Nghiên cứu chiết tách phân lập và hoạt tính gây độc tế bào ung thư của hợp chất 6 hydroxyl 2 6 dimethyloct 7 enoic acid từ phân đoạn dichloromethane hoa đu đủ đực carical

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TÔ THỊ NGỌC ÁNH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, PHÂN LẬP VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT 6-HYDROXY-2,6-DIMETHYLOCT-7-ENOIC ACID TỪ PHÂN ĐOẠN DICHLOROMETHANE HOA ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA L.) LUẬN VĂN CỬ NHÂN HÓA HỌC Đà Nẵng - Năm 2020 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TÔ THỊ NGỌC ÁNH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, PHÂN LẬP VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT 6-HYDROXY-2,6-DIMETHYLOCT-7-ENOIC ACID TỪ PHÂN ĐOẠN DICHLOROMETHANE HOA ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA L.) LUẬN VĂN CỬ NHÂN HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Đà Nẵng - Năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày tháng năm 2020 Tác giả Tô Thị Ngọc Ánh LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập, nghiên cứu hoàn thiện đề tài kh a luận tốt nghiệp em nhận nhiều giúp đỡ: Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Đỗ Thị Thúy Vân trực tiếp hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm cho em suốt trình nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô Khoa H a, Trường ĐH Sư Phạm, người truyền đạt kiến thức quý báu cho em suốt thời gian học tập vừa qua Sau xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè ln động viên, giúp đỡ em trình làm luận luận văn Tuy nhiên kiến thức chun mơn cịn hạn chế thân thiếu nhiều kinh nghiệm thực tiễn nên nội dung báo cáo không tránh khỏi thiếu s t Kính mong nhận đ ng g p ý kiến thầy cô giáo, bạn bè đồng nghiệp để nghiên cứu em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC MỞ ĐẦU .8 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết 4.2 Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm 10 Bố cục luận văn 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11 1.1 Giới thiệu đu đủ 11 1.2 Tình hình nghiên cứu thành phần h a học đu đủ 15 1.2.1 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học đu đủ nước15 1.2.2 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học đu đủ giới16 1.3 Tình hình nghiên cứu hoạt tính sinh học đu đủ .18 1.3.1 Tác dụng trị giun sán 18 1.3.2 Tác dụng hạ huyết áp 18 1.3.3 Tác dụng kháng sinh, kháng nấm 19 1.3.4 Tác dụng trị ung bướu, ung thư 20 1.3.5 Tác dụng chống oxi hóa 22 1.3.6 Các tác dụng dược lý khác 23 1.3.7 Công dụng dân gian 23 1.4 Các phương pháp nghiên cứu tính gây độc tế bào 24 1.4.1 Phương pháp MTT 25 1.4.2 Phương pháp SRB 25 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Nguyên liệu, h a chất, thiết bị nghiên cứu 27 2.1.1 Nguyên liệu 27 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 28 2.2.2 Phương pháp tách tinh chế chất 28 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 28 2.3 Sơ đồ điều chế cao chiết 28 2.4 Thử hoạt tính sinh học 30 2.4.1 Vật liệu 30 2.4.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào in vitro 30 2.4.3 Phương pháp thử tác dụng gây độc tế bào ung thư 31 2.5 Chạy cột sắc ký phần cao dichloromethane 32 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Kết PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT dichloromethane 35 3.2 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP10 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CÁC KÍ HIỆU: d : Doublet (NMR) dd : Doublet of doublet (NMR) J(Hz) : Hằng số tương tác (NMR) Rf : Retention factor m : Multiplet (NMR) s : Singlet (NMR) t : Triplet (NMR) ppm : Parts per million (mg/kg) ppb : Parts per billion (µg/kg) δ : Độ chuyển dịch h a học (NMR) P : Probability CÁC CHỮ VIẾT TẮT NMR : Nuclear magnetic resonance H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance 13 IR : Infrared radiation GC/MS :Gas Chromatography Mass Spectometry OD :Optical Density IC50 : Half maximal inhibitory concentration DMSO : Dimethyl sunfoxide DEPT : Distortionless enhancement by polarisation transfer HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC : Heteronuclear Single Quantum Corelation MMT : 3-[4,5-dimetylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide SRB : Sulforhodamine B UV : Ultraviolet TCA : Trichloroacetic acid CH2Cl2 : Dichloromethane EtOAc : Ethyl acetat MeOH : Methanol EtOH : Ethanol BuOH : Butanol TLC : Thin Layer Chromatography CC : Column Chromatography HEPES : 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid DMEM : Dulbecco's Modified Eagle Medium CP10 : 6-hydroxy-2,6-dimethyloct-7-enoic acid DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất CP9 hợp chất tham Trang 35 khảo 3.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP9 38 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Hình ảnh Đu đủ 12 2.1 Hoa Đu đủ đực Bột hoa Đu đủ đực 27 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 29 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất CP10 từ phân đoạn dịch chiết dichloromethane hoa đu đủ đực 34 3.1 Cấu trúc h a học (a) tương tác HMBC (b) hợp chất CP10 35 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất CP10 36 3.3 Phổ 13C-NMR hợp chất CP10 37 3.4 Phổ HSQC hợp chất CP10 37 3.5 Phổ HMBC hợp chất CP10 38 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây đu đủ (Carica papaya Linn) loại nhiệt đới giàu dinh dưỡng c giá trị kinh tế cao Ở Việt Nam, đu đủ trồng hầu hết tỉnh miền Bắc miền Nam Diện tích trồng đu đủ nước ước khoảng 10 000 – 17 000 hecta với sản lượng khoảng 200 – 350 nghìn Cây đu đủ c lợi loại dễ trồng, sớm, suất cao đồng thời toàn thân, lá, sử dụng với nhiều mục đích khác Ngoài việc lấy tươi, dùng làm nguyên liệu cho chế biến, đu đủ trồng để lấy nhựa, dùng làm thức ăn chăn nuôi Lá đu đủ chứng minh c khả chống oxy h a mạnh, c hoạt tính kháng khuẩn tốt, kháng viêm giảm đau Ngoài ra, dân gian đu đủ sử dụng để sát khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, chữa sốt rét, trừ giun sán… Do đ , nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt tính sinh học đu đủ đưa nước Năm 2006, Đỗ Thị Thảo c cao chiết methanol đu đủ c tác dụng gây độc tế bào ung thư phổi LU với IC50 = 19,2 µg/ml Năm 2001, Phạm Im Mãn cộng chứng minh cao chiết từ đu đủ với cồn c tác dụng ức chế phát triển u báng gây tế bào ung thư Sarcoma TG – 180 chuột nhắt trắng Làm giảm thể tích u, giảm mật độ tế bào ung thư, giảm gia tăng sinh khối u Ngồi ra, kết báo cáo tạp chí nghiên cứu vào tháng 10 năm 2013 Trung tâm nghiên cứu quốc gia, Cục dược điển, Ai Cập cho thấy Ether dầu hỏa chiết xuất từ đu đủ nồng độ 100 µg/ml c tác dụng chống ung thư đáng kể tế bào MCF7 (vú) Gần đây, việc sử dụng hoa đu đủ đực để điều trị bệnh đường hô hấp viêm họng, ho… nhiều người quan tâm Hoa đu đủ đực coi thần dược n chứa nhiều vitamin A, C, E, chiết xuất papain tốt cho hệ  Điều chế cao n – hexane (CPH), chloroform (CPC), dichloromethane (CPD), ethylacetate (CPET) Dồn dịch đặc sau lần chiết, bổ sung lít nước cất cất loại bớt dung môi, phân lớp với n – hexane, chloroform, dichloromethane ethylacetate - Phân lớp với n – hexane, chiết lần, lần khoảng lít n – hexane Sau đ cất loại dung môi áp suất thấp thu 54g cao n – hexane - Phân lớp với chloroform, chiết lần, lần khoảng lít chloroform Sau đ cất loại dung môi áp suất thấp thu 12g cao chloroform - Phân lớp với dichloromethane, chiết lần, lần khoảng lít dichloromethane Sau đ cất loại dung môi áp suất thấp thu 52g cao dichloromethane - Phân lớp với ethylacetate, chiết lần, lần khoảng lít ethylacetate Sau đ cất loại dung mơi áp suất thấp thu 20g cao ethylacetate 2.4 Thử hoạt tính sinh học 2.4.1 Vật liệu - H a chất: L-glutamine, sodium bicarbonate, glucose, HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid), sodium pyruvate, fetal bovine serum, sulforhodamine B, DMSO 10%, trichloroacetic, 5% acetic acid, tris(hydroxymethyl)aminomethane - Mẫu thử: Chất CP10 - Các dòng tế bào thử nghiệm: A549 (ung thư phổi người), MCF-7 (ung thư vú người) Hep3B (ung thư gan người) GS J M Pezzuto, Trường Đại học Hawaii, Mỹ GS Jeanette Maier, trường Đại học Milan, Italia cung cấp 2.4.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào in vitro Các dòng tế bào ung thư người nuôi cấy dạng đơn lớp môi trường nuôi cấy DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) với thành phần kèm theo gồm mM L-glutamine; 1,5 g/L sodium bicarbonate; 4,5 g/L 30 glucose; 10 mM HEPES 1,0 mM sodium pyruvate, bổ sung 10% fetal bovine serum-FBS (Gibco) Tế bào cấy chuyển sau 3-5 ngày với tỉ lệ (1:3) nuôi tủ ấm CO2 điều kiện 37oC, 5% CO2 2.4.3 Phương pháp thử tác dụng gây độc tế bào ung thư Phương pháp thử độ độc tế bào ung thư in vitro Viện Ung thư Quốc gia Hoa Kỳ (National Cancer Institute – NCI) xác nhận phép thử độ độc tế bào chuẩn nhằm sàng lọc, phát chất c khả kìm hãm phát triển tiêu diệt tế bào ung thư điều kiện in vitro Phép thử thực theo phương pháp Monks Phép thử tiến hành xác định hàm lượng protein tế bào tổng số dựa vào mật độ quang học (OD – Optical Density) đo thành phần protein tế bào nhuộm Sulforhodamine B (SRB) Giá trị OD máy đo tỉ lệ thuận với lượng SRB gắn với phân tử protein, đ lượng tế bào nhiều (lượng protein nhiều) giá trị OD lớn Phép thử thực điều kiện cụ thể sau: - Chất thử (10 L) pha DMSO 10% (trong nước cất vô trùng) đưa vào giếng khay 96 giếng để c nồng độ sàng lọc 100  g/mL Chất thử c hoạt tính xác định IC50 nhờ dải nồng độ 100; 20; 4; 0,8 g/mL Mỗi nồng độ mẫu thử chuẩn bị thành giếng - Trypsin h a tế bào thí nghiệm để làm rời tế bào đếm buồng đếm để điều chỉnh mật độ cho phù hợp với thí nghiệm - Thêm vào giếng thí nghiệm lượng tế bào phù hợp (190  L môi trường) để chúng phát triển vòng 3-5 ngày - Một khay 96 giếng khác không c chất thử c tế bào ung thư (190 L) chuẩn bị thành cột để làm đối chứng ngày Sau giờ, đ a đối chứng ngày cố định tế bào trichloroacetic acid –TCA - Sau giai đoạn phát triển tủ ấm CO2, tế bào cố định vào đáy giếng TCA 30 phút, nhuộm SRB 37 oC Đổ bỏ SRB giếng thí nghiệm rửa lần 5% acetic acid để khơ khơng khí nhiệt độ phòng - Cuối cùng, sử dụng dung dịch tris(hydroxymethyl)aminomethane 10 mM 31 để hòa tan lượng SRB bám nhuộm phân tử protein, đưa lên máy lắc đ a, lắc nhẹ 10 phút sử dụng máy ELISA Plate Reader (Bio-Rad) để đọc kết hàm lượng màu chất nhuộm SRB thông qua phổ hấp thụ bước s ng 515-540 nm Phần trăm tế bào bị ức chế c mặt chất thử xác định thông qua công thức sau: % Tế bào bị ức chế = 100% - [OD (chất thử) – OD (ngày 0)] x 100 [OD (đối chứng âm) – OD (ngày 0)] - Các phép thử lặp lại lần để đảm bảo tính xác Ellipticine (Sigma-Aldrich, Mỹ) nồng độ 10  g/ml;  g/ml; 0,4  g/ml; 0,08  g/ml sử dụng làm chất đối chứng dương DMSO 10% sử dụng đối chứng âm Giá trị IC50 (nồng độ ức chế 50% phát triển) xác định nhờ vào phần mềm máy tính TableCurve 2Dv4 (System software Inc., San Jose, California, Mỹ) 2.5 Chạy cột sắc ký phần cao dichloromethane Cao chiết dichloromethane (CPD, 52 g) hòa tan với lượng tối thiểu dichloromethane, sau đ tẩm với 150 g silica gel, cất quay bột tơi khô Tiến hành phân tách hỗn hợp cột silica gel pha thường, rửa giải gradient hệ dung môi dichloromethane/methanol với độ phân cực tăng dần (dichloromethane/methanol, 100:0 → 0:100, v/v) thu phân đoạn CPD1 (20,6 g), CPD2 (4,0 g), CPD3 (2,5 g), CPD4 (3,5 g) CPD5 (15,1 g) Phân đoạn CPD4 (3,5 g) phân tách sắc ký cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải dichloromethane/methanol (20/1, v/v) thu phân đoạn CPD4A (0,6 g), CPD4B (1,5 g) CPD4C (1,1 g) Phân đoạn CPD4A (0,6 g) phân tách cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải dichloromethane/ethyl acetate (2/1, v/v) thu phân đoạn CPD4A1, CPD4A2, CPD4A3 CPD4A4 32 Tiếp tục phân tách phân đoạn CPD4A4 sắc ký cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải dichloromethane/methanol (10/1, v/v) thu hợp chất CP10 (6-hydroxy-2,6-dimethyloct-7-enoic acid) (8 mg) Sơ đồ phân lập hợp chất CP9 (6-hydroxy-2,6-dimethyloct-7-enoic acid) từ cao chiết dichloromethane trình bày hình 2.3: Cao dichloromethane (CPD, 52g) 150g Silica gel CC D:M gradient 100:0→0:100 CPD1 (20,6 g) CPD2 (4,0g) CPD3 (2,5g) CPD5 (15,1g) CPD4 (3,5g) Silica gel CC D:M 20:1 CPD4A (0,6g) CPD4B (1,5g) CPD4C (1,1g) Silica gel CC D:E 2:1 CPD4A1 CPD4A2 CPD4A3 CPD4A4 Silica gel CC D:M 10:1 CP10 (8mg) Hình 2.3: Sơ đồ phân lập hợp chất CP10 từ phân đoạn dịch chiết dichloromethane hoa đu đủ đực 33 - Hợp chất 10 (CP10): 6-hydroxy-2,6-dimethyloct-7-enoic acid - Chất dầu, không màu - Công thức phân tử C10H18O3, M = 186 - Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), 13C-NMR (125 MHz, CDCl3): Bảng 34 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT dichloromethane Hợp chất CP10 phân lập dạng chất dầu khơng màu Hình 3.1: Cấu trúc hóa học (a) tương tác HMBC (b) hợp chất CP10 Bảng 3.1: Số liệu phổ NMR hợp chất CP10 hợp chất tham khảo C δC# 177,5 39,6 34,3 δCa, b 181,0d 39,1 33,9 21,8 42,3 73,2 145,3 111,8 21,5 42,0 73,2 145,0 111,8 2-Me 6-Me 1-OMe 17,3 27,8 51,7 16,9 27,8 - δHa, c (J, Hz) 2,48 (m) 1,68 (m) 1,43 (m) 1,38 (m) 1,53 (m) 5,90 (dd, 11,0; 17,0) 5,20 (d, 17,0) 5,04 (d, 11,0) 1,18 (d, 7,0) 1,28 (s) - δC methyl-6-hydroxy-2,6-dimethyloct-7-enoat [33], ađo CDCl3, b125 # MHz, c500 MHz, dtín hiệu xác định nhờ phổ HMBC Các phổ hợp chất CP10 35 OH COOH Hình 3.2: Phổ 1H-NMR hợp chất CP10 Phổ 1H-NMR CP10 tín hiệu đặc trưng proton olefinic methine …, proton methylene  H 1,18 (H, d, J = 7,0 Hz, H-9) …, proton methyl H 1,28 (3H, s, H-9)… Phổ 13C-NMR HSQC CP10 tín hiệu 11 carbon, đ c carbon carboxylic acid  C 181,0 (C-1), carbon oxymethine  C 73,2 (C-6), carbon olefinic methine  C 145,77 (C-7) 145,0 (C-3), carbon methylene vinylene  C 111,8 (C-8), carbon methylene  C 42,0 (C-5) 21,5 (C-4), carbon methyl C 39,1 (C-2) 73,2 (C-6)… 36 Hình 3.3: Phổ 13C-NMR hợp chất CP10 Hình 3.4: Phổ HSQC hợp chất CP10 37 Hình 3.5: Phổ HMBC hợp chất CP10 Phổ HMBC CP10 thể tương tác… Từ liệu phổ thu kết hợp với liệu phổ hợp chất tham khảo tài liệu [33], cho phép khẳng định hợp chất CP10 - hydroxy 2,6 - dimethyloct - - enoic acid (Hình 4.1) 3.2 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP10 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro hợp chất CP10 ba dòng tế bào ung thư người A549, MCF-7, Hep3B trình bày Bảng 3.2 Bảng 3.2: Hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất CP10 STT Hợp chất CP10 Ellipticine A549 86,03±7,57 0,43±0,04 IC50 (µg/mL) MCF-7 67,49±2,41 0,37±0,03 Hep3B 77,77±5,52 0,50±0,04 Kết luận: Hợp chất CP10 c hoạt tính gây độc tế bào ung thư dòng tế bào ung thư người A549, MCF-7, Hep3B 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ nguyên liệu hoa đu đủ đực ban đầu, phương pháp khác thu cao chiết với dung môi hữu tương ứng: n – hexane, chloroform, dichloromethane, ethyl acetate Từ cao chiết dichloromethane, phương pháp sắc ký cột silicagel, kết hợp với sắc ký lớp mỏng phương pháp phổ đại phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1HNMR, 13 CNMR phổ HSQC, phổ HMBC phân lập xác định cấu trúc chất CP10 6-hydroxy-2,6-dimethyloct-7- enoic acid Kết cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư dòng tế bào ung thư phổi A549, ung thư gan Hep3B, ung thư vú MCF-7 với mức độ khác Kết sở khoa học cho việc định hướng bào chế cao dược liệu thử nghiệm in vitro hướng đến ứng dụng thực tế KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu chiết tách, phân lập thêm xác định thành phần h a học, cấu trúc chất phân lập từ phân đoạn lại dịch chiết dichloromethane hoa đu đủ đực Thăm dị hoạt tính sinh học khác chất phân lập dịch chiết hợp chất phân lập khác 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT: [1] TS Nguyễn Hoài Hương (2013), “Ứng dụng enzym papain thủy phân bánh dầu đậu phộng tạo sản phẩm có giá trị dinh dưỡng cao ứng dụng chăn ni”, Luận văn [2] Trần Thế Tục, Đồn Thế Lư (2004), “Cây Đu đủ kỹ thuật trồng”, Nxb lao động xã hội [3] PGS.TS Giang Thị Kim Liên (2019), “Xác định thành phần hóa học thử nghiệm số hoạt chất sinh học có khả ức chế tế bào ung thư từ hoa đu đủ đực”, Báo cáo t m tắt đề tài khoa học công nghệ cấp [4] Lê Thị Thanh Phương(2017), “Nghiên cứu phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết Chloroform hoa đu đủ đực thu hái Quảng Nam” [5] Hồ Thị Hà (2014), “Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết tách từ Đu đủ(Carica papaya Lin), Luận án tiến s công nghệ sinh học, Đại học Bách khoa Hà nội [6] Nguyễn Tường Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khơi, Trần Mạnh Bình, Phan Quốc Kinh (1983), “Chiết xuất xác định carpaine alkaloid Đu đủ”,Tạp chí dược học số [7] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007) ‘‘Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam”, Tạp chí khoa học ĐHQGHN, khoa học tự nhiên công nghệ, (23), pp 130-134 [8] Hồ Thị Hà (2014), “Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết tách từ Đu đủ (Carica papaya Linn)”, Luận án tiến s , Đại học Bách khoa Hà Nội [9] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tập 1, pp 824-827 40 TIẾNG ANH: [10] Stephen Chinwendu Ukpabi, Emmanuel O., Chukwu Henry C., Ezikpe Chizaram; Department of Chemistry, Abia State Polytechnic, Aba (03/2015), “Chemical Composition Of Carica Papaya Flower (Paw-Paw)” , International Journal of Scientific Research and Engineering Studies (IJSRES), Volume Issue [11] Department of Pure and Industrial Chemistry, Chukwuemeka Odumegwu Ojukwu University, Uli, Anambra State, Nigeria (2017), “Preliminary Pharmaceutical Constituents of Crude Solvent Extracts of Flower and Stalk of Male Carica papaya”, Chemistry Research Journal, Volume Issue [12] Xiuyi Wang, Changying Hu, Qian Ai, Yanfen Chen, Zhiwei Wang & Shiyi Ou (16/3/2015), “Isolation and Identification Carpaine in Carica papaya L Leaf by HPLC-UV Method”, International Journal of Food Properties, Volume 18 Issue 7, Pages 1505-1512 [13] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (8/2002) “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, Phytochemistry, volume 60 Issue 8, pp 873-882 [14] Antonella Canini, Daniela Alesiani, Giuseppe D’Arcangelo, Pietro Tagliatesta (11/2007) “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from carica papaya L leaf”, Article in Journal of food composition and analysis, vol 20, pp 584-590 [15] Marline Nainggolan and Kasmirul(2015), “Cytotoxicity activity of male Carica papaya L flowers on MCF-7 breast cancer cells”,Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 7(5):772-775 , ISSN : 0975-7384 [16] Gillian Stepek, Ann E Lowe, David J Buttle, Ian R Duce (12/2007), “In vitro anthelmintic effects of cysteine proteinases from plants against intestinal helminths of rodents”, Article in Journal of Helminthology, Volume 81 Issue 41 [17] S.A.Ameen, O.M.Azeez, Y.A.Baba, L.O.Raji, A.Basiru, K.T.Biobaku, G J.Akorede, A.O.Ahmed, (2008),“Anthelmintic Potency A.O.Olatunde of Carica papaya I.A.Odetokun seeds against Gastro-intestinal Helminths in Red Sokoto goat”, Research article in Ceylon Journal of Science 47(2) 2018: 137-141 [18] A.E.Eno, O.I.Owo, E.H.Itam, R.S.Konya (2000), “Blood pressure depression by the fruit juice of Carica papaya (L.) in renal and DOCA‐induced hypertension in the rat”, Research Article in Phytotherapy Research [19] Girlandia Alexandre Brasil, Silas Nascimento Ronchi, Andrews Marques Nascimento, Ewelyne Miranda de Lima,Wanderson Romão, Helber Barcellos da Costa, Rodrigo Scherer, José Aires Ventura, Dominik Lenz, Nazaré Souza Bissoli, Denise Coutinho Endringer (2014), “Antihypertensive Effect of Carica papaya Via a Reduction in ACE Activity and Improved Baroreflex”, Biological and Pharmacological Activity Original Papers, Planta Medica 2014; 80(17): 1580-1587 [20] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1996), “Fungicidal activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)-glucosamine on Candida albicans growth”, Mycoses in US Nation Library of Medicine National Institutes of Health , 39, 103-110 [21] PedroChávez-Quintal, Tania González-Flores,Ingrid Rodríguez-Buenfil& Santiago Gallegos-Tintoré (2011), “Antifungal Activity in Ethanolic Extracts of Carica papaya L cv Maradol Leaves and Seeds”, Indian Journal of Microbiology volume 51, pages54–60(2011) [22] Masria Phetheresia Sianipar, Edy Suwarso, Rosidah Rosidah (2018) , “Antioxiadant and anticancer activitives of Hexane fraction from Carica papaya L.”, Semantic scholar, Corpus ID: 212570677 [23] Khaled N Rashed, Gerda Fouche (2013), “Anticancer Activity of Carica papaya Extracts in vito and Phytochemical Analysis”, Research Article in Greener Journal of Pharmacy and Pharmacology, Vol (1), pp 001-005 42 [24] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah Abdullah Sani (2002) “Antiproliferative Activity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines”, Research Article in Journal of Medical Sciences, vol 2.Isuae 2, page 55-58 [25] Rumiyati, Sismindari dan Ariyani (2006) “Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl - in breast cancer cells line”, Majalah Farmasi Indonesia, Vol 17 No 4, pp 170 – 176 [26] E.V.Mikhalchik, A.V.Ivanova, M.V.Anurov, S.M.Titkova, L.Yu Penkov, Z F Kharaeva & L G Korkina(2004), “Wound-Healing Effect of Papaya-Based Preparation in Experimental Thermal Trauma”, Bulletin of Experimental Biology and Medicine volume 137, pages560–562 [27] Maisarah A.M., Nurul Amira B., Asmah R and Fauziah O (2013) “Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya”, International Food Research Journal, Vol 20 Issue 3, p1043-1048 6p [28] Bamidele Owoyele, Olubori M Adebukola, Adeoye A Funmilayo and Ayodele O Soladoye (2008), “Anti - inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave”, Article in Inflammopharmacology, 16 (2008), pp 168 – 173 [29] Bungom Sripanidkulchai, Varima Wongpanich, Pisamai Laupattarakasem , Jamsai Suwansaksri J (2001), “Diuretic effects of selected Thai indigenous medicinal plants in rats”, Article in Journal of Ethnopharmacology, 75(2-3):185-90 [30] Mundayat Gopalakrishnan , M.R.Rajasekharasetty (1978 ), “Effect of papaya(Carica papaya Linn) on pregnancy and estrous cycle in albino rats of Wistar strain”, Indian J Physiol Pharmacol, Jan-Mar;22(1):66-70, Corpus ID: 28405727 43 [31] Lohiya NK, Kothari LK, Mani vannan B, Mishra PK, Pathak N (2000), “Human sperm immobilization effect of Carica papaya seed extracts: an in vitro study”,Asian J Androl, Jun;2(2):103-9 [32] Scudiero D.A., Shoemaker R.H., Kenneth D.P., Monks A., Tierney S., Nofziger T.H., Currens M.J., Seniff D., Boyd M.R (1988), “Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”, Cancer Reseach.48: 4827 – 4833 [33] S.A.S Pope, G.E Burtin, P.T Clayton, D.J Madge, D.P.R Muller (2001), “New synthesis of (±)-α-CMBHC and its confirmation as a metabolite of α-tocopherol (vitamin E)”, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 9(5), pp 1337-1343 WEBSITE: [34] https://vi.wikipedia.org/wiki/H%E1%BB%8D_%C4%90u_%C4%91%E1 %BB%A7 [35] https://vi.wikipedia.org/wiki/%C4%90u_%C4%91%E1%BB%A7 [36] https://tuoitre.vn/goc-tu-do-lao-hoa-va-benh-tat-1246969.htm [37] https://caythuocdangian.com/cay-du-du/ 44 ... TÔ THỊ NGỌC ÁNH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, PHÂN LẬP VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HỢP CHẤT 6- HYDROXY -2 ,6- DIMETHYLOCT- 7- ENOIC ACID TỪ PHÂN ĐOẠN DICHLOROMETHANE HOA ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA L.)... HMBC phân lập xác định cấu trúc chất CP10 6- hydroxy -2 ,6- dimethyloct- 7- enoic acid Kết cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư dòng tế bào ung thư phổi A549, ung thư. .. độc tế bào ung thư hợp chất CP10 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro hợp chất CP10 ba dòng tế bào ung thư người A549, MCF -7, Hep3B trình bày Bảng 3 .2 Bảng 3 .2: Hoạt tính gây độc