phá t trung bì nh vớ i riêng từ ng loi thuc c khc nhau , cụ th l : khng isoniazid 3,2%, rifampicin 0,2%, Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 9 ethambutol 0,3%, steptomycin 2,5% %, trong đó khá ng steptomycin ở vù ng Ivanovo (Nga) l nơi khng đơn thuc cao nht . Tỷ l kh ng thuc tiên pht trung bì nh là 9,9 % trong đó khá ng 1 thuố c chiế m 6,6 %, khng 2 thuố c chiế m 2,5 %, khng 3 thuố c chiế m 0,6 %, khng bn thuố c chiế m 0,2 %, khng đa thuố c trung bình là 1,4 %. Tỷ l khng thuc tiên pht cao n hấ t 40,6 % ở cng ha Dominica, thấ p nhấ t là 2% ở cng ha Séc [6]. Tnh hnh khng thuc mắc phi với từng loi thuc cng khc nhau : khng isoniazid trung bì nh 6,3 %, rifampicin 0,7 %, ethambutol 0,4 %, steptomycin 2,6 %. Khng thuố c mắ c phả i vớ i steptomycin ở Cuba có tỷ lệ cao nhấ t 57 %. Tỷ l khng thuc mắc phi trung bnh trên ton th giới l 36 %, trong đ khng 1 loi thuc 12,2 %, 2 loi thuc 9,7 %, 3 loi thuc 5,4 %, 4 loi thuc 4,4 %. Lao khá ng đa thuố c mắ c phả i có tỷ lệ trung bì nh là 13 %. Khng đa thuc mắc phi cao nht ở Latvia , c tỷ l 54 % [6]. Vi khuẩ n lao khá ng đa thuố c là mộ t thá ch thứ c lớ n , đe dọ a công cuộ c phng chng lao trên ton cu , v cc thuố c chố ng lao có hiệ u quả hiệ n nay đang bị vi khuẩ n lao khá ng lạ i nhấ t là khá ng đa thuố c . Trong khi cá c thuố c chố ng lao hà ng đầ u chỉ có năm thuố c thì cá c thuố c chố ng lao loạ i hai lạ i thườ ng có độ c tính cao và giá thà nh đắ t [5]. Việ c nghiên cứ u lao khá ng thuố c ở Việ t Nam đượ c tiế n hà nh khá sớ m . Năm 1958 Phm Ngc Thc h và cộ ng sự đã công bố t ỷ lệ khá ng thuố c mắ c phi v ới isoniazid l 53 %, vớ i paraminosalicylic acid l 26 %, vớ i steptomycin là 59 % [6]. Bo co ca CTCLQG năm 1998 cho thấ y tì nh hình khá ng thuố c củ a vi khuẩ n lao ở Việ t Nam là mộ t vấ n đề đá ng lo ngạ i . Tỷ l khng thuc tiên pht l 32,5 % đứ ng thứ tư trong khả o sá t củ a TCYTTG sau Latvia (34%), Thi Lan (36,6%), v Cng ha Dominica (40,6%). Qua cá c nghiên cứ u đã cho thấ y Việ t Nam là mộ t trong nhữ ng quố c gia có tỷ lệ bệ nh lao khá ng thuố c cao trên thế giớ i [6]. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 10 Nhiễ m vi khuẩ n lao khá ng thuố c là nguyên nhân dẫ n đế n thấ t bạ i trong điề u trị . Nhữ ng bệ nh nhân lao mớ i có thể chữ a khỏ i 95 – 100%. Nhưng bệ nh nhân lao khá ng thuố c mắ c phả i , tỷ l cha khỏi ch 20 – 30% [22]. Kế t quả cn thấ p hơn nữ a ở nhữ ng trườ ng hợ p khá ng đa thuố c mắ c phả i, thm ch không chữ a đượ c. Nguy hiể m hơn là cá c bệ nh nhân nà y có thể tiế p tụ c truyề n bệ nh cho ngườ i khá c. V vy vic pht hin v ngăn chặn s lan trn ca cc chng lao khng đa thuc l vn đ quan trng nht trong chin lượ c điề u trị lao hiệ n nay. 1.2. Vi khuẩ n lao 1.2.1. Đc đim phân loạ i Vi khuẩ n lao thuộ c giớ i Bacteria , ngnh Actinobacteria , bộ Actinomycetales, phân bộ , h Mycobacteriaceae, giố ng Mycobacterium [18]. Tên khoa họ c củ a vi khuẩ n lao l: Mycobacterium tuberculosis. Cc chng vi khun lao đưc chia lm 2 nhm: Mycobacterium tuberculosis gồ m bố n loi c kh năng gây bnh ở người , v nhm Mycobacteria other than tuberculosis gồ m nhiề u loà i không gây bệ nh ở ngườ i [6,7]. 1.2.2. Đc đim hnh th Vi khun lao c hnh trc khun , kch thước 2 – 4 μm, rộ ng 0,3 – 1,5 μm. Trự c khuẩ n thanh mả nh , đứ ng riêng lẻ hoặ c xế p thà nh hình chữ N , Y, V hoặ c thà nh dã y phân nhá nh như cà nh cây . Vi khun lao không di độ ng, không sinh bà o t, kh bắ t mu cc thuố c nhuộ m thông thường do có lớp sp ở thnh t bo [7]. 1.2.3. Kh năng gây bnh Cc bnh lý nhiễm trùng l nguyên nhân gây t vong hng đu trên th giới. Không ch c nhng bnh nhiễm trùng mới pht sinh m nhng bnh nhiễm trùng c gây cht người đ bit từ lâu cng ti xut hin. Hơn na t l vi khun gây bnh đ khng khng sinh ngy cng tăng cao l nguy cơ lớn cho sc khỏe cng đng. Nhng bng chng gn đây cho thy cc tc nhân gây bnh mặc dù rt khc nhau đu s dụng nhng phương thc chung đ [...]... http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.3 Gen KatG và tính kháng thuốc isoniazid ở vi khuẩn lao Gen katG là một đoạn DNA có kích thước 2223 bp, năm trên nhiêm săc ̀ ̃ ́ thê cua vi khuân lao va chị u trach nhiêm mã hóa cho enzyme catalase ̉ ̉ ̉ ̀ ́ ̣ - peroxidase Ngươi ta nhân thây co khoang 95% các chủng vi khuẩn lao kháng ̀ ̣ ́ ́ ̉ isoniazid có đột biến trên gen này [28] Gen katG mã hóa cho enzyme... co đôi chưng ̣ ̣ ́ ́ ́ Sơ đô nghiên cƣu ̀ ́ DNA (Tách từ vi khuẩn lao đa đƣơc xac đị nh tí nh ̃ ̣ ́ kháng thuốc) Nhân ban đoan gen katG ̉ ̣ sƣ dung môi đăc hiêu ̉ ̣ ̀ ̣ ̣ Sản phẩm gen KatG Tách dòng gen KatG Sản phẩm vector có đoạn gen KatG Xác định đột biến liên quan đên tí nh khang INH ́ ́ Giải trình tự gen KatG 17 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn... thuốc isoniazid [51] Do đó phát hiện sự thay đổi di truyền này trong gen katG có thể cung cấp một phương pháp sàng lọc nhanh và chính xác cho vi ̣c phát hiện các chủng M tuberculosis kháng isoniazid 1.4 Chân đoan vi khuân lao khang Isoniazid ̉ ́ ̉ ́ Vi khuân lao khang isoniazid đươc xác định theo phương pháp ̉ ́ ̣ chân ̉ đoan kiêu gen Các phương pháp chẩn đoán kiểu gen đều... ̣ ́ ́ ̀ ̉ 30 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn E.coli DH5α Các mẫu DNA plasmid thu được có đủ điều kiện về độ tinh sạch và nồng độ phụ c vụ cho giải trình tự gen 3.4 Kêt qua phát hiện đột biến trên gen katG liên quan đên tí nh khang ́ ̉ ́ ́ thuôc isoniazid ơ các chủng vi khuân lao nghiên cƣu ́ ̉ ̉ ́ Các chủng vi khuẩn lao sau khi đọc... ́ 3.1 Kêt qua nhân bản gen katG các chung vi khuân lao nghiên cƣu ́ ̉ ̉ ̉ ́ Sư dung căp môi katG F và katG R nhân ban đoan gen katG băng kỹ ̉ ̣ ̣ ̀ ̉ ̣ ̀ thuât PCR Sau khi co đươc san phâm PCR , chúng tôi tiên hanh kiêm tra đoan ̣ ́ ̣ ̉ ̉ ́ ̀ ̉ ̣ gen đươc nhân lên băng phương phap điên di trên agarose ̣ ̀ ́ ̣ 1% Kêt qua đươc ́ ̉ ̣ thê hiên như trong anh 3.1 và 3.2 ̉ ̣ ̉ 25 Số hóa bởi Trung tâm Học... cac đoan gen đí ch co trì nh tư tương ưng la : ̉ ̣ ̉ ́ ́ ̣ ́ ̣ ́ ̀ - Căp môi dùng cho nhân trì nh tư gen katG: ̣ ̀ ̣ KatG F: 5'-GAG CCC GAT GAG GTC TAT TG-3' KatG R: 5'-ACA AGC TGA TCC ACC GAG AC-3' - Căp môi dùng cho giải trình tự gen katG: ̣ ̀ M13 F: 5'-GTAAAACGACGGCCAG-3' M13 R: 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3' Các trình tự này được gửi tổng hợp ở công ty Invitrogen , Hông Kông ̀ 16 Số hóa bởi... nhân gen ́ ̉ ̣ ̉ katG cho thây ca 14 ́ ̉ chủng vi khuẩn lao đều có kết quả dương tính với đoạn gen katG có chiều dài 684bp Các vạch DNA đặc hiệ u ro rang, không co vach phu kem theo Chưng ̃ ̀ ́ ̣ ̣ ̀ ́ tỏ đoạn gen katG đa đươc nhân lên đặc hiệu ̃ ̣ Zenteno-cuevas và cộng sự (2009), tư 80 mâu bênh phâm lâm sang co ̀ ̃ ̣ ̉ ̀ ́ kêt qua PCR chân đoan dương tí n h vơi vi khuân lao thì... , vi khuân lao co thê theo đương bach huyêt hoăc đương mau ́ ̉ ́ ̉ ̀ ̣ ́ ̣ ̀ ́ tơi cơ quan khac gây tôn thương thư phat ́ ́ ̉ ́ ́ Nhiêu cơ quan : phôi, thân, màng não , xương, hạch, da đều có thể bị ̀ ̉ ̣ vi khuân lao xâm nhâp , nhưng thương bị hơn ca la phôi va vi trí găp nhiêu ̉ ̣ ̀ ̉ ̀ ̉ ̀ ̣ ̀ nhât la đỉ nh phôi , nơi co phân ap oxy 120 mmHg [6] ́ ̀ ̉ ́ ́ 1.2.4 Hê gen cua vi khuân lao. .. pháp chẩn đoán kiểu gen đều dựa trên cơ sở xác ́ ̉ đị nh đôt biên ơ cac gen co liên quan khang thuôc tương ưng ̣ ́ ̉ ́ ́ ́ ́ ́ Đê xac đị nh đôt biên trên gen ̉ ́ ̣ ́ katG hiên co nhiêu phương phap , song ̣ ́ ̀ ́ giải trình gen vẫn là phương phá p cơ ban, chính xác , rõ ràng nhất Tuy nhiên ̉ đây la phương phap không phai nơi nao cung lam đươc vi đoi hoi may moc ̀ ́ ̉ ̀ ̃ ̀ ̣ ̀ ̉... lực của vi khuẩn Tìm hiểu các cơ chế mà vi khuẩn sử dụng để xâm nhập và gây bệnh có ý nghĩa quan trọng trong cuộc chiến chống lại các tác nhân bé nhỏ này [7] Độc lực của vi khuẩn lao có liên quan đến “Cord factor” (trehalose – 6,6’ – dimycolate ) là chất gây ức chế hoạt động của tế bào bạch cầu , gây nên nhưng u hat man tí nh Miên dị ch trong bê nh lao ngay . đoạ n gen katG từ cá c chủ ng vi khuẩ n lao nghiê n cu. 2. Pht hin đt bin trên gen katG liên quan đế n tnh khng isoniazid ở cc chng vi khuẩ. 1.3. Gen KatG v tnh kháng thuốc isoniazid  vi khun lao Gen katG l mt đon DNA c kch thước 2223 bp, nằ m trên nhiễ m sắ c thể củ a vi khuẩ