Tuyển chọn một số chủng vi khuẩn bacillus thuringiensis phân lập từ các mẫu đất tại huyện tiên phước tỉnh quảng nam

ĈҤI HӐ&Ĉ¬1 ҸNG 75Ѭ Ӡ1*Ĉ ҤI HӐ&6Ѭ3+ ҤM KHOA SINH - 0Ð,75Ѭ ӠNG ««««« PHAN NGUYӈN GIA LINH TUYӆN CHӐN MӜT SӔCHӪNG VI KHUҬN BACILLUS THURINGIENSIS TӮ CÁC MҮ8Ĉ ҨT PHÂN LҰP TҤI HUYӊ17,Ç13+Ѭ ӞC, Tӌ NH QUҦNG NAM KHĨA LUҰN TӔT NGHIӊP Ĉj1 ̽QJ1ăP ĈҤI HӐ&Ĉ¬1 ҸNG 75Ѭ Ӡ1*Ĉ ҤI HӐ&6Ѭ3+ ҤM KHOA SINH - 0Ð,75Ѭ ӠNG NGUYӈ N ««««« PHAN GIA LINH LӠ,&$0Ĉ2$1 TUYӆN CHӐN MӜ T SӔCHӪNG VI KHUҬN 7{L[LQFDPÿRDQÿk\OjF{QJWUuQKQJ ӭu khoa c cӫ a8Ĉ riêngҨ BACILLUS THURINGIENSIS TӮ CÁChӑMҮ T Các sӕ liӋ u kӃ t quҧtrong khóa luұ n trung thӵFYjӯQJÿѭ FKѭDW ӧc công bӕtrong bҩ t kì PHÂN LҰP TҤI HUYӊ17,Ç13+Ѭ ӞC, Tӌ NH QUҦNG NAM cơng trình khác Tác giҧkhóa luұ n Phan NguyӉ n Gia Linh Chuyên ngành : Công nghӋsinh hӑ c *LiRYLrQKѭ ӟng dүn 7K6/r9NJ.KiQK Ĉj1 ̽QJ1ăP LӠI CҦ0Ѫ1 ĈӅtài khóa luұ n tӕt nghiӋ p mӝt cơng trình nghiên cӭu khoa hӑFÿmÿѭ ӧc ÿҫ XWѭNKiN ӻOѭ ӥQJĈk\FNJQJOjF{QJWUuQKJ һ p phҧ i nhiӅ u vҩ Qÿ ӅNKyNKăQ , vҩ Qÿ Ӆ khuҩ t mҳ c trình nghiên cӭu cӫ a Tuy nhiên, thành quҧÿHPO ҥ i xӭng ÿiQJÿѭ ӧc ghi nhұ n Tҩ t cҧnhӳng thành quҧnày khơng chӍriêng sӵnӛlӵc cӫa trị chúng tơi mà cịn sӵJL~Sÿ ӥ, sӵӫng hӝvӅmһ t vұ t chҩ t lү n tinh thҫ n tӯJLDÿuQK ҫ y bҥ QEqÿ Ӈtơi có thӇhồn thành tӕ t khóa luұ n 7Uѭ ӟc hӃ t, xin chân thành cҧ PѫQEDP ҽ , cҧ PѫQQJѭ ӡLÿmJL~Sÿ ӥÿ ӝ ng viên tôi, hұ XSKѭѫQJY ӳng chҳ c hӛtrӧtơi có thӇtұ p trung hồn thành tӕ Wÿ Ӆtài Ĉһ c biӋ t, xin gӱi lӡi cҧ PѫQVkXV ҳ Fÿ Ӄ QF{/r9NJ.KiQK Trang cô Lê Thӏ 0DLQJѭ ӡLF{QJѭ ӡi chӏÿmOX{QW ұ n tâm hӛtrӧJL~Sÿ ӥW{Lÿ ӝ ng viên tơi thӵc hiӋ n khóa luұ n Cҧ PѫQFiFF{ÿmOX{QWKHRViWWUX Ӆ Qÿ ҥ t kiӃ n thӭFFKX\rQQJjQ nhӳng góp ý vӅkinh nghiӋ m thӵc tiӉ QWURQJQJjQKFNJQJQKѭ g cuӝc sӕ ng suӕ t thӡi gian vӯa qua Tôi xin gӱi lӡi cҧ PѫQÿ Ӄ n quý thҫ y cô khoa Sinh ±0{LWUѭ ӡQJÿmJL~S ӥ, hӛtrӧtӝi suӕ t trình hӑ c tұ p bӕ QQăPWUrQJL ҧ QJÿѭ ӡQJÿ ҥ i hӑc, tҥ RÿL Ӆ u kiӋ QYjFѫK ӝLÿ ӇVLQKYLrQÿѭ ӧc hӑc tұ p, rèn luyӋ n tӕ t nhҩ t Sau cùng, xin gӱi lӡi cҧ PѫQWKkQWKѭѫQJÿ Ӄ n nhӳQJQJѭ ӡi bҥ QQJѭ ӡLDQKQJѭ ӡi chӏvà bҥ n sinh viên NKyDGѭ ӟLÿmOX{Qÿ ӗ ng hành tôi, chia sҿkiӃ n thӭc hӛtrӧJL~Sÿ ӥlү n trình nghiên cӭu, hӑc tұ p Tôi xin chân thành cҧPѫQ Ĉj1 ҹ QJWKiQJQăP Sinh viên Phan NguyӉ n Gia Linh MӨC LӨC LӠ,&$0Ĉ2$1 LӠI CҦ0Ѫ1 DANH MӨC TӮ VIӂT TҲT DANH MӨC BҦNG BIӆU DANH MӨC HÌNH ҦNH MӢ ĈҪU 1 Ĉһ t vҩQÿ Ӆ Mөc tiêu nghiên cӭu éQJKƭDNKRD hӑ c êQJKƭD thӵc tiӉ n cӫDÿ Ӆtài &+ѬѪ1*7 ӘNG QUAN TÀI LIӊU 1.1 Khái quát vӅBacillus thuringiensis 1.1.1 Lӏ ch sӱphát hiӋ n Bacillus thuringiensis Ĉ һFÿL Ӈ m phân bӕ Ĉ һFÿL Ӈ m sinh lý cӫa Bacillus thuringiensis Ĉ һFÿL Ӈ m sinh hóa cӫa Bacillus thuringiensis 1.1.5 Phân loҥ LJHQHÿ ӝ c tӕcӫa Bacillus thuringiensis 1.1.6 Các loҥ Lÿ ӝ c tӕcӫa Bacillus thuringiensis &ѫFK ӃWiFÿ ӝng cӫa protein tinh thӇlên côn trùng 1.2 Mӝ t sӕnghiên cӭu vӅvi khuҭn Bacillus thuringiensis 1.2.1 Mӝ t sӕnghiên cӭu thӃgiӟi 1.2.2 Mӝ t sӕnghiên cӭXWURQJQѭ ӟc 1.3 Mӝ t sӕchӃphҭm Bacillus thuringiensis thӏWUѭ ӡng hiӋ n 10 &+1*9 T LI89ơ3+1*3+ẩ31*+,ầ1& U 11  ӕ LWѭ ӧng, vұt liӋ u phҥm vi nghiên cӭu 11 Ĉ ӕ LWѭ ӧng nghiên cӭu 11 0{LWUѭ ӡng nuôi cҩ y thuӕ c thӱ 11 2.1.3 Phҥm vi nghiên cӭu 11 2.2 Nӝ i dung nghiên cӭu 11 3KѭѫQJSKiSQJKLrQF ӭu 12 6ѫ ÿӗbӕtrí thí nghiӋ m 12 2.3.2 Phân lұp tuyӇ n chӑ n chӫng vi khuҭn Bacillus thuringiensis 12 2.3.3 Các phép thӱsinh lý, sinh hóa 14 3KѭѫQJSKiSWK ӱnghiӋ m hoҥt tính diӋ WVkXWѫ Pluella xylostella) cӫa chӫng Bacillus thuringiensis giҧÿӏ nh 15 3KѭѫQJ SKiSÿ ӏ nh danh Bacillus sp 16 3KѭѫQJSKiS[ ӱlý sӕliӋ u 16 &+ѬѪ1* ӂT QUҦNGHIÊN CӬU VÀ THҦO LUҰN 17 3.1 KӃ t quҧphân lұp, tuyӇ n chӑn cӫa vi khuҭn Bacillus sp có tinh thӇÿӝ c phân lұp tӯÿҩt tҥi huyӋ Q7LrQ3Kѭ ӟc 17 3.2 KӃ t quҧ [iF ӏ QK ÿһc ÿ tính sinh lý, sinh hóa cӫa vi khuҭn Bacillus thuringiensis phân lұSÿѭ ӧc 20 ӏ nh ;iF hoҥt tính ÿ diӋ W VkX Pluella Wѫ xylostella) cӫa chӫng Bacillus thuringiensis giҧÿӏ nh 25 3.3.1 KӃ t quҧ[iFÿ ӏ nh sӕOѭ ӧng bào tӱtrong 24 giӡnuôi cҩy 25 3.3.2 KӃ t quҧhoҥt lӵc diӋ t sâu 26 3.4 KӃ t quҧÿӏ nh danh bҵQJSKѭѫQJSKiSNKX Ӄ FKÿ ҥi vùng gene 16S rRNA 28 KӂT LUҰN VÀ KIӂN NGHӎ 32 TÀI LIӊU THAM KHҦO 33 PHӨLӨC DANH MӨC TӮ VIӂT TҲT B thuringiensis (Bt) Bacillus thuringiensis CAB Center for Advanced Bioimaging NCBI National Center for Biotechnology Information TCVN Tiêu chuҭ n ViӋ t Nam PCR Polymerase Chain Reaction DNA Deoxyribonucleic acid RNA Ribonucleic acid tRNA transfer Ribonucleic acid rRNA ribosome Ribonucleic acid KL Khuҭ n lҥ c Ĉ& Ĉӕi chӭng TNHH MTV Trách nhiӋ m hӳu hҥ n mӝt thành viên DANH MӨC BҦNG BIӆU Kí hiӋ u bҧng 1.1 Tên bҧng Phân loҥ i gene cry cӫa Bacillus thuringiensis Trang Ĉһ FÿL Ӈ m hình thái khuҭ n lҥ c mӝ t sӕÿһ FÿL Ӈ m sinh hӑc 3.1 cӫ a chӫ ng vi khuҭ n phân lұ Sÿѭ ӧc ӣ42oC 17 3.2 KӃ t quҧthӱnghiӋ m khҧQăQJGLÿ ӝ ng 21 3.3 KӃ t quҧthӱnghiӋ m khҧQăQJFK ӏ u mһ n 22 3.4 KӃ t quҧthӱphҧ n ӭng oxidase 23 3.5 KӃ t quҧthӱphҧ n ӭng catalase 24 3.6 SӕOѭ ӧng bào tӱ/ml dung dӏ ch lên men sau 24 giӡ 26 3.7 Hoҥ t lӵc diӋ t sâu cӫ a chӫng vi khuҭ n nghiên cӭu 26 DANH MӨC HÌNH ҦNH Tên hình ҧnh SӕhiӋ u Trang 1.1 Bào tӱvà tinh thӇÿӝ c cӫa Bacillus thuringiensis 1.2 &ѫFK ӃdiӋ t sâu cӫa vi khuҭ n Bacillus thurigiensis 2.1 6ѫÿ ӗbӕtrí thí nghiӋ m 12 3.1 Hình thái khuҭ n lҥ c hình thái tӃbào cӫa chӫ ng B1 (VK100) 19 Hình thái khuҭ n lҥ c hình thái tӃbào cӫ a chӫng B4 3.2 (VK100) 19 3.3 Hình thái khuҭ n lҥ c hình thái tӃbào cӫa chӫ ng B7 (VK100) 19 3.4 Hình thái khuҭ n lҥ c hình thái tӃbào cӫa chӫ ng B9 (VK100) 20 3.5 KhҧQăQJGLÿ ӝ ng cӫa chӫng B1, B4, B7, B9 21 3.6 3.7 &DQKWUѭ ӡng chӭa 10% NaCl sau 10 ngày thӱnghiӋ m mү u ÿ ӕi chӭng sau 24 giӡnuôi cҩ y KӃ t quҧthӱnghiӋ m khҧQăQJFK ӏ u mһ n cӫ a chӫng B1, B4, B7, B9 22 23 3.8 Phҧ n ӭng oxidase cӫa chӫng B1, B4, B7, B9 24 3.9 Phҧ n ӭng catalase cӫ a chӫ ng B1, B4, B7, B9 25 3.10 6kXWѫTXDFiFJLDLÿR ҥ n thӱnghiӋ m 27 3.11 DNA tә ng sӕcӫ a chӫng B7 28 3.12 KhuӃ FKÿ ҥ i vùng gene 16S rRNA chӫng B7 29 3.13 KӃ t quҧtìm kiӃ m trình tӵWѭѫQJÿ ӗ ng chӫng vi khuҭ n B7 30 MӢ ĈҪU Ĉһt vҩ Qÿ Ӆ Vӟi xu thӃhiӋ n nay, ÿ ӇÿiS ӭQJÿѭ ӧc nhu cҫ u cӫ DQJѭ ӡi tiêu dùng, dҫ n dҫ n QJѭ ӡi nông dân chӫdoanh nghiӋ p ÿmFKX\ Ӈ n sang Kѭ ӟng ÿӃ n nông nghiӋ p hӳXFѫ , mӝt nӅ n nông nghiӋ p sҥ ch thân thiӋ n vӟLP{LWUѭ ӡng, vӟi viӋ c phát triӇ n công nghӋkӻthuұ t tiên tiӃ n Các chӃphҭ m vi sinh vұ t vӟi loҥ i thҧ RGѭ ӧFÿmG ҫ n thay thӃcác thuӕ c bҧ o vӋthӵc vұ t hóa hӑFÿ ӝ c hҥ i ÿӇkiӇ m soát tӕ t KѫQFiFG ӏ ch bӋ nh sâu hҥ LQkQJFDRQăQJVX ҩ t chҩ WOѭ ӧng nông sҧ n mà không gây ҧ QKKѭ ӣng xҩ Xÿ Ӄ n hӋsinh thái sӭc khӓ e cӝ QJÿ ӗng Bacillus thuringiensis mӝ t lồi vi khuҭ n có khҧQăQJW ә ng hӧp protein gây tê liӋ tҩ u trùng cӫ a mӝ t sӕlồi trùng gây hҥ LWURQJÿyFyVkXÿ өc quҧbơng, lồi VkXÿ ө c thân ngơ ChúQJÿ Ӆ u sâu hҥ i thӵc vұ t phәbiӃ n, có khҧQăQJJk\UDQK ӳng sӵ tàn phá nghiêm trӑ ng [41] HiӋ n nay, vi khuҭ n Bacillus thuringiensis ÿѭ ӧc sӱdөng rӝ ng UmLÿ ӇkiӇ m soát loài gây hҥ i khác ҧ QKKѭ ӣng ÿӃ n nӅ n nơng nghiӋ p tồn thӃgiӟi Theo Trung tâm quӕ c tӃCAB (2010), chӃphҭ m Bacillus thuringiensis chiӃ m khoҧ ng 53% thӏWUѭ ӡng toàn cҫ u thuӕ c trӯsâu sinh hӑc, tҥ o doanh thu hҵ ng QăPOjWUL Ӌ Xÿ{OD Trong nhӳQJQăPJ ҫ Qÿk\FiFQKjNKRDK ӑc vү n nghiên cӭu phân lұ p vi khuҭ n tӯP{LWUѭ ӡng tӵnhiên ӣFiFQѭ ӟc thӃgiӟi vӟi hy vӑ ng tìm nhӳng chӫng Bacillus thuringiensis có phәgây bӋ nh mӟi khoҧ ng gây bӋ nh rӝng, hoһ c nâng cao hoҥ t tính chӫng Bacillus thuringiensis ÿ ӕi vӟi nhóm trùng mӟi, hay tìm kiӃ m nguӗn gene tӯnhӳng chӫng phân lұ p cho kӻthuұ t di truyӅ n tiӃ p theo 1KuQFKXQJÿ ӝ c tӕcӫ a Bacillus thuringiensis mӝt nhӳng chiӃ QOѭ ӧc thành công nhҩ t viӋ c kiӇ m sốt sinh hӑc cӫ a trùng gây hҥ i HuyӋ n 7LrQ3Kѭ ӟc ÿѭ ӧc biӃ Wÿ Ӄ n mӝt vùng trung du miӅ n núi vӟi loҥ i trӗ QJÿHPO ҥ i kinh tӃFDRQKѭ quӃ , hӗtiêu, bịn bon, thDQKWUjPăQJF өt« HѭѫQJY ӏ cӫ a nông sҧ n QѫLÿk\Fy vӏrҩ t riêng tҥ RQrQFiFÿ һ c sҧ n nәi tiӃ ng ӣtӍ nh Quҧ ng Nam ThӃQKѭQJTX\P{ sҧ n xuҩ t trӗng trӑ WQѫLÿk\FzQQK ӓlҿ , sҧ n phҭ m nông nghiӋ p phҫ n lӟn chӍ ÿӫcung cҩ p cho nӝLÿ ӏ a, EjFRQQ{QJGkQFKѭDWL Ӄ p cұ Qÿѭ ӧc tiӃ n bӝkӻthuұ t nên gһ p nhiӅ u vҩ Qÿ ӅNKyNKăQWURQJSKzQJWU ӯsâu bӋ nh hҥ i Vӟi hy vӑng JL~Sÿ ӥ QJѭ ӡLGkQQѫLÿk\WL Ӄ p cұ Qÿѭ ӧFFiFSKѭѫQJSKiSV ҧ n xuҩ t tiên tiӃ QKѫQPjY ү n thân thiӋ QP{LWUѭ ӡQJNKDLWKiFÿѭ ӧc tiӅ PQăQJVLQKY ұ t bҧ n ÿӏ Dÿ Ӈÿ ӕi phó vӟi sâu bӋ nh gây hҥ i, tiӃ n hành thӵc hiӋ Qÿ Ӆtài nghiên cӭu: ³ TuyӇ n chӑn mӝt sӕchӫng vi khuҭn Bacillus thuringiensis phân lұp tӯcác mүXÿ ҩt tҥi huyӋ Q7LrQ3Kѭ ӟc, tӍ nh Quҧng 1DP´ Mөc tiêu nghiên cӭu Phân lұ p tuyӇ n chӑ n ÿѭ ӧc mӝt sӕchӫng Bacillus thuringiensis Yj ÿiQK J mӝt sӕÿһ FÿL Ӈ m sinh lý, sinh hóa cӫa chúng éQJKƭD khoa hӑ c êQJKƭD thӵc tiӉ n cӫDÿ Ӆtài 3.1 éQJKƭDNKRDK ӑ c KӃ t quҧnghiên cӭu cӫ Dÿ Ӆtài sӁcung cҩ p dү n liӋ u khoa hӑc mӟLÿiQKJ ÿѭ ӧc mӭFÿ ӝÿDG ҥ ng cӫa vi khuҭ n Bacillus thuringiensis ÿѭ ӧc phân lұ p tӯcác mү Xÿ ҩ t khác tҥ i huyӋ Q7LrQ3Kѭ ӟc, tӍ nh Quҧ ng Nam 3.2 éQJKƭDWK ӵc tiӉ n Các kӃ t quҧWKXÿѭ ӧc qua trình nghiên cӭu góp phҫ Q[iFÿ ӏ nh mӝt sӕÿ һ c ÿL Ӈ m vӅhình thái khuҭ n lҥ c hình thái tӃbào cӫa vi khuҭ n Bacillus thuringiensis Bên cҥ QKÿy viӋ c thӵc hiӋ Qÿ Ӆtài nghiên cӭu khóa luұ n giúp sinh viên tiӃ p cұ n vӟi công tác khoa hӑ FTXDÿyQkQJFDRWUuQKÿ ӝFKX\rQP{QYjÿ ӗ ng thӡi tҥ o cho bҧ n thân sinh viên tác phong làm viӋ c nghiêm túc nghiên cӭu khoa hӑc 17 &+ѬѪ1* ӂT QUҦNGHIÊN CӬU VÀ THҦO LUҰN 3.1 KӃ t quҧphân lұp, tuyӇ n chӑn cӫa vi khuҭn Bacillus sp có tinh thӇÿӝ c phân lұp tӯÿҩ t tҥi huyӋ Q7LrQ3Kѭ ӟc Tӯcác mү Xÿ ҩ t lҩ y ӣnhӳng khu vӵc khác tҥ i 7LrQ3Kѭ ӟc, tiӃ n hành phân lұ SWKHRSKѭѫQJ pháp cӫa Traves, 19877Uѭ ӟc phân lұ p, mү Xÿѭ ӧc gia nhiӋ t vӟLQѭ ӟc muӕ i sinh lý ӣ80oC 10 phút TiӃ n hành nuôi cҩ y chӫ ng WUrQP{LWUѭ ӡng LB ӣ28o&WURQJÿ Ӄ n 48 giӡ6DXÿyWL Ӄ n hành tuyӇ n chӑn chӫ ng Bacillus thuringiensis WKHRSKѭѫQJSKiSF ӫD)DGHO TXDÿ һ FÿL Ӈ m hình hình thái khuҭ n lҥ c ni ӣ42o&WUrQP{LWUѭ ӡng LB 48 giӡvà quan sát hình dҥ ng tӃbào, tinh thӇ bào tӱkhi nhuӝm vӟi Coomassie brilliant blue KӃ t quҧWKXÿѭ ӧc 10 chӫ ng vi khuҭ n có khҧQăQJWăQJWUѭ ӣng ӣ42o&ÿѭ ӧc kí hiӋ u tӯ%ÿ Ӄ n B10, trình bày ӣbҧ ng 3.1 B̫QJĈ ̿ FÿL ͋ m hình thái khu̱n l̩ c m͡t s͙ÿ ̿FÿL ͋ m sinh h͕c cͯa chͯng vi khu̱n phân l̵Sÿ˱ ͫc ͧ42oC Kí hiӋ u chӫng B1 B2 B3 Hình thái khuҭn lҥc (KL) KL có màu trҳ ng sӳa, lõm ӣ Hình thái tӃbào Hình que, xӃ p thành chuӛi, bào tӱlӋ ch tâm KL màu trҳ ng sӳD WUzQ Ӆ u, có Hình ÿque, xӃ p riêng lҿ , nhҫ y Tinh tӱ thӇ + + + - + - + + - - Hình que, xӃ p riêng lҿ , bào tӱchính tâm, tinh giӳa, viӅ n lan rӝ QJWUzQQKăQ thӇhình cҫ u KL hình giӑWQѭ ӟc, có nhҫ y Bào bào tӱlӋ ch tâm KL màu trҳ ng sӳa, có núm ӣ Hình que, xӃ p riêng lҿ , B4 giӳa, viӅ n lan rӝ ng, nhìn nghiêng bào tӱchính tâm, tinh bӅmһ t sҫ n sùi B5 thӇhình cҫ u KL màu vàng nhҥ WWUzQÿ Ӆ u, có Hình que, khơng sinh ria nhӓtӓDÿ Ӆ XKѫLQK ҫ y bào tӱ 18 Khuҭ n lҥ c màu trҳ QJÿ өc, bӅmһ t Hình que, xӃ p riêng lҿ , B6 nhҹ n, cҥ nh mӏ n bào tӱchính tâm Hình que, xӃ p riêng lҿ , 7ѭѫQJW ӵKL cӫ D%QKѭQJKuQK bào tӱchính tâm, tinh tán xҥQKѭ E{QJ Ӆ n trịn KRD YL thӇhình cҫ u hình KѫQ quҧtrám B7 + - + + + - + + + - KL màu trҳ ng sӳa, có núm ӣ Hình que, xӃ p riêng lҿ , giӳa, mӑ c lan tӓ DQKѭO{QJFKLP bào tӱlӋ ch tâm viӅ n mӡ B8 KL màu trҳ ng sӳa, có núm lõm ӣ B9 Hình que, xӃ p riêng lҿ , bào tӱchính tâm, tinh giӳa, có viӅ n lan rӝ QJQKѭ% thӇhình cҫ u B10 KL trҳ QJÿ өc, khơ, bám dính Hình que, thҥ ch bào tӱ tâm Ghi chú: (+) kӃ t quҧGѭѫQJWtQK -) kӃ t quҧâm tính KӃ t quҧcho thҩ y sӕ10 chӫng vi khuҭ n phân lұ p có: - 9/10 chӫ ng thuӝc chi Bacillus (tӃbào có dҥ ng hình que, hình thành bào tӱ) - 4/9 chӫ ng quan sát thҩ y có sӵhiӋ n diӋ n cӫa tinh thӇÿӝ c (B1, B4, B7, B9) TӯkӃ t quҧtrên cho thҩ y, q trình tiӃ n hành thí nghiӋ Pÿm[X ҩ t hiӋ n dҥ ng vi khuҭ n lҥlà B5 chúng có thӇsӕQJWURQJÿL Ӆ u kiӋ n phân lұ p (nhiӋ Wÿ ӝcao 80oC 10 phút) Hình thái khuҭ n lҥ c hình thái tӃbào cӫa chӫ ng sinh tinh thӇÿӝ Fÿѭ ӧc thӇ hiӋ n ӣcác hình ҧ nh sau: 19 Hình 3.1: Hình thái khu̱ n l̩c hình thái t͇bào cͯa chͯng B1 (VK100) Hình 3.2: Hình thái khu̱ n l̩c hình thái t͇bào cͯa chͯng B4 (VK100) Hình 3.3: Hình thái khu̱ n l̩c hình thái t͇bào cͯa chͯng B7 (VK100) 20 Hình 3.4: Hình thái khu̱ n l̩c hình thái t͇bào cͯa chͯng B9 (VK100) Ĉӕi vӟi chӫng vi khuҭ n sinh tinh thӇÿӝ FFyÿ һ FÿL Ӈ m chung là: khuҭ n lҥ c có có màu trҳ ng sӳa, có núm ӣgiӳa, viӅ n lan rӝng; tinh thӇÿ ӝc có nhiӅ u dҥ ng: hình Oѭ ӥng tháp hình cҫ u vӟLFiFNtFKWKѭ ӟc khác Nhӳng chӫng vi khuҭ QQj\Fyÿ һ FÿL Ӈ m giӕng vӟi vi khuҭ n Bacillus thuringiensis ÿmÿѭ ӧc công bӕ ÿyOjN huҭ n lҥ c màu trҳ ng, bӅmһ WQKăQKR һ c khơng, có viӅ n lan rӝng; tӃbào có dҥ QJKuQKTXHÿ ҫ XKѫLW bào tӱhình trӭng tâm; tinh thӇcó hình Oѭ ӥng tháp, hình lұ SSKѭѫQJ hình cҫ u Qua kӃ t quҧcó thӇthҩ y chӫng vi khuҭ n sinh tinh thӇmӟi phân lұ Sÿѭ ӧc có ÿӝÿDG ҥ ng cao vӅdҥ ng tinh thӇ , bao gӗm: dҥ ng Oѭ ӥng tháp dҥ ng hình cҫ u vӟi NtFKWKѭ ӟc khác Sӵkhác vӅcҩ XWU~FFNJQJQKѭKuQKG ҥ ng tinh thӇÿӝc thành phҫ n protein cҩ u tҥ o nên Sӵphong phú vӅhình dҥ ng tinh thӇcó thӇdү n tӟi sӵÿD ҥ ngGvӅgene ÿ ӝ c tӕ Oj ӣtҥ oFѫ nên phә V diӋ t côn trùng rӝng cho chӫ ng Bacillus thuringiensis nghiên cӭu [29], [37] 3.2 KӃ t quҧ[iF ӏ QK ÿһc ÿ tính sinh lý, sinh hóa cӫa vi khuҭn Bacillus thuringiensis phân lұSÿѭ ӧc Các chӫ ng Bacillus thuringiensis ÿѭ ӧFÿ һ FWUѭQJ bӣi sӵhiӋ n diӋ n cӫ a protein tinh thӇ 7X\QKLrQÿ Ӈkhҷ QJÿLQKFK ӫ ng vi khuҭ n tuyӇ n chӑn thuӝc chi Bacillus, tiӃ n hành khҧ RViWFiFÿ һ c tính sinh lý sinh hóa bao gӗm: khҧQăQJGLÿ ӝ ng, khҧ QăQJFK ӏ u mһ n, khҧQăQJVLQKHQ]\PHFDWDODVHYjNK ҧQăQJVLQKHQ]\PHR 21 KӃ t quҧthӱnghiӋ m khҧQăQJGLÿ ӝng Cҩ y chӫQJ%%%% YjRP{LWUѭ ӡng thҥ ch mӅ m, sau 24 giӡnuôi cҩ y tiӃ n hành ÿӑc kӃ t quҧ KӃ t quҧÿѭ ӧc trình bày ӣbҧ ng sau: B̫ng 3.2: K͇ t qu̫th͵nghi͏ m kh̫QăQJGLÿ ͡ng STT Kí hiӋ u chӫng KӃ t quҧ B1 + B4 + B7 + B9 + *KLFK~ GѭѫQJWtQK : có sinh khӕ i vi khuҭ n mӑc lan khӓ Lÿѭ ӡng cҩ y Sau 24 giӡ, quan sát hiӋ QWѭ ӧng xҧ y ӕng nghiӋ m nhұ n thҩ y mү u vi khuҭ n phân lұ Sÿѭ ӧc (B1, B4, B7, B9) OjPÿ өFP{LWUѭ ӡng xung quanh, mӑc lan khӓLÿѭ ӡng cҩ y Hình ҧ nh kӃ t quҧJLiPÿ ӏ nh khҧQăQJGLÿ ӝ ng: Hình 3.5: Kh̫QăQJGL ÿ͡ng cͯa chͯng B1, B4, B7, B9 22 KӃ t quҧthӱnghiӋ m khҧQăQJFK ӏ u mһn Sau 10 ngày nuôi cҩ \WURQJFDQKWUѭ ӡng LB có chӭa 10% NaCl, quan sát ӕng nghiӋ m không thҩ \PjXP{LWUѭ ӡng bӏ WKD\ÿ әi, khơng có sinh khӕi vi khuҭ QVLQKWUѭ ӣng ӕ ng nghiӋ P7URQJNKLÿy ӕQJÿ ӕi chӭQJĈ& ÿѭ ӧc nuôi cҩ \WURQJP{L ӡng LB khơng có bәsung NaCl bӏÿө c, có sӵxuҩ t hiӋ n sinh khӕi vi khuҭ n sau 24 giӡnuôi cҩ y KӃ t quҧÿѭ ӧc thӇhiӋ n ӣbҧ ng 3.3 hình 3.6: B̫ ng 3.3: K͇ t qu̫th͵nghi͏ m kh̫QăQJFK ͓ u m̿n STT Kí hiӋ u chӫng KӃ t quҧ B1 - B4 - B7 - B9 - Ĉ& + Ghi chú: (-) âm tính (khơng xuҩ t hiӋ n sinh khӕi vi khuҭ QWURQJFDQKWUѭ ӡng)  GѭѫQJWtQKFy[X ҩ t hiӋ n sinh khӕ i vi khuҭ QWURQJFDQKWUѭ ӡng) Hình 3.6&DQKWU˱ ͥng chͱa 10% NaCl sau 10 ngày th͵nghi͏ m m̳ u ÿ͙ i chͱng sau 24 giͥnuôi c̭y Sau ӫ10 ngày ӣ28oC, tiӃ n hành cҩ y trang dӏ ch nuôi cҩ \UDFiFÿƭ thҥ FK/%ÿ ӇkiӇ m tra sӵsӕng cӫa chӫ ng vi khuҭ n thӱnghiӋ m KӃ t quҧcho thҩ y khơng có khuҭ n lҥ c vi khuҭ n xuҩ t hiӋ QWUrQÿƭDWK ҥ FK1KѭY ұ y, chӫng 23 có khҧQăQJFK ӏ u nhiӋ t tӕWQKѭQJNK{QJWăQ JWUѭ ӣQJÿѭ ӧFWURQJÿL Ӆ u kiӋ n có nӗ QJÿ ӝ muӕi cao Hình 3.7: K͇ t qu̫th͵nghi͏ m kh̫QăQJFK ͓ u m̿n cͯa chͯng B1, B4, B7, B9 Sau tiӃ n hành nhӓ vài giӑt thuӕc thӱ tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride 1% giҩ y lӑFÿmÿѭ ӧc khӱWUQJÿ һ t mӝt lam kính sҥ ch, dùng que thӫ y tinh vơ trùng lҩ y mӝt khuҭ n lҥ c vi khuҭ n cӑlên vùng thuӕ c thӱtrên giҩ y lӑ c KӃ t quҧÿѭ ӧc thӇhiӋ n ӣbҧ ng 3.4: B̫ng 3.4: K͇ t qu̫th͵ph̫n ͱng oxidase STT Kí hiӋ u chӫng KӃ t quҧ B1 + B4 + B7 + B9 + Ghi FK~ GѭѫQJWtQKFKX\ Ӈ n qua màu tím sү m (có sinh enzyme oxidase) 24 KӃ t quҧthӱphҧn ӭng oxidase Dӵa vào khҧQăQJVLQKHQ]\PHF\WRFKURPHR[L ӫa vi khuҭ QWKѭ ӡng dùng ÿӇphân biӋ t Enterobacteriaceae GѭѫQJWtQK vӟi Pseudomadaceae (âm tính) Khi vi sinh vұ t tiӃ t cytochrome oxidase, enzyme sӁoxy hóa chҩ W FKR Ӌ n tӱnhân ÿLtҥ o, chuyӇ QÿL Ӌ n tӱsang chҩ t nhұ QÿL Ӌ n tӱnhân tҥ o làm xuҩ t hiӋ n màu tím thү m giҩ y thӱ ThӇhiӋ n ӣFiFKuQKGѭ ӟLÿk\ Hình 3.8: Ph̫ n ͱng oxidase cͯa chͯng B1, B4, B7, B9 KӃ t quҧthӱphҧn ӭng catalase ĈӇtiӃ n hành phҧ n ӭng catalase, dùng que cҩ y lҩ y mӝt khuҭ n lҥ c thuҫ Qÿ һ t lên mӝt lam kính sҥ ch Nhӓvài giӑt hydrogene peroxide (H2O2) 30% lên sinh khӕi vi khuҭ n lam kính KӃ t quҧthӇhiӋ n ӣbҧ ng 3.5: B̫ ng 3.5: K͇ t qu̫th͵ph̫n ͱng catalase STT Kí hiӋ u chӫng KӃ t quҧ B1 + B4 + B7 + B9 + *KLFK~ ... cho chӫ ng Bacillus thuringiensis nghiên cӭu [29], [37] 3.2 KӃ t quҧ[iF ӏ QK ÿһc ÿ tính sinh lý, sinh hóa cӫa vi khuҭn Bacillus thuringiensis phân lұSÿѭ ӧc Các chӫ ng Bacillus thuringiensis. .. mӝt sӕchӫng vi khuҭn Bacillus thuringiensis phân lұp t? ?các mүXÿ ҩt tҥi huyӋ Q7LrQ3Kѭ ӟc, tӍ nh Quҧng 1DP´ Mөc tiêu nghiên cӭu Phân lұ p tuyӇ n chӑ n ÿѭ ӧc mӝt sӕchӫng Bacillus thuringiensis. .. chӫng vi khuҭ Qÿѭ ӧc tuyӇ n chӑ n Nghiên cӭu hoҥ t tính diӋ t sâu cӫ a chӫng Bacillus thuringiensis phân lұ Sÿѭ ӧc Ĉӏ nh danh bҵ ng kӻthuұ t sinh hӑ c phân tӱchӫ ng vi khuҭ n Bacillus thuringiensis