Phát hiện đột biến trên một số exon của gen RB1 ở mẫu mô của bệnh nhân u nguyên bào võng mạc

BỌ GIÁO DỤC VÀ DÀO TẠO TRƯỜNG DẠI HỌC Y HÀ NỘI BỌ Y TÉ NGUYÊN THỊ MAI LINH DÈ TÀI PHÁT HIỆN DỘT BIẾN TRÊN MỘT SÓ EXON CỦA GEN RB1 Ờ MẢU MÔ CỦA BỆNH NHÂN u NGUYÊN BÀO VÔNG MẠC Chuyên ngành : Xét nghiệm V học Mà sổ : 1753320027 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP cú NHÂN NGƯỜI HƯỚNG DÂN KHOA HỌC: TS Nguyền Hoàng Việt TS Phạm Lẽ Anh Tuấn HÀ NỘI-2021 LÒI CẢM ƠN Lởi cho phép em xin giri lời cam ơn chân thành tới TS Nguyền TM/ zfci V*: 4Ả 'V Hồng Việt người thầy đà ln đồng hành truyền cam hứng cho em từ mói bất đầu tim hiêu VC môn bệnh học phán tư Em xin cam ơn Tien sí Phạm Lè Anh Tuần đà giúp đỡ chi báo em không chi việc thực khóa luận mà cịn dạy cho em tinh thần nghiên cứu khoa học thực nghiên cứu khoa học Em xin gưi lòng biết ơn đến GS.TS.BS Tạ Thành Văn giám đốc Trưng Tàm Nghiên cứu Gen - Protein Đại học ¥ Hà Nội dã tạo điều kiện thuận lợi cho em tròm; trinh thực hiên nghiên cứu Em xin cám ơn PGS.TS Trần vãn Khánh, phò giâm dốc Trung Tàm Nghiên Cứu Gen- Piữtein Trưởng Bộ mòn Bệnh học phản tư Dại học Y Hà Nội đà cho em hội thực hành trung tâm giúp em làm quen với môi trưởng nghiên cứu khoa học trang thiết bị máy móc dại Em xin cám ơn ThS Lẽ Thị Phương ThS Nguyễn Qúy Lỉnh người chi người anh dà hướng dần em thực hành từ nhùng ngày dầu tiên Cant ơn nhiệt tình, tận tâm cua anh chị Cuối cũng, em xin cam ơn thầy cỏ anh chị trung tâm dà giúp dỡ dộng viên em suốt quã trinh thực khõa luận, giúp em cõ thè hoãn thành tốt Hà Nội ngây 11 thảng nám 2021 Sinh viên Nguyền Thị Mai Linh LỊI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kểt nghiên cúu "Phát đột biển ưên TM/ V*: số e.xon cua gen RBJ mẫu mò cua bệnh nhàn nguyên bào vồng mạc" kết qua nghiên cứu cua cá nhàn tòi Nghiên cứu tài trợ Trung tâm nghiên cứu Gen - Protein Dili học Y Hâ Nội Tỏi xin chịu trádi nhiệm lời cam đoan Hà Nội ngây 11 tháng năm 2021 Sinh viên Nguyền Thị Mai Linh TM/ V*: MỤC LỤC TÀI LIỆU THAM KHÁO DANH MỤC BÁNG TM/ zfci V*: 4Ả 'V DANH MỤC BIÉV DÒ Biêu dồ 3.1: Ti lệ bệnh nhản phát dột biền gen RBÌ 39 Biêu đồ 3.2: Ti lệ dạng dột biếngen 39 DANH AIỤC HÌNH Hĩnh 1.1: Hĩnh ánh giai phẫu mắt bính thường mắt cỏ khối u nguyên bão TM/ zfci GẠ: • -U DANH MỤC CHỮ VIẾT TÁT UNBVM u nguyên bào vỏng mạc RB1 Retinoblastoma Protein RB Protein Retinoblastoma Cdk Cylin dependent kinase PCR Polymerase Chain Reaction DNA Deoxyribonucleic axit dNTP ddNTP MLPA GTT aa bp ĐB Deoxynucleoside triphosphate Dideoxynucleoside triphosphate Multiplex Ligation- Dependent Probe Amplification Giải trinh tự axit amin base pair dột biến TM/ c*: -u ĐẠT VÂN ĐÈ u nguyên bào võng mạc khói u ác tính, thuộc nhóm u ngun bào thần kinlỳ Bệnh dụng ung thư gặp, xay với ti lệ 1/15000- 1/20000 ưẽ sống2 vã chiêm 3% khối u tre em u nguyên bào võng mạc loại ung thư nội nhàn phó biền thứ chi sau u hắc mạc với ti lộ mac 8000 ca năm toàn thề giới3 Tại Việt Nam khoang 90-100 ca chân đoán mồi nànr Bệnh gày nhùng tôn thương nghiêm trọng mắt hậu qua có thê dần đến khoét bó mat tể bão ung thư xám lấn thần kinh trung ương qua dây thần kinh thi giác, di càn tư vong' u nguyên bào vồng mạc xảy đột biền gen RBỈ Thông thưởng, te bào cùa thê phát triên phân chia cách cỏ kicm soảt cãc te bào dược “chcl" theo chương trinh lập sần vã thay vào lả tế bào khoe mạnh đê tri chức nâng cua thê Khi gen RBỈ bị đột biến, san phẩm cua gen protein RB mắt chức nâng ửc che khối u tế bào tiền thân tế bảo nõn vịng mạc tâng sinh kiêm sốt vã trơ thành u Đê hình thánh khối u gen RB1 phai trải qua hai lần đột biến hay đột biền chức ca hai alcn Dột biến cỏ thè xay di truyền cõ the lã đột biến phát sinh trinh sinh trương Khi ca hai alen cùa gen RBi xay dột biến, gen khơng san xuất dược ban bính thưởng cùa protein RB protein dược dịch mà từ gen RB1 dột biền sè khơng cịn chửc ức chế khối u ki cm soát chu trinh tề báo Te bào vơng mạc tảng sinh mắt Idem sốt tạo thành khối u nhũng bệnh nhân có dột biến di truyền, ti lệ cõ khối u hai mát cao nhùng bệnh nhàn dột biến không di truyền Ư nguyên 95% bào trường võngTrong mạc chân hợp tí lệti đốn sốngvã diều nước tri sớm phátcó triển thê báo den tồn mắt bị bộnh TM/ zfci V*: - 44 Bàng 33: Bâng tong hợp kết giãi ĩrìnlt tự gen RB1 trẽn bệnh nhàn nghiên cứu Mã Vùng BN ĐB RB1 Thay đỏi axit Thõng tin VỊ trí ĐB Dạng ĐB Exon 20 C.1981OT Sai nghía R661W Đống hợp Dà cơng bơ RB2 Exon 14 C.1363OT Vỏ nghía R455X Đồng hợp Dà cịng bỗ RB3 Exon 14 C.1333OT Vơ nghía R445X Đồng hụp Dà công bố RB4 Exon 23 c.2390del L797Yfs*13 Đổng hợp Dã công bổ RB5 Exon 15 R467X Dồng họp Dã cóng bố LT Vơ nghía RB6 aniin The ĐB DB KHÔNG PHÁT HI ẸN ĐỘT BI ẼN Exon 14 C.1333OT Vô nghta R445X Dị hợp Dà công bõ Exon 17 C.1654OT Vỏ nghía R552X Dà cơng bỗ RB8 Exon 23 c.2388del Lệch khung P796fs*13 Dị hợp • Dóng hợp RB9 Exon 23 C.2359OT Vơ nghía R787X Đổng hợp Dà cơng bỗ RB10 Exon 15 C.1399OT Vơ nghía R467X Đồng họp Dà cịng bổ RB7 Dà cơng bồ Nhộn xét: Bang tông hop kết qua phát dột biến gen RB1 10 bệnh nhân ƯNBVM cho thấy 9/10 bộnli nhản phát dột biền, chiếm ti lộ 90% Trong dó có dạng dột biền khác với 8/8 dụng cảc đột biến dà công bố TM/ zfci V*: 4Ả 'V Ti lệ bệnh nhân phát dột biền gcn ■ ■ BN phái dội bicn BN không phái hiộn dội hiền Biếu đồ 3.1: Tì lệ bệnh nhàn pltát đột biền gen RB1 Ti lệ dạng dột biến • Võ nghía ■ Lệch khung dịch mã • Sai nghía • Biếu đồ 3.2: Ti lệ dụng dột biến gen Nhận xét: Kết giải trinh tự gen cua 10 mẫu nghiên círu cho thầy phát dột biến vỏ nghía trẽn tống số dạng dột biến khảc chiếm 62.5% Đột biến lệch khung dạng sai nghfa dạng Không phát đột biến vị tri cat CIIƯONG IV BÀN LUẬN 4.1 Kết tách chiết DNA Mầu mò sinh thiết tách chiết bang Kit Qiagen Mini Kit bao gồm ba bước chinh (1) Phá mảng tế bão (2) Gắn DMA lên mãng (3) Rữa DNA (4) Elute DNA Trong bước phả mảng tế bão mãng tề bão vã mãng nhãn bị ly giái Đổng thời DNA protein sè bị biền tínlỊ nuclease bị bầt hoạt Thòng thường bước sè bố sung số chất tây rừa enzyme đê tảng tính hiệu qua cua trinh ly giai Trong nghiên cứu nảy chúng tịi bơ sung enzyme Protease K giúp hõa tan protein vã phá mảng tốt Những yểu tố chủ quan có thè ãnh hưởng đen hiệu suầt cùa phả mãng cỏ thê thời gian chưa du tế bào chưa dược ly giai hết dẫn tới nồng độ DNA thu dược sau tách chiết thấp Sau bước phả mảng DNA từ nhân ngồi, cần cố định DNA lẽn cột đe loại bo thảnh phần khác dung dịch Đe tảng hiệu qua cua việc gắn người ta thường dũng ethanol đỏi isopropanol Trong nghiên cứu tỏi sư dụng ethanol 100% đẻ tua DNA Bước DNA nhầm loại bo cãc thành phần khác muối, protein, carbonhydrate dam bao độ tinh cho mầu tránh anh hương trinh PCR Cuối cúng DNA hòa tan màng đe thu DNA tinh sạch, ban bước tây nra hóa tan it cõ sai sõt Lỗi thường thấy lả tế bão khơng dược ly giai hồn tồn Cãc tế bảo mó chứa lượng tạp chất lớn vã không the bị ly tâm loại bo bước rưa DNA Vi dam bao du thời gian vả Idem tra tan hoàn toàn bước ly giãi quan trọng 4.2 Kết quà PCR Kct qua PCR phụ thuộc vào yếu tồ (1) mầu DNA tách chiết (2) Thành phần tham gia phàn úng (3) Chu trinh nhiệt Mầu DNA sau tách chiết ánh hường lớn đến kết qua PCR Mầu DNA cần đạt yêu cầu nồng độ độ tinh Khi mầu nồng độ thấp, phàn ứng PCR diễn kiêm tra bâng điện di gel Agarose không phát dược Không the kiêm tra trinh bảng đo OD có nhiều thành phàn hấp thụ bước sóng trũng với DNA muối Primer Mầu có độ tinh khơng đạt chuẩn, tức mầu bị nhiêm protein muối, caibonhydrat hay enzyme nuclease, thảnh phần làm thay đỗi độ pH anh hưởng đen hoụt động cua enzyme, ức chề thành phần phan ủng 10 mầu DNA tách chiết có mầu đạt yêu cầu nồng độ độ tinh mầu cõ nồng độ thấp vả chi sổ A ; Số lượng mầu nho khơng cỏ ỷ nghía thống kẽ > Bệnh nhản chấn doán xác định mắc u nguyên bào võng mạc > Mầu thu thập lã màu mõ ung thư cỏ the phát ca dột biển di truyền dột biền soma 1/10 bệnh nhản không phát dột biển gen RB1 cò nhùng kha xay như: > Không cỏ tề bào ung thư > Ltrợng DNA đột biền không du dê tụo thành tin hiệu máy đọc dược > DNA cúa mô ung thư khơng có dột biến trãi gen RBỈ Ngun nhản tc hào ung thư không phát dột biến trẽn gen RB1 có thê xay nguyên nhàn khuếch dại gen sinh ung thư MYCN chi cm 2% tỷ lộ ca UNBVM27, methyl hóa mức cùa CpG vùng promoter cùa RBỈ thay đỏi phosphoryl hóa cùa protein RB gen PINl16 hay nhiễm virus HPV tìm thầy 12/43 mầu mơ cua bệnh nhàn UNBVM nghiên cứu cua M A Palazzi r 4.4 u nguyên bào võng mạc gen RB1 4.4.1 Ti lị’phát dột biển gen RB1 ứ bệnh nhân UNBVM Củng với phát tríên cua cơng nghệ, ngành y si lúi học đà có bước di lim việc chân đoán, tiên lượng vã tư vấn di truyền nhờ ứng dụng cua sinh học phân tư Cùng nhờ đỏ mối liên quan đột bicn gen RB1 bệnh UNBVM dà dược phát UNBVM lả khối u nội lứiàn ảc tính, thuộc nhóm u nguyên bào thần kinh Bệnh dột biển gen RB1 gày chiếm đến 98°/o ?4 Gen nằm nhiễm sắc thê 13 gồm 27 exon 26 intron Gen RB1 cỏ dịch mà tạo thành protein RB protein ức chế khối u tham gia vảo chu trinh te bào.Các dột biến vị nghía, lệch khung dịch mà sai nghía đột biến vị trí cắt nối cỏ thê dần tới protein bị bất ho«ạt chức nàng 5S 5Í 4I 40 Trong vã 1/10 nghiên cứu nhãn không cõ 9/10 bệnh nhân Nghiên phát cứu trài dột 180 biển bệnh trẽn nhãn gen ỡđoản Bắc RB1 Mỳ UNBVM cua phát Kim E Nichols dược dột cho biến thầy, trài cõ 98/180 gen RB1 (chiêm 54.44%) Nghiên bệnh cứu nhản cùa chần Kwong Way Choy qua phát bệnh đột nhản biến UNBVM ơphát 16'42 khơng CO yếu nhân, tố gia dính 38% Trung Ty lệ Quốc cho cao kết Latha nhùng Parsam bệnh nhàn 49/71 Malaysia (66.2%) 10/19 bệnh (52.6%) nghiên cứu cua Vidya Sự khác cua kết qua phát đột biến cãc nghiên cứu cua nước lã cờ mảu thu thập khác vã sừ dụng phương pháp phái dột biến khác nhau, cần sir dụng phương pháp có độ nhạy cao đe có kết qua chinh xác 4.42 Sự pltàtt bố dột biển gen RB1 Gen RB1 gồm 27 exon promoter vã có khoang 85% dột biến gãy bệnh xãy vùng 23 Đà có 900 dột biến dược công bố cãc nhá nghiên cứu đà nhận thầy răng, khác với hầu hểt bệnh bất hoạt gen đột biến sai nghía thi dột biến gen RBỈ chu yếu dột biến vơ nghía đột biến lệch khung dịch mã Cùng với dó 16 diêm nóng đột biền dirợc cơng bố nhiều lan tịng hợp từ 68 bãi bão irong có 12 đột biền vơ nghi'a I đột biền sai nghía vã dột biền vị tri cat nối Cãc dột bicn lại nằm rai rãc cãc exon 9.10.14.17.18.20.23 23 N Box A Box Hình 4.1: 16 điếm nóng dột biển gen RB1' Trong nghiên cứu với dối tượng 10 bệnh nhân lầy mầu từ bệnh viện mat Trung Ương, xuất dột biến R445X R455X R467X R787X danh sách 16 "hot spot" Trong đó: • Đột biển R445X xãy bệnh nhân • Đột biến R455X xay ỡ bệnh nhản • Đột bicn R467X xáy ỡ bộnh nhản • Đột biến R787X xây bệnh nhản Đột biến sai nghía R661W cua bệnh nhân RB1 đột biến sai nghía 16 diêm nóng dột biển Như nghiên cữu 7/9 bệnh nhân phát dột biến mang dột biến thuốc 16 diêm nóng dược cơng bố Nghiên cúu phảt dột biền khác nẳm trẽn exon 14 15 17 20 23 Các exon đêu thuộc nhóm exon xây nhiều đột biến ưẽn gen RB1 Đột biến phát dược exon 15 R467X thuộc nhóm 16 diêm nóng Các cxon nằm vùng mà hóa axit amin cua mien túi AB vùng cỏ chức nâng tương tác với yếu tố chép E2F cô vai trô quan trụng chức ức che tâng trường tế bào cùa protein RB 42 4.5 Kết quã số nghiên cứu So sánh với so nghiên cứu nước cua Nguyền Ngọc Chung Nguyền Cõng Kiệt cộng (2018) vả Nguyền Hài Hà củng cộng (2019) cho thấy, dối tượng nghiên cứu bệnh nhi nho đa sổ trường hợp dược chân đoán trước nãm tuỏi Nghiên cứu cúa Nguyền Ngọc Chung, tuồi trung bỉnh chân đốn 13 tháng Nguyền Cơng Kiệt 24.6 tháng24 3-36 tháng với nghiên cứu cua Nguyền Hai Hà2 32 Các mầu mẫu thuthê cỏ thập thu khác thập nhảm dần xác tói định ti lộ phát dạng độthiện soma biến haykhác dạngnliau đột biếnKết Nam di truyền Trong nghiên cứu phát dột biếndột cùa bệnh nhân Việt , Ó qua phát đột biển ưẻn mầu mõ sinh thiết cua tác gia Nguyen Công Kiệt cho ti lệ đột biến lã 41/50 ( 82%) trẽn mầu màu ngoại vi cua Nguyền Hái Hã 25/34 ( 73,5%) mẫu máu ngoại vi cua Nguyền Ngọc Chung 24/43 (55,9%) Kết qua phát đột biến mẫu mò tươi với mầu 10 cua tòi pliát đột biến gen RB1 9/10 bệnh nhàn Trong độtmắc nghiên biến vơnghiên cứu nghía 2biến chúng đột biến tỏiđểu phát lệch 8công dịch dụng mã đột biến I ngàn dột khác biến sai gồm nghía liệu đột Tẩt biển cá cãc gen đột RBỈ LOVD3 Nghiên đàkhung cứu không bố phát háng đột biến dừ nhãn Kết UNBVM Việt cứu bô sung Nam dừ liệu cho data phô đột biến cua bệnh TM/ zfci V*: 4Ả 'V 52 KÉT LUẬN Càn vào kết qua phân lích đira kểt luận sau: Nghiên cứu "Phát đột biền ưèn sổ exon genbiến RB1 ởđiềm mân mò cùa bệnh gen RBJ nhân ờđã mầu usai nguyên mó cua bào bệnh võng nhản nguyên cho thầy bào tixlệ ông pliãt mục lã 9/10 đột Phát biền trài s I đọng đột biến dột biền nghía khác 7/10 5mạc" bệnh dột nhân biến mang vơ nghía, đột biền đột thuộc 16 lệch khung nóng đột biến cóng bổ TM/ V*: TÀI LIỆU THAM KHÁO Rao R Honavar SG Retinoblastoma Indian JPedicar 2017;84(12):937- 944 doi: 10.1007/sl 2098-017-2395-0 Nguyen Hai Ha, Nguyen Thí Thanh Hoa Vu NP et al Mutational screening of germline RBI gene in Vietnamese patients with retinoblastoma reveals three novel mutations AfoZ Vis 2018;24:231-238 Dimaras H, Corson TW Cobrinik D et al Retinoblastoma Nat Rex- Dis Primer 2015; 1:15021 doi: 10.1038/nrdp.2015.21 Fabian ID Reddy A Sagoo MS Classification and staging of retinoblastoma Com/nunHT Eye Health 2018;31(101): 11-13 Valverde JR .Alonso J Palacios I Pestafia Á RBI gene mutation up-date, a meta-analysis based on 932 reported mutations available in a searchable database BMC Genet 2005:6:53 doi: 10.1186/1471 -2156-6-53 Ortiz MV, Dunkel IJ Retinoblastoma J Child Neurol 2016;31(2):227- 236 doi: 10.1177/0883073815587943 Broaddus E Topham A Singh AD Survival with retinoblastoma in the USA: 1975-2004 Br J Ophthalmol 2009:93(1 ):24-27 doi:10.1136.bjo 2008.143842 Kivelă T The epidemiological challenge of the most frequent eye cancer: retinoblastoma, an issue of birth and death Bl- J Ophthalmol 2009:93(9): 1129-1131 doi: 10.113 6'bjo.2008.150292 Shields CL Shields JA Shall p Retinoblastoma in older children Ophthalmology 1991:98(3):395-399 doi: 10.1016's0161-6420(91)32283 -8 10 Kanukollu VM Tripathy K Leukocoria In: StatPearls StatPearls Publishing; 2020 Accessed December 2020 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK560794/ 11 5302pel.pdf Accessed December 12 2020 http-J/smj sma org.sg/5 302/5302pe pdf 12 Staging and Classifying Intraocular Retinoblastoma WE c Hope Published May 2014 Accessed December 13 2020 https:/Avechope.org/retinoblastoma/staging-and-classification-for- intraocularretinoblastoma/ 13 Carlson RH Retinoblastoma: New Classifications open Door to Cooperative Studies Oncol Times 2006;28(12):20-21 doi: 10.1097/01 COT 0000295101.07603.78 14 Lohmann DR Gallie BL Retinoblastoma In: Adam MP Ardinger HH Pagon RA et al., eds CfeneKevfeit's-g University of Washington Seattle; 1993 Accessed Mardi 29 2021 http://www.ncbi.nln1.nih.3DV/books/NBKl 52/ 15 Chaussade A Millot G Wells c et al Correlation between RB lgermline mutations and second primary malignancies in hereditaty retinoblastoma patients treated with external beam radiotherapy Eur J Med Genet 2019:62(3):217-223 doi: 10.1016/j.ejmg.2018.07.017 16 Retinoblastoma Stages Accessed December 16 2020 https:/Avww.cancer.org'cancer/retinoblastoma/detection-diagnosisstaging'staging.html 17 Razek AAKA Elkhamary s MRI of retinoblastoma Bi- J Radiol 2011;84(1005):775-784 doi:10.1259/bjr/32022497 IS Kitajima s Li F Takahashi c Tumor Milieu Controlled by RB Tumor Suppressor Int J.Mol Sci 2020:21(7) doi: 10.3390/ijms21072450 19 Yun J Li Y Xu C-T Pan B-R Epidemiology and Rbl gene of retinoblastoma Int J Ophthalmol 2011:4(1): 103-109 doi: 10.3980/j.issn.2222-3959.2011.01.24 20 Rubin SM Deciphering the Rb phosphorylation code Trends Biochem Sei 2013;38(l):1219 doi:10.1016/j.tibs.2012.l0.007 21 Dick FA Rubin SM Molecular mechanisms underlying RB protein function Nat Rex- Mol Cell Biol 2013;14(5):297-306 doi:10.1038/nrm3567 22 Goodrich DW The retinoblastoma tumor suppressor gene, the exception that proves the rule Oncogene 2006;25(38): 5233-5243 doi.10.1038/sj.onc.1209616 23 Berry JL Polski A Cavenee WK Dryja TP Murphree AL Gallic BL The RBI Story" Characterization and Cloning of the First Tumor Suppressor Gene Genes 2019;10(l 1) doi:10.3390/genesl0110879 24 Nguyen Cong Kiet Le Thai Khuong Do Minh Due et al Spectrum of mutations in the RBI gene in Vietnamese patients with retinoblastoma Mol Vis 2019;25:215-221 25 Rojanapom D Boontawon T Chareonsirisuthigul T et al Spectrum of germline RBI mutations and clinical manifestations in retinoblastoma patients from Thailand Mol Vis 2018;24:778-788 26 Knudson AG Mutation and Cancer: Statistical Study of Retinoblastoma Proc Natl Acad Sei USA 1971:68(4):820-823 27 Soliman SE Racher H Zhang c MacDonald H Gallie BL Genetics and Molecular Diagnostics in Retinoblastoma—An Update Asia-Pae J Ophthalmol Phila Pa 2017:6(2): 197-207 doi:l0.22608/APO.201711 28 Ewens KG Bhatt i TR Moran KA et al Phosphorylation of pRb: mechanism for RB pathway inactivation in MYCN-amplified retinoblastoma Cancer Med 2017;6(3):619-630 doi:10.1002/cam4.1010 29 Rushlow DE Mol BM Kennett JY et al Characterisation of retinoblastomas without RBI mutations: genomic, gene expression, and clinical studies Lancet Oncol 2013;14(4):327334 doi: 10.1016/S1470- 2045(13)70045-7 30 Zhu H Zhang H Xu Y Laẫẵáková s Korabcènã M, Ncuzil p PCR past, present and future Biotechniques doi:l0.2144/’btn-2020-0057 31 Vãn C: TT PCR vá Mọt So Kỳ Thuịỉt y Sính Học Phàn Tư: Sách Dào Tạo Sau Đại Học y Dược 122 tr.Ị 2010 Accessed April 2021 http://repository, vnu.edu vn/handle/VbIU_ 123/55638 32 NGUYENNGOCCHUNG-LAnhankhoa33.pdf Accessed December 2020 https://sdh.hmu.edu.vn/images/NGUYENNGOCCHUNG- LAnhankhoa33.pdf 33 He M An Y Gao Y Qian X Li G Qian J Screening of RBI gene mutations in Chinese patients with retinoblastoma and preliminary exploration of genotype phenotype correlations Mol Vis 2014;20:545-552 34 Abouzeid H Munier FL Thonnev F Schorderet DF Ten novel RBI gene mutations in patients with retinoblastoma Mol Vis 2007;13:1740-1745 35 Esteller M CpG island hypermethylation and tumor suppressor genes: a booming present, a brighter future Oncogene 2002;21(35): 542 7-5 440 doi: 10.1038/sj.onc.l 205600 36 Rizzolio F Lucchetti c Caligiuri I et al Retinoblastoma tumorsuppressor protein phosphorylation and inactivation depend on direct interaction with Pinl Cell Death Differ 2012;19(7): 1152-1161 doi: 10.1038/cdd.2011.202 37 Palazzi MA Yunes JA Cardinally IA et al Detection of oncogenic human papillomavirus in sporadic retinoblastoma Acta Ophthalmol Sc and 2003;81(4):396-398 doi:10.1034/j 1600-0420.2003.00112A Nichols KE Houseknecht MD Godmilow L etin al Sensitive multistep clinical retinoblastoma molecular detects screening 36 novel of mutations 180 unrelated the individuals RBI gene with Hwm Mutat 2005;25(6):566-574.doi:10.1002/humu.20184 38 Choy KW Pang CP, Yu CBO et al Loss of heterozygosity and mutations are the major mechanisms of RBI gene inactivation in Chinese with sporadic retinoblastoma Hum Mutca 2002;20(5):408 doi:10.1002/humu.9077 39 Mohd Klialid MKN Yakob Y, Md Yasin R et al spectrum of germ-line RBI gene mutations in Malaysian patients with retinoblastoma Mol Vis 2015;21:1185-1190 40 Parsam VL, Kannabiran c, Honavar s Vemuganti GK All MJ A comprehensive, sensitive and economical approach for die detection of mutations in the RBI gene in retinoblastoma J Genet 2009:88(4):517- 52 doi: 10.1007/s 12041 -009-0069-z Nội H ĐÈBÊNH TÀI LUẬN VAN Tllư THẠC TẠI sì: VIỆT SẢNG NAM LỌC ĐỘT BIẺN GEN RB1 THẺ DI TRUYỀN TRẺN CÁC NHẢN UNG Published online 2019:71 TM/ V*: 1.1.2 bào vòng mạc (ngiiôn: h ftps://wWWJUML org/healthy-eyes/eye-and-visioncon(litions/retinoblastoma?sso=v) Dịch tề học u nguyên bào vồng mạc lả dạng ung thư gập chiềm 3% khối u trê em Bệnh xay với tỷ lệ 1/15000-1/20000 trê sổng ’ Hang nãm sổ ca mẳc mởi tồn thề giới vào khống 8000 Trong sổ lượng ca ghi nhận hầng năm lại Viột Nam dao dộng khoáng 90-100 ca2 ... gen thực RBJ ? ?phát mầude mổtài cua "Phát bệnh nhân u đột nguyên biên ưên võng mật sổ mục" cua với mục nhản ti? ?u u18 nguyên bào vông dột biền mạc cụ trẽn the gen RB? ?bào exon m? ?u 9.10 mô 14.15 16... kểt nghiên c? ?u "Phát đột biển ưên TM/ V*: số e.xon cua gen RBJ m? ?u mò cua bệnh nhàn nguyên bào vồng mạc" kết qua nghiên c? ?u cua cá nhàn tòi Nghiên c? ?u tài trợ Trung tâm nghiên c? ?u Gen - Protein... lác Tri? ?u chúng gụp 20% bệnh nhãn u nguyên bào võng mạc I0 Tuy nhiên lác tri? ?u chững khơng điên hình vả gập nhi? ?u bệnh lý VC mát cá bâm sinh thứ phát Ngoái u nguyên bào vòng mạc xuất số bicu le