NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) VÀ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ELICITOR LÊN SỰ TÍCH LŨY SAPONIN LUẬN ÁN TIẾN SĨ
Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 187 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Cấu trúc
LỜI CAM ĐOAN
LỜI CẢM ƠN
MỤC LỤC
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
DANH MỤC BẢNG
DANH MỤC HÌNH ẢNH, BIỂU ĐỒ
ĐẶT VẤN ĐỀ
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1. GIỚI THIỆU VỀ SÂM NGỌC LINH
1.1. Nguồn gốc và lịch sử phát triển
1.2. Đặc điểm hình thái và sinh trưởng
1.3. Đặc điểm phân bố
1.4. Đặc điểm đa dạng di truyền
1.5. Tác dụng dược lý
2. SƠ LƯỢC VỀ CÁC HỢP CHẤT SAPONIN
2.1. Cấu trúc của các saponin có trong sâm Ngọc Linh
2.2. Các tính chất hóa lý của các saponin trong sâm Ngọc Linh
2.3. Vai trò của saponin trong cây
2.4. Con đường tổng hợp các triterpene saponin
3. NUÔI CẤY IN VITRO SINH KHỐI RỄ BẤT ĐỊNH VÀ RỄ THỨ CẤP
3.1. Khái niệm về rễ bất định
3.2. Khái niệm về rễ thứ cấp
3.3. Một số yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy rễ thứ cấp và rễ bất định
3.3.1. Loại mẫu cấy
3.3.2. Vị trí phát sinh
3.3.3. Vai trò điều hòa của auxin
3.3.4. Tương tác giữa auxin và cytokinin
3.3.5. Nhiệt độ
3.3.6. Ánh sáng
3.3.7. Giá thể nuôi cấy
3.3.8. Các hệ thống nuôi cấy
3.4. Một số nghiên cứu nuôi cấy thu nhận sinh khối rễ các loài sâm
3.4.1. Một số nghiên cứu trên thế giới
3.4.2. Một số nghiên cứu trong nước về rễ bất định sâm Ngọc Linh
4. ELICITOR VÀ SỰ KÍCH KHÁNG TRONG NUÔI CẤY IN VITRO
4.1. Khái niệm
4.2. Phân loại
4.3. Cơ chế tác động của các elicitor
1.1. Cách xử lý và tác động của elicitor
4.4.1. Nồng độ elicitor
4.4.2. Thời gian tiếp xúc với elicitor
4.4.3. Thời kỳ nuôi cấy
4.4.4. Thành phần dinh dưỡng
1.2. Một số elicitor phổ biến trong nuôi cấy nhân sâm
4.5.1. Chitosan
4.5.2. Dịch chiết nấm men
4.5.3. Elicitor có nguồn gốc từ chất điều hòa sinh trưởng thực vật
1.3. Ứng dụng elicitor trong nuôi các loài nhân sâm in vitro
CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
1. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
1.1. Nguồn mẫu
1.2. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất
1.3. Địa điểm và thời gian thực hiện luận án
2. PHƯƠNG PHÁP BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM
2.1. Tối ưu cách chọn mẫu và môi trường nuôi cấy rễ thứ cấp từ nuôi cấy rễ bất định sâm Ngọc Linh in vitro
2.1.1. Khảo sát ảnh hưởng của cách cắt mẫu rễ bất định lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.1.2. Khảo sát ảnh hưởng của auxin lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.1.3. Khảo sát ảnh hưởng của việc kết hợp giữa auxin và cytokinin lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ rễ bất định in vitro
2.1.4. Khảo sát ảnh hưởng của môi trường khoáng lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.1.5. Khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ NH4+/NO3- trong môi trường MS lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ rễ bất định in vitro
2.1.6. Khảo sát ảnh hưởng của các loại đường carbohydrate lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.1.7. Khảo sát ảnh hưởng của giá thể nuôi cấy lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.2. Tối ưu điều kiện nuôi cấy rễ bất định sâm Ngọc Linh để tăng cường sự hình thành rễ thứ cấp và tích lũy saponin trong nuôi cấy in vitro
2.2.1. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.2.2. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.2.3. Khảo sát ảnh hưởng của pH lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.2.4. Khảo sát ảnh hưởng của giai đoạn nuôi cấy tối và sáng lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.2.5. Khảo sát ảnh hưởng của thể tích nuôi cấy lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.2.6. Khảo sát ảnh hưởng của hệ thống nuôi cấy lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.3. Tối ưu khả năng tích lũy saponin của rễ thứ cấp hình thành từ rễ bất định sâm Ngọc Linh nhờ tác động của các elicitor
2.3.1. Khảo sát ảnh hưởng của chitosan lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.3.2. Khảo sát ảnh hưởng của dịch chiết nấm men lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.3.3. Khảo sát ảnh hưởng của abscisic acid lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.3.4. Khảo sát ảnh hưởng của salicylic acid lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.3.5. Khảo sát ảnh hưởng của jasmonic acid lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.3.6. Khảo sát ảnh hưởng kết hợp của elicitor ngoại sinh và elicitor nội sinh lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro
2.3.7. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian xử lý elicitor lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.4. Phương pháp xác định chỉ số tăng trưởng, tỷ lệ chất khô, tỷ lệ hình thành và tăng sinh của mẫu cấy
2.5. Môi trường nuôi cấy
2.6. Điều kiện nuôi cấy
3. PHƯƠNG PHÁP SINH HÓA ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG SAPONIN
3.1. Phương pháp định tính bằng sắc ký lớp mỏng
3.2. Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao
3.3. Phương pháp xác định năng suất tổng hợp saponin
4. PHƯƠNG PHÁP QUAN SÁT TẾ BÀO HỌC
5. PHƯƠNG PHÁP THỐNG KÊ VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
1. TỐI ƯU NUÔI CẤY RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH TỪ NHỮNG MẪU RỄ BẤT ĐỊNH IN VITRO
1.1. Tối ưu cách chọn mẫu và môi trường nuôi cấy rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh
1.1.1. Ảnh hưởng của cách cắt mẫu rễ bất định lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.1.2. Ảnh hưởng của auxin lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.1.3. Ảnh hưởng của việc kết hợp auxin với cytokinin lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.1.4. Ảnh hưởng của môi trường khoáng lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.1.5. Ảnh hưởng của tỷ lệ NH4+/NO3- trong môi trường MS lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.1.6. Ảnh hưởng các loại đường carbohydrate lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.1.7. Ảnh hưởng của giá thể nuôi cấy lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.2. Tối ưu điều kiện nuôi cấy rễ thứ cấp từ rễ bất định sâm Ngọc Linh in vitro
1.2.1. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.2.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.2.3. Ảnh hưởng của pH môi trường lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.2.4. Ảnh hưởng của giai đoạn nuôi cấy tối và sáng lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.2.5. Ảnh hưởng của thể tích môi trường nuôi cấy lên sự tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
1.2.6. Ảnh hưởng của hệ thống nuôi cấy lên sự hình thành và tăng trưởng của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2. TĂNG CƯỜNG TÍCH LŨY SAPONIN CỦA RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH NUÔI CẤY TỪ RỄ BẤT ĐỊNH IN VITRO
2.1. Ảnh hưởng của một số điều kiện nuôi cấy lên sự tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro
2.1.1. Ảnh hưởng của các giai đoạn nuôi cấy lên sự tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất đinh in vitro
2.1.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ lên sự tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.1.3. Ảnh hưởng của pH lên sự tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.1.4. Ảnh hưởng của hệ thống nuôi cấy lên sự tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2. Ảnh hưởng của một số elicitor lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.1. Ảnh hưởng của chitosan lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.2. Ảnh hưởng của dịch chiết nấm men lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.3. Ảnh hưởng của abscisic acid lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.4. Ảnh hưởng của salicylic acid lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.5. Ảnh hưởng của jasmonic acid lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.6. So sánh tác động của các elicitor đơn lẻ lên sư tổng hợp saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro
2.2.7. Ảnh hưởng của việc kết hợp đồng thời salicylic acid và dịch chiết nấm men lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro
2.2.8. Ảnh hưởng của thời gian bổ sung dịch chiết nấm men lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro
CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN
1. TỐI ƯU HÓA NUÔI CẤY TẠO RỄ THỨ CẤP TỪ RỄ BẤT ĐỊNH IN VITRO SÂM NGỌC LINH
1.1. Ảnh hưởng của cách chọn mẫu rễ bất định in vitro để tạo rễ thứ cấp
1.2. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy
1.3. Ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng thực vật
1.4. Ảnh hưởng của môi trường khoáng
1.5. Ảnh hưởng của việc thay đổi tỷ lệ NH4+/NO3- trong môi trường MS
1.6. Ảnh hưởng của ánh sáng
1.7. Ảnh hưởng của nhiệt độ
1.8. Ảnh hưởng của pH
1.9. Ảnh hưởng của giá thể nuôi cấy
1.10. Ảnh hưởng của loại đường carbohydrate
1.11. Ảnh hưởng của thể tích môi trường nuôi cấy
1.12. Ảnh hưởng của hệ thống nuôi cấy
2. ẢNH HƯỞNG CỦA ELICITOR LÊN KHẢ NĂNG TÍCH LŨY SAPONIN TRONG NUÔI CẤY TẠO RỄ THỨ CẤP IN VITRO
2.1. Ảnh hưởng riêng lẻ của các elicitor lên khả năng tích lũy saponin trong nuôi cấy tạo rễ thứ cấp in vitro
2.1.1. Ảnh hưởng của chitosan
2.1.2. Ảnh hưởng của dịch chiết nấm men
2.1.3. Ảnh hưởng của abscisic acid
2.1.4. Ảnh hưởng của salicylic acid
2.1.5. Ảnh hưởng của jasmonic acid
2.2. Ảnh hưởng kết hợp giữa các elicitor
2.3. Ảnh hưởng của thời gian bổ sung dịch chiết nấm men lên sự tăng sinh và tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro
2.4. So sánh hiệu quả tác động của các elicitor lên năng suất tích lũy saponin của rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro
KẾT LUẬN
KIẾN NGHỊ
DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC LIÊN QUAN ĐÃ CÔNG BỐ