Khảo sát mối liên quan giữa các đột biến gen với một số bất thường cấu trúc tai ở trẻ điếc bẩm sinh

-■c -ÍM Qỉ ugc V Hl LỜI CẢM ƠN Lài đầu nên em xin bày tị lịng biềt mì đền Ban Giám hiệu Phòng Dào tạo Dại học Trường Dại học YHà Nội Phịng Cơng tác Chinh trị & Học sinh Sinh viên Trường Dại học Y Hà Nội, khoa phịng nơi em học tập dà tạo (liều kiện thuận lợi cho em suồt trình học rập làm luận vãn với lịng biết mi sâu sốc, em xin cám ơn PGS.TS Nguyễn Thị Trang, giang viên Bộ mòn Y Sinh học - Di truyền Trường Dại Học Y Hà Nội cô (là khơi gợi ỷ tưởng vá tợn tình chi bao tận làm hường dần em ưong suổt trình em thực hiên khóa luỏn Ern xin (lược giá lời căm ơn chân thành dền thầy cỏ n ong mòn YSinh học - Di truyền Trường Dại hục Y Hà Nội khoa Tai Mùi Họng bịnh viện Dụi học Y Há Nội dã lạo (liều kiện thuôn lợi vá giúp dờ em tư liệu dế hoán thành luận vãn Xin gửi lời cam ơn lới cớc bệnh nhàn gia dinh bệnh nhân dà dong ý tham gia nghiên cừu Cuối em xin gưĩ lời cam ơn tin gia dinh bạn bè dã dồng hành, giúp dở bên chia se em nhừng khô khàn trừih học tập Trường Dại hục Y Hâ Nội thời gian thực luận vãn Em xin chân thành cám ơn Hà Nội ngày 11 tháng 05 năm 2021 Sinh viên Cao Minh Hưng LỜI CAM ĐOAN Tỏi lã Cao Minh Hưng sinh viên khóa 2015 2021 chuyên ngành Bảc sỳ đa khoa Trường Đụi học Y Hà Nội xin cam đoan: Dây lã luận vân bán thân trực tiếp thực hướng dẫn cua PGS.TS Nguyễn Thị Trang, giang viên môn Y Sinh học Di truyền Trưởng Dại I1ỌC Y Hà Nội Công trinh không trũng lập với bất kỹ nghiên cứu khác dà dược cõng bố Việt Nam Các sổ liệu vả thõng tin nghiên cứu hồn tốn xác trung thực khách quan, dà dược xác nhận vã chấp nhận cua sư nơi nghiên cứu cho phép lấy số liệu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm tnrớc pháp luậtvể nhùng cam kết Người viết cam đoan PGS.TS.Nguycn Thị Trang Hà Nội ngày IJ ỉ hãng 05 num 202ỉ ao Minh Hưng MỤC LỰC TÀI LIỆU THAM KHÁO PHỤLỤC ABR Auditor.' Brainstem Response Do diện thí nil giác thản PTA Pure Tone Ax erage Ngưởng nghe trung binh ADN Add Deoxiribonucleic ADN ARN Acid Ribonucleic ARN ASSR Auditory Steady State Do đãp ứng trạng thải bên Response vừng thính giãc CLVT MRI Cat hip vi tinh Magnetic Resonance Imaging Chụp cộng hưởng từ KTBS Khiêm thính bảm sinh ĐCỎT Diện cực òc tai GJB2 GapJunctionBeta Gen GJB2 GJB3 Gap Junction Beta Gen GJB3 NGS Next-Generation Sequencing Giai trình tự gen the hệ Nhiêm sãc thê Otoacoustic Emissions Do âm ốc tai Polymerase Chain Reaction Phan ứng chuỏi Polymerase NST OAE PCR (phan ứng khuếch đại gen) SLC26A4 Solute carrier family 26 (anion Gen SLC26A4 WHO exchanger), member World Health Organization Tô chức y té thề giới \vs Waardenburg Syndrome Hội chửng Waardenburg dNTP deoxynucleoside triphosphate Các nucleotid A, T, G c DANH MỤC HÌNH -ÍM Qỉ ugc V Hl TĨM TẤT Mỏi nãm có them 15 nghìn tre dice bẩm sinh dược sinh Việt Nam Phát sớm đột biến gen gày bệnh hiếu rỏ tính chẩi di truyền cúa đột biên lã yếu tổ định việc chẩn đoán, giúp tre khiếm thinh phát triền tư ngôn ngừ bính thưởng Nghiên cửu nhầm kháo sát cãc dột biến gen liên quan khiếm thinh bam si lih bang kỳ thuật giai trinh tự gen the hộ mói (NGS) bước đầu tim hiểu sổ dột biên gen mang tính chắt di truyền bệnh nhân gia dính Nghiên cứu mị tá cắt ngang dược tiến hành 100 trê khiếm thinh bấm sinh gia đính tré Các kiều gen đột biến dược phát kỳ thuật NGS Tý lộ đột biên gen phát nhõm nghiên cứu lả 22% Ty lệ tre có tiền sư gia dính bị điếc bầm sinh chiếm 10% dó cỏ 7% so trường hụp có bố mẹ mang alcn dột biển Nghiên cửu chua thê xác định chinh xác tý lộ đột biến cộng đồng, vi vậy' cần mở rộng với cò mầu lớn lừ dó sè xác dị nil tý lộ dột biển dậc trưng cộng dồng Việt Nam góp phần giám thiều tỷ lệ trê khiếm thính dược sinh Từ khóa: khiêm thinh bấm sinh NGS dột biến ABSTRACT Each year 15.000 children are born deaf in Vietnam Eariv detection of common deafiiess mutations is a key factor for diagnosing, helping hearingloss children normally develop their language and awareness This study aims to investigate the genetic mutations associated with congenital hearing loss using Next Generation Sequencing technique (NGS) and the initial understanding about the relationship of the genetic mutations between the patient and the family Descriptive cross-sectional study was conducted on 100 children with congenital hearing loss and their family members The mutant genotypes were detected using NGS technique The rate of genetic mutations detected in the research group was 22% The proportion of children with a family history of congenital deafness accounts for 1OỸÓ of which 7% of the cases have parents with mutant alleles This study has not been able to accurately determine the rate of mutations in the community, so it is necessary to expand with a largw sample size, thereby identifying the specific mutation rate in the Vietnamese community, contributing to minimizing the rate of children with hearing loss being born Key words: congenital hearing impaired NGS, mutation -ÍM CỊỈ ugc V Hl ĐẠT VÂN ĐÈ Theo cãc nghiên cứu trèn giới, tý lộ điếc bấm sinh tre em tử 0.3% - 0.5% mỏi năm có khống 400.000 tre bị điếc bầm sinh la đời [1] Đây tỷ lộ rat cao nhu cầu chân đoán vã điều trị phục hoi sửc nghe cho tre lã lớn Điểc tinh trạng giàm sức nghe vói ngưỡng nghe > 90 dB đo sức nghe đơn âm hoậc diện thinh giác thản - ABR Nghe lã mức dộ giâm sức nghe với ngưỡng nghe từ 16 - 90 dB Điếc bẩm sinh tinh trạng bệnh lý hoàn toàn nâng nghe từ giai doọn sơ sinh Ớ Mỳ tý lệ điếc tre em 1.51/1000 tré vã lã nhùng khuyết tật thằn kinh sơ sinh phô biến [2] Ớ ức 1000 tre si nil cõ - trê nghe kẽm cảc mửc độ khác [3] Theo số liệu cơng bỗ thí nám 2013 Việt Nam cỏ khống triệu tre sinh ước tinh cỏ khoáng 15000 tré nghe bãm sinh dó có khống 5000 tre lã nghe kẽm nặng dice bấm sinh [4] Thiếu hụt sức nghe lả tinh trạng ưe suy giám khiếm khuyết kha nàng nghe dần den hạn chế giao tiếp, vui chơi, học tập vi tre khiếm thỉnh thưởng dề bị cô lập vã chịu nhiều thiệt thơi cu(>c sống từ dần dến rối loạn lảm lý quan hộ xà hội kém, hạn chế nhận thức Neu tre không dược chân doán phát bệnh can thiệp phục hồi chức nàng nghe nói sởm thi anh hương rát lớn đen q trình phát triền ngơn ngừ tâm lỷ hỏa nhập cộng dồng cua tré sau Có truyền di hai nhóm vànguyên mỏi nhàn trường; chu yểu gáy điếc nhóm bẩm nguyên sibiến nil nhân là: do yếu chân tồ đoán di truyền nguyên (do nhân đột gày biến điếc gen) bấm chiếm sinh dột 50% [5) gen Việc có vai chứng trỏ quan tru trọng diêm chân doán tư vấn sớm di truyền thời kỳ dự bào phòng thai, biến sơ sinh dặc biệt với -ÍM CỊỈ ugc V Hl nhùng gcn gây điếc nằm ADN ty thê: tre mang đột biến gen sè bị anh Inrờng nghiêm trọng tới sức nghe dùng kháng sinh nhóm Aminoglycoside sớm (trước 10 mỗi), nhóm kháng sinh quan trọng điều ưị nhiêm khuân, có tác dụng mạnh giá thành thắp đirợc kè đơn cách rộng rài mà không cỏ giám sãt cần thiết tíũ Việt Nam Điếc bẩm sinh dược chia lãm hai loại điếc cỏ hội chứng dice khơng hội chứng Điếc có hội chứng thướng nguyên nhân di truyền, chi em tý lộ cao dice bầm sinh, hội chững Pendred (suy giáp bâm sinh vã dice bẩm sinh), hội chứng mờ rộng ống tiền đính (Enlarged Vestibular Aqueduct Syndrome - EVAS), hội chứng MELAS.hội chứng Waadenburg Ngày cỏ rắt nhiều kf thuật sinh học phán tư dà dược sư dụng đẽ chân doán nguyên nhân điếc di truyền, nhiên, hầu hết phương pháp cỏ hiệu qua thấp vã tốn thời gian cho việc chân đoản da gcn Hiện giai trinh tự gen the hộ dược chứng minh kỳ thuật cõ hiộu quà cao việc phát dột biến gen với hiệu suầt cao có thê dồng thời phát nhiều đột biến trẽn nhiều gen chi ven lần thao tác Việc ứng dụng NGS việc phát dột biến gen gảy khiếm thinh bắm sinh đà thực Việt Nam qua sỗ nghiên cứu chi lã bước đầu Bơi chúng tòi tiến hành đe tài với hai mục tiêu chinh sau: ỉ Khảữ sát dột biến gen liên quan khiếm thínli bủm sinh kỹ thuật giãi rrùih lựgen Ihế hệ (NGS) Bưởcgiửa dầu bệnh tìm hiếu sổ dột biền gen mang tính chất di truyền nhânmột vù gia dinh -■c -ÍM Qỉ ugc V Hl Jownfl/ of translational medicine, 79-82 12 Wei Qinjun et al (2013) Genetic mutations of GJB2 and mitochondrial 12S rRNA in nonsvndromic hearing loss in Jiangsu Province of China, Journal of translational medicine, 11(1) 163 13 Du w Zhu YM, Guo YF et al (2014), Prevalence of GJB2 mutations in the Silk Road region of China and a report of three novel variants, ActaOtolaryngol, 134 373 381 14 Nguyen Tuyết Xương, Nguyền Anh Dùng Khu Thị Khánh Dung (2012), Ket qua sàt^ lọc khiếm thính trê em Hà Nội nám 20)1 Hội tai mùi họng Việt Nam Nội san hụi ngh ị khoa học kỳ thuật toàn quốc 277-285 15 Nguyền Thúy Dương Phí Thị Thu Trang Nơng Ván Hai (2014) Xác định đột biến gen GJB2 gia đính bệnh nhản cỏ hai mắc bệnh khiếm thinh, Tạp chi Cơng nghè Sinh /ípcl2(4), 601-605 16 Nguyen Thùy Dương Nguyền Thị Xuân Nguyen Hai Hà et al (2015), Mutational analysis of GJB2, GJB6 and 12S rRNA genes in Vietnamese nonsyndromic deaf children Asian Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences 5(46), 01-06 17 Ho Kim Hoa Nguyen Thị Trang Lẽ Hoàng Thang vả cộng (2016), ửng dụng DNA Microarray phát dột bion gene gày khiếm thính bầm sinh ỡ trẻ em việt Nam.T(jp chì Yhọc Việt Nam 445 134-138 18 Lin X Tang w„ et al (2012) Applications of targeted gene capture and nextgeneration sequencing technologies in studies of human deafness and other genetic disabilities Hearing research, 288(1), 67-76 19 G M Hand D J Muller B J Nicholson, et al (2002) Isolation and characterization of gap junctions from tissue culture cells Journal of molecular biology 315(4), 587 600 20 G Richard T W White L E Smith, et al (1998) Functional defects of Cx26 resulting from a heterozygous missense mutation in a family with dominant -ÍM Qỉ ugc V Hl deaf-mutism and palmoplantar keratoderma Human genetics 103(4) 393-399 21 p Gardner E Oitmaa A Messner, et al (2006), Simultaneous multigene mutation detection in patients with sensorineural hearing loss through a novel diagnostic microarray; a new approach for newborn screening follow-up Pediatrics 118(3), 985-994 22 s I Usami s Abe M D Weston, et al (1999) “Non-syndromic hearing loss associated with enlarged vestibular aqueduct is caused by PDS mutations,” Human generics, 104(2), 188-192 23 s Angeli X Lin and X z Liu (2012), Genetics of Hearing and Deafness Anat Rec Adv Integr Anar Evol Biol 295(11), 1812-1829 24 Y Noguchi T Yashima T Ito et at (2001) Audiowstibular findings in patients with mitochondrial A1555G mutation Izringascope 114(2) 344-348 25 J Lu z Li Y Zhu et al (2010) Mitochondrial 12S rRNA valiants in 1642 Han Chinese pediatric subjects with aminoglycoside-induced and nonsyndromic hearing loss Mitochondrion 10(4) 380-390 26 Parsons T Weimer L EngelstadK et al (2010) Autonomic Symptoms in Carriers of the m.3243A>G Mitochondrial DNA Mutation Arch Neurol 67(8) 976-979 doi:10.I001/ardmeurol.2010.174 27 Edoardo Malfatti Pascal Laforet Claude Jardel et al (2013) High risk of severe cardiac adverse events in patients with mitochondrial m.3243A>G mutation Neurology 80(1) 100-105 M Crimi mitochondrial s.and Galbiati tRNA*®’ gene M.p.mutation Perini A Bordoni causing pigmentary (2003) (7), retinopathy 1200-1203 neurosensorial deafness Neurology 60 A 28 Kitajiri s., McNamara R., Makishima, T., Husnain, T., Zafar A., Kittles, R., Griffith, A (2007) Identities, frequencies and origins of TMC1 mutations causing DFNB7/B11 deafness in Pakistan Clinical Genetics 72(6) 546 550 29 Li w Mei L Chen H Cai X et al (2019) New Genotypes and Phenotypes in Patients with Subtypes of Waardenburg Syndrome Identified by Diagnostic Next-Generation Sequencing Neural https://doi.org/10.1155/2019/7143458 -ÍM Qỉugc ugcVVHl Hl -c -ÍM CỊỈ plasticity, 2019 7143458 30 Bogdanova-Mihaylova, p Alexander M D Murphy R & Murphy, s M (2017) Waardenburg syndrome: a rare cause of inherited neuropathy- due to SOX 10 mutation Jour tied of the peripheral nervous system: JPNS, 22(3) 219 223 https://doi.orgi0.1111/jns.12221 31 Pingault V, Faubert E Baral V.(2015) SOXIO mutations mimic isolated hearing loss Clin Genet 88(4), 352 - 359 doi: 10.1111/cge 12506 32 J H Xia c Y Liu B s Tang, et al (1998), Mutations in the gene encoding gap junction protein beta-3 associated with autosomal dominant hearing impairment Nature genetics 20(4), 370-373 33 X z Liu X J Xia L R Xu et aL (2000) Mutations in connexin 31 underlie recessive as well as dominant non-syndromic hearing loss Human molecular genetics, 9(1) 63-67 34 Chunfeng Yun Zhenjie Wang Jiamin Gao et al (2017) Prevalence and Social Risk Factors for Hearing Impairment in Chinese Children A National Survey Int J Environ Res Public Health 14(1) 88 35 Kc hoạch hành động quốc gia VC Chàm sóc SK Bà mẹ Trc ss trị cm giai đoạn 2016-2020, Vụ sửc khoe bà me trẻ em Bộ Y tề 36 Aleem M D (201S) Biology' of human melanocyte development, Piebaldism and Waardenbuig syndrome Pediatric Dei ma to logy, doi: 10.1111 /pde 13713 37 Nayak cs, Isaacson G (2003) Worldwide distribution of Waardenburg syndrome, -inn Otol Rhmol Laryngol 112(9 Pt 1) 817-820 38 American Academy of Pediatrics Joint Committee on Infant Healing (2007) Year 2007 position statement: principles and guidelines for early hearing detection and intervention programs Pediatrics 120(4) 898-921 39 Farrer LA Gnindfast KM Amos J et al (1992) Waardenburg syndrome (WS) type I is caused by defects at multiple loci, one of which is near ALPP on clưomosome 2: first report of the ws consortium Am J Hum Genet 50(5) 902913 -ÍM Qỉ ugc V Hl 40 Taku Ito et aL (2011) SLC26A4 Genotypes and Phenotypes associated with enlargement of the vestibular aqueduct Cell Physiol Biochem 28(3), 545-552 41 Aigerim Bizhanova et al (2010) Genetics and phenomics of Pendred syndrome Mol Cell Endocrinol 322(1-2) 83-90 42 Shermila Pia Forshing Lui (2020) MELAS syndrome StatPearis NCBI 43 Ayman w El-Hattab et al (2015) MELAS syndrome: Clinical manifestations, pathogenesis and treatment options Mol Genet Metab 116(1-2), 4-12 44 Yan D Tekin et al (2013) Next-generation sequencing in genetic heari ng loss Genetic testing and molecular biomarkers 17(8) 81 -5 87 45 Lẽ Trần Quang Minh Nguyền Thị Ngọc Dung c.s (2012) Tỏng kết phàu thuật cấy ốc lai điện từ Bệnh viện Tai Mùi I lọng Thành phố Hồ Chí Minh từ 1998-2011 Tạp chí Tai Mùi Họng Việt Nam, 57(8), 9-14 46 Phạm Tiến Dùng (2005) Bước đầu đánh giá vai trò cua ABR việc chẩn đốn tơn thương sau ốc nhùng bệnh nhãn nghe kẽm ticp nhận Tạp chí Tai Mùi Họng Việt Nam 25 47 Declau, Frank, et al (2008) Etiologic and audiologic evaluations after universal neonatal hearing screening: analysis of 170 referred neonates Pediatrics, 121(6), 1119-1126 48 Nikolopoulos Thomas p et al.(2004), Development of spoken language grammar following cochlear implantation in prelingually deaf children Archives of Otolaryngology-Head & Neck Surgery 130(5) 629-633 49 Holl RF Svirsky MA (2008) "An exploratory look at pediatric cochlear implantation:is earliest always best? Ear and hearing., 29(4), 492-511 50 Martines F et al (2013) speech perception outcomes after cochlear implantation in prelingually deaf infants: the Western Sicily experience IntJPediarr OtorhinolaryngoỊ 77(5), 707-13 51 M L Maraãta L M Ploughman B Rawlings, et al (1993), Genetic epidemiological studies of early-onset deafness in the U.S school-age -ÍM Qỉugc ugcVVHl Hl -c -ÍM CỊỈ population American Journal of Medical Genetics 46(5) 486-491 Liati* Zhao M,of Fan L et (2016) Identification of a de Waardenburg novoF mutation syndrome SOXIO type inal IV aInt Chinese J Pediatr patient with Otorhinolaryngol 91 67-71 -ÍM Qỉ ugc V Hl PHỤ LỤC Quy trinh giai trinh tự gen hệ (NGS) I Tách chiết DNA từ máu ngoại vi - DNA tách chiết theo kit DNA express (Lytech- Nga I\T>) với quy trình gồm bước sau: Lấy Iml máu tươi chổng dông bang ETDA Ly tâm 1300 vòng/phút nhiệt độ thường (20°C) ưong phút Loại bõ dịch nôi Ú nhiệt độ - 20 °C 40 phút Râ đông nhiệt độ thường Cho thêm the tích kit tách bang thê tich máu (Tuy nhiên ỡ bước náy chúng tỏi có tiền nhầm giam the tích cua hóa chất tách chiết, góp phần giám giá thành mã dam báo chất lirợng) Tiến hành Vortex thời gian 10 giây, Ú 99 °C ưong 25 phút Ly tâm 1300 vòng/phút ưong 20 phút 10 Hút dịch nối sang eppendor vờ tnìng loại 1.5 ml Bao quan - 20°C II Kiềm tra chất lirọngDNA phương pháp đo mật độ quang - Mục đích: định lượng vả kiếm tra độ tinh cua DNA - Nguyên lý: Dựa vào hấp thụ cực đại cua chất bưởc sóng định Acid nucleic hấp thụ mạnh ánh sáng tứ ngoại bước sõng 260nm Vì giá trị mật độ quang học bước sóng 2óỡnm cho phép xác định nồng độ DNA Đồng thời bước sóng 280nm protein hấp thụ cực đại dựa vào de Idem tra dộ tinh cua DNA DNA gọi tinh tý sổ - -8 Tiến hành: Sư dụng máy quatig phố Nanodrop 2000 dê nồng độ vã tính tốn dộ tinh cùa DNA tách dược Chọn bước sóng 260nm, bước sóng, hâp ứiụ cực đại cua acid nucleic Nhó 2ụl dung dịch TE nưcc cất lên đầu cám úng (chúng blank) Lau khô bề mặt dầu cám úng giấy thấm Lẩy 2|il dung dịch DNA/1 mẫu để đo Kết quá: kết đo kết nối với hệ thống máy vi tinh thể hiên bảng dồ thị độ hấp thụ thõng số bước sóng 260nm 280nm * Các mầu dược bước sóng 260 nin 280nm mầu DNA dược nhát lẩn lẩy giá trị trung bính đê xác định nồng dộ DNA cua mầu III Tạo thư viện DNA - Hóa chất cần thiết Thứ Tên hóa chắt Đơn vị Sổ lượng HL PCR Buffer 1.25ml/Tube Tubes HL Primer-Label 1.5uL/Tube 384 Tubes HL Positive Control 7.5uL/Tube Tube tự HL Báo quail •30cC đền -10cC Negative Control 7.5uLTube Tube HL Beads 2.4mLZBottle Bottle HL Beads 1.6mL/Bottle Bottle 30uL Tube Tube HL Qbit Fluorescent Dye HL Qbit Solution 6mL/Bottle Bottle HL Standard 12.5uL/Tube Tube 10 HL Standaid 12.5uL/Tube Tube 2°C den °C - Các bước tiền hành: Thêm hỏa chất lương ứng theo bang sau vào ống PCR 0.2 ml vortex phút dặt vào máy Hỏa chất Thể tích (u!) HL PCR buffer 12.50 HL Primer-Label 1.20 DNA X Nước câl dà khư ion 11.3-X Tòng thê tích 25 Cãi đật chu trinh PCR sau: Nhiệt dộ Thời gian 9?c 95ffõ 15 s 60°C 90s 72°c 30 s 72°c Chu trinh 35 “Ĩ7c Ly tám sán phàm PCR 30 giãy, lây lOul suliày lcác sưinlì PCR sau:n khác nhau), trrính PCR sau:à vortex đu), trrỉnh PCR sau: thơng sổ bước sóng 260nm, 280nm giá trị mật độ quang học ó bước sóng 260nước cắt den lOOul Vortex beads BL B2 trộn them 70ul BI ưong hu them 70ul B12 vàndorí l.5ml hỗn hợp khơng đu lOOul Ly tâm nhanh giây, dặt lên giá tử tính 2-5 phút Hút phần sang chứa 20ul beads BI Vortex vànỗi dế phía dứng yên phút I Lỵ tàm nhanh giây, d đê đứng yên phút.g đu 100 Hút phần nơi phía sang mởí chứa 20ul beads B2 vã lOul LOW TE Vortex đê yên phút Ly tàm nhanh giây, đortex đe yên phút.g du 100 10 Loại bo phần chất I bo phần chất II Dặt ong giá tg trên, thèm 200ul ethanol 75%, dặt đứng yen 30 giây, mơ nắp loại bó phần nơi phía 12 Lặp lại bước 11 13 Mơ nap de làm khô beads phút 14 Thêm 50ul LOW TE trộn cách sư đụn cách sừE dứng yên 30 giày, mở n 15 Dặt ống lên giã tử tính phút 16 Chun phan nơi phía trẽn sang ong cppendorl' l.5ml chứa 40ul beads B2 chl clì5 phút 17 Ly tâm nhanh đặt ống lên giá lừ tính 2-5 phút 18 Loại bo tất cá phần nôi phía mà khơng có beads 19 Đê ống lên giã từ tính thêm 200ul ethanol 75% dẻ dứng yên 30 giây, mờ nắp loại bo chất long 20 Lập lại bước 19 21 Làm khò beads phút, 22 Thèm 20 ul LOW TW trộn vả ch vảo ul LO 23 Đặt ồng lèn giá từ tính 2-3 phút 24 Chuyên phan nơi phía sang ong cppendorỉ’ l,5ml chờ định lượng 25 Sir dụng hộ thống Qubit de thực định lượng thư viện DNA Gỉãi trình tự vã phân tích trinh lự nucleotid Sân phẩm thu chuần bị cho trinh giái trinh tự tự dộng trẽn mây giãi trùứi tự hệ Bioelectron 4000 sứ dụng chip bán dẫn semi conductor với cãc mồi thiết kế sần cho 100 dột biến tTẻn 18 gen (CapitalBio Mỳ) PHỤ LỤC Danh sách 100 đột biến trẽn 18 gen kliao sát PIIỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN STT Họ tên bệnh nhân Ngày sinh Giới Sỗ BA Ngày XN Phan Đính Đ 05/07/2011 Nam 16134S45 2S 03 2018 Nguyen The M 18 10 2010 Nam 16162114 03 04 2018 Phạm Dâng Kh 12 04 2014 Nam 1618878 04 04 2018 Đặng Đức M 16 08 2012 Nam 16250604 05 04 2018 Đàm Hoàng T 02/10/2011 Nam 16347827 19 04 2018 Nguyền Như ọ 03 11 2011 Nừ 16348674 20 04 2018 Nguyền Viet H 18 05 2012 Nam 17753684 24 04 2018 s Dỏ Quang T 23/04 2015 Nam 16374631 26 04 201 s Nguyen Bao A 16 09 2015 Nừ 16436416 27.04 201 s 10 Nguyền Cõng Duy H 02 10 2011 Nam 16460553 09 05 2018 11 Hoàng Minh Ch 09 01 2010 Nừ 16470374 15 05 2018 12 Không Vân Đ 11 08 2011 Nam 17522189 20 05 2018 13 Nguyễn Ngọc H 07 03 2011 Nam 17559179 30 05 2018 14 Nguyền Gia B 13 03 2014 Nam 17579397 04 06 2018 15 Nguyên Bao s 03 08 2015 Nam 17517588 06 06 2018 16 Nguyễn Hà L 10 11 2015 Nừ 17591379 20 06 201 s 17 Phan Dàng Kh 03 03/2011 Nam 16266019 22 06 2018 18 Doàn Minh D 28 12 2009 Nam 17609120 30 06 2018 19 Phạm Thị Như Q 09 08 2014 Nừ 17611725 30.06 2018 20 Dào Bích Tr 12 11 2014 Nừ 16274524 02/07/2018 21 Dinh Tùng D 04 12 2010 Nam 17614309 03 07 2018 22 Bùi Bao L 28 04 2013 Nừ 17648245 10 07 2018 23 Lê Tien D 27 08 2013 Nam 17667672 1S 07/2018 24 Vù Hoảng Kim Ng OS 02 2012 Nữ 17668252 25 07 2018 25 Mạc Duy D 06 11 2012 Nam 17685708 27 07 2018 26 Nguyên Phạm Tuần H 13 04 2015 Nam 17683820 31 07.2018 27 Lẽ Gia Ph 31 01 2011 Nam 17670850 17 08 2018 28 Bùi Hai D 06 06 2015 Nam 17689735 20 08 201S 29 Nguyen Tiến Đ 01 08 2014 Nam 17695662 23 08 2018 30 Nguyền Khánh H 12 02 2015 Nam 17695777 23 OS 2018 31 Trần Nguyền Ngọc L 07 09 2013 Nừ 17712086 24 08 2018 32 Vù Kim Ng 01 01 2011 Nừ 17716865 31 08 2018 33 Trần Phương D 12'05 2015 Nữ 16278652 03 09 201 s 34 Nguyền Khảnh A 19 06 2014 Nừ 17772853 03 09 2018 35 Nguyền Phương L 01 09 2011 Nừ 16322197 07 09 201 s 36 Nguyên Huyền Tr 18 02 2015 Nừ 17793051 10 09 2018 37 Nguyền Học Quỗc H 28 03 2015 Nam 17821978 17 09 2018 38 Nguyen Dire L 20 09 2011 Nam 17823844 24 09 2018 39 Bũi Thanh M 25 05'2011 Nữ 17832698 27 09 2018 40 DỒ Quốc Kh 02 09 2015 Nam 17833119 01 10 2018 41 Đào Linh Đ 08 11 2011 Nữ 16219997 05 10 2018 42 Phạm Nguyền Việt A 27 09 2011 Nam 17886231 08 10/2018 43 Nguyen Hoàng H 03 04/2012 Nam 16322065 15/10 2018 44 Tống Thị Phương A 09 04 2014 Nữ 17958787 29 10 2018 45 Nguyên Nhà u 31 12 2015 Nử 18031172 06 11 2018 46 Mai Huyền Ph 01 09 2006 Nữ 1S032758 26 11 2018 47 u Vân V 23 01 2012 Nam 18040536 03 12 2018 48 Lê Thu Th 18 09 2011 Nừ 18140308 07 01 2019 49 H-oàng Gia B 09 12 2012 Nam 18053110 28 02/2019 50 Nguyền Thị Yen N 31 08 2014 Nừ 18042981 05 03 2019 51 Dồ Gia Ư 04 06 2013 Nam 18152083 12/03 2019 52 Trần Hai M 20 08 2015 Nam 18243431 15 03 2019 53 Bùi Phạm Hã V 01 04 2014 Nữ 18268352 29 03 2019 54 Vỏ Hoàng Hãi A 30 10 2014 Nữ 1S289468 02 04 2019 55 Nguyên Minh Tr 1006 2015 Nam 18331205 05 04 2019 56 Nguyền Báo N 29 09 2011 Nam 18362195 10 04 2019 57 Nguyễn Hùu Thái Q 06 07 2016 Nam 18373638 15 04 2019 58 Nguyền Phương A 19 11 2005 Nữ 18071621 19 04 2019 59 Thân Thị Quýnh Ch 04 11 2014 Nữ 18071607 25 04 2019 60 Nguyen Đầc Ph 04 05 2014 Nam 18072530 30 04 2019 61 Nguyền Dire T 24 12 2015 Nam 18073117 03 05.2019 62 Phạm Trung H 18 07 2012 Nam 18081416 08/05/2019 63 Nguyên Xuân K 14 06 2011 Nam 18110514 10 05 2019 64 Nguyen Bảo Ng 01 01 2016 Nừ 1S120320 13 05 2019 65 Thân Dừc H, 01 01 2014 Nam 18121204 16 05 2019 66 Lẽ Ngọc Kim Ch 30/12 2007 Nữ 18120619 21 05 2019 67 Nguyen Hoàng s 25 09 2013 Nam 19032812 23 05 2019 68 Vâng Quang Th 11'05 2017 Nam 19051708 29 05 2019 69 Dinh Hoàng Ph 08 07 2016 Nam 19051709 04 06 2019 70 VÙ DuyD 12 08 2011 Nam 19062517 07 06 2019 71 Phạm Thị Linh A 01 01 2016 Nử 19060425 10 06 2019 72 Nguyen Hoảng Linh Đ 01 01 2012 Nữ 19060810 14 06 2019 73 Nguyền Gia H 18 05 2015 Nam 19060309 19 06 2019 74 Nguyễn Trần Khảnh H 02 08 2011 Nam 19070215 25 06 2019 75 Chu Trần Nhật M 19 12 2013 Nam 16212040 28 06 2019 76 Triệu Thị B 15 06 2013 Nữ 16211659 01 07/2019 77 NguycnThịPhươngL 11 08 2014 Nừ 17529812 05 07/2019 78 Nguyền Ngọc M 22 11 2015 Nữ 17636445 09 07 2019 79 Nguyen Ngọc A 12 08 2010 Nừ 17780627 11 07 2019 so Phạm Báo s 04 02 2015 Nữ 17917255 12 07 2019 SI Ngọc Gia H 15 02 2012 Nam 16075515 15/07/2019 82 Lâm Thu Th 12 09 2016 Nử 17871960 18 07 2019 83 Trần Tháo L 09 11 2011 Nừ 19071531 23 07 2019 84 Thãi Gia B 17/05/2015 Nam 19072709 29 07 2019 85 Ngô Gia B 22 08 2014 Nam 19081205 01 08 2019 86 Ngu vẻn Mạnh D 24 04 2018 Nam 19081209 05 0S 2019 87 Chu Dửc M 04 11 2013 Nam 19091609 09 08 2019 88 Dinh Duy M 21 03 2016 Nam 19100211 12 08 2019 89 Ngõ Bao Ng 10 09 2017 Nử 19100411 IS 08 2019 90 Bùi Ánh Ng 26 01 2017 Nữ 19100416 20 08 2019 91 Nguyền ĐảngDửủ A 28 07 2018 Nam 19100411 23 08 2019 92 Nguyen Hai L 29 11 2012 Nam 19101415 28 08 2019 93 Nguyễn Sinh Ph 21 11 2013 Nam 16204332 30 08 2019 94 Dinh Như s 28 07 2014 Nam 19040608 03 09 2019 95 Hoàng Mai Ph 15 05 2018 Nữ 19101801 06 09 2019 96 Bùi Minh D 07 05 2011 Nam 17590220 10 09 2019 97 Nguyền Trung K 28 06 2011 Nam 18052721 13 09 2019 98 Nguyễn Vù II 04 09 2011 Nam 16322115 IS 09 2019 99 Kim Dừc H 08 05 2016 Nam 19102101 20 09 2019 100 Phùng Hoàng Hai D 21 11 2017 Nam 19110803 01 10 2019 -■c -ÍM CỊỈ ugc V Hl ... bất thường cầu trúc điếc Các đột biến trẽn gen GJB2 MT-TL, MT-TH không phát bắt thường cấu trúc tai Dột biến gen SLC26A4, MT-RNR1 TMC1 có ca trưởng họp bằt thưởng không bất thường cáu trúc lai Các. .. tương quan giừa đột biến cảc gen với bất thưởng cấu tnic tai Trong nghiên cứu chứng tòi phát hiộn I trường hợp bất thường với I đột biển TMC1 trường họp khác với dột biến MT-RNR1 4.2 Khao sát (lột... cô bất thường tai trong, tương đương 10% có I trường hụp bất thường ca tai nong vã tai giừa chiếm 1% 90% số tre tươngtai trúc đương 90 trường hợp không phát bất thưởng cấu 3.2 Ket phát đột biến