Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn salmonela gây bệnh trên vịt nuôi tại huyện hoài nhơn, tỉnh bình định

i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực với hướng dẫn giáo viên hướng dẫn TS Trần Quang Vui Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn hồn tồn trung thực, xác chưa dùng để bảo vệ học vị Tôi cam đoan rằng, giúp đỡ để thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thừa Thiên Huế, tháng năm 2016 Tác giả luận văn Hồ Văn Lợi ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp, cố gắng thân, nhận quan tâm giúp đỡ gia đình, thầy giáo, bạn bè đồng nghiệp Trước hết xin chân thành cảm ơn quý thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi - Thú y, phòng Đào tạo sau Đại học, trường Đại học Nông Lâm Huế giảng dạy, truyền đạt kiến thức cho suốt thời gian học tập trường Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo hướng dẫn: TS Trần Quang Vui tận tình giúp đỡ, nhiệt tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy giáo TS Nguyễn Xn Hịa - Trưởng mơn Vi trùng - Truyền nhiễm, phịng Thí nghiệm Vi trùng – Truyền nhiễm, Khoa Chăn nuôi - Thú y, trường Đại học Nông Lâm Huế nhiệt tình giúp đỡ, cung cấp thơng tin, tài liệu liên quan giúp xử lý mẫu, xử lý số liệu phịng Thí nghiệm để tơi hồn thành số liệu nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến lãnh đạo Chi cục Chăn ni Thú y Bình Định tạo điều kiện thời gian công việc để học tập suốt 02 năm qua Tôi xin gửi lời cảm ơn đến lãnh đạo cán nhân viên Trạm Chăn ni Thú y huyện Hồi Nhơn, tồn thể cán mạng lưới Thú y sở 17 xã, thị trấn huyện Hoài Nhơn tạo điều kiện công việc điều tra, lấy mẫu, thu thập số liệu thời gian thực đề tài Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè chia sẻ, động viên suốt thời gian 02 năm học tập Mặc dù có cố gắng, song với kiến thức lực nhiều hạn chế, nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Tôi mong nhận bảo quý thầy ý kiến đóng góp bạn bè để luận văn tơi hồn thiện Một lần xin chân thành cảm ơn! Thừa Thiên Huế, tháng năm 2016 Học viên Hồ Văn Lợi iii TĨM TẮT Vịt lồi thuỷ cầm có tính thích nghi cao với điều kiện sinh thái, thích hợp cho việc chăn thả nơi có nguồn nước để tìm kiếm thuỷ động vật thóc lúa rơi vãi sau thu hoạch Định hướng phát triển chăn nuôi thủy cầm theo hướng trang trại, cơng nghiệp chăn ni chăn thả có kiểm sốt Những năm gần đây, chăn nuôi vịt phát triển mạnh, nhiên điều kiện ni vịt cần có nước môi trường thuận lợi cho việc phát triển nhiều loại bệnh truyền nhiễm vi khuẩn gây ra, Salmonella có vai trị quan trọng dịch tể, cản trở lớn việc phát triển chăn nuôi vịt Đề tài “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Salmonella gây bệnh vịt nuôi huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định” Mục tiêu chung đề tài khảo sát tình hình bệnh Salmonella gây vịt, xác định số đặc điểm sinh học vi khuẩn Salmonella phân lập từ vịt nghi mắc bệnh Salmonella, đánh giá mức độ mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn làm sở cho việc xây dựng phác đồ điều trị hiệu vịt ni địa bàn huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định Đề tài nghiên cứu triển khai điều tra phịng vấn 198 hộ chăn ni vịt địa bàn xã, chia thành vùng theo dõi, vùng ven sơng có xã Hồi Đức, Hồi Thanh; vùng ngập nước có xã Tam Quan Nam, Hồi Mỹ; vùng khơ có xã Hồi Sơn, Hồi Phú, thu thập mẫu bệnh phẩm vịt nghi mắc bệnh Salmonella để phân lập vi khuẩn xác định số đặc điểm sinh học, đánh giá mức độ mẫn cảm kháng sinh, xây dựng phác đồ điều trị thử nghiệm Kết đề tài điều tra 54.050 vịt 198 đàn, cho thấy tỷ lệ vịt nhiễm bệnh 23,11% so với tổng đàn điều tra, đề tài thu thập 90 mẫu bệnh phẩm lách vịt mắc bệnh nghi nhiễm Salmonella để phân lập vị khuẩn, kết có 54 mẫu phân lập vi khuẩn Salmonella, chiếm tỷ lệ 59,96% Kết cho thấy Salmonella xảy hầu hết xã thuộc vùng theo dõi Tất chủng vi khuẩn phân lập có đặc tính vi sinh vật học vi khuẩn Salmonella tài liệu ngồi nước cơng bố Các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập có độc lực cao, có khả gây chết động vật thí nghiệm với tỷ lệ lớn Khi mổ khám động vật thí nghiệm iv thấy có triệu chứng bệnh tích điển hình bệnh quan: tim, gan, lách, ruột, xoang bụng Các chủng vi khuẩn phân lập kháng với hầu hết loại kháng sinh phổ biến như: Streptomycin, Cefoxitin, Tetracycline, Gentamicin Phác đồ điều trị sử dụng kháng sinh Colistin Ampicillin có tỷ lệ vịt khỏi bệnh (85%) cao thời gian điều trị (4,76 ngày) ngắn so với phác đồ điều trị thường dùng thú y sở Trên sở kết nghiên cứu đề tài đề xuất số biện pháp phòng điều trị bệnh hiểu bệnh Salmonella gây vịt ni địa phương huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định v MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 2.1 Mục tiêu chung 2.2 Mục tiêu cụ thể Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 CƠ SỞ LÝ LUẬN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1.1 Hệ vi sinh vật đường tiêu hóa 1.1.2 Cảm nhiễm 1.1.3 Tính gây bệnh vi khuẩn 1.1.4 Vi khuẩn Salmonella 1.1.5 Salmonella bệnh truyền nhiễm 16 1.1.6 Salmonella trúng độc thực phẩm 17 1.1.7 Salmonella bệnh phó thương hàn vịt 21 1.2 CƠ SỞ THỰC TIỂN CỦA CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 17 1.2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Salmonella gây vịt ngồi nước 17 1.2.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Salmonella gây vịt nước Error! Bookmark not defined vi CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI NGHIÊN CỨU 28 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.1.2 Phạm vi thời gian nghiên cứu 28 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 28 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.3.1.Vật liệu nghiên cứu 29 2.3.2 Phương pháp điều tra 30 2.3.3 Phương pháp lấy mẫu bệnh phẩm 30 2.3.4 Phương pháp phân lập vi khuẩn Salmonella 30 2.3.5 Phương pháp đánh giá độc lực vi khuẩn Salmonella động vật thí nghiệm 34 2.3.6 Phương pháp kháng sinh đồ 34 2.3.7 Phương pháp điều trị thử nghiệm vịt 36 2.3.8 Phương pháp xử lý số liệu 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 TÌNH HÌNH BỆNH DO SALMONELLA TRÊN VỊT NI TẠI HUYỆN HỒI NHƠN, TỈNH BÌNH ĐỊNH 37 3.2 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VI KHUẨN SALMONELLA TỪ MẪU VỊT BỆNH 41 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN SALMONELLA GÂY BỆNH TRÊN VỊT 43 3.3.1 Kết kiểm tra hình thái vi khuẩn khuẩn lạc 43 3.3.2 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa vi khuẩn 46 3.3.3 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonella động vật thí nghiệm 51 3.4 KẾT QUẢ LÀM KHÁNG SINH ĐỒ 53 3.5 KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ TRÊN VỊT 56 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 4.1 KẾT LUẬN 58 4.2 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 vii viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thời gian sống Salmonella loại môi trường 10 Bảng 1.2 Các biểu sinh hóa Salmonella 12 Bảng 2.1 Dấu hiệu thể khả lên men đường vi khuẩn 33 Bảng 2.2 Tiêu chuẩn đánh giá mức độ mẫn cảm vi khuẩn với số loại kháng sinh 35 Bảng 3.1 Tình hình vịt mắc bệnh Salmonella số xã huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định 37 Bảng 3.2 Tỷ lệ vịt mắc bệnh chết Salmonella vịt tháng tuổi 39 Bảng 3.3 Tỷ lệ vịt mắc bệnh chết Salmonella vịt từ tháng tuổi trở lên 40 Bảng 3.4 Kết phân lập Salmonella từ mẫu vịt bệnh 42 Bảng 3.5 Kết giám định số đặc điểm sinh hóa vi khuẩn Salmonella phân lập 46 Bảng 3.6 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonella chuột nhắt trắng 51 Bảng 3.7 Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm vi khuẩn Salmonella số loại thuốc kháng sinh 54 Bảng 3.8 Kết điều trị vịt bệnh Salmonella 57 ix DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Quy trình phân lập Salmonella “ISO 6579:2002” 31 Hình 3.1 Biểu đồ tỷ lệ vịt mắc bệnh Salmonella xã nghiên cứu 38 Hình 3.2 Biểu đồ tỷ lệ chết vịt mắc bệnh Salmonella xã nghiên cứu 39 Hình 3.3 Tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết Salmonella theo tuổi vịt 41 Hình 3.4 Tỷ lệ mẫu vịt bệnh phân lập vi khuẩn Salmonella theo xã 43 Hình 3.5 Hình thái vi khuẩn Salmonella sau nhuộm Gram 44 Hình 3.6 Đặc điểm Salmonella môi trường tăng sinh 45 Hình 3.7 Khuẩn lạc Salmonella mơi trường SS 45 Hình 3.8 Đặc điểm môi trường chưa nuôi cấy vi khuẩn Salmonella 47 Hình 3.9 Kiểm tra đặc tính sinh hóa vi khuẩn Salmonella 48 Hình 3.10 Đặc điểm Salmonella mơi trường KIA 49 Hình 3.11 Đặc điểm Salmonella môi trường MUI 50 Hình 3.12 Khuẩn lạc Salmonella môi trường thạch máu 50 Hình 3.13 Mổ khám chuột 53 Hình 3.14 Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Salmonella 55 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Ngành chăn ni nước ta chiếm vị trí quan trọng sản xuất nơng nghiệp cấu kinh tế đất nước Chăn ni với nhiều hình thức khác góp phần giải việc làm, nâng cao thu nhập cho người dân, tạo nguồn sản phẩm có giá trị, góp phần tăng trưởng kinh tế đất nước Mục tiêu chủ yếu kế hoạch phát triển chăn nuôi Việt Nam đến năm 2020 cần đạt: Tỷ trọng chăn nuôi nơng nghiệp chiếm 42%, sản lượng thịt xẻ loại đạt khoảng 5.500 ngàn tấn; thịt lợn 63%; thịt gia cầm 32%, thịt bò 4%: sản lượng trứng, sữa đạt khoảng 14 tỷ trứng 1.000 ngàn sữa Định hướng phát triển chăn nuôi gia cầm đến năm 2020, phát triển chăn nuôi gia cầm theo hướng trang trại, công nghiệp chăn nuôi chăn thả có kiểm sốt (Cục chăn ni, 2014) Để đạt mục tiêu cần phải đầu tư cho công tác giống, quan tâm đến vấn đề dinh dưỡng thức ăn, công tác quản lý, đồng thời trọng công tác thú y, tăng cường áp dụng biện pháp khoa học kỹ thuật chẩn đoán làm sở cho cơng tác phịng, chống dịch bệnh vật ni có hiệu Vịt lồi thuỷ cầm có tính thích nghi cao với điều kiện sinh thái, thích hợp cho việc chăn thả nơi có nguồn nước để tìm kiếm thuỷ động vật thóc lúa rơi vãi sau thu hoạch Những năm gần đây, chăn nuôi vịt thịt phát triển mạnh, nhiên, điều kiện ni vịt cần có nước mơi trường thuận lợi cho việc phát triển bệnh vi khuẩn gây ra, Salmonella có vai trị quan trọng dịch tễ, cản trở đáng kể việc phát triển đàn thủy cầm Bệnh Salmonella bệnh gây thiệt hại lớn, hay gặp phổ biến vịt cịn gọi bệnh phó thương hàn vịt, với đặc điểm dịch tễ phức tạp, gây nên thiệt hại đáng kể cho người chăn nuôi Tỷ lệ chết bệnh cao, đặc biệt vịt tỷ lệ chết lên đến 60-70% Việc ngăn chặn giảm thiểu bệnh Salmonella gây gia cầm điều kiện thuận lợi để chăn nuôi thủy cầm phát triển mạnh Hồi Nhơn huyện nằm phía bắc tỉnh Bình Định, có diện tích đất tự nhiên khoảng 412,95 km2, dân số 228.000 người, mật độ dân số 550,7 người/km², 48 Hình 3.9 Kiểm tra đặc tính sinh hóa vi khuẩn Salmonella Ghi chú: Ống 1: Glucose :(-) đỏ nhạt, (+) màu vàng Ống 2: Lactose : (-) đỏ, (+) màu vàng Ống 3: Saccharose : (-) đỏ nhạt, (+) màu vàng Ống 4: MR :(-) vàng nhạt, (+) đỏ hồng Ống 5: MUI :(-) vòng màu vàng, (+) vòng màu hồng cánh sen Ống 6: KIA :(-) màu đỏ,(+) màu vàng/màu đen Ống 7: Citrat :(-) xanh cây, (+) màu xanh dương Trong môi trường Kligler-Iron-Agar (KIA), sau 24 ni cấy hình thành khuẩn lạc trắng đục, mơi trường chia thành màu rõ rệt, phần thạch đứng đáy màu vàng, phần thạch nghiêng màu đỏ Vi khuẩn có khả sinh nên làm thạch bị đẩy lên khỏi đáy ống nghiệm (Hình 3.10) 49 Hình 3.10 Đặc điểm Salmonella mơi trường KIA Trong môi trường MUI vi khuẩn không sinh Urease nên không phân giải Ure thành NH3 không làm cho pH mơi trường thay đổi, chất thị màu Phenol red không chuyển môi trường sang màu hồng cánh sen Mặt khác vi khuẩn khơng có khả phân giải Tryptophan khơng có men Tryptophanaza, khơng sinh Indol, nhỏ thuốc thử Kovacs vào môi trường không xuất vịng màu đỏ ống nghiệm (Hình 3.11) 50 Hình 3.11 Đặc điểm Salmonella mơi trường MUI Trên môi trường thạch máu sau nuôi cấy 24 giờ, Salmonella hình thành nên khuẩn lạc có màu trắng đục, khơng dung huyết (Hình 3.12) Hình 3.12 Khuẩn lạc Salmonella môi trường thạch máu 51 3.3.3 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonella động vật thí nghiệm Từ 20 chủng vi khuẩn Salmonella phân lập xác định đặc tính sinh hóa đặc trưng chúng tơi tiến hành chọn ngẫu nhiên chủng vi khuẩn đại diện cho vùng để nuôi cấy môi trường giàu dinh dưỡng BHI 37oC, sau 24h nuôi cấy kiểm tra nồng độ vi khuẩn sau tiến hành thử nghiệm tiêm cho chuột nhắt trắng với liều 0,2ml/con, vị trí tiêm xoang phúc mạc, lơ đối chứng dùng nước muối sinh lý 0,9% Mỗi chủng thử nghiệm chuột, sau tiêm tiếp tục theo dõi tình trạng sức khỏe chuột ngày (72h), chuột chết mổ khám, kiểm tra bệnh tích, lấy bệnh phẩm để phân lập lại vi khuẩn Kết trình bày Bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn Salmonella chuột nhắt trắng Vùng Ngập nước Ven sông Vùng khô Số chuột chết theo thời gian (con) Số chuột tiêm (con) 12 – 24 25 – 72 Tổng số Tỷ lệ (con) (%) HM72 2 100 + HM85 2 100 + TQN20 1 100 + HĐ39 2 100 + HĐ28 2 100 + HT06 1 100 + HS86 2 100 + HS36 2 100 + HP02 2 100 + 0 0 - Ký hiệu chủng Đối chứng (NaCl 0,9%) Số chuột chết Kết phân lập lại 52 Kết Bảng 3.6 cho thấy, chủng Salmonella đem thử độc lực có khả gây chết 100% chuột thử nghiệm sau ngày tiêm thử nghiệm Trong thời gian theo dõi chúng tơi nhận thấy chủng có độc lực cao gây chết chuột sớm trước 24 sau tiêm chủng HĐ39 thời gian chết 13 – 14 sau tiêm, chủng HS36 thời gian chết 16 – 18 sau tiêm chủng HT06 TQN20 thời gian chết 23 – 25 sau tiêm Những chủng gây chết chậm MH72, HM85 thời gian gây chết sau ngày tiêm thời gian gây chết từ 50 – 56 sau tiêm; chủng HP02, HĐ28 thời gian gây chết 41- 52 sau tiêm Thời gian gây chết chuột phụ thuộc vào yếu tố độc lực vi khuẩn, có tham gia nội độc tố (Endotoxin), vi khuẩn có độc lực mạnh thời gian giết chuột nhanh Từ kết nhận thấy vùng vùng theo dõi tồn chủng có độc lực cao chủng có độc lực thấp Trong số chủng thử nghiệm chủng có độc lực cao gây chết 100% chuột ngày sau tiêm, chủng gây chết 50% chuột ngày sau tiêm, chủng lại gây chết chuột ngày sau tiêm Trước chúng tơi có thử nghiệm độc lực chủng Salmonella vịt 10 ngày tuổi, thực phương pháp chủng không gây chết vịt, nguyên nhân theo chúng tơi vịt nhận kháng thể từ vịt mẹ Kết cho thấy số lượng chuột chết thời gian từ 12 – 24 6/18 chiếm tỷ lệ 33,3%; số chuột chết khoảng thời gian 25 – 72 sau tiêm 12/18 con, tỷ lệ 66,7% Từ kết cho thấy chủng có độc lực cao HĐ39, HS36, HT06 TQN20 Đối chiếu với kết kiểm tra đặc tính sinh hóa chủng có đặc tính điển hình vi khuẩn Salmonella Những chủng có mặt vùng theo dõi Chuột chết tiêm truyền vi khuẩn Salmonella mổ khám để kiểm tra bệnh tích bệnh Bệnh tích chung thường thấy xoang bụng chướng hơi, tích dịch, tim tụ máu, gan, lách sưng to nhão, có nhiều điểm xuất huyết, ruột căng phồng nhiều hơi, thận sưng to, tím đen… Khi tiến hành phân lập vi khuẩn từ chuột chết, 100% trường hợp thấy có mặt vi khuẩn Salmonella Kết xác định độc lực chủng vi khuẩn Salmonella spp nghiên cứu phù hợp với kết Phạm Hồng Ngân (2008): 63,89% số chủng giết chết 100% số chuột thí nghiệm, 36,11% số chủng giết chết 50% động vật thí nghiệm, phù hợp với kết Nguyễn Văn Sửu cs (2005): 72 sau tiêm, tổng số chuột chết 40/42 (95,24%) 53 Hình 3.13 Mổ khám chuột 3.4 KẾT QUẢ LÀM KHÁNG SINH ĐỒ Để chọn lựa loại thuốc kháng sinh phù hợp thị trường có tác dụng điều trị bệnh Salmonella gây vịt, phạm vi nội dung nghiên cứu này, chọn chủng vi khuẩn gây chết 100% chuột để tiến hành kiểm tra mức độ kháng thuốc với loại kháng sinh hóa dược thơng dụng theo phương pháp Kirbly – Bauer (1959) Các chủng chọn là: HM72, HM85,TQN20; HDD39, HDD28, HT06; HS86, HS36, HP02 Các mẫu giấy kháng sinh cơng ty Nam Khoa, thành phố Hồ Chí Minh sản xuất Kết thực kháng sinh đồ trình bày Bảng 3.7 54 Bảng 3.7 Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm vi khuẩn Salmonella số loại thuốc kháng sinh Kết Loại kháng sinh Ký hiệu Streptomycin Sm Kanamycin TT Số chủng kiểm tra Kháng Mẫn cảm Số mẫu Tỷ lệ (%) Số mẫu Tỷ lệ (%) 9 100 0 Kn 100 11,11 Cefoxitin Cn 77,78 22,22 Colistin Co 44,44 55,56 Tetracycline Te 9 100 0 Gentamicin Ge 9 100 0 Ampicillin Am 77,78 22,22 Từ kết làm kháng sinh đồ Bảng 3.7 ta thấy, 100% chủng vi khuẩn Salmonella kháng với kháng sinh Streptomycin, Tetracycline, Gentamicin Đối với Kanamycin có chủng mẫn cảm chủng HS86 (là chủng có độc lực cao gây chết nhanh động vật thí nghiệm), chiếm tỷ lệ 11,11% Cefoxitin có chủng mẫn cảm chủng HT06 HP02, chiếm tỷ lệ 22,22; Ampicillin có chủng mẫn cảm chủng HĐ28, HS36, tỷ lệ 22,22% Colistin kháng sinh có số lượng chủng vi khuẩn mẫn cảm nhiều có chủng, tỷ lệ 55,56%; chủng mẫn cảm gồm TQN20, HS86, HS36, HM72, HM85 Đối chiếu với kết thử độc lực chuột thí nghiệm để đánh giá độc lực vi khuẩn nhận thấy tất chủng có độc lực cao độc lực thấp với động vật thí nghiệm có đặc điểm chung mẫn cảm với kháng sinh Colistin 55 Đối chiếu với kết giám định sinh hóa chúng tơi nhận thấy chủng có đặc tính sinh hóa đặc trưng vi khuẩn Salmonella hồn tồn kháng với loại kháng sinh thơng dụng Streptomycin, Tetracycline Gentamicin Như vậy, chủng Salmonella thử nghiệm nghiên cứu kháng hoàn toàn với Streptomycin, Tetracycline, Gentamicin Có nhiều nguyên nhân dẫn đến tượng kháng kháng sinh này: loại kháng sinh thông dụng thường dùng liều thấp để trộn vào thức ăn nước uống cách thường xuyên nguyên nhân xảy tượng di truyền dọc di truyền ngang tính kháng thuốc gen nằm Plasmid chủng vi khuẩn Salmonella Bên cạnh kháng sinh bị kháng, chủng vi khuẩn Salmonella thử nghiệm mẫn cảm với Colistin Kết phù hợp với nghiên cứu tác giả nghiên cứu mức độ kháng kháng sinh Salmonella Hình 3.14 Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Salmonella Dẫn theo kết nghiên cứu Trần Thị Phần cs (2005), đa phần vi khuẩn Salmonella kháng với thuốc kháng sinh thông thường với tỷ lệ khác Tetracycline (54,2%), Sulfonamide (52,5%), Streptomycin (41,5%), 56 Trimethoprim (36,4%), Chloramphenicol (35,6%), Ampicillin (33,1%) Trong nghiên cứu Nguyễn Thị Chinh cs (2010), cho thấy tỷ lệ kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella cao, kháng Gentamicin 90,91%, Nitrofurantrin 72,73%, Ampicillin 63,64% Salmonella đề kháng với hầu hết kháng sinh thông dụng hay sử dụng Streptomycin, Tetracycline, Chloramphenicol, Doxycyclin, Ofloxacin (Tô Liên Thu, 2004) Như việc lạm dụng kháng sinh để phịng chữa bệnh cho động vật nói chung vấn đề đáng quan tâm nước ta, gây khơng khó khăn cho ngành thú y nhân y Vì yếu tố kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn Salmonella luôn thay đổi theo thời gian, không gian khác cá thể Vì vậy, thời điểm định, cần phải làm kháng sinh đồ để xác định xác khả kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn gây bệnh 3.5 KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ TRÊN VỊT Căn vào kết kháng sinh đồ, sử dụng loại thuốc kháng sinh thông dụng thị trường để tiến hành điều trị số vịt mắc bệnh Colistin Ampicillin Vịt bệnh có triệu chứng điển hình bệnh Salmonella chia thành lơ thử nghiệm, lơ thí nghiệm 20 có độ tuổi (11 ngày tuổi) + Phác đồ (sử dụng kháng sinh từ kết kháng sinh đồ): dùng NOVA AMCOLI FORT Thành phần thuốc gồm Colistin Sulfat 120.000.000 UI/kg thuốc, AmpicilinTrihydrate 40.000mg/kg thuốc Liều lượng điều trị gam thuốc/lít nước uống + Phác đồ (phác đồ điều trị thú y sở): dùng NOVA: STREPTOTETRAMYCINE; thành phần thuốc gồm Oxytetracylin HCL 10gam/kg thuôc, Steptomycin Sulfat gam/kg thuốc Liều điều trị 4gam thuốc /lít nước uống + Phác đồ (lơ đối chứng): không sử dụng thuốc kháng sinh Cả phác đồ sử dụng thuốc bổ tăng sức đề kháng NOVA-Gluco K-C NOVA-ADEB.Complex suốt thời gian điều trị thời gian hồi sức sau điều trị Kết điều trị trình bày Bảng 3.8 57 Bảng 3.8 Kết điều trị vịt bệnh Salmonella Phác đồ Thuốc dùng Số điều trị Thời gian Số Tỷ lệ khỏi khỏi bệnh khỏi bệnh bệnh trung bình (ngày) (%) X  SE NOVA - AMCOLI FORT 20 17 85 4,76  0,32 NOVA:STREPTO TETRAMYCINE 20 11 55 5,54  0,43 20 10 8,00  0,00 Không dùng kháng sinh Kết điều trị Bảng 3.8 cho thấy phác đồ điều trị NOVA AMCOLI FORT tỷ lệ vịt khỏi bệnh cao 85%, thời gian khỏi bệnh trung bình 4,76 ngày với sai số trung bình 0,32 Ở phác đồ điều trị NOVA: STREPTO-TETRAMYCINE, tỷ lệ vịt khỏi bệnh đạt 55%, thời gian khỏi bệnh trung bình 5,54 ngày với sai số trung bình 0,43 Ở lơ đối chứng khơng dùng kháng sinh tỷ lệ vịt tự khỏi bệnh đạt 10% Như vậy, phác đồ sử dụng Colistin Ampicillin từ kết kháng sinh đồ có hiệu điều trị vịt cao 58 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đạt rút số kết luận sau: - Trong 90 mẫu bệnh phẩm thu thập từ 90 đàn vịt bị bệnh nghi nhiễm Salmonella nuôi xã huyện Hồi Nhơn tỉnh Bình Định có 54 mẫu phân lập vi khuẩn Salmonella, chiếm tỷ lệ 59,96% - Tất chủng vi khuẩn phân lập có đặc tính vi sinh vật học vi khuẩn Salmonella tài liệu nước công bố - Các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập có độc lực cao, có khả gây chết động vật thí nghiệm với tỷ lệ lớn Khi mổ khám động vật thí nghiệm thấy có triệu chứng bệnh tích điển hình bệnh quan: tim, gan, lách, ruột, xoang bụng - Các chủng vi khuẩn phân lập kháng với hầu hết loại kháng sinh phổ biến như: Streptomycin, Cefoxitin, Tetracycline, Gentamicin - Phác đồ điều trị sử dụng kháng sinh Colistin Ampicillin có tỷ lệ vịt khỏi bệnh (85%) cao thời gian điều trị (4,76 ngày) ngắn so với phác đồ điều trị thường dùng thú y sở 4.2 KIẾN NGHỊ Cần có nghiên cứu sâu với lượng mẫu lớn để phân tích dịch tễ học, xác định serotype, gen mã hóa số yếu tố độc lực, yếu tố bám dính vi khuẩn Salmonella đàn vịt ni huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định để có đánh giá cách tồn diện 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Trần Văn Bình (2005), Hướng dẫn điều trị số bệnh thủy cầm, Nhà xuất Lao Động – Xã Hội [2] Nguyễn Xn Bình, Trần Xn Hạnh, Tơ Thị Phấn (2005), 109 bệnh gia cầm cách phòng trị, Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội [3] Nguyễn Thị Chinh, Nguyễn Quang Tính, Trần Thị Hạnh (2010), Nghiên cứu số đặc tính Salmonella Typhimurium Salmonella Enteritidis đàn vịt Bắc Ninh, Bắc Giang, Khoa học kỹ thuật thú y, tập XVII, số 4, tr 28 - 33 [4] Đỗ Trung Cứ, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Quang Tuyên (2011), Kết phân lập xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella spp gây bênh Phó thương hàn lợn số tỉnh miền núi phía Bắc, Khoa học kỹ thuật thú y, số 3, tr 45 - 49 [5] Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng (1986), Bệnh gia súc non, Nhà xuất Nông nghiệp [6] Trần Đức Hạnh (2011), Nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Salmonella phân lập từ lợn sau cai sữa bị tiêu chảy chế tạo thử nghiệm vacxin phòng bệnh, Khoa học kỹ thuật thú y, tập XVIII, số 3, tr 38 – 49 [7] Nguyễn Đức Hiền Phạm Thị Như Thảo (2012) Tình hình nhiễm mức độ kháng thuốc Salmonella spp phân lập từ vịt môi trường nuôi thành phố Cần Thơ, Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XIX, số 3, tr 36 – 40 [8] Nguyễn Ngọc Huân, Trần Xuân Hạnh, Tô Thị Phấn (2008), Sự lưu hành Salmonella đàn vịt CV-SUPER M nuôi trại vịt giống VIGOVA, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Chăn ni, số 14, tr 59 – 66 [9] Phạm Quang Hùng (2009), Con vịt với người nông dân, Nhà xuất Nông Nghiệp, tr 163 – 166 [10] Đỗ Thị Huyền Tô Long Thành ( 2009 ), Salmonella - tác nhân gây nhiễm độc thực phẩm, Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XVI, số 4, tr 79 - 91 [11] Nguyễn Thị Ngọc Liên, Cù Hữu Phú, Phạm Hồng Ngân ( 2004 ), Nghiên cứu đặc tính sản sinh độc tố đường ruột kiểm tra khả gây bệnh chủng Salmonella phân lập từ vịt động vật thí nghiệm, Báo cáo khoa học chăn nuôi thú y, phần thú y, Nhà xuất Nông Nghiệp, tr 418 – 423 60 [12] Phạm Hồng Ngân (2008), Phân lập, xác định serotyp số yếu tố gây bệnh Salmonella từ bê tháng tuổi, Khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số 2, tr 39 – 44 [13] Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Vũ Bình Minh, Đỗ Ngọc Thúy ( 2000, Phân lập vi khuẩn E coli Salmonella lợn mắc bệnh tiêu chảy, xác định số đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn phân lập biện pháp phòng trị, Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2000 [14] Nguyễn Vĩnh Phước, Vi sinh vật thú y, NXB Đại học trung học chuyên nghiệp Hà Nội, 1970 [15] Nguyễn Phú Quý, Phùng Đức Cam, Lương Ngọc Trâm, Hoàng Thu Thủy, vi khuẩn thương hàn (Salmonella), Escherichia coli Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh vật học Chủ biên: Hồng Thủy Long NXB văn hóa Hà Nội, 1991 [16] Phạm Hồng Sơn, Giáo trình Vi sinh vật học chăn nuôi, Nhà xuất Đại học Huế, 2012 [17] Phạm Hồng Sơn, Giáo trình Vi sinh vật học Thú y, Nhà xuất Đại học Huế, 2013 [18] Nguyễn Văn Sửu, Nguyễn Quang Tuyên, Trần Thị Hạnh, Kết xác định số đặc tính sinh hóa yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella spp phân lập từ bê, nghé tiêu chảy số tỉnh miền núi phía Bắc, Khoa học kỹ thuật Thú y tập XII, số 1, 2005 [19] Lê Văn Tạo cs, Kết phân lập định danh vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho lợn, Báo cáo khoa học mã số: KN 02-15; NXB Nông nghiệp, Hà Nôi 1997 [20] Nguyễn Như Thanh, Vi sinh vật Thú y, NXB Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội, 1997 [21] Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Lan Hương, Giáo trình vi sinh vật thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2001 [22] Tơ Liên Thu, Tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella E.coli phân lập từ thịt lợn thịt gà vùng đồng Bắc bộ, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XI, số 4, 2004 [23] Nguyễn Đức Trọng, Hoàng Văn Tiệu, Hồng Thị Lan, Chăn ni vịt ngan – An tồn sinh học đảm bảo tính bền vững, 2008 61 Tài liệu tiếng nước [24] Bauer, A W., D M Perry, and W M M Kirby 1959 Single disc antibiotic sensitivity testing of Staphylococci A.M.A Arch Intern Med 104:208–216 [25] Evan D.G., Evan D.J., Gorbch S.L., Production of vascular permeability factor by enterotoxigenic Escherichia coli isolated fromman Infect.Immun, V8, pp.725-730, 1973 [26] Ewing, Eward, Indentification of Enterobacteriaceae, Edicion Revolucionnalria, Instituto Cubano Del libro 19 No 1002, Vedado Habana, 1970 [27] Flament A, Soubbotina A, Mainil J, Marlier D, Prevalence Salmonella serotypes in male mule ducks in Belgium, Vet Rec, 2012 [28] Frederick Adzitey, Nurul Huda and Gulam Rusul Rahmat Ali, Prevalence and Antibiotic Resistance of Campylobacter, Salmonella and L.monocytogenes in Ducks, Foodborne pathogens and disease, Volume 9, Number 6, 2012 [29] Jiansen Gong, Jinqiu Zhang, Ming Xu, Chunhong Zhu, Yan Yu, Xuexian Liu, Patrick Kelly, Bu Xu and Chengming Wang, Prevalence and Fimbrial Genotype Distribution of Poultry Salmonella Isolates in China (2006 to 2012), Appl Environ Microbiol, 2014 [30] Ogasawara N, Tran TP, Ly TL, Nguyen TT, Iwata T, Okatani AT, Watanabe M, Taniguchi T, Hirota Y, Hayashidani H, Antimicrobial susceptibilities of Salmonella from domestic animals, food and human in the Mekong Delta, Vietnam, J Vet Med Sci, 2008 [31] Peterson J.W., Salmonella toxin, Pharm Ather, VII, 1980, pp 719-724 [32] Phan TT, Khai LT, Ogasawara N, Tam NT, Okatani AT, Akiba M, Hayashidani H, Contamination of Salmonella in retail meats and shrimps in the Mekong Delta, Vietnam, J Food Prot, 2005 [33] Quinn P.J., Carter M.E., Markey B., Carte G.R., Clinical veterinary microbiology, 1994, pp 98- 220 [34] Quinn P.J, Carter M.E, Makey B, Carter G.R, Clinical veterinary microbiology, Wolfe Publishing, London WC1 H9LB, England, 2002, p 209-236 [35] Tang T, Cheng A, Wang M, Li X, He Q, Jia R, Zhu D, Chen X, Development and clinical verification of a loop-mediated isothermal amplification method for detection of Salmonella species in suspect infected ducks, Poult Sci, 2012 62 [36] Thi Thu Hao Van, George Moutafis, Taghrid Istivan, Linh Thuoc Tran, Peter J Coloe, Detection of Salmonella spp in Retail Raw Food Samples from Vietnam and Characterization of Their Antibiotic Resistance, Appl Environ Microbiol, 2007 [37] Wei B, Cha SY, Kang M, Park IJ, Moon OK, Park CK, Jang HK, Development and application of a multiplex PCR assay for rapid detection of major bacterial pathogens inducks, Oult Sci, 2013 [38] Yu CY, Chu C, Chou SJ, Chao MR, Yeh CM, Lo DY, Su YC, Horng YM, Weng BC, Tsay JG, Huang KC, Comparison of the association of age with the infection of Salmonella and Salmonella enterica Serovar Typhimurium in Pekin ducks and Roman geese, Poult Sci, 2008 ... tài ? ?Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Salmonella gây bệnh vịt ni huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định? ?? Mục tiêu đề tài 2.1 Mục tiêu chung Mục tiêu đề tài xác định số đặc điểm sinh học vi khuẩn. .. Salmonella gây bệnh vịt ni huyện Hồi Nhơn, tỉnh Bình Định? ?? Mục tiêu chung đề tài khảo sát tình hình bệnh Salmonella gây vịt, xác định số đặc điểm sinh học vi khuẩn Salmonella phân lập từ vịt nghi mắc bệnh. .. SALMONELLA TRÊN VỊT NI TẠI HUYỆN HỒI NHƠN, TỈNH BÌNH ĐỊNH 37 3.2 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VI KHUẨN SALMONELLA TỪ MẪU VỊT BỆNH 41 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN SALMONELLA