Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống tràm trà melaleuca alternifolia cheel bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

I Ầ Sau kết thúc chƣơng trình học, chúng em đƣợc trang bị tƣơng đối đầy đủ kiến thức kiến thức chuyên ngành cần thiết cho kỹ sƣ công nghệ sinh học Những nội dung thực hành lớp giúp chúng em có số kỹ định củng cố, hiểu sâu kiến thức lý thuyết học Tuy nhiên kiến thức thực hành lớp chƣa thể cho chúng em nhìn sâu, rộng ngành, chƣa đƣợc liên hoàn kỹ thuật chƣa biết cách giải vấn đề phát sinh Vì vậy, sinh viên sau tốt nghiệp, làm việc quan, doanh nghiệp không tránh khỏi bỡ ngỡ, khó khăn ban đầu Để tránh khởi bỡ ngỡ, khó khăn ban đầu nhƣ giúp sinh viên mở rộng thêm kiến thức, hoàn thiện kiến thức đƣợc học trƣờng bƣớc đầu vận dụng kiến thức vào thực tiễn sản xuất Đƣợc đồng ý Nhà trƣờng, Viện công nghệ sinh học Lâm Nghiệp hƣớng dẫn tận tình Th.S Vũ Thị Huệ, em tiến hành thực đề tài khóa luận tốt nghiệp: “Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống Tràm trà (Melaleuca alternifolia Cheel) kỹ thuật nuôi cấy in vitro” Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo trƣờng ĐH Lâm nghiệp, Viện công nghệ sinh học Lâm nghiệp, cán nhân viên Viện, đặc biệt Th.S Vũ Thị Huệ, em xin đƣợc cảm ơn gia đình, bạn bè ln bên cạnh động viên tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành đề tài N 26 t ệ Vũ T ị Hợp MỤC LỤC L I ĐẦU MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật hái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Sơ lƣợc lịch sử phát triển Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật Các giai đoạn nhân giống in vitro Giai đoạn chu n bị Giai đoạn tái sinh mẫu nuôi cấy Giai đoạn nhân nhanh Giai đoạn tạo hoàn ch nh Giai đoạn đƣa mơ ngồi vƣờn ƣơm Các điều kiện cần thiết nuôi cấy mô – tế bào thực vật 10 ôi trƣờng nuôi cấy 10 Vật liệu nuôi cấy 14 Điều kiện vô tr ng 14 ng dụng nuôi cấy mô – tế bào thực vật công tác giống trồng 14 1.6 Giới thiệu tràm trà: 16 1.6.1 Phân loại, nguồn gốc, phân bố 16 6.2 Đặc điểm sinh học 17 1.6.3 Giá trị sử dụng giá trị kinh tế 17 1.6.4 Một số nghiên cứu loài Tràm 22 PHẦN 2: MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN C U 25 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 25 2.1.1 Mục tiêu chung 25 2.1.2 Mục tiêu cụ thể: 25 2.2 Nội dung nghiên cứu 25 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 Phƣơng pháp luận 25 .2 Địa điểm điều kiện bố trí thí nghiệm 26 2.3.3 Vật liệu nghiên cứu 26 Phƣơng pháp nghiên cứu cụ thể 26 Phƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 31 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu tái sinh chồi 32 3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 35 3.3 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 37 3.4.Ảnh hƣởng loại hàm lƣợng đƣờng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 41 3.5 Ảnh hƣởng điều kiện nuôi đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 43 PHẦN 4: KẾT LUẬN TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 46 4.1 Kết luận 46 4.2 Tồn 46 4.3 Kiến nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ BIỂU DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viế đầy đủ Chữ viết tắt BAP 6- benzyl amino purine kinetin 6-furfuryl amino purine NAA α- naphthalene acetic IBA Indole butyric acid ĐHST Điều hòa sinh trƣởng MS ôi trƣờng MS (Murashige & Skoog-1962) MS* ôi trƣờng MS cải tiến WPM ôi trƣờng thân gỗ DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu 27 Bảng 2.2: Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 28 Bảng 2.3: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 29 Bảng 2.4: Ảnh hƣởng loại hàm lƣợng đƣờng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 30 Bảng 2.5: Ảnh hƣởng điều kiện nuôi đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 30 Bảng 3.1: Ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu tái sinh chồi 33 Bảng 3.2: Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 35 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 38 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng loại hàm lƣợng đƣờng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 41 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng điều kiện nuôi đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi 44 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Tinh dầu tràm trà thị trƣờng 18 Hình 1.2: Rừng tràm trà v ng Đồng Tháp ƣời 20 Hình 3.1: Ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu tái sinh chồi 33 Hình 3.2: Mẫu tái sinh chồi môi trƣờng MS* (15 ngày) 34 Hình 3.4: Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả nhân nhanh chồi 36 Hình 3.5: Mẫu chồi tràm trà môi trƣờng dinh dƣỡng khác 37 Hình 3.6: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 39 Hình 3.7: Bình chồi tràm trà mơi trƣờng TC6 40 Hình 3.8: Ảnh hƣởng loại hàm lƣợng đƣờng đến khả nhân nhanh chồi 42 Hình 3.9: Ảnh hƣởng điều kiện nuôi đến khả nhân nhanh chồi 44 Hình 3.10: Mẫu cấy mơi trƣờng N4 45 ẶT VẤN Ề Tinh dầu nguồn hƣơng liệu có nguồn gốc thiên nhiên cỏ Từ thời cổ đại cung điện hay gia đình quyền quý Trung Hoa, Ai Cập, Hy Lạp… tinh dầu đƣợc chƣng cất sử dụng Ngày với phát triển ngƣời đặc biệt ý đến ƣa chuộng Mỗi loại tinh dầu có m i đặc trƣng hƣơng thơm riêng giúp thƣ thái, thoải mái, dễ chịu Tinh dầu đƣợc sử dụng rộng rãi hỗn hợp chất có giá trị cao lĩnh vực dƣợc ph m, thực ph m xuất kh u Tràm trà (Melaleuca alternifolia Cheel) loài nguyên sản loài để sản xuất tinh dầu tràm Australia, đƣợc Trung Quốc nhiều nƣớc khác trồng để lấy tinh dầu Hiện Tràm trà lồi có tiềm khơng ch cho tinh dầu cao mà cịn tác dụng có lợi khác mà chúng đem lại Dầu Tràm trà chứa thành phần tuyệt vời có khả chữa trị bệnh gây nấm, vi khu n, virut Nhờ dầu Tràm trà đƣợc tinh chế để điều trị bệnh da: mụn trứng cá, da nhờn, phồng rộp…Ngồi cịn giúp làm giảm đau tay khớp, trị vết trùng cắn phịng ngừa cảm mạo, trúng gió Thậm chí sử dụng tinh dầu tràm trà liều lƣợng cao không gây phản ứng phụ lên phận khác thể Do tinh dầu Tràm trà đƣợc d ng để sản xuất dầu gội đầu, sữa tắm, [24] Ngày nay, việc dùng loại thuốc có nguồn gốc thiên nhiên ngày đƣợc ƣa chuộng Các cơng trình nghiên cứu chúng không ngừng phát triển hiệu mang lại từ loại thuốc cao so với loại thuốc có nguồn gốc tổng hợp Qua cơng trình nghiên cứu cho thấy, sử dụng loại thuốc có nguồn gốc thực vật, có tác dụng phụ có hại lí quan trọng mà ngày loại thuốc có nguồn gốc thiên nhiên phát triển Việt Nam, số biệt dƣợc nhƣ ecaseptil, Eucaseptil đƣợc sản xuất từ tinh dầu tràm có tác dụng tốt rút ngắn thời gian điều trị Ngồi tinh dầu tràm cịn đƣợc sử dụng công nghiệp mỹ ph m hƣơng liệu Vì vậy, việc nhân giống để sản xuất hàng loạt Tràm trà có hàm lƣợng tinh dầu cao, đáp ứng cho sản xuất việc làm cấp thiết có ý nghĩa Xuất phát từ thực tiễn sở trên, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống Tràm trà (Melaleuca alternifolia Cheel) kỹ thuật nuôi cấy in vitro” PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ị ế ậ Nuôi cấy mô tế bào thực vật phƣơng pháp sản xuất hàng loạt từ phận m , b ng nuôi cấy chúng ống nghiệm điều kiện vơ tr ng có điều kiện thích hợp đƣợc kiểm sốt [11] Bộ phận đem ni cấy mẫu thƣờng nhỏ so với nhân giống truyền thống đƣợc tiến hành khơng gian nhỏ bình, phịng nên hình thức cịn gọi vi nhân giống Vì đƣợc thực điều kiện vơ tr ng ống nghiệm với môi trƣờng dinh dƣỡng ph hợp đƣợc kiểm soát gọi nhân giống ống nghiệm in vitro) Nhân giống in vitro đƣợc khởi xƣớng vào cuối kỷ 19, trình phát triển khái quát qua giai đoạn sau: - Giai đoạn : Giai đoạn khởi xƣớng (1898-1930) Gottlieb Haberlandt (1902), nhà thực vật học ngƣời Đức, đặt móng cho ni cấy mơ tế bào thực vật Ơng đƣa giả thiết tính tồn tế bào sách “Thực nghiệm nuôi cấy tế bào tách rời”[13] Đây tảng lý thuyết nuôi cấy mơ tế bào sau Tuy nhiên, thí nghiệm Haberlandt với tế bào mơ mềm, biểu bì bị thất bại chúng khơng phân chia đƣợc Nhƣng sau Garrison 90 - 907 nuôi cấy thành công tế bào thần kinh ếch huyết tƣơng Trên sở nhà khoa học tiến hành nhiều thí nghiệm dựa tảng có nhà khoa học trƣớc Năm 922, otte học trò Haberlandt với Robbins lặp lại thí nghiệm Haberlandt với đ nh sinh trƣởng tách từ đầu rễ ngô Trên mơi trƣờng lỏng có chứa đƣờng glucose muối khống đầu rễ đƣợc ni hồn thiện mơi trƣờng nuôi cấy - Giai đoạn 2: Giai đoạn nghiên cứu sinh lý (1930-1950) Giai đoạn đánh dấu thành cơng White trì đƣợc sinh trƣởng đầu rễ cà chua thời gian dài mơi trƣờng lỏng có chứa đƣờng, số muối khoáng dịch chiết nấm men Theo hƣớng khác, Gautherets thành công nuôi cấy mô tƣợng tầng gỗ tìm mơi trƣờng thích hợp Cũng giai đoạn tìm đƣợc vai trị thúc đ y sinh trƣởng ni cấy hàng loạt vitamin nhóm B Đồng thời chất kích thích sinh trƣởng Went Thimann phát Tạo thuận lợi cho nuôi cấy mô thực vật Nhiều chất kích thích sinh trƣởng đƣợc ni cấy tổng hợp thành công thời gian 1941- nhƣ: Napthalenacetic acid NAA , axit 2.4D- dichlorophenoxy acetic (2.4D) Năm , Skoog phát chế ph m thủy phân tinh dịch cá b kích thích sinh trƣởng rõ rệt ni cấy mảnh mơ thân thuốc Một năm sau, chất đƣợc tổng hợp thành công Skoog gọi Kinetin có tác dụng kích thích phân bào Việc phát NAA, D, inetin với loại vitamin nƣớc dừa bƣớc tiến có ý nghĩa giai đoạn thứ nuôi cấy mô tế bào thực vật - Giai đoạn : Giai đoạn nghiên cứu phát sinh hình thái Skoog iller 7-1960) chứng minh biệt hóa rễ, chồi nghiên cứu nuôi cấy mô tủy thuốc phụ thuộc vào nồng độ tƣơng đối auxin, cytokinin từ đƣa quan niệm điều khiển hoocmon trình hình thành quan thực vật Thành công Skoog nhiều phát qua trọng mở đầu cho giai đoạn thứ iller dẫn đến nuôi cấy mô tế bào thực vật Năm 960, Bergman tái sinh tế bào đơn thuốc môi trƣờng lỏng 10 Phùng C m Thạch, Nguyễn Thị Hải Hồng, Phạm Thị Th y Hƣơng (2000) Đ i lượng chất lượng dầu tràm theo loài xuất xứ Kết nghiên cứu khoa học công nghệ Lâm nghiệp iai đoạn 1996-2000, NXB Nông nghiệp, tr290-295 11 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật – nghiên cứu ứng dụng, NXB nông nghiệp, Hà Nội 12 Ngơ Đình Quế, 2006, “ phục phát triển rừng ngập măn rừng Tràm Việt Nam”, NXB Nông nghiệp 13 Nguyễn Văn Uyển cs 1993, Nuôi cấy mô tế bào thực vật - nghiên cứu ứng dụng, NXB nông nghiệp, Hà Nội 14 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học (tập 2), NXB Giáo dục Tài liệu Tiếng Anh: 15 Gamborg, O, L, G, C, Phillips Organ culture-bG Fundamental 997 , “Plant Cell, Tissue and ethods cell spinger”, Lab anual 16 Sharma J, K, (1994), Pathological investigations in forest nurseries and plantations in Vietnam, FAO VIE/92/022, Hanoi, Vietnam, 46 pp Các trang web: 17.http://www.ioop.org.vn/vn/NCTK/Thanh-Tuu-Cua-Vien/Ban-Tin-KhoaHoc-Cong-Nghe/Kha-Nang-Thich-Nghi-Cua-Cay-Tram-Tra-MelaleucaAlternifolia-O-Viet-Nam/ 18.http://vi.wikipedia.org/wiki/Chi tram 19.http://www.kilobook.com 20.http://www.thuvienluanvan.com 21 http://www.sinhhocvietnam.com 22.http://www.kinhtenongthon.com.vn 23.http://www.tinhdauthiennhien.org 24 http://phunu.net/wiki/khampha/congdungcuadautram PHỤ BIỂU Phụ biểu 01 : Thành phần môi trƣờng MS Thành phần môi trƣờng Hàm lƣợng mg l KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 332,2 FeSO4.7H2O 27,84 Na2.EDTA 37,24 MnSO4 16,9 ZnSO4 8,6 H3BO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4 0,025 CoCl2 0,025 Glycine Myo-inositol 100 Thiamin HCl 0,4 Pyridoxyl HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Phụ biểu 02 : Thành phần môi trƣờng MS* Thành phần môi trƣờng Hàm lƣợng mg l KNO3 950 NH4NO3 825 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 332,2 FeSO4.7H2O 27,84 Na2.EDTA 37,24 MnSO4 16,9 ZnSO4 8,6 H3BO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4 0,025 CoCl2 0,025 Glycine Myo-inositol 100 Thiamin HCl 0,4 Pyridoxyl HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Phụ biểu 03 : Thành phần môi trƣờng WPM Thành phần môi trƣờng Hàm lƣợng mg l NH4NO3 40 Ca(NO3)2 55,6 K2SO4 99 MgSO4 37 MnSO4 2,23 KH2PO4 17 CaCl2 9,6 FeSO4.H2O 27,84 Na2.EDTA 37,24 ZnSO4.7H2O 0,86 CuSO4 0,0025 H3BO3 0,26 Na2MoO4.2H2O 0,025 NaH2PO4 0,085 Glycine Myo - inositol 100 Thiamin HCl 0,4 Pyridoxyl HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Phụ biểu 04.1 : Ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu tái sinh chồi CTTN KT1 KT2 KT3 Lần TN TB TB TB Tổng số mẫu 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Số mẫu 17 15 14 15,33 20 24 22 22 23 27 26 25,33 Tỷ lệ mẫu 56,67 50,00 46,67 51,11 66,67 80,00 73,33 73,33 76,67 90,00 86,67 84,44 Số mẫu tái sinh 15 13 12 13,33 17 19 15 17,00 6,33 Tỷ lệ tái sinh (%) 50,00 43,33 40,00 44,44 56,67 63,33 50,00 56,67 20,00 26,67 16,67 21,11 Phụ biểu 04.2: Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến tỷ lệ mẫu Anova: Single Factor SUMMARY Groups KT1 KT2 KT3 Count Sum Average Variance 153,34 51,11333 25,92963 220 73,33333 44,42223 253,34 84,44667 48,12963 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 1728,346 236,963 Total 1965,309 df MS F 864,1728 21,88121 39,49383 P-value F crit 0,001752868 5,143253 Phụ biểu 04.3: Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tái sinh chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups KT1 KT2 KT3 Count Sum Average Variance 133,33 44,44333 25,92963 170 56,66667 44,42223 63,34 21,11333 25,92963 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 1957,738 192,563 Total 2150,301 df MS F 978,8691 30,50023 32,09383 P-value F crit 0,000718159 5,143253 Phụ biểu 05.1: Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi Môi trƣờng MS MS* WPM Số mẫu cấy ban đầu 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Số lần lấy số liệu Số mẫu tạo cụm chồi Tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi (%) TB TB TB 22 24 27 24,33 27 27 29 27,67 22 26 21 23 73,33 80,00 90,00 81,11 90,00 90,00 96,67 92,22 73,33 86,67 70,00 76,67 Số chồi Hệ số nhân hình chồi lần thành 60 2,00 59 1,97 54 1,80 57,67 1,92 85 2,83 82 2,73 88 2,93 85 2,83 55 1,83 53 1,77 58 1,93 55,33 1,84 Phụ biểu 05 2: Bảng ANOVA ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả nhân nhanh chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups MS MS* WPM Count 3 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 1,801955556 0,056333333 Total 1,858288889 Sum 5,77 8,49 5,53 df Average 1,923333333 2,83 1,843333333 Variance 0,011633333 0,01 0,006533333 MS 0,900977778 0,009388889 F 95,96213018 P-value 2,78584E-05 F crit 5,1432528 Phụ biểu 06.1: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi CTTN ĐC CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 CT7 Số chồi ban đầu 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Chất ĐHST mg l BAP Kinetin 0 NAA 0,2 0,5 1,5 0,2 0,2 0,2 0,15 0,5 Số mẫu Số lần tạo cụm lặp chồi TB TB TB TB TB TB TB 0 0 24 26 25 25,00 27 28 25 25,00 26 28 28 27,33 28 26 28 27,33 26 29 28 27,67 30 29 30 29,67 29 26 28 Tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi 0,00 0,00 0,00 0,00 80,00 86,67 83,33 83,33 90,00 93,33 83,33 83,33 86,67 93,33 93,33 91,11 93,33 86,67 93,33 91,11 86,67 96,67 93,33 92,22 100,00 96,67 100,00 98,89 96,67 86,67 93,33 Số Hệ số chồi nhân sau chồi tuần lần 30 1,00 30 1,00 30 1,00 30 1,00 67 2,23 65 2,17 62 2,07 64,67 2,16 67 2,23 69 2,30 73 2,43 69,67 2,32 72 2,40 69 2,30 75 2,50 72 2,40 77 2,57 79 2,63 81 2,70 79 2,63 83 2,77 85 2,83 86 2,87 84,67 2,82 158 5,27 156 5,20 137 4,57 150,33 5,01 127 4,23 125 4,17 128 4,27 CT8 CT9 CT10 CT11 CT12 CT13 CT14 CT15 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 1,5 0,2 0,5 1,5 0,1 TB TB TB TB TB TB TB TB TB 27,67 25 29 29 27,67 29 27 27 27,67 28 28 28 28,00 28 29 27 28 26 27 25 29 28 27 27 27,33 28,00 27 25 26,67 28 27 28 27,67 92,22 83,33 96,67 96,67 92,22 96,67 90,00 90,00 92,22 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 96,67 90,00 93,33 86,67 90,00 83,33 96,67 93,33 90,00 90,00 91,11 93,33 90,00 83,33 88,89 93,33 90,00 93,33 92,22 126,67 125 120 110 118,33 111 116 105 110,67 103,00 110 99 104 133 126 128 129 122 125 130 126,5 117 120 116 117,67 113 110 105 109,33 106 95 100 100,33 4,22 4,17 3,67 3,94 3,70 3,87 3,50 3,69 3,43 3,67 3,30 3,47 4,43 4,20 4,27 4,30 4,07 4,17 4,33 4,22 3,90 3,87 3,92 3,77 3,67 3,50 3,64 3,53 3,17 3,33 3,34 Phụ biểu 06.2: Bảng ANOVA ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 3 CT1 6,47 2,15666667 0,006533333 CT2 6,96 2,32 0,0103 CT3 8,47 2,82333333 0,002533333 CT4 7,9 2,63333333 0,004233333 CT5 7,2 2,4 0,01 CT6 15,04 5,01333333 0,148633333 CT7 12,67 4,22333333 0,002533333 CT8 11,84 3,94666667 0,064633333 CT9 11,07 3,69 0,0343 CT10 10,4 3,46666667 0,035233333 CT11 12,9 4,3 0,0139 CT12 12,57 4,19 0,0172 CT13 11,77 3,92333333 0,004633333 CT14 10,94 3,64666667 0,018633333 CT15 10,03 3,34333333 0,032533333 df MS ANOVA Source of Variation SS Between Groups 47,16988 15 3,14465875 Within Groups 0,811667 32 0,02536458 Total 47,98155 47 F 123,9783326 P-value 5,54721E-24 F crit 1,991989505 Phụ biểu 07 1: Ảnh hƣởng loại hàm lƣợng đƣờng đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi CTTN Đ Đ2 Đ Đ Đ Đ6 Đ7 Số mẫu cấy ban đầu 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Số lần lặp lại TN TB TB TB TB TB TB TB Hàm lƣợng đƣờng glucose sucrose 30 0 30 25 5 25 20 10 10 20 15 15 Số mẫu tạo cụm chồi Tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi Số mẫu sau tuần Hệ số nhân chồi lần 29 28 28 28,33 29 29 27 28 29 30 29 29 30 29 27 28,67 30 30 30 30,00 30 29 30 29,67 29 30 30 29,67 96,67 93,33 93,33 94,44 96,67 96,67 90,00 94,44 96,67 100,00 96,67 97,78 100,00 96,67 90,00 95,56 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 96,67 100,00 98,89 96,67 100,00 100,00 98,89 107 110 112 109,67 98 103 105 102 116 113 118 115,67 116 110 113 113 159 163 168 163 148 137 142 142 149 150 152 150,33 3,57 3,67 3,73 3,66 3,27 3,43 3,50 3,40 3,87 3,77 3,93 3,86 3,87 3,67 3,77 3,77 5,30 5,43 5,60 5,44 4,93 4,57 4,73 4,74 4,97 5,00 5,07 5,01 Phụ biểu 07 1.2: Bảng ANOVA ảnh hƣởng loại hàm lƣợng đƣờng đến khả nhân nhanh chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Đ Đ2 Đ Đ Đ Đ6 Đ7 Count 3 3 3 Sum 10,97 10,2 11,57 11,31 16,33 14,23 15,04 Average 3,656666667 3,4 3,856666667 3,77 5,443333333 4,743333333 5,013333333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups 11,12164762 0,189533333 1,853607937 14 0,013538095 Total 11,31118095 20 SS df MS Variance 0,006533333 0,0139 0,006533333 0,01 0,022633333 0,032533333 0,002633333 F 136,9179271 P-value 1,29634E-11 F crit 2,847726 Phụ biểu 08.1: Ảnh hƣởng điều kiện nuôi đến khả tạo cụm chồi nhân nhanh chồi CTTN N1 N2 N3 N4 N5 Số chồi ban đầu 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Số lần lặp lại TN TB TB TB TB TB Thời gian nuôi tuần Tối Sáng TG mẫu tạo cụm chồi tuần 4 3 2 3 Số mẫu tạo cụm chồi Tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi Số chồi hình thành 28 30 30 29,33 29 29 30 29,33 30 30 30 30,00 30 30 30 30 30 29 30 29,67 93,33 100,00 100,00 97,78 96,67 96,67 100,00 97,78 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 96,67 100,00 98,89 118 122 115 118 123 128 120 124 160 163 167 163 183 188 188 186 123 135 130 129 Hệ số nhân chồi lần 3,93 4,07 3,83 3,94 4,10 4,27 4,00 4,12 5,33 5,43 5,57 5,44 6,10 6,27 6,27 6,21 4,10 4,50 4,33 4,31 Phụ biểu 08.2: Bảng ANOVA ảnh hƣởng điều kiện nuôi đến khả nhân nhanh chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups N1 N2 N3 N4 N5 Count 3 3 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 11,67289 0,2244 Total 11,89729 Sum 11,83 12,36 16,43 18,64 12,93 Average 3,943333333 4,12 5,476666667 6,213333333 4,31 Variance 0,014533333 0,0172 0,030533333 0,009633333 0,0403 df MS 2,918223333 0,02244 F 130,0456031 10 14 P-value 1,4098E-08 F crit 3,478049691 ... Hồn thiện quy trình nhân giống Tràm trà (Melaleuca alternifolia Cheel) b ng kỹ thuật nuôi cấy in vitro 2.1.2 Mục tiêu cụ th : - Xác định đƣợc ảnh hƣởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu tái sinh... tinh dầu tốt đáp ứng trƣờng Các lồi tràm đƣợc trồng để sản xuất tinh dầu Tràm trà (Melaleuca afterniafolia Cheel , Tràm năm gân M.quinquenvervia), Tràm cajuput (M.cajuputi) Kết nghiên cứu Đinh... mô nuôi cấy 11 - Vitamin: Nuôi cấy in vitro chồi tái sinh tổng hợp đƣợc vitamin nhƣng không đủ phải bổ sung vitamin vào môi trƣờng nuôi cấy, đặc biệt vitamin B Tùy thuộc vào loại mô nuôi cấy