Luận văn thạc sĩ nghiên cứu tác động của vitamin c lên sự tăng trưởng, chu kỳ tế bào và apoptosis của tế bào ung thư dạ dày​

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC –––––––––––––––––––– ĐINH THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA VITAMIN C LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG, CHU KỲ TẾ BÀO VÀ APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC –––––––––––––––––––– ĐINH THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA VITAMIN C LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG, CHU KỲ TẾ BÀO VÀ APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Trương Phúc Hưng LỜI CẢM ƠN LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực đề tài luận văn khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên, em nhận THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực đề tài luận văn khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên, em nhận giúp đỡ nhiệt tình Thầy, Cơ giáo, anh chị kỹ thuật viên cán khoa trường Đầu tiên, em xin trân trọng cảm ơn TS Trương Phúc Hưng hướng dẫn em hoàn thành luận văn Để có kết học tập ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy giáo - TS Nguyễn Phú Hùng – Trưởng khoa Công nghệ sinh học, Thầy dành thời gian để hướng dẫn, bảo em trình thực luận văn Xin trân trọng cảm ơn ThS Ngô Thu Hà giúp đỡ em nghiên cứu thực nghiệm phịng Thí nghiệm Khoa Xin chân thành cảm ơn thầy cô phận Sau đại học Nhà trường tạo điều kiện thuận lợi trình em học tập trường Em xin cảm ơn Ban lãnh đạo quý đồng nghiệp khoa Cận lâm sàng – Trung tâm Y tế huyện Đầm Hà, tới người thân gia đình người bạn ln gắn bó với em, nguồn động lực cho em tiếp tục phấn đấu học tập, mong nhận đóng góp q báu thầy giáo, nhà khoa học bạn bè đồng nghiệp Thái Nguyên, ngày 22 tháng 11 năm 2019 Học viên Đinh Thị Hiền Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CAM ĐOAN Mọi kết thu luận văn không chỉnh sửa, chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tất số liệu luận văn chưa cơng bố cơng trình khác Nếu có điều sai trái tơi xin hồn toàn chịu trách nhiệm Thái Nguyên, ngày 22 tháng 11 năm 2019 Người viết cam đoan Đinh Thị Hiền Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT 5-hmC : 5- hydroxymethycytosine AA : Axit Ascoricic CA : Carbohydrate antigen CEA : Carcinoembryonic antigen DHA : Dehydroascorbic acid GLUT : Vận chuyển hexose GSH : Glutathione H pylori : Helicobacter pylori MNNG :N -methyl- N '-nitro- N –nitrosoguanidine NADPH : Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate NOC : Hợp chất N-nitroso gây ung thư RBC : Số lượng hồng cầu máu ROS : Loại oxy phản ứng SVCT : Vận chuyển natri – vitamin C UTBM : Ung thư biểu mô UTDD : Ung thư dày CSC : Tế bào gốc ung thư Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .iii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu 1.1 Dịch tễ học ung thư dày 1.1.1 Tình hình ung thư dày giới nước 1.1.2 Yếu tố nguy bệnh lý nguyên nhân phát sinh ung thư dày 1.1.3 Phân loại học ung thư dày 1.2 Vitamin C 10 1.2.1 Cấu trúc vitamin C 10 1.2.2 Hấp thu chuyển hóa vitamin C đường ruột 11 1.2.3 Chức sinh lý vitamin C thể 13 1.2.4 Vitamin C điều trị ung thư 14 1.2.5 Các nghiên cứu vai trò vitamin C ung thư dày 16 1.3 Chu kỳ tế bào 18 1.3.1 Khái niệm chu kỳ tế bào 18 1.3.2 Các giai đoạn chu kỳ tế bào 18 1.3.3 Vai trị chu kỳ tế bào việc hình thành khối u 21 1.4 Apoptosis 22 1.4.1 Khái niệm apoptosis 22 1.4.2 Vai trò apoptosis ung thư 23 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHÊN CỨU .25 2.1 Vật liệu nghiên cứu 25 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn v 2.2 Địa điểm thời gian 28 2.3 Phương pháp nghiên cứu .28 2.3.1 Nuôi cấy tế bào ung thư 2D xử lý với Vitamin C 28 2.3.3 Phân tích chu kỳ tế bào apoptosis Flow cytometry 30 2.3.4 Phân tích khả di cư tế bào 30 2.3.5 Nuôi cấy tumorsphere 30 2.3.6 Phương pháp xử lí số liệu 31 3.1 Tác động vitamin C lên tăng sinh tế bào 32 3.2 Tác động vitamin C lên kiểu hình tế bào 34 3.3 Ảnh hưởng vitamin C lên chu kỳ tế bào 35 3.4 Ảnh hưởng vitamin C lên apoptosis tế bào 36 3.5 Ảnh hưởng vitamin C lên di trú tế bào 38 3.6 Ảnh hưởng vitamin C lên hình thành tumorsphere tế bào 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Bảng phân loại dạng Ung thư biểu mô Bảng 1.2 Đặc điểm ung thư tế bào biểu mô dày giai đoạn khác 10 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 38 với nhạy cảm khối u nói chung với hy vọng chiến lược điều trị theo sau Phản ứng chống ung thư không đồng bao gồm loại tế bào chết tế bào khác nhau, tùy thuộc vào mức độ tổn thương tế bào DNA phát sinh tế bào ung thư Là chiến lược điều trị mới, loại tế bào chết thay khai thác để kiểm soát tiêu diệt tế bào ung thư Phản ứng chống ung thư không đồng bao gồm loại tế bào chết tế bào khác nhau, tùy thuộc vào mức độ tổn thương tế bào DNA phát sinh tế bào ung thư, loại tế bào chết thay khai thác để kiểm soát tiêu diệt tế bào ung thư [48] Trong nghiên cứu này, nhận thấy ảnh hưởng vitamin C lên apopotosis không đáng kể, gây chết tế bào nồng độ xử lý cao theo chế lão hóa stress tế bào cần có nghiên cứu để lãm rõ 3.5 Ảnh hưởng vitamin C lên di trú tế bào Để đánh giá ảnh hưởng vitamin C lên di trú tế bào, tiến hành xử lí tế bào MKN45 nồng độ 0,5- 2mM, so với đối chứng tế bào trước xử lý Kết thể hình 3.5 Kết thử nghiệm cho thấy, mẫu tế bào xử lý với vitamin C nồng độ 0,5 – 1mM, mức độ di trú tế bào vào vùng phân cách khơng có khác biệt lớn Hay nói cách khác, tốc độ tăng trưởng xâm lập tế bào bị xử lý không xử lý khơng có nhiều thay đổi Tuy nhiên, tăng nồng độ lên 2mM, tế bào xâm lấn vào tế it rõ rệt so với đối chứng tế bào trước xử lý Điều có nghĩa rằng, nồng độ cao hơn, vitamin làm giảm khả tăng sinh di trú tế bào Như nghiên cứu trình bày mục 3.1 3.2 cho thấy vitamin C ức chế tăng sinh tế bào thông qua việc làm dừng chu kỳ phân chia tế bào pha G0/G1 Sự dừng chu kỳ tế bào G0/G1 nhiều nghiên cứu cho có liên quan tới trạng thái lõa hóa biệt hóa tế bào Những tế Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 39 bào thường khả phân chia giảm khả di trú (di chuyển vị trí) Đối với ung thư dày, di trú xâm lấn tế bào ung thư trình thiết yếu di ung thư Các tế bào xâm nhập vào mô xung quanh bước quan trọng Theo nghiên cứu Yin cộng sự di cư xâm lấn tế bào ung thư dày cách điều chỉnh q trình chuyển dịch biểu mơ – trung mô (EMT) Trong nghiên cứu này, tác giả nuôi cấy Các dòng tế bào GC người MGC803, HGC27, SGC7901 MNK45 môi trường DMEM (Gibco; Thermo Fisher Khoa học, Inc.), bổ sung 10% huyết bào thai (FBS; Gibco; Thermo Fisher Khoa học, Inc.), trì mức 37 C mơi trường 5% CO2 Sau đó, tế bào xâm lấn bề mặt màng nhuộm Hoechst 33 342 đếm kính hiển vi Kết rằngtrong GC, CircRNA_0023642 thúc đẩy di cư xâm lấn tế bào ung thư dày cách điều chỉnh EMT [68] Trong nghiên cứu gần đây, phân tích RT -PCR Western blot, nghiên cứu tìm thấy hsa_circ_101882 làm giảm biểu gen đánh dấu trung mô bao gồm vimentin, Snail N-cadherin mRNA mức protein tế bào GC, biểu mô E -cadherin tăng mRNA mức protein Như hsa_circ_101882 tăng cường kích hoạt đường dẫn tín hiệu EMT ung thư dày Theo nghiên cứu Zhicheng Yao cộng gen ZKSCAN1 RNA tuần hoàn liên quan ( tuần hoàn ZKSCAN1 ) ức chế phát triển, di chuyển xâm lấn tế bào ung thư tế bào gan thơng qua đường truyền tín hiệu khác nhau, phân tích nhóm 102 bệnh nhân thấy biểu ZKSCAN1 mRNA CircZKSCAN1 thấp đáng kể ( P