ĐỀ tài chiết xuất hạt nho để giảm vi rút trong thực phẩm trên sản phẩm

TRUỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ SÀI GỊN KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM MÔN : VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : Chiết xuất hạt nho để giảm vi rút thực phẩm sản phẩm GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN: GV.THS Nguyễn Minh Hải NHÓM SINH VIÊN THỰC HIỆN: Nguyễn Lê Tú Trinh DH61805861 D18 - TP03 Phạm Thị Lan Anh DH61801027 D18 - TP04 Lê Thị Cẩm Tú DH61805931 D18 - TP03 Dương Thị Mai Phương DH61804193 D18 - TP03 NỘI DUNG : Tóm tắt Giới thiệu Phương pháp Kết thảo luận Tóm tắt • Chiết xuất hạt nho (GSE) báo cáo có đặc tính kháng khuẩn với số nghiên cứu hoạt động kháng vi rút • Gần đây, báo cáo tác dụng GSE chống lại đại diện vi rút thực phẩm ống nghiệm Hình 1: Virus viêm gan A (HAV) Hình 3: Feline Calicivirus (FCV-F9) Hình 2: Norovirus người Hình 4: Murine Norovirus (MNV-1)     log10 PFU/ml Cấy log10 PFU/ml Xử lý GSE • Ở hiệu giá cao, FCV-F9 giảm 2.33, 2.58 2.71 log10 PFU rau diếp; 2.20, 2.74 3.05 log10 PFU ớt sau phút sử dụng 0.25, 0.50 mg/ml GSE • Khơng thể phát hiệu giá FCV-F9 thấp sau phút ba nồng độ GSE • MNV-1 hiệu giá thấp giảm 0.2 - 0.3 log10 PFU rau diếp 0.8 log10 PFU ớt mà không giảm hiệu giá cao • GSE 0.25 - mg/ml sau phút gây giảm PFU 0.7 – 1.1 – 1.3 log10 hiệu giá HAV cao thấp hai mặt hàng 2 Giới thiệu • Virus viêm gan A (HAV) norovirus người (NoV) hai loại virus đường ruột người có liên quan mặt dịch tễ học gây bệnh virus qua đường thực phẩm • Các đợt bùng phát virus từ thực phẩm thường bắt nguồn từ việc tiêu thụ trái rau sống bị nhiễm • Chiết xuất hạt nho (GSE) chứng minh có hoạt tính kháng khuẩn chống lại mầm bệnh vi khuẩn thực phẩm gram dương gram âm • Nghiên cứu trước cho thấy GSE có tác dụng kháng vi-rút chống lại đại diện vi-rút thực phẩm (FCV-F9; MNV-1; xạ khuẩn MS2) HAV • Mục tiêu nghiên cứu xác định việc áp dụng GSE để giảm norovirus thực phẩm (sử dụng chất thay thế) vi rút viêm gan A sản phẩm nông sản kiểu mẫu (xà lách búp ớt jalapeno) • Mục tiêu chung xác định tiềm sử dụng GSE chất tẩy rửa thay sản phẩm phân tích cơng cụ để xác định thay đổi màu sắc sản phẩm xử lý chưa xử lý sau bảo quản thực 3 Phương pháp 3.1 Virus dòng tế bào   Các dòng tế bào để truyền virus bao gồm tế bào Crandell Reese Feline Kidney (CRFK), tế bào RAW 264.7 tế bào thận khỉ rhesus bào thai (FRhK4) Các tế bào trì F-12 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Ham’s F-12 bổ sung 10% huyết thai bị (FBS) kích hoạt Anti-Anti (Kháng sinhAntimycotic) 37oC khí chứa 5% CO2 3.2 Tác dụng kháng vi rút GSE • Các dung dịch GSE nồng độ từ 0.25 đến mg/ml nước muối đệm phosphat (pH 7.4) khử trùng lọc trước sử dụng để xử lý virus • Xà lách búp ớt jalapeno mua từ cửa hàng tạp hóa địa phương Trước cấy vi rút: Rau diếp ớt rửa nước khử ion Xử lý 70% ethanol phút Rửa lại nước khử ion vô trùng làm khơ khơng khí BSL-2 FCV-F9, MNV1, HAV (0.15 ml)   Rau diếp (khoảng 3 cm2) ớt (25 30 g trái ớt) Rửa cách rửa / dùng pipet với 0.85 ml DMEM chứa 10% (FBS) hai lần Phủ lên bề mặt để khơ khơng khí nhiệt độ phịng 5’ 0.15 ml 0.25, 0.5 mg/ml GSE, nước thêm 30s đến 5’ • Sự phục hồi virus tính cách nhân số lượng mảng bám với yếu tố pha loãng tương ứng • Giảm tiêu chuẩn tính cách trừ hiệu giá virus sản phẩm xử lý GSE từ sản phẩm xử lý nước Mỗi lần xử lý lặp lại ba lần 3.3 Xét nghiệm mảng bám nhiễm trùng • Các tế bào CRFK, RAW 264.7 FRhK4 hợp lưu bị nhiễm 0.5 ml FCV-F9, MNV-1 HAV tương ứng • Vi rút hút tế bào phủ ml DMEM hoàn chỉnh chứa 0.75% agarose ủ 37oC điều kiện CO2 • Sau ủ hai (đối với FCV-F9), ba (đối với MNV-1) tám ngày (đối với HAV), đơn lớp tế bào nhuộm màu đỏ trung tính ủ 37oC nhìn thấy mảng 3.4 Đo màu rau diếp ớt jalapeno trước sau xử lý  • Sáu rau diếp sáu ớt jalapeno xử lý với GSE mg/ml phút, mô tả trên, sau rửa nước • Sản phẩm (sáu sản phẩm) ngâm nước khử ion phút sử dụng làm đối chứng chưa qua xử lý • Thay đổi màu sắc E tính theo bậc hai ((L1* L2*)^ + (a1* a2*) ^ + (b1* b2*) ^ 2), +L = Light; L = black; +b = yellow; b = blue; +a = red; a = green 3.5 Phân tích thống kê Kết từ ba phương pháp xử lý đối chứng lặp lại phân tích thống kê ANOVA với phần mềm SAS thử nghiệm Tukey’s thiết kế hoàn toàn ngẫu nhiên 4 Kết thảo luận • Mức giảm hiệu giá thu ba loại vi rút thử nghiệm sau xử lý GSE cho sản phẩm 30 giây đến phút tóm tắt Bảng • Hiệu GSE vi rút thử nghiệm chứng minh tuân theo thứ tự FCV-F9 > HAV > MNV-1 sau phút tiếp xúc Bảng Giảm calicivirus mèo (FCV-F9), norovirus chuột (MNV-1) virus viêm gan A (HAV) sản phẩm rau diếp ớt Sự khảo sát FCV-F9 Chuẩn độ cao (log10 PFU/ml) Rau diếp MNV-1 Chuẩn độ thấp (log10 PFU/ml) Chuẩn độ cao (log10 PFU/ml) HAV Chuẩn độ thấp (log10 PFU/ml) Chuẩn độ cao (log10 PFU/ml) Chuẩn độ thấp (log10 PFU/ml) 30’ 1’ 30 1’ 1’ 5’ 1’ 5’ 30’ 1’ 30’ 1’ Nước 0.00 ± 0.00 D 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 A 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 A 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.25 mg/ml 1.95 ± 0.16 C 2.33 ± 0.42 A 4.93 ±0.00 A 4.95 ± 0.00 A 0.04 ± 0.03 A 0.05 ± 0.06 AB 0.29 ± 0.10 A 1.06 ± 0.04 A 0.84 ± 0.22 A 0.97 ± 0.10 A 0.98 ± 0.06 A 1.14 ± 0.10 A 0.5 mg/ml 2.400.21 B 2.58 ± 0.11 A 4.93 ± 0.00 A 4.95 ± 0.00 A 0.07 ± 0.06 A 0.09 ± 0.08 AB 0.27 ± 0.19 A 1.07± 0.08 A 0.86 ± 0.17 A 1.02 ± 0.16 A 1.17 ± 0.10 A 1.19 ±0.13 A mg/ml 3.02 ± 0.18 A 2.71 ± 0.15 A 4.93 ± 0.00 A 4.95 ± 0.00 A 0.08 ± 0.05 A 0.15 ± 0.06 A 0.16± 0.04 A 1.09 ± 0.10 A 1.06 ± 0.24 A 1.12 ±0.09 A 1.20 ± 0.12 A 1.23 ± 0.11 A Ớt Nước 0.00± 0.00 B 0.00± 0.00 D 0.00 ±0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 A 0.00 ± 0.00 A 0.00 ± 0.00 B 0.00 ± 0.00 B 0.00 ±0.00 B 0.00± 0.00 C 0.00± 0.00 B 0.00± 0.00 B 0.25 mg/ml 2.06± 0.11 A 2.20± 0.05 C 5.00± 0.00 A 5.02 ± 0.00 A 0.00± 0.00 A 0.02± 0.06 A 0.82 ± 0.05 A 1.22 ±0.04 A 0.74 ± 0.28 A 0.66 ± 0.12 B 1.01± 0.20 A 1.07± 0.13 A 0.5 mg/ml 2.16± 0.16 A 2.74± 0.07 B 5.00± 0.00 A 5.02± 0.00 A 0.00± 0.00 A 0.01± 0.06 A 0.76 ± 0.06 A 1.17 ± 0.06 A 0.80 ± 0.17 A 0.93± 0.15 AB 1.11± 0.12 A 1.15± 0.07 A mg/ml 2.43± 0.28 A 3.05 ± 0.15 A 5.00 ± 0.00 A 5.02 ±0.00 A 0.00± 0.00 A 0.07 ± 0.05 A 0.81 ± 0.04 A 1.17 ± 0.06 A 1.03 ± 0.23 A 1.13 ±0.18 A 1.21± 0.21 A 1.29± 0.19 A Sự gia tăng thời gian tiếp xúc có lẽ nồng độ GSE dẫn đến việc giảm hiệu giá virus cao hơn, đặc biệt MNV-1 sau phút tiếp xúc GSE mức mg/ml chứng minh làm giảm hiệu giá FCV-F9, MNV-1, HAV MS2 5.0, 1.7, 2.9 1.2 log10 PFU/ml so với hiệu giá ban đầu log10 PFU/ml sau h ủ nhiệt độ phòng   Giá trị E trung bình mơ tả Bảng cho rau diếp ớt sau bảo quản 0-5 ngày xử lý sau làm lạnh với nước mg/ml GSE Kết luận, GSE nồng độ từ 0.25 mg/ml đến mg/ml tìm thấy để giảm mức độ ô nhiễm vi rút thực phẩm sản phẩm mà không gây thay đổi đáng kể màu sắc rau diếp ớt   Bảng Cơng cụ phân tích màu rau diếp ớt jalapeno sau - ngày sau xử lý với (a) nước (b) mg/ml chiết xuất hạt nho (GSE) phút (a) Những ngày sau xử Rau diếp lý nước   Ớt jalapeno   L* a* b* E L* a* b* E 83.60 1.30 A 7.80 1.20 A 27.80 3.90A 0.00 0.00 25.90 4.10 A 9.40 1.10 A 16.20 3.00 A 0.00 0.00 83.60 1.30 A 7.20 1.60 A 27.60 4.30 A 4.00 2.00 27.90 3.50 A 9.00 1.40 A 15.60 3.70 A 5.20 1.50 83.60 1.60 A 6.90 1.20 A 28.40 4.20 A 4.40 1.00 25.50 3.20 A 8.90 0.80 A 15.40 2.20 A 3.30 1.80 82.60 1.60 A 6.90 1.10 A 28.10 3.90 A 4.10 1.20 24.70 2.20 A 8.90 1.00 A 15.20 2.90 A 4.00 1.00 (b) Những ngày sau xử lý GSE Rau diếp Ớt jalapeno   L* a* b* E L* a* b* E 85.50 2.00 A 6.50 0.90 A 23.90 2.90 A 0.00 0.00 27.20 2.60 A 8.80 0.90 A 14.70 1.90 A 0.00 0.00 85.50 1.70 A 5.80 0.60 A 24.30 2.50 A 2.40 1.90 29.10 2.30 A 8.80 0.90 A 13.20 1.50 A 3.10 2.10 84.80 1.80 A 5.10 0.60 A 25.10 2.10 A 2.90 1.60 28.30 2.00 A 8.10 0.60 A 14.20 0.60 A 2.10 1.40 83.80 1.80 A 5.00 0.40 A 27.20 1.90 A 4.40 1.70 28.20 2.10 A 7.90 0.80 A 13.20 1.80 A 2.70 2.10 ... kháng vi- rút chống lại đại diện vi- rút thực phẩm (FCV-F9; MNV-1; xạ khuẩn MS2) HAV • Mục tiêu nghiên cứu xác định vi? ??c áp dụng GSE để giảm norovirus thực phẩm (sử dụng chất thay thế) vi rút vi? ?m... • Chiết xuất hạt nho (GSE) báo cáo có đặc tính kháng khuẩn với số nghiên cứu hoạt động kháng vi rút • Gần đây, báo cáo tác dụng GSE chống lại đại diện vi rút thực phẩm ống nghiệm Hình 1: Virus... thiệu • Virus vi? ?m gan A (HAV) norovirus người (NoV) hai loại virus đường ruột người có liên quan mặt dịch tễ học gây bệnh virus qua đường thực phẩm • Các đợt bùng phát virus từ thực phẩm thường