Nghiên cứu tác dụng điều trị đái tháo đường typ 2 của cao chiết lá chè đắng (llex kaushue s y hu)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TYP CỦA CAO CHIẾT LÁ CHÈ ĐẮNG (Ilex kaushue S Y Hu) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TYP CỦA CAO CHIẾT LÁ CHÈ ĐẮNG (llex kaushue S Y Hu) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QH.2016Y Người hướng dẫn 1: PGS.TS BÙI THANH TÙNG Người hướng dẫn 2: ThS NGUYỄN THỊ HUYỀN Hà Nội – 2020 LỜI CẢM ƠN Trong q trình xây dựng hồn thành khóa luận, tơi ln nhận hướng dẫn tận tình PGS.TS Bùi Thanh Tùng ThS Nguyễn Thị Huyền Bên cạnh giảng dạy tâm huyết thầy cô giáo trường Đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội khích lệ, cổ vũ gia đình ln bên cạnh động viên, tạo điều kiện thuận lợi để học tập, nghiên cứu cho việc hồn thành khóa luận Do tơi xin bày tỏ lòng biết ơn gửi lời cảm ơn trân trọng tới hai thầy cô hướng dẫn tơi khóa luận PGS.TS Bùi Thanh Tùng ThS Nguyễn Thị Huyền – Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng Trường Đại học Y Dược Hai thày khơng tận tình bảo giúp tơi hồn thành khóa luận cịn đưa lời khun hữu ích cho tơi đường nghiệp sau Đồng thời, xin chân thành cảm ơn tới ban chủ nhiệm Trường Đại học Y Dược tạo điều kiện tốt cho học tập làm khóa luận Ngồi ra, tơi xin cảm ơn thày cô môn Dược lý - Dược lâm sàng, Bào chế, Dược liệu - Dược cổ truyền Hóa dược – Kiểm nghiệm trang bị cho phép sử dụng sở vật chất, phịng thí nghiệm để hồn thành khóa luận Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè tơi ln bên cạnh động viên, khích lệ tơi lúc khó khăn q trình thực khóa luận Mặc dù thân nỗ lực, cố gắng song khó tránh khỏi hạn chế, thiếu sót Kính mong q thầy, giáo đóng góp thêm ý kiến để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2021 Tác giả khóa luận Nguyễn Thị Nhung DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ĐTĐ Đái tháo đường IC50 Nồng độ ức chế 50% IDF Liên đoàn Đái tháo đường giới (International Diabetes Federation) HDL Lipoprotein tỉ trọng cao LDL Lipoprotein tỉ trọng thấp STZ Streptozocin DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1: Hình ảnh chè đắng Hình 1.2: Công thức số hợp chất chè đắng Hình 1.3: Lá chè đắng sau phơi khơ Hình 2.1: Lá chè đắng sau cắt nhỏ, sấy khơ Hình 2.2: Quy trình chiết xuất chè đắng Hình 2.3: Quy trình nghiên cứu Hình 3.1: Sắc kí đồ GC - MS / MS chiết xuất etanol chè đắng Hình 3.2: Thể trọng chuột sau 28 ngày ni theo mơ hình gây béo phì thực nghiệm Hình 3.3: Trọng lượng nhóm chuột trước sau điều trị 28 ngày Hình 3.4: Chỉ số glucose huyết nhóm chuột trước sau điều trị 28 ngày DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Nguyên nhân gây ĐTĐ nguyên phát Bảng 1.2: Phân loại mức độ cân nặng theo BMI Bảng 3.1: Các chất xác định chiết xuất etanol chè đằng GC – MS / MS Bảng 3.2: Tác động ức chế enzym α –glucosidase cao chiết chè đắng Bảng 3.3: Thể trọng chuột sau 28 ngày ni theo mơ hình béo phì thực nghiệm Bảng 3.4: Nồng độ glucose máu nhóm chuột tiêm STZ tiêm đệm (đơn vị mmol/L) Bảng 3.5: Tác dụng cao chiết chè đắng lên trọng lượng chuột Bảng 3.6: Ảnh hưởng dịch chiết chè đắng lên nồng độ glucose huyết Bảng 3.7: Tác dụng cao chiết chè đắng lên lipid máu (mg/ml) chuột bị tiểu đường streptozotocin sau 28 ngày điều trị MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Dịch tễ .3 1.1.3 Phân loại đái tháo đường .3 1.1.4 Cơ chế bệnh sinh biến chứng đái tháo đường typ 1.1.5 Biến chứng bệnh đái tháo đường 1.1.6 Các thuốc điều trị 1.2 BỆNH BÉO PHÌ .5 1.2.1 Vài nét béo phì 1.2.2 Nguyên nhân gây bệnh béo phì .6 1.2.3 Mối quan hệ béo phì kháng insulin ĐTĐ typ 1.3 TỔNG QUAN VỀ ENZYME -GLUCOSIDE 1.3.1 Danh pháp phân loại 1.3.2 Các chất ức chế enzyme - glucosidase 1.4 MÔ HÌNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG THỰC NGHIỆM 1.5 CÂY CHÈ ĐẮNG 10 1.5.1 Tên gọi 10 1.5.2 Đặc điểm thực vật 10 1.5.3 Phân bố, sinh thái .11 1.5.4 Thành phần hóa học 11 1.5.5 Công dụng 13 1.5.6 Tính an tồn chè đắng 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.1.1 Mẫu thực vật .17 2.1.2 Động vật thí nghiệm .18 2.2 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 19 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.3.1 Phương pháp xác định số hợp chất cao chiết GC – MS / MS 19 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế enzym  - glucosidase 20 2.3.3 Phương pháp gây đái tháo đường chuột béo phì 21 2.3.4 Đánh giá tác dụng hạ glucose dịch chiết chè đắng 22 2.3.5 Đánh giá tác dụng hạ lipid máu dịch chiết chè đắng 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 25 3.1 KẾT QUẢ CỦA CHIẾT CAO DƯỢC LIỆU .25 3.2 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH MẪU CAO CHIẾT BẰNG GC- MS / MS 25 3.3 KẾT QUẢ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM -GLUCOSIDASE IN VITRO CỦA CAO CHIẾT CHÈ ĐẮNG 25 3.4 KẾT QUẢ GÂY ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TRÊN CHUỘT BÉO PHÌ 28 3.4.1 Kết gây béo phì 28 3.4.2 Kết gây ĐTĐ chuột béo phì 28 3.5 KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ BẰNG CAO CHIẾT 29 3.5.1 Kết cao chiết chè đắng khối lượng chuột 29 3.5.2 Kết cao chiết chè đắng glucose máu 30 3.5.3 Kết cao chiết chè đắng lipid máu 31 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 MỞ ĐẦU Trong xã hội đại ngày nay, đái tháo đường bệnh có tỷ lệ mắc ngày tăng Đái tháo đường trở thành nguyên nhân tử vong hàng đầu nước phát triển Đái tháo đường gây nhiều biến chứng nghiêm trọng suy thận, hôn mê, hạ đường huyết, nhiễm trùng, cắt cụt chi, ảnh hưởng tới sống người Ở Việt Nam số người mắc đái chiếm khoảng 1- 2.5% dân số có tỷ lệ tử vong cao bệnh nội tiết Con số không ngừng tăng lên năm gần Bên cạnh với phát triển kinh tế gia tăng việc sử dụng thực phẩm không thích hợp, chế độ dinh dưỡng chưa hợp lý Cùng với chưa có chế độ luyện tập thường xuyên hay phổ biến không vận động khiến cho độ tuổi mắc đái tháo đường đặc biệt đái tháo đường typ ngày giảm xuống Ngày nay, xu hướng chữa bệnh quay thiên nhiên Mặc dù có nhiều tiến nghiên cứu phát triển thuốc tân dược trình tìm hợp chất có chi phí cao gây nhiều tác dụng phụ Hầu hết thuốc điều trị ĐTĐ thị trường có tác dụng phụ Ví dụ nhóm Sulfonylureas gây hạ đường huyết, run rẩy, đổ mồ hơi, chóng mặt Nhóm Thiazolidinediones gây tăng cân, hạ glucose huyết, tăng cholesterol xấu máu Nhóm thuốc ức chế SGLT2 làm tăng nguy mắc nhiễm trùng nhiễm nấm đường tiết niệu, nhiễm toan Do đó, xu hướng tìm tịi phát triển thuốc Đông y, thuốc Nam, kết hợp Y học cổ truyền y học ngày phổ biến Hơn nữa, Việt Nam với khí hậu địa hình đa dạng có nguồn tài ngun thuốc phong phú Các dược liệu sử dụng hàng nghìn năm có nhiều tác dụng điều trị tác dụng tiềm Hiện có nhiều nghiên cứu chứng minh tác dụng điều trị đái tháo đường nhiều loại thảo dược đạt nhiều tác dụng khả quan Điều cho thấy tiềm phát triển loại dược liệu thành thuốc hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường typ Lá chè đắng (Ilex kaushue) loại trà phổ biến nhiều nước châu Á Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản,… Theo Y học cổ truyền, chè đắng có nhiều tác dụng làm trí óc minh mẫn mắt sáng, giải độc, giảm ho, đau họng; giúp lợi tiểu phiền khát; kích thích tiêu hóa; giảm huyết áp, hạ đường huyết; kháng khuẩn, kháng viêm Lá chè đắng sử dụng để điều trị chứng ngủ, mắt đỏ, nhức đầu, đau Các nghiên cứu phân lập thành phần hóa học chè đắng cho kết có nhiều nhóm chất quý từ tự nhiên saponin, alkaloid, triterpenoid, phenolic, flavonoid, Một số nghiên cứu giới cho thấy chè đắng có tác dụng hạ đường huyết giảm nồng độ lipid máu Nhưng qua tìm hiểu Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu chứng minh nhằm phát triển loại thảo dược thành sản phẩm hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường Vì vậy, đề tài nghiên cứu khoa học: “Nghiên cứu tác dụng điều trị đái tháo đường typ cao chiết chè đắng (llex kaushue S Y Hu)” thực nhằm mục tiêu sau: Triển khai mơ hình chuột nhắt béo phì bị ĐTĐ typ 2 Đánh giá tác dụng điều trị ĐTĐ typ cao chiết chè đắng thực nghiệm Bảng 3.1: Các chất xác định chiết xuất etanol chè đắng GC – MS / MS Pic Thời sắc gian lưu kí (tR) Độ tin cậy Tên hợp chất (%) Công thức phân tử Phân tử khối (g/mol) 4.575 benzaldehyde, 4(dimethylamino)-2-hydroxy- 75.67 C9H11NO2 165.19 7.056 2-Phenylindolizine 63.33 C14H11N 193.24 7.058 Cyclotrisiloxane, hexamethyl- 64.82 C6H18O3Si3 222.46 7.058 7-Hydroxy-7,8,9,10-tetramethyl7,8-dihydrocyclohepta[d,e]s naphthalene 70.04 C18H20O 252.3 7.598 7,8-Dimethoxy-2-methyl-1-(4'hydroxybenzyl)-1,2,3,4tetrahydroisoquinoline 64.54 C19H23NO3 313.4 13.362 1H-Inden-1-one, 5(dimethylamino)-2,3-dihydro- 60.79 C11H13NO 175.23 14.762 Anthracene, 9,10-dihydro-9-(1methylpropyl)- 65.76 C18H20 236.35 15.162 7-Methoxy-2,3-dimethylindole 74.77 C11H13NO 175.23 15.483 5-Methylpyrimido[3,4-a]indole 75.69 C12H10N2 182.22 10 15.499 l-Leucine, N-ethoxycarbonyl-Nmethyl-, pentadecyl ester 62.70 C25H49NO4 427.7 11 16.417 9H-Fluoren-9-one 70.70 C13H8O 180.2 12 16.818 Phenol, 2,5-bis(1-methylethyl)-, acetate 67.16 C14H20O2 220.31 13 17.264 4-(2-Phenylvinyl)pyridine, trans- 68.00 C13H11N 181.23 14 17.267 5H-Indeno[1,2-b]pyridin-5-one 64.25 C12H7NO 181.19 15 17.960 Felbinac 66.52 C14H12O2 212.24 16 18.724 1,2-Benzendiol, O,O'-di(trans-3trifluoromethylcinnamoyl)- 60.18 C26H16F6O4 506.39 17 23.171 Anthracene-9,10-biimine-11,12dicarboxylic acid, 9,10-dihydro-, diethyl ester 65.42 C20H20N2O4 352.4 27 3.4 Kết gây đái tháo đường chuột béo phì 3.4.1 Kết gây béo phì Sau 28 ngày ni theo chế độ, chuột gây béo phì tăng cân rõ rệt Sự thay đổi thể trọng chuột trung bình nhóm thí nghiệm sau 28 ngày thể bảng 3.3 Bảng 3.3: Thể trọng chuột sau 28 ngày ni theo mơ hình béo phì thực nghiệm Khối lượng (g) Nhóm Ngày Thay đổi (%) Ngày 28 Nhóm ni 20,3 ± 1,21 thường (n=10) 34,2 ± 1,28  68,47% Nhóm ni béo 21,1 ± 1,43 (n=40) 46,5 ± 1,32  120,38% 46.5 50 45 Trọng lượng 40 34.2 35 30 25 21.1 20.3 20 15 10 Lô nuôi thường Lô nuôi béo Ngày Ngày 28 Hình 3.2: Thể trọng chuột sau 28 ngày ni theo mơ hình gây béo phì thực nghiệm Nhận xét: Nhóm chuột ăn thức ăn bình thường sau 28 ngày ni khối lượng thể tăng so với ngày bắt đầu thí nghiệm 13,9 g (tăng 68,47 %), nhóm chuột ni với chế độ giàu chất béo khối lượng thể tăng so với ngày đầu thí nghiệm 25,4 g (tăng 120,38 %) Chuột nuôi với chế độ ăn giàu chất béo có khối lượng thể lớn chuột ni thường 12,3 g tương đương tăng 35,96% Như kết luận chuột nuôi thức ăn giàu chất béo tăng cân rõ rệt khối lượng so với chuột nuôi chế độ ăn thức ăn thường 3.4.2 Kết gây ĐTĐ chuột béo phì 28 Chọn chuột béo phì có khối lượng từ 35 g trở lên để làm tiếp thí nghiệm Chuột chia làm hai lô, kiểm tra đường huyết trước tiêm STZ Tiến hành tiêm STZ liều 50 mg/kg ngày liên tục Sau kiểm tra đường huyết vào ngày thứ thứ 10 Kết thể bảng Bảng 3.4 Nồng độ glucose máu nhóm chuột tiêm STZ tiêm đệm (đơn vị mmol/L) Sau tiêm Chuột Trước tiêm Lô tiêm điệm Lô tiêm STZ ngày 10 ngày 5,9 ± 1,12 6,4 ± 2,21 6,9 ± 1,43 6,1 ± 0,79 8,7 ± 0,98 11,5 ± 1,38 Nhận xét: Từ bảng 3.4 ta thấy lô đối chứng (lô tiêm đệm) nồng độ glucose máu tương đối ổn định theo thời gian, xung quanh nồng độ mmol/L Nhưng lô tiêm STZ nồng độ đường huyết trước tiêm 6,1 ± 0,79 mmol/L, ngày thứ sau tiêm STZ tăng lên 42,62 %; tới ngày thứ 10 nồng độ đường huyết chuột 11,5 ± 1,38 (88,52%) Kết cho thấy, việc gây mơ hình bệnh đái tháo đường chuột béo phì STZ thành cơng 3.5 Kết điều trị cao chiết 3.5.1 Kết cao chiết chè đắng khối lượng chuột Bảng 3.5: Tác dụng cao chiết chè đắng lên trọng lượng chuột Đơn vị: g Trước điều trị Sau điều trị Sau điều trị % thay đổi 15 ngày 28 ngày Nhóm 43,5 ± 0,92 45,2 ± 2,41 46,7 ± 3,21 Tăng 7,34% Nhóm 47,9 ± 1,12 50,2 ± 1,75 52,8 ± 2,93 Tăng 10,27% Nhóm 39,8 ± 2,22 35,1 ± 2,45 33,6 ± 1,72 Giảm 15,51% Nhóm 47,1 ± 1,51 44,7 ± 1,78 41,3 ± 2,44 Giảm 12,22% Nhóm 44,5 ± 1,32 39,1 ± 2,95 36,7 ± 1,12 Giảm 17,35% 29 60 Trọng lượng chuột 50 52.8 43.5 46.7 47.9 47.1 41.3 39.8 40 44.5 36.7 33.6 30 20 10 Nhóm Nhóm Nhóm Trước điều trị Nhóm Nhóm Sau điều trị 28 ngày Hình 3.3: Trọng lượng nhóm chuột trước sau điều trị 28 ngày Nhận xét: Từ bảng 3.5 hình 3.3 cho thấy kết tác dụng cao chiết chè đắng lên trọng lượng chuột Từ bảng ta thấy, trọng lượng chuột nhóm sinh lý (nhóm 1) nhóm chứng bệnh (nhóm 2) có tăng nhẹ (7,34% 10,27%) Nhóm điều trị glibenclamid (nhóm 3) trọng lượng chuột nhóm nhẹ (15,51%) Hai nhóm điều trị với cao chiết liều 100 mg/kg 200mg/kg có trọng lượng chuột giảm tương tự với thuốc điều trị glibenclamid Liều cao chiết chè đắng 200mg/kg (giảm 12,22%) cho thấy việc giảm trọng lượng cao liều 100 mg/kg (giảm 17,35%) 3.5.2 Kết cao chiết chè đắng glucose máu Bảng 3.6: Ảnh hưởng dịch chiết chè đắng lên nồng độ glucose huyết Ngày Ngày 10 Ngày 20 Ngày 28 Thay đổi (%) Nhóm 5,07 ± 0,66 5,58±1,04 5,79±1,01 5,14±0,91  1,38 Nhóm 14,58±3,21 15,02±2,24 16,09±2,51 16,23±2,31#  11,31 Nhóm 15,83±1,21 13,25±3,32 11,27±2,36 9,52±2,25*  39,86 Nhóm 15,07±1,45 13,87±1,89 12,69±1,35 10,52±1,34*  30,19 Nhóm 14,69±2,53 12,67±2,12 11,57±1,82 8,91±1,12*  39,35 Khác biệt có ý nghĩa thống kê, #p