ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH -[ \ - ĐOÀN THỊ THỤC ANH Nghiên cứu tuyển chọn chủng xạ khuẩn Streptomyces chống nấm mốc gây bệnh thán thư héo vàng ớt (Capsicum frutescens L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP >ғ/ѵDґE Để Hà hồn thành tận tình khóa Đồng thành thời Thầy Phạm, Đại Cuối luận Cô đề hướng chân giáo, xin tập thành xin ủng hộ bày em thành iệt cảm tình ơn s –Mơi anhTrường, chị cánTrường k Nẵng giangười đình thân em xin bè, hoàn dẫn nghiệp em em tốt học Đà tài bày giúp tỏ ln khóa lời động luận đỡ em cảm viên tro ơn c giú này! ă EҬŶŐ͕ŶŐăLJ 21 ƚŚĄŶŐϬϱŶĉŵ Sinh viên ŽăŶ dŚҷ dŚӅĐ Anh DANH MỤC CÁC BẢNG Số Tên bảng hiệu Trang TӹlӋmү u có nҩ m mӕc gây bӋ QK WKiQ WKѭ Yj héo vàng tәng sӕmү u phân lұ p ӣcác giai 3.1 ÿR ҥ Q VLQK ӣng, phát WUѭ triӇ n ӟt 25 (Capsicum frutescens L.) Ĉһ FӇ m ÿL nuôi cҩ y, hình thái cӫ a chӫ ng nҩ m 3.2 mӕc NB1 gây bӋ QK WKiQ WKѭ Ӌ nhYj 1% Jk\ 30 héo vàng ӟt m{L ӡng WUѭ nuôi cҩ y ҦQK ӣng Kѭ cӫ D P{L ӡQJ WUѭ GLQK ӥQJ Ӄ nÿ Gѭ sӵ 3.3 phát triӇ n cӫ a nҩ m Colletotrichum Fusarium 31 KӃ t quҧlây bӋ nh nhân tҥ o nҩ m Colletotrichum 3.4 lên quҧӟt (Capsicum frutescens L.) 34 KӃ t quҧlây nhiӉ m nҩ m Fusarium gây bӋ nh héo 3.5 vàng lên ӟt (Capsicum frutescens L.) 35 Ho̩t tính kháng sinh cͯa chͯng x̩khu̱n 3.6 36 MT Gause II 969.Ĉ &ROOHWRWULFKXP )XVDULX Ĉ̿F͋ m ÿL nuôi c̭y, hình thái cͯa chͯng x̩ 3.7 ҦQKӣng Kѭ cӫ a MT nuôi cҩ y 3.8 38 khu̱n XK3 XK14 tuy͋ n ch͕n dӃ n khҧQăQJ sinh tәng hӧp CKS cӫ a các chӫ ng XK tuyӇ n chӑn; 40 969.Ĉ Colletotrichum; 1% NB6: Fusarium 3.9 ҦQK KѭӣQJ FӫD WKӡL JLDQ QX{L Fҩ 42 VLQK WәQJ KӧS &.6 FӫD FiF FKӫ FKӑQ 969.Ĉ Colletotrichum; Fusarium KӃ t quҧҧ QK ӣng Kѭ cӫ a dӏ ch kháng sinh thô cӫ a 3.10 chӫ QJ ;.ÿ ӕi vӟi ӟt nhiӉ m nҩ m 44 Colletotrichum KӃ t quҧҧ QK ӣng Kѭ cӫ a dӏ ch kháng sinh thô cӫ a 3.11 chӫ QJ ;.ÿ ӕi vӟi ӟt nhiӉ m nҩ m Colletotrichum 44 DANH MỤC CÁC HÌNH Số Tên hình Trang hiệu 3.1 TӹlӋ% nҩ m gây bӋ QK WKiQ WKѭ ӟt WUrQ Fk\ (Capsicum frutescens / TXD ҥ FiF n JLDL ÿR 26 VLQKWUѭ ӣng, phát triӇ n 3.2 TӹlӋ% nҩ m gây bӋ nh héo vàng ӟt (Capsicum frutescens / TXD ҥ FiF n JLDL ÿR 26 VLQKWUѭ ӣng, phát triӇ n 3.3 Hình ̫nh tri͏ u chͱng b͏ QK WKiQ ӣcây ӟ WK˱ t 30 ngày tuәi quҧͣt (Capsicum frutescens L.) tҥ i 28 Lӝc Mӻ , Hòa Bҳ F +zD9DQJ ҹ ng Ĉj 3.4 Hình ҧ nh triӋ u chӭng bӋ nh héo vàng ӟt (Capsicum frutescens / JLDL ҥ n 90 ÿR ngày tuәi tҥ i thơn Lӝc Mӻ , xã Hịa Bҳ c, 29 huyӋ Q +zD9DQJ ҹ ng 73 Ĉj 3.5 Hình ҧ nh khuҭ n lҥ c nҩ m Colletotrichum 32 (NB1) 3.6 Hình ҧ nh khuҭ n lҥ c nҩ m Fusarium (NB6) 32 3.7 Hình ҧ nh bào tӱnҩ m Colletotichum 33 3.8 Hình ҧ nh bào tӱnҩ m Fusarium 33 3.9 Hình ҧ nh ӕng giӕng Colletotrichum nҩ m Fusarium chӫ ng nҩ m 33 3.10 Hình ҧ nh vịng vơ khuҭ n cӫ a chӫ ng xҥkhuҭ n ;. Yj ӕ ;. i vӟi nҩ m Colletotrichum ÿ 37 MT PDA 3.11 Hình ҧ nh vịng vơ khuҭ n cӫ a chӫ ng xҥkhuҭ n ;. Yj ӕ ;. i vӟi nҩ m Fusarium ÿ 37 MT PDA 3.12 Hình ̫nh ͙ng gi͙ng cͯa chͯng x̩khu̱n 39 XK3 XK14 MT Gause I 3.13 Kh̫QăQJKuQKWKjQKV ̷c t͙melanin cͯa 39 chͯng x̩khu̱n XK3 va XK14 tuy͋ n ch͕n 3.14 Hoҥ t tính kháng nҩ m Colletotrichum cӫ a chӫ ng xҥkhuҭ n XK3 XK14 40 Hoҥ t tính kháng nҩ m Fusarium cӫ a chӫ ng xҥ 3.15 khuҭ n XK3 XK14 41 ҦQK ӣng Kѭ cӫ a thӡi gian nuôi cҩ y lên sӵsinh 3.16 tәng hӧp CKS cӫ a chӫ ng xҥkhuҭ n XK3 42 XK14 Hình ҧ nh ӟt (Capsicum frutescens L.) ӣ 3.17 cơng thӭc thí nghiӋ m 45 DANH MỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT CKS &KҩW kháng sinh CFU &RORQ\ )RUPLQJ 8QLW ĈѫQYӏ K HSCC +Ӌ VӧL Fѫ FKҩW HSKS +Ӌ VӧL khí sinh KS : Kháng sinh KTKS .KXҭQ W\NKtVLQK MT : Môi WUѭӡQJ TP : Thành SKӕ TLB 7ӹ OӋEӋQK VSV : Vi sinh YұW 969.Ĉ : Vi sinh YұW NLӇP ÿӏQK XK ;ҥ NKXҭQ ĈӇ EҧR TXҧQ JLӕQJ FKR QKӳQJ QJKLrQ Fӭ SKѭѫQJ SKiS [11] FӫD ӔQJ JLӕQJ (JRURY ÿѭӧF ӣ JLӳ QKLӋW - 60C ÿӝ WKiQJ chuyӅ Q PӝWOҫQ 2.4.6 Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh chủng xạ khuẩn 2.4.63K˱˯QJ ͙ i th̩ch SKiSNK Ĉk\ OjSKѭѫQJ SKiS ÿӏQKWtQKWKѭӡQJ ÿѭ o C, &ҩ\ [ҥ NKXҭQ WUrQ P{L WUѭӡQJ ӣ QKLӋW - 30 *DXVH ÿӝ sau ,, - QJj\Q NKL PӑF [ҥ WӕW NKXҭ GQJ NKRDQ Q~W FKDL ÿƭD SHWUL ÿm Fҩ\ QҩP EӋQK - NLӇP JLӡ FKR ÿӏQK NKiQ ĈӇ NKXӃFKWiQUӗLQX{LFҩ\ӣQKLӋWÿӝ - 30 oC ĈӑFNӃWTXҧVDX 3- QJj\ÿӕLYӟ NLӇP ÿӏQK +RҥW K ÿѭӧF WtQK [iF NKiQJ ÿӏQK VLQ Y{ WKHR NKXҭQ (D- NtFK d; mm) 7URQJ ÿy ' Y{ ÿѭӡQJ NKXҭQ PP NtQK G NtQK YzQJ ÿѭӡQJ FӫD NK OҥF PP [8], [11] 2.4.63K˱˯QJ ͭc l͟ SKiSÿ 3KѭѫQJ Qj\ SKiS ӧFGQJ ÿѭ Ӈthӱhoҥ ÿ t tính kháng sinh dӏ ch thӇ Nuôi cҩ y xҥkhuҭ Q WURQJ ӡQJ P{L ұ X ÿ WѭѫQJ WUѭ ӓng, GauseOI, Gause II, Czapek o C, sau QKLӋW - 30ÿӝ - ngày ÿӇtҥ o dung dӏ ch cҫ n thӱkháng sinh Dùng khoan nút chai, khoan lӛtrên bӅmһ W P{L ӡQJ WUѭ cҩ ÿm y nҩ m bӋ nh kiӇ Pÿ ӏ nh Nhӓvào lӛkhoan 1ml dung dӏ ch kháng sinh cҫ n thӱ &iF ӟc tiӃ pEѭ theo tiӃ n hành giӕng SKѭѫQJӕ SKiS i thҥ ch [9], [11] NK 2.4.7 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm ni cấy, hình thái xạ khuẩn * Ĉ̿FÿL͋PQX{L F̭\YjKuQK WKiL ;ҥ NKXҭQ Fҩ\ ÿѭӧF MT: QX{L MT Gause I, MT Gause II, MT Czapek QJX\rQ JӕF- ӣ 30 o& QKLӋW 6DX ÿӝ QJj\ TXDQ PjX VҳF NKXҭQ OҥF PjX VҳF +&.6 PjX V WKHR SKѭѫQJ *DXVH SKiS Yj FӫD FӝQJ Sherling Vӵvà Gottieb (1969) >@ [60] 6KuQK jQK V̷FW͙PHODQLQ WK ;ҥ NKXҭQ ÿѭӧF QX{L- Fҩ\ ӣWUrQ QKLӋW P{L ÿӝSKzQJ WUѭӡQ ViW PjX FӫD P{L WUѭӡQJuVDXJLӡÿӃQQ sinh melaninPjXFӫDP WUѭӡQJ VӁFKX\ӇQ WӯPjX YjQJ QKҥW 55] VDQJ 2.4.8 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng môi trường thời gian nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn tuyển chọn ̪QK K˱ͧQJ FͯDP{LWU˱ͥQJ &iF FKӫQJ [ҥ NKXҭQ WX\ӇQ FKӑQ ÿѭӧF Or Gause I, MT *DXVH ,, 07 &]DSHN QJX\rQ JӕF Pi\ OҳF YzQJSK~W - 30 oC sau ,3 ,4,5 ӣ,6QKLӋW , QJj\ ÿӝ[iF ÿӏ WtQK NKiQJ FKӑQ VLQK P{L UD QKҵP WUѭӡQJ Fѫ EҧQ SK KӧS FKR Q WLӃSWKHR [9] ̪QK FͯDWKͥLJLDQ K˱ͧQJ &iF FKӫQJ [ҥ NKXҭQ ÿѭӧF QX{L Fҩ\ WUrQ WUrQ Pi\ OҳF YzQJ - 30 o& SK~W 7ӯ QJj\ ӣWKӭ QKLӋW ÿ ÿ WLӃQKjQK [iF ÿӏQKKRҥWWtQKNKiQJ GӏFKWKӇ VLQK 2.4.9 Nghiên cứu thử nghiệm khả diệt nấm gây bệnh thán thư héo vàng ớt dịch kháng sinh thô chủng xạ khuẩn tuyển chọn &KXҭQ Eӏ WKӡL Fk\ ӟW JLDQ Fy VLQK WUѭӣQJ thân, cóQKѭ kích QKD WKѭӟF WѭѫQJ ÿѭӧF ÿѭѫQJ WUӗQJ iF QKDX WKQJ YjR F[ӕS Fy ÿөF O Fk\ ӣ FiF UXӝQJ NK{QJ Fy GӏFK EӋQK ӣ WӃ ÿұX«'ӏFK QX{L Fҩ\ FӫD FiF FKӫQJ bào /ml [ҥNKXҭ GӏFKEjR WӱFӫD 6QҩP WӃEjRPO EӋQK FyPұW ÿӝ 7Kt QJKLӋP ÿѭӧFWLӃQKjQK WKHRF{QJWKӭFVDX + Công thӭF &k\ ӕi chӭng + dӏ ÿch nuôi cҩ y chӫ ng xҥkhuҭ n + Cơng thӭc 2: Cây nhiӉ m dӏ ch bào tӱnҩ m gây bӋ QK WKiQ + dӏ ch nuôi WKѭ cҩ y chӫ ng xҥkhuҭ n + Cơng thӭc 3: Cây nhiӉ m dӏ ch bào tӱnҩ m gây bӋ QK WKiQ + dӏ ch nuôi WKѭ cҩ y chӫ ng xҥkhuҭ n tuyӇ n chӑn + Công thӭc 4: Cây nhiӉ m dӏ ch bào tӱnҩ m gây bӋ nh héo vàng + dӏ ch nuôi cҩ y chӫ ng xҥkhuҭ n + Cơng thӭc 5: Cây nhiӉ m dӏ ch bào tӱnҩ m gây bӋ nh héo vàng + dӏ ch nuôi cҩ y chӫ ng xҥkhuҭ n tuyӇ n chӑn 0ӛL WKQJ [ӕS ÿѭӧFWѭӟL WKtQJKLӋP 2POFiFGӏFKQX{LFҩ\ 0ӛL công WKӭF 30 Fk\ YӟLĈiQK OҫQOһS ӹOӋFk\EӏEӋQK JLiW OҥL Yj uFKLӅ cao sau ngày 2.4.10 Phương pháp xử lý số liệu ;ӱOêVӕOLӋXWKӕQJ NrYj xcel YӁ ELӇXÿӗE CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Phân lập chủng vi nấm gây bệnh thán thư héo vàng ớt (Capsicum frutescens L.) 7ӯ PүX EӋQK WKiQ WKѭ FiFYj JLDL KpR ÿRҥQ YjQJ SKi W QKDX WUrQ Capsicum Fk\ӟW frutescens L.) WҥLWK{Q/ӝF0ӻ[m+ 9DQJ 73 Ĉj 1ҹQJ ÿѭӧF SKkQ OұS WUrQ P FKҭQ ÿRiQ EӋQK Fk\ 9LӋW 1DP >@ Brian C 9NJ 7UL Sutton (1998) [37], Keith Seifert (1996) [52], S B Marthu Olga Kongsdal (2000) [59] ÿm SKkQ OұS FKӫQJ ÿѭӧF PӕF Jk\ QҩPEӋQK WKiQ WKѭ Y Fk\ӟW 7UrQ P{L WUѭӡQJ , FiF FKӫQJ FKӑQ OӑF QҩP ÿһF PӕF ÿLӇP Jk\ EӋQK FK QKѭ VDX Cy KӋ VӧL PjX NKt WUҳQJ SKiWWULӇQPҥQKPӁFiFV VLQK ҥRGҥQJ VӧL JLӕQJ VӧL FKӍ SKkQ QKiQK SKiW WU VLQKEjR Wӱ« 7ҥP Nê KLӋX PӕF FKӫQJ Jk\ Oj EӋQK 1% QҩP ÿӃQ 1% 7URQ QҩP Nê KLӋX 1% ÿӃQ 1% ӟW Eӏ ÿѭӧF EӋQK SKkQ WKiQ OұS W QҩP 1% ÿӃQ1% ÿѭӧFSKkQ PүX ӟWEӏ EӋQK OұSKpRYjQJ Wӯ ӃWTXҧ QJKLrQ FӭXÿѭӧFWKӇKLӋQTXD Eҧ %̫QJ 7ͽ O͏P̳XFyQ̭PP͙FJk\E͏QKWKiQ W͝QJV͙ P̳XSKkQO̵SͧFiFJLDLÿR̩QVLQKWU˱ͧ psicum frutescens L.) Ký hiệu Bệnh chủng nấm bệnh Mẫu có nấm bệnh/ Tổng số mẫu phân lập giai đoạn sinh trưởng, phát triển ớt *LDLÿR ҥ n *LDLÿR ҥ n hoa SӕOѭ ӧng SӕOѭ ӧng (mү u bӋ nh) TLB (%) (mү u bӋ nh) TLB (%) *LDLÿR ҥ n tҥ o quҧ SӕOѭ ӧng (mү u bӋ nh) TLB (%) NB1 4/10 40 6/10 60 10/10 100 Bệnh NB2 2/10 20 0/10 4/10 40 thán thư NB3 2/10 20 2/10 20 6/10 60 NB4 2/10 20 4/10 40 6/10 60 10/40 25 12/40 30 26/40 65 NB5 2/10 20 2/10 20 0/10 NB6 4/10 40 8/10 80 6/10 60 NB7 0/10 4/10 40 0/10 NB8 2/10 20 4/10 40 4/10 40 NB9 2/10 20 4/10 40 6/10 60 10/50 20 22/50 44 16/50 32 Tổng cộng Bệnh héo vàng Tổng cộng Ghi chú 7/% 7ӹ OӋEӋQK Hình 3.1 Tͽ O͏Q̭PJk\E͏QKWKiQ WK˱WUrQFk\ͣW &DSVL TXDFiFJLDLÿR̩QVLQKWU˱ͧQJ Hình 3.2 7ͽ O͏Q̭PJk\E͏QKKpRYjQJWUrQ / TXDFiFJLDLÿR̩QVLQKWU˱ͧ 4XD NӃW TXҧ KuQK EҧQJ KuQK Yj TXi WU FKR WKҩ\ ÿӕL YӟL PӝW WULӋX FKӭQJ EӋQK Jk\ UD NӃW TXҧ Qj\ FӭX SK FӫDKӧS %XUJHVV YӟL FiF Yj FӝQ QJ 7ULӋX [19], 0kQ Burgess Summerll [38@ YӅ WKjQK SKҩQ QҩP J WUӗQJ Ӣ FiF JLDL ÿRҥQ VLQK WUѭӣQJ SK Jk\ KҥL ӣFiFPӭFÿӝNKiF QKDX QKѭ VDX ĈӕL YӟL EӋQK WKiQ WKѭ WUrQ Fk\ ӟW F FKLӃP 65 FzQ JLDL ӣÿRҥQ Fk\ FRQPӭFÿӝJk\Kҥ 25YjJLDLÿR hoa 30 ӃW TXҧ Qj\ SK KӧS YӟL QKLӅX QJ 7UҫQ 7Kӏ 0LrQ , J Zhejiang (2008) [50@ >@ 3 3 7KDQ Yj F [57@ PӭF YӅ ÿӝ Jk\ ORҥL KҥL Jk\ FӫD QҩPEӋQK FiFWKiQ WKѭ WUr QJKLrQ FӭX WKu QҩP Jk\ EӋQK WKiQ WKѭ ÿm SKҭP FKҩWchúng ӟW Jk\ ÿһF KҥL ELӋW QJKLrP ӣ JLDL WUӑQJ ÿRҥQ Fk\ ӣ Wҥ JLDLÿRҥQVDX NKLWKX KRҥFK ĈӕL YӟL pR YjQJ EӋQKWUrQ K Fk\ ӟW WKu Wӹ OӋ hoa (44 Wӹ OӋ EӋQK WKҩS KѫQ ӣ32 JLDL ĈLӅX ÿRҥQ Qj\ SK KӧS YӟL QKLӅX QJKLrQ FӭX YӅ QҩP Yj FӝQJ Vӵ 3], Javis FӝQJ> Vӵ8@ ... Nghiên? ? cứu tuyển chọn chủng xạ khuẩn Streptomyces chống nấm mốc gây bệnh thán thư héo vàng ớt (Capsicum frutescens L. )´ MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI Nghiên cӭu tuyӇ n chӑn mӝt sӕchӫ ng xҥkhuҭ n chi Streptomyces. .. W? ?L 6XUDQLQJVLK ĈjL /RDQ [iF Colletotrichum ÿӏQK FiF capsici, Colletotrichum gloeosporioides, Glomerella cingulata Jk K? ?L WUrQ FKtQ WURQJ Colletotrichum ÿy capsici ORjL Colletotrichum... TXҧ QJKLrQ FӭX YӅ ÿһF ÿ FiF ORjL QҩP zQ Jk KҥQFKӃÿһFELӋWOjQҩP EӋQK Fk Fusarium F gây héo vàng FkӟW 1.4.3 Tình hình nghiên cứu nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư %ӋQK