Nghiên cứu sự khác biệt về di truyền ở mức độ phân tử giữa các giống bạch đàn lai sinh trưởng nhanh và chậm làm cơ sở cho chọn giống sớm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP NGUYỄN VIỆT TÙNG NGHIÊN CỨU SỰ KHÁC BIỆT VỀ DI TRUYỀN Ở MỨC ĐỘ PHÂN TỬ GIỮA CÁC GIỐNG BẠCH ĐÀN LAI SINH TRƯỞNG NHANH VÀ CHẬM LÀM CƠ SỞ CHO CHỌN GIỐNG SỚM CHUYÊN NGÀNH: LÂM HỌC MÃ SỐ: 60.62.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC LÂM NGHIỆP NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN VIỆT CƯỜNG TS NGUYỄN VĂN VIỆT Hà Nội, 2015 i CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan, cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực có kế thừa số liệu sinh trưởng sử dụng số liệu hai đề tài nghiên cứu khoa học: “ Nghiên cứu lai tạo giống số lồi bạch đàn, keo, tràm, thơng” “Nghiên cứu chọn giống bạch đàn lai thị phân tử” Nếu nội dung nghiên cứu trùng lặp với cơng trình nghiên cứu cơng bố, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tuân thủ kết luận đánh giá luận văn Hội đồng khoa học Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Người cam đoan Nguyễn Việt Tùng ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Việt Cường – Bộ môn Lai Giống – Viện nghiên cứu Giống Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình làm việc, học tập hồn thành luận văn Trong q trình học tập thực luận văn nhận nhiều hướng dẫn, giúp đỡ từ phía thầy giáo, đồng nghiệp, bạn bè quan, nhà trường Nhân đây, xin gửi lời cảm ơn tới cô, chú, anh, chị bạn đồng nghiệp môn Lai Giống Viện nghiên cứu Giống Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp, TS Nguyễn Văn Việt – Viện Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp – Trường Đại học Lâm nghiệp giúp đỡ suốt thời gian làm việc học tập Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè ln hết lịng ủng hộ, động viên năm qua Luận văn phần đề tài “Nghiên cứu chọn giống bạch đàn lai thị phân tử” có kế thừa số liệu nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu lai tạo giống số loài bạch đàn, keo, tràm, thông” Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Học viên Nguyễn Việt Tùng iii MỤC LỤC Trang Trang phu ̣ bià Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mu ̣c lu ̣c iii Danh mu ̣c các ký hiêu, ̣ các chữ viế t tắ t v Danh mu ̣c các bảng vi Danh mu ̣c các hình vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Những nghiên cứu tuyển chọn giống bạch đàn suất cao 1.1.1 Các nghiên cứu nước 1.1.2 Các nghiên cứu nước 1.2 Cơ sở khoa học ứng dụng kỹ thuật phân tử chọn giống trồng 1.3 Nghiên cứu, phát triển thị phân tử chọn giống lâm nghiệp 12 1.3.1 Các nghiên cứu nước 13 1.3.2 Các nghiên cứu Việt Nam 18 Chương MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1.Mục tiêu nghiên cứu 25 2.2.Đối tượng phạm vi, địa điểm nghiên cứu 25 2.3.Nội dung nghiên cứu 25 2.4.Phương pháp nghiên cứu 26 2.4.1.Tách chiết ADN tổng số 26 2.4.2.Điện di ADN tổng số sản phẩm PCR 27 iv 2.4.3.Phương pháp kiểm tra chất lượn nồng độ ADN máy quang phổ 31 2.4.4.Phương pháp PCR 32 2.4.5.Phương pháp khảo nghiệm giống, thu thập phân tích số liệu 34 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 36 3.1.Đánh giá sinh trưởng giống bạch đàn lai lựa chọn 36 3.2.Xác định thị SSR đa hình 46 3.2.1.Tách chiết ADN tổng số 46 3.2.2.Sàng lọc thị SSR đa hình 49 3.3.Phân tích khác biệt mức độ phân tử giống bạch đàn lai 52 3.3.1.Điện di sản phẩm PCR với thị đa hình ghi nhận số liệu 52 3.3.2.Sự khác biệt mức độ phân tử giống bạch đàn lai sinh trưởng nhanh, sinh trưởng chậm 57 3.4.Phân tích khác biệt di truyền giống bạch đàn lai 63 3.4.1.Quan hệ di truyền 10 tổ hợp bạch đàn lai 63 3.4.2.Quan hệ di truyền dòng bạch đàn lai 66 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 71 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN AFLP APS ARN Bp cM CTAB CTPT CU dNTPs EDTA ISSR Kb MAS NST Nu PCR PU QTL RAPD RFLP RNase SDS SNP SSR TBE TE UC UE UP Acid Deoxyribonucleic Amplified fragment length polymorphism Amonium Persulfate Axit Ribonucleic Base pair Centi Morgan Cetyltrimethyl Amonium Bromide Chỉ thị phân tử Dòng bạch đàn lai E camaldunensis x E urophylla Deoxynucleotide triphosphate Ethylenediaminetetra Acetic Acid Inter-Simple sequence repeat Kilo base Marker Assisted Selection Nhiễm sắc thể Nucleotide polymerase chain reaction Dòng bạch đàn lai E pellita E urophylla Quantitative trait locus Random Amplified Polymosphic DNA Restriction Fragment Length Polymorphism Ribonuclease Sodium Dodecyl Sulphate Single nucleotide polymorphism Simple sequence repeats Tris-Boric Acid-EDTA Tris-EDTA Dòng bạch đàn lai E urophylla E camaldunensis Dòng bạch đàn lai E urophylla E exserta Dòng bạch đàn lai E urophylla E pellita vi DANH MỤC CÁC BẢNG 2.1 Tên bảng Thành phần phản ứng PCR - SSR 2.2 Chương trình chạy phản ứng PCR chu kỳ nhiệt TT 3.1 3.2 3.3 Sinh trưởng bạch đàn lai Minh Đức – Bình Phước tuổi Sinh trưởng bạch đàn lai Minh Đức – Bình Phước tuổi Sinh trưởng bạch đàn lai Tân Lập – Bình Phước tuổi Trang 33 33 37 38 40 40 3.5 Sinh trưởng bạch đàn lai Tân Lập – Bình Phước tuổi 12 Sinh trưởng bạch đàn lai Tam Thanh – Phú Thọ tuổi 3.6 Sinh trưởng bạch đàn lai Bầu Bàng – Bình Dương tuổi 7,5 43 3.7 Sinh trưởng bạch đàn lai Kinh Đứng – Cà Mau tuổi 44 3.8 Xếp nhóm sinh trưởng dòng bạch đàn lai nghiên cứu 45 3.9 Kết đo độ hấp thụ bước sóng 260nm, 280nm nồng độ ADN tổng số 14 mẫu bạch đàn lai Danh mục thị SSR đa hình 48 53 3.12 Số liệu điện di thị EMBRA223, EMBRA225 gel polyacrylamide Số liệu thống kê thơng tin đa hình 36 thị 3.13 Số liệu điện di thị EMBRA206 gel polyacrylamide 59 3.14 Số liệu điện di thị EMBRA263 gel polyacrylamide 61 3.15 Số liệu điện di thị EMBRA229 gel polyacrylamide 62 3.16 Khoảng cách di truyền 10 tổ hợp bạch đàn lai 63 3.17 Khoảng cách di truyền 14 dòng bạch đàn lai 66 3.4 3.10 3.11 3.18 3.19 Khoảng cách di truyền nhóm bạch đàn lai sinh trưởng nhanh Khoảng cách di truyền nhóm bạch đàn lai sinh trưởng chậm 41 51 55 68 69 vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình vẽ TT 3.1 Mẫu bảo quản 3.2 Kết tách ADN tổng số gel agarose 1% 3.3 3.4 3.5 Kết tách ADN tổng số mẫu bạch đàn lai sau năm bảo quản gel agarose 1% Kiểm tra sản phẩm PCR gel agarose 1% Điện di sản phẩm PCR tìm thị đa hình gel polyacrylamide 4,5% Trang 46 47 47 50 51 Kết điện di sản phẩm PCR EMBRA223, 3.6 EMBRA225 gel polyacrylamide với 14 mẫu bạch 53 đàn lai 3.7 Kết điện di sản phẩm PCR EMBRA116 gel polyacrylamide với 14 mẫu bạch đàn lai 54 Kết điện di sản phẩm PCR EMBRA102, 3.8 EMBRA153 gel polyacrylamide với 14 mẫu bạch 54 đàn lai 3.9 3.10 Kết điện di sản phẩm PCR EMBRA206 gel polyacrylamide với 14 mẫu bạch đàn lai Kết điện di sản phẩm PCR EMBRA229 gel polyacrylamide với 14 mẫu bạch đàn lai 59 61 3.11 Biểu đồ quan hệ di truyền 10 tổ hợp bạch đàn lai 65 3.12 Biểu đồ quan hệ di truyền 14 dòng bạch đàn lai 67 3.13 3.14 Biểu đồ quan hệ di truyền nhóm bạch đàn lai sinh trưởng nhanh Biểu đồ quan hệ di truyền nhóm bạch đàn lai sinh trưởng chậm 68 70 ĐẶT VẤN ĐỀ Bạch đàn nhóm lồi có khả thích nghi với nhiều vùng sinh thái nên bạch đàn số loài dẫn đầu trồng rừng sản suất giới sáu châu lục 100 quốc gia với tổng diện tích đạt 20,07 triệu khoảng 90-95% giống bạch đàn trồng sản xuất giới thuộc chín lồi phân chi Symphyomyrtus (Brooker, 2000) giống lai chúng (Harwood, 2011) [32], [42], [43] Gỗ bạch đàn sử dụng cho ngành xây dựng, đóng đồ nội thất, nguyên liệu chế biến ván ép, ván dăm ngành công nghiệp giấy sản phẩm sinh khối cho ngành lượng Bạch đàn lai tên gọi chung cho sản phẩm lai tạo hai hay nhiều loài bạch đàn khác Bạch đàn lai quan tâm với ưu điểm vượt trội suất, chất lượng tính chống chịu với điều kiện bất lợi so với giống bố mẹ Cho đến nay, bạch đàn lai lựa chọn ưu tiên trồng rừng sản xuất Việt Nam quốc gia có lâm nghiệp phát triển giới: Brazil, Úc, Ấn Độ, Trung Quốc Bằng phương pháp chọn tạo giống truyền thống, từ giai đoạn năm 1990 đến nhà khoa học Việt Nam lai tạo thành công nhiều giống bạch đàn lai công nhận giống quốc gia giống tiến kỹ thuật Nhờ phát triển tính ứng dụng cao kỹ thuật sinh học phân tử, nhiều hướng nghiên cứu chọn tạo giống trồng lâm nghiệp triển khai năm gần Kỹ thuật sinh học phân tử công cụ hữu hiệu, trợ giúp đắc lực cho chọn giống trồng nhằm khắc phục trở ngại công tác chọn giống truyền thống Đặc biệt, phát triển nhanh chóng số lượng thị phân tử giải phóng nhà chọn giống khỏi khối lượng công việc đồ sộ phải chọn lọc, phát số lượng nhỏ cá thể quan tâm vô số cá thể khác nhờ việc xác định có mặt hay vắng mặt thị phân tử liên kết với allele đặc hiệu mà không cần đánh giá kiểu hình [8] Ở Việt Nam, thời gian để giống lai nhân tạo công nhận phương pháp chọn giống truyền thống phải từ – năm với quy mô khảo nghiệm lớn nhiều lập địa khác Trong đó, dựa thành nghiên cứu đạt từ chọn giống truyền thống kết hợp việc sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử tiết kiệm thời gian chọn giống quy mô khảo nghiệm giống Đây hướng nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu tìm giống sớm đưa vào sản xuất Từ sở trên, luận văn “Nghiên cứu khác biệt di truyền mức độ phân tử giống bạch đàn lai sinh trưởng nhanh chậm làm sở cho chọn giống sớm” đề xuất thực Đây nghiên cứu cần thiết làm sở xác định khác biệt di truyền cho số giống bạch đàn lai kỹ thuật Simple sequence repeats (SSR) 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 Map for Eucalyptus", BMC Genomics, (13) Le Dinh Kha, Nguyen Viet Cuong (2000), "Research on hybridization of some Eucalytus species in Vietnam", Hybrid Breeding and Genetics of Forest Trees, QFRI/CRC-SPF Symposium Noosa, Queensland, Australia, - 14 April, compiled by H S Dungey, M J Dieters and D G Nikles, p 139 - 146 Le Dinh Kha, Ha Huy Thinh, Nguyen Viet Cuong, (2003), “Improvement of Eucalypts for Reforestation in Vietnam”, Eucalypts in Asia (Edited by J.W Turnbull), ACIAR proceedings, (111), 71- 81 Murugan, S and Y Ramasamy (2014), "Microsatellite resources of Eucalyptus: current status and future perspectives", Botanical Studies, 55(1): 73 Myburg, A.A., Grattapaglia, D., Tuskan, G.A., Hellsten, U., Hayes, R.D., et al., (2014), "The genome of Eucalyptus grandis", Nature, 510(7505), 356-362 OECD (2014), Consensus Document on the Biology of Eucalyptus spp., Environment Directorate, Paris, France Rao, D.V (1984), "Provenance trials of Eucalyptus", Indian Forester, 110(1), 28-34 Rezende, G and Rezende, M., (2000), “Dominance effects in Eucalyptus grandis, Eucalyptus urophylla ADN hybrids”, Hybird Breeding ADN Genetics of Forest Trees, QFRI/CRC-SPF Symposium Noosa, QueenslADN, Australia - 14 April, p 93 100 Shen Xihuan (2000), "Hybridization of forest tree species in Chiana", Hybird Breeding ADN Genetics of Forest Trees, QFRI/CRC-SPF Symposium Noosa, Queensland, Australia - 14 April, pp 491 499 Sun, D., Dickinson, G.R (1997), "Ascreeing trial of 28 species conducted on non-saline soil in dry tropical Northeast Australia", Journal of Sustainable Forestry, 5(3-4), 1-13;1 ref, Australia; Queenland.Technical Reports No.34 20 pp Turnbull, J.W (1999), “Eucalyptus plantations”, New Forest, 17, 37-52 Varshney, R.K., Graner, A., Sorrells, M.E., (2005) "Genic 50 51 52 53 54 microsatellite markers in plants: features and applications." Trends in Biotechnology, 23(1): 48-55 Verryn, S.D (2000), "Eucalyptus Hybrid breeding in south Africa", Hybrid Breeding and Genetics of Forest Trees, QFRI/CRC-SPF Symposium Noosa, Queensland, Australia - 14 April, pp 191 199 Vuong T.D., (2013), “Final report to ACIAR on Acacia auriculiformis DNA fingerprinting”, Institute of Forest Tree Improvement and Biotechnology Wang, G., Yang, M (1996), "Traits for indirect selection of windfirmness in E grandis, E urophylla ADN hybrid clones", Tree Improvement for Suistainable Tropical Forestry, Caloundra, QueenslADN, Australia, QFRI-IUFRO, Vol.1, pp 173 - 177 Watanable, H (1987), "A trial of coppicing river red gum (E camaldulensis) in Thailand", Tropical Forestry, (10), 42-44, Thailand Zalapa, J.E., Cuevas, H., Zhu, H., Steffan, S., Senalik, D., Zeldin, E., McCown, B., Harbut, R., Simon, P., (2012) "Using nextgeneration sequencing approaches to isolate simple sequence repeat (SSR) loci in the plant sciences", American journal of botany, 99(2), 193-208 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Danh mục 70 thị phân tử SSR STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Tên mồi Trình tự mồi xi Trình tự mồi ngược Trình tự lặp lại Nhiệt độ gắn mồi (ºC) EMBRA12 EMBRA147 EMBRA206 EMBRA219 EMBRA154 EMBRA110 EMBRA126 EMBRA158 EMBRA164 EMBRA195 EMBRA57 EMBRA68 EMBRA218 EMBRA114 EMBRA125 EMBRA189 EMBRA239 EMBRA49 EMBRA231 aggatttgtggggcaagt gcacggtactcgatcataga gaacagctactcgtcgattc gattccactgcggccagaca tggatggtcaacggcgta tgcctactgttattcggga gtagtccctgacgcaaac gtgcagatatcaccacct ccttgttgagctcctgtct gaatcactaatcgaactagg ccttctctctcttggaatac gatgacttctccttccgt tcagtaatcagatttgcgct aggcgatgactgttatcaa ttcaagaaatcatcgacaaa cgtgcttttgaggctct aagagagagtgattggcgag attattggttcatattgaaaacc gtcattgttgcgatcactgc gttccccattttcatgtcc tgagataggattgcgcgt gtaaccaggcttggacgat cgaacgtaagactaggtccgaaga catgcattggccattggt tgggggaaggtataaaagg agtacgatattttcgcgagt cattcagttcccagtacc actatcagcgtcctgcaa ggagttacgttctttcactt atagccagtgaaagtgagg tggcttacggtagaacac ctctcaggcgattgatggt acttccaaaattccccac tcgcatcatagaagtcgtc gattgaggatgagtggtc ctgtgacactaggcatgttg agatagagattgagtgagaccc acgtgacttggttgatctgc (ag)22 (ag)n (ga)8aa(ga)11 (ga)17 (ct)19 (ct)28 (tcctc)4tcc (ct)18 (ct)26 (ct)18 (ga)24 (ag)28 (ag)20 (tc)17 (ga)26 (ct)29 (ct)17a(ca)14 (ga)24gg(ga)8 (ag)20 (ct)21 56 56 57 57 60 54 58 56 60 56 56 58 57 56 56 56 56 54 50 Kích thước Allele (bp) Vị trí NST 98 204 316 268 247 110 99 125 127 240 115 108 217 130 132 143 202 132 222 1 1 1,6 2 2 2 2,1 3 3 3,7 STT 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 Tên mồi Trình tự mồi xuôi EMBRA137 EMBRA232 EMBRA99 EMBRA135 EMBRA188 EMBRA214 EMBRA225 EMBRA229 EMBRA237 EMBRA54 EMBRA104 EMBRA187 EMBRA20 EMBRA233 EMBRA51 EMBRA8 EMBRA81 EMBRA112 EMBRA145 EMBRA167 ctcgtcttgcacgctctctt tccttatcgtcaattcttgc ctaatcatgagggggaag ctgacttggccggtacata gagcgagatctaatcttc ccttccacttcttcaggt agtgcagcattgagttcc agaacgttaactcctaaggt tgccaagaacctattaatcg tgtatgaggtacatccgg caccgatctccactatgc ctcatgcatagctgctactc gtgagtgggtatccatcg gatgcacttatctccaccaa gatgcattcctttttttcc cacaactaaaaatcaaaaccc catgagttactgcaagaaaag ggcctctttgttcagttg aagccacaccgtgtcagttagc ggagaagtctctactgct Trình tự mồi ngược gagagtgtgttcatgcggct ggtctagcgtgattcatcct ctttctctcagacggtcac aaatctagtcggtctcaaagc ggatgcagttctagagag catcagataatcaagcaagc tgttatctgactgatcaagg ctgcaatacatatcttctcc cttcgtgctataatcaggtc aaagttatcagcgagagttc ttttttcaaggcaaaagtg gcagctcagtgtacattgg gctggaactggtcttgag tgtagcaccagaatgtcagg cattctcttgcatctggac aaagagcagattattacagaagc acagccaaaaaccaaatc catactctaaaaccgcaaca aactcacaggcgcaaggca ccactcacttgttattcc Trình tự lặp lại Nhiệt độ gắn mồi (ºC) Kích thước Allele (bp) Vị trí NST (ag)n (ag)12 (ga)24 (ag)15aat (ag)10 (ct)25 (tc)22 (ga)5gt(ga)8 (ga)20 (ga)25 (ag)17 (ct)11 (ga)9cagg(ga)20 (ag)19 (ag)14 (ag)20 (ag)21 (ct)21 (ct)20 (ct)29 (tc)19 58 56 58 54 56 56 56 56 56 50 60 56 56 56 58 56 60 60 64 56 273 104 89 116 180 151 164 181 123 144 99 193 97 160 115 127 70 187 151 124 4 5 5 5 6 6 6 7 STT 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 Tên mồi Trình tự mồi xuôi EMBRA7 EMBRA116 EMBRA157 EMBRA197 EMBRA205 EMBRA223 EMBRA240 EMBRA47 EMBRA53 EMBRA82 EMBRA140 EMBRA18 EMBRA204 EMBRA217 EMBRA58 EMBRA75 EMBRA95 EMBRA102 EMBRA124 EMBRA153 cacaccgtgtcagttagc ctcctactactggttctatcact tgccagaatgtatcgtcc gcagcaacgtctacctcttcc aggaaggcggattgatgagg tggatgtgaagggagagtg cagcaacgtctacctcttcc agaaccctctataaaacccc attagcttttctgtaacccg ggagacagacattttgtcg ggtttgataggtggattggg cagctaggatgttagacttgg ctcgtgtggttatgtgaact cgtgtggttatgtgaact caccaactggtactatgaggat ctctcggtatcttctcagctag gttcaaaaggaaaaagacgt ggctagtgatccaaacatg tgtggacatgatagatgaagt cacacttctagtccatcc Trình tự mồi ngược aataaggaggattccatgg tcctgctctttctctctcta tctggcttctttcttgttg ctactgtacgttgagcgaagc gaacggacggaggtgagcta gagtgctgtgtcgtaggct ccagttccgactagtgttcc gggctagacatgatggag gaatggacaagctctgatg taagattccttgaatgcaca ggttgatgactgagagatgaagg gcacacctagaattttcaaacta gcttgtctactatgcacatga atgagtatatgcctgtgg ttggcttagggtagaacact aaaagacaacagcaatgagc gaagagaaacttggtcctgt gtctctctcgcgtatgaca aattatttcgatagaaacgga ggagtatagaacgattgtg Trình tự lặp lại (ag)15 (tc)21 (gt)16 (tc)21 (ga)21 (ga)16gg(ga)4 (tc)21 (ag)24 (ag)17gt(ag)5 (ga)27 (ct)15 (ag)3gg(ag)19 (tc)25 (tc)25 (ag)20 (ct)37 (ct)19 (ct)29 (tc)34 (ct)24 Nhiệt độ gắn mồi (ºC) Kích thước Allele (bp) Vị trí NST 56 56 56 57 57 58 56 56 60 58 64 56 56 56 56 56 58 54 58 56 115 104 150 279 182 157 344 106 130 105 176 87 147 128 143 100 110 160 90 215 8 8 8 8 9 9 9 10 10 10 STT 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 Tên mồi EMBRA194 EMBRA165 EMBRA191 EMBRA39 EMBRA86 EMBRA263 EMBRA280 EMBRA296 EMBRA341 EMBRA363 EMBRA72 Trình tự mồi xuôi aagataggtggcgcttgag aagaacatgcagcggaga gatccagctgtgtacatc gcattcgtactcattttcaa ctatactgcgaatcaaagca cttcgaatcaagccgtc gccacctcctgccttatatc acaatgagataagcagctcc cctcacactccacgaacacg acaagccatgattgatctg ctggtcaacgtccgaaag Trình tự mồi ngược gggcatgtagaaactcttcg ttgtgatggaccactcaatg aggtgtgtctctctgttg gcatcgagagtggattagtt gattcaatatgtgtgcttgg ttcaggaggtggaggag ttcttggacgctcgttga actggtggcatgtcatgg ctgtgtttcgatggtgatgc agtgtgaaaagggcacag atgctgcagagggcataa Trình tự lặp lại (ct)17 (ct)2c(ct)23 (ct)23(cata)5 (ag)9(ca)11 (ga)25 (ga)n (tc)17 (ct)23 (tc)22 (ag)29 (ag)n Nhiệt độ gắn mồi (ºC) Kích thước Allele (bp) Vị trí NST 56 56 56 54 52 58 56 56 56 58 56 146 129 207 146 96 158 115 311 276 200 124 10 11 11 11 11 n.s n.s n.s n.s n.s n.s Phụ lục 2: Số liệu điện di sản phẩm PCR 36 thị EMBRA với 14 dòng bạch đàn lai Chỉ thị Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 190 190 190 190 190 190 190 Embra229 229-190 180 180 180 180 180 180 180 180 229-180 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 229-160 160 180 180 180 180 180 Embra223 223-175 170 170 170 170 170 223-170 170 165 165 223-165 160 160 160 160 160 160 160 160 160 223-160 160 150 150 150 223-150 195 195 Embra225 225-195 180 180 180 180 180 180 180 180 225-180 180 175 175 175 175 175 175 175 225-175 175 170 170 170 170 170 225-170 165 225-165 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 Embra116 116-160 160 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 116-150 150 165 165 165 165 165 165 165 Embra102 102-165 155 155 155 155 155 155 155 155 155 155 102-155 140 140 140 140 140 140 102-140 140 130 130 130 102-130 130 400 400 400 Embra206 206-400 370 370 370 206-370 340 340 340 340 340 340 340 340 340 206-340 340 300 300 300 300 300 300 300 300 206-300 300 230 230 Embra153 153-230 230 220 220 220 220 220 153-220 190 190 190 190 190 190 153-190 185 185 153-185 Chỉ thị Embra51 Embra114 Embra219 Embra197 Embra54 Embra205 Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 180 180 153-180 180 160 160 160 160 160 160 153-160 170 51-170 165 165 165 165 165 165 165 165 165 165 51-165 160 160 160 160 51-160 155 155 51-155 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 51-150 110 51-110 170 170 170 170 170 170 170 170 170 170 114-170 170 165 165 165 165 165 114-165 150 150 150 150 150 114-150 150 340 340 219-340 320 320 320 320 320 320 320 219-320 320 300 300 300 300 300 219-300 280 280 280 280 280 280 280 219-280 280 175 175 175 175 197-175 170 170 170 170 197-170 160 160 160 160 197-160 160 150 150 150 150 150 150 197-150 130 130 130 130 130 197-130 130 120 197-120 220 220 220 220 220 220 220 220 54-220 200 200 200 200 200 54-200 190 190 190 190 190 190 190 190 54-190 185 54-185 180 180 180 54-180 220 220 205-220 210 210 205-210 Chỉ thị Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 200 200 200 205-200 200 185 205-185 180 180 180 180 180 180 205-185 175 175 175 175 175 205-175 175 170 170 170 205-170 150 205-150 175 175 175 175 175 175 Embra232 232-175 175 165 165 232-165 160 160 160 232-160 155 155 155 232-155 150 150 150 232-150 150 145 145 232-145 140 140 140 140 232-140 240 240 240 240 240 Embra82 82-240 220 220 220 220 82-220 205 205 82-205 200 200 200 200 200 200 82-200 190 190 82-190 160 160 160 160 82-160 150 150 150 150 150 82-150 160 160 160 Embra47 47-160 155 155 47-155 150 150 150 150 150 150 150 150 47-150 148 47-148 145 145 145 47-145 135 135 47-135 170 170 170 Embra86 86-170 160 86-160 Chỉ thị Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 155 155 155 155 155 155 155 155 86-155 150 86-150 145 86-145 140 140 140 140 86-140 135 135 135 135 86-135 130 86-130 115 86-115 105 105 105 105 86-105 150 150 150 Embra104 104-150 145 104-145 145 140 140 140 140 104-140 135 104-135 133 133 133 133 133 104-133 130 130 130 130 130 130 104-130 145 145 Embra99 99-145 140 140 99-140 130 130 130 130 99-130 125 125 125 99-125 120 120 120 120 120 120 99-120 200 Embra124 124-200 175 175 175 175 124-175 170 170 170 124-170 160 160 160 124-160 150 150 124-150 150 140 140 140 140 140 124-140 140 130 130 130 124-130 260 Embra191 191-260 210 191-210 Chỉ thị Embra126 Embra157 Embra263 Embra135 Embra165 Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 200 200 200 191-200 195 195 195 195 195 195 195 195 191-195 195 190 190 191-190 185 185 185 185 185 185 185 191-185 185 180 191-180 155 126-155 155 150 150 150 150 150 150 150 150 150 126-150 135 126-135 135 130 130 130 130 126-130 125 126-125 120 126-120 180 180 180 157-180 170 170 170 157-170 165 165 165 165 165 165 165 157-165 165 150 150 150 150 150 150 150 150 157-150 150 190 263-190 180 263-180 180 170 170 170 170 170 170 263-170 160 160 160 263-160 150 150 150 150 150 150 150 263-150 150 195 195 135-195 195 190 190 190 190 190 135-190 185 185 135-185 182 182 182 182 135-182 182 180 180 180 180 180 135-180 155 165-155 150 150 150 165-150 150 145 165-145 Chỉ thị Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 140 140 140 140 140 165-140 135 135 135 165-135 130 130 130 130 165-130 130 120 120 120 120 165-120 110 165-110 185 Embra214 214-185 175 214-175 175 170 170 170 214-170 160 160 214-160 150 150 150 214-150 140 140 140 140 214-140 135 214-135 130 214-130 125 214-125 120 120 214-120 120 110 110 214-110 100 100 214-100 170 170 170 Embra20 20-170 160 160 160 20-160 150 150 150 150 150 20-150 147 147 147 147 147 20-147 140 140 140 140 140 140 140 20-140 160 160 160 160 160 160 160 Embra12 12-160 155 155 155 12-155 150 150 150 150 12-150 145 145 12-145 140 140 140 140 12-140 135 135 135 12-135 Chỉ thị Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 150 150 150 150 150 Embra194 194-150 140 140 140 140 140 194-140 130 130 130 194-130 125 125 194-125 120 120 120 120 120 120 194-120 120 100 100 100 194-100 200 200 Embra188 188-200 190 190 188-190 190 185 185 188-185 180 180 180 180 180 188-180 175 188-175 170 170 170 170 170 170 170 170 188-170 170 165 165 188-165 160 160 188-160 380 380 Embra240 240-380 370 370 370 240-370 360 360 360 240-360 360 340 340 340 340 340 340 340 240-340 340 330 330 240-330 320 320 320 320 240-320 310 310 240-310 300 240-300 160 160 160 160 160 160 160 Embra53 53-160 145 145 145 145 145 145 145 145 145 145 145 145 145 145 53-145 130 130 130 53-130 140 140 Embra39 39-140 130 130 130 130 130 130 130 39-130 120 39-120 Chỉ thị Allele UC18 UC19 UC1 UC2 UC20 UC75 UC77 UC78 CU90 UC79 UC82 CU91 UC80 UC81 115 115 115 115 115 115 115 115 115 115 115 115 115 39-115 190 190 Embra58 58-190 180 180 180 180 58-180 175 175 58-175 170 170 170 170 58-170 165 165 58-165 160 160 160 160 160 160 58-160 155 155 155 155 155 58-155 135 Embra237 237-135 135 130 130 130 130 130 237-130 120 120 120 237-120 120 115 115 115 237-115 110 110 110 110 110 110 110 237-120 105 105 237-105 90 90 237-90 80 80 237-80 ... Từ sở trên, luận văn ? ?Nghiên cứu khác biệt di truyền mức độ phân tử giống bạch đàn lai sinh trưởng nhanh chậm làm sở cho chọn giống sớm? ?? đề xuất thực Đây nghiên cứu cần thiết làm sở xác định khác. .. 3.3 .Phân tích khác biệt mức độ phân tử giống bạch đàn lai 52 3.3.1.Điện di sản phẩm PCR với thị đa hình ghi nhận số liệu 52 3.3.2 .Sự khác biệt mức độ phân tử giống bạch đàn lai sinh trưởng nhanh, ... bạch đàn lai 63 3.17 Khoảng cách di truyền 14 dòng bạch đàn lai 66 3.4 3.10 3.11 3.18 3.19 Khoảng cách di truyền nhóm bạch đàn lai sinh trưởng nhanh Khoảng cách di truyền nhóm bạch đàn lai sinh trưởng