Nghiên cứu quy trình xác định đồng thời auramine o và rhodamine b trong một số mẫu thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng kết nối detector tử ngoại khả kiến

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC NGUYỄN THANH THƠI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI AURAMINE O VÀ RHODAMINE B TRONG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KẾT NỐI DETECTOR TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN CỬ NHÂN NGÀNH SƯ PHẠM HĨA HỌC TP HỒ CHÍ MINH - THÁNG 05/2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC NGUYỄN THANH THƠI – 40.201.091 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI AURAMINE O VÀ RHODAMINE B TRONG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KẾT NỐI DETECTOR TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN CỬ NHÂN NGÀNH SƯ PHẠM HÓA HỌC GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN: ThS HUỲNH THỊ NHÀN ThS NGUYỄN THỊ TUYẾT NHUNG TP HỒ CHÍ MINH, NĂM 2018 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP TP HCM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc TP HCM, ngày 05 tháng 05 năm 2018 NHẬN XÉT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên khóa luận: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI AURAMINE O VÀ RHODAMINE B TRONG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KẾT NỐI DETECTOR TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thanh Thơi Cán phản biện: 40.201.091 ThS Phan Thị Hoàng Yến Số trang _ Số chương _ Số bảng số liệu _ Số hình vẽ _ Số tài liệu tham khảo _ Sản phẩm _ Đánh giá Khóa luận Về báo cáo: Nhận xét chủ tịch hội đồng: Điểm khóa luận: Nguyễn Thanh Thơi: ……… /10 Chủ tịch Hội đồng ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP TP.HCM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc ĐỀ CƯƠNG NGHIÊN CỨU TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI AURAMINE O VÀ RHODAMINE B TRONG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KẾT NỐI DETECTOR TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN Cán hướng dẫn: ThS HUỲNH THỊ NHÀN ThS NGUYỄN THỊ TUYẾT NHUNG Thời gian thực hiện: Từ tháng 7/2017 đến tháng 5/2018 Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THANH THƠI – 40201091 Nội dung đề tài:  Mục tiêu: Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đồng thời Auramine O Rhodamine B số mẫu thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng kết nối detector tử ngoại khả kiến Sử dụng quy trình đề xuất phân tích số mẫu thực tế  Phạm vi: Phân tích số mẫu thực phẩm (cải chua, măng, thịt gà)  Phương pháp: Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector tử ngoại khả kiến  Kết mong đợi đề tài: Nghiên cứu đề xuất điều kiện HPLC tối ưu để phân tích đồng thời Auramine O Rhodamine B, đề xuất quy trình xử lý số mẫu thực phẩm phân tích số mẫu thực tế TP HCM, ngày 05/05/2018 Sinh viên iii LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến cô Nguyễn Thị Tuyết Nhung cô Huỳnh Thị Nhàn hướng dẫn em tận tình, hỗ trợ giúp đỡ em từ ngày đầu thực đến hoàn thành đề tài: “Nghiên cứu quy trình xác định Auramine O Rhodamine B số mẫu thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng kết nối detector tử ngoại khả kiến” Em xin gửi lời cảm ơn đến Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài Gịn (Sapharcen), Lê Thị Hồng Vân (giảng viên Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược – Trường Đại học Y dược Thành Phố Hồ Chí Minh), thầy Huỳnh Lời, anh Lê Văn Huấn hỗ trợ hướng dẫn em sử dụng máy sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector PDA cho em lời khun bổ ích q trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn Thành Lộc, thầy Trần Bửu Đăng, cô Văn Thị Cẩm Duyên, cô Phạm Thị Thảo Uyên, thầy Võ Công Minh, thầy Nguyễn Ngọc Hưng giúp đỡ em trình tiến hành thực nghiệm thầy Khoa Hóa – trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh truyền cho em kiến thức quý báu năm tháng em học trường Cuối cùng, em gửi lời cảm ơn đến gia đình, anh chị, bạn bè tất người bên cạnh em, động viên, ủng hộ, giúp đỡ em trình thực đề tài Đặc biệt, em muốn cảm ơn bạn Phan Thị Ngọc Trinh em thực đề tài Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng 05 năm 2018 Nguyễn Thanh Thơi iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU AOAC (Assosiation of Official Analytical Chemists): Hiệp hội nhà hóa phân tích thức PDA (Photodiode array): Đầu dò diode quang LC-MS (Liquid chromatography mass spectrometry): Sắc ký lỏng khối phổ HPLC (High performance liquid chromatography): Sắc ký lỏng hiệu cao ICH (International Conference on Harmonization): Hội nghị quốc tế hài hịa hóa ISO (International Organization for Standardization): Tổ chức Quốc tế tiêu chuẩn hóa LOD (Limit of Detection): Giới hạn phát LOQ (Limit of Quantitation): Giới hạn định lượng S N (Signal to noise ratio): Tỉ lệ tín hiệu nhiễu TCVN: Tiêu chuẩn Việt Nam STT: Số thứ tự AO: Auramine O RB: Rhodamine B v DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Phân loại sắc ký theo pha tĩnh Bảng 2.1 Danh mục chất chuẩn 18 Bảng 2.2 Danh mục dung môi tinh khiết chuyên dùng cho HPLC 18 Bảng 2.3 Danh mục hóa chất tinh khiết 19 Bảng 2.4 Thông số thẩm định phương pháp không tiêu chuẩn ICH, USP, FDA 24 Bảng 2.5 Độ lặp lại tối đa chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC) 28 Bảng 2.6 Lấy mẫu thông tin mẫu 28 Bảng 3.1 Kết bước sóng độ hấp thụ cực đại chất phân tích MeOH ACN 32 Bảng 3.2 Kết khảo sát dung môi pha động 33 Bảng 3.3 Khảo sát giá trị pH sử dụng acid acetic 33 Bảng 3.4 Khảo sát pH = sử dụng acid formic 34 Bảng 3.5 Khảo sát pH = 2,3 2,6 sử dụng H3PO4 35 Bảng 3.6 Chương trình gradient khảo sát tốc độ dòng 37 Bảng 3.7 Khảo sát tỉ lệ dung môi ban đầu 39 Bảng 3.8 Chương trình gradient tối ưu 39 Bảng 3.9 Dữ liệu nồng độ diện tích AO, RB thu tiến hành chạy sắc ký 40 Bảng 3.10 Độ chệch điểm nồng độ dùng xây dựng đường chuẩn 42 Bảng 3.11 Hệ số dung lượng hệ số không đối xứng AO 43 Bảng 3.12 Hệ số dung lượng hệ số không đối xứng RB 43 Bảng 3.13 Diện tích chất phân tích giá trị B i' tương ứng nồng độ 44 Bảng 3.14 Bảng giá trị Ftính chất phân tích 44 Bảng 3.15 Khảo sát độ lặp lại phép đo 46 Bảng 3.16 Thể tích chiết diện tích peak sắc ký 47 Bảng 3.17 Kết phân tích mẫu măng 49 Bảng 3.18 Hệ số thu hồi AO, RB mẫu măng 49 Bảng 3.19 Kết phân tích mẫu cải chua 52 Bảng 3.20 Hệ số thu hồi AO, RB mẫu cải chua 52 Bảng 3.21 Kết phân tích mẫu thịt gà 53 vi Bảng 3.22 Hệ số thu hồi AO RB mẫu thịt gà 53 vii DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Auramine O Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo Rhodamine B Hình 1.3 Minh họa a) trình sắc ký b) Sắc ký đồ Hình 1.4 Hệ thống sắc ký khí Hình 1.5 Hệ thống sắc ký lỏng Hình 1.6 Hình ảnh minh họa sắc ký đồ 10 Hình 1.7 Hình ảnh minh họa peak sắc ký 10 Hình 1.8 Hình ảnh minh họa peak sắc ký theo phân bố Gauss 12 Hình 1.9 Hình ảnh minh họa cột sắc ký đĩa lý thuyết 13 Hình 1.10 Hình ảnh minh họa tách hai peak sắc ký 14 Hình 1.11 Hình ảnh minh họa sơ đồ hệ thống HPLC 15 Hình 2.1 Chương trình gradient pha động – Khảo sát chọn loại dung môi 21 Hình 2.2 Gradient pha động – Khảo sát pH 2,3 2,6 22 Hình 2.3 Hình ảnh minh họa xác định LOD cách tính S N 26 Hình 2.4 Khảo sát thể tích dung mơi chiết 29 Hình 3.1 Sắc đồ khảo sát pH = sử dụng acid acetic 34 Hình 3.2 Sự phụ thuộc hệ số không đối xứng theo pH 34 Hình 3.3 Sắc đồ khảo sát pH = 3,0 sử dụng acid formic 35 Hình 3.4 Sắc đồ khảo sát pH = 2,6 sử dụng acid phosphoric 35 Hình 3.5 Sắc đồ chạy đẳng dịng với dung môi MeOH – HCOOH (pH = 3) 36 Hình 3.6 Sắc đồ chạy đẳng dịng với dung môi ACN – HCOOH (pH = 3) 36 Hình 3.7 Sắc đồ chạy đẳng dịng với dung môi ACN – đệm acetate 37 Hình 3.8 Sắc đồ AO RB ứng với tốc độ dòng 0,6 mL/phút 37 Hình 3.9 Sắc đồ AO RB ứng với tốc độ dòng 0,7 mL/phút 38 Hình 3.10 Sắc đồ AO RB ứng với tốc độ dòng 0,85 mL/phút 38 Hình 3.11 Sắc đồ AO RB ứng với tốc độ dòng mL/phút 38 Hình 3.12 Quan hệ tuyến tính diện tích peak nồng độ Auramine O 41 Hình 3.13 Quan hệ tuyến tính diện tích peak nồng độ Rhodamine B 41 viii Hình 3.14 Sắc đồ xác định LOD AO RB nồng độ 0,02 ppm 45 Hình 3.15 Sắc đồ xác định LOQ AO RB nồng độ 0,05 ppm 46 Hình 3.16 Sự phụ thuộc diện tích peak vào lần chiết AO (a) RB (b) 47 Hình 3.17 Quy trình xử lý mẫu tối ưu 48 Hình 3.18 Các sắc ký đồ phân tích mẫu măng 50 Hình 3.19 Bước sóng ứng với hấp thụ cực đại AO 51 Hình 3.20 Bước sóng ứng với hấp thụ cực đại RB 51 ix Bảng 3.19 Kết phân tích mẫu cải chua Ký hiệu Khối lượng mẫu mẫu (g) Thể tích (µL) chuẩn 100 ppm Thể tích Diện tích (mL) dung dịch thu AO RB A 5,04444 250 25 2287,67 2767,33 B 5,12013 250 25 2412,13 2902,54 C 5,00030 250 25 2062,043 2851,95 D 5,01767 25 0 E 5,01375 25 0 F 5,22954 25 0 Do mẫu thực khơng thêm chuẩn khơng cho tín hiệu AO RB nên pha chuẩn hỗn hợp 1,0 ppm dung môi chiết để khảo sát hệ số thu hồi Bảng 3.20 Hệ số thu hồi AO, RB mẫu cải chua Diện tích peak Mẫu Hệ số thu hồi (%) AO RB AO RB Chuẩn 1,0 ppm 2658,38 3169,699 - - A 2287,67 2767,33 86,06 87,31 B 2412,13 2902,54 90,74 91,57 C 2062,043 2851,95 77,57 89,98 85  17 89,6  5,3 TRUNG BÌNH 3.3.3.2 Tính chọn lọc AO RB phân tích mẫu cải chua Kết khảo sát tính chọn lọc có tương đồng thời gian lưu AO RB mẫu thêm chuẩn khơng thêm chuẩn Ngồi ra, peak tạp mẫu có thêm chuẩn mẫu khơng thêm chuẩn có tương đồng thời gian lưu Sử dụng chức kiểm tra độ tinh khiết peak đầu dò PDA cho thấy peak AO RB mẫu có thêm chuẩn có độ tinh khiết 100% Như vậy, quy trình định lượng AO, RB có tính chọn lọc 52 3.3.4 Mẫu thịt gà 3.3.4.1 Phân tích mẫu gà xác định hệ số thu hồi Cân khoảng gam mẫu thịt gà cân phân tích (chính xác đến 0,00001g) cho vào ống ly tâm 50 mL Các ký hiệu mẫu, khối lượng mẫu, thể tích, diện tích peak sắc ký Bảng 3.21 Trong A, B, C, D, E, F lấy từ mẫu thịt gà A, B, C mẫu thêm chuẩn; D, E, F mẫu không thêm chuẩn Bảng 3.21 Kết phân tích mẫu thịt gà Thể tích (mL) Diện tích peak dung dịch thu AO RB 25 2307,74 2902,54 250 25 2362,03 2941,80 5,02111 250 25 2427,96 2501,03 D 5,00842 25 0 E 5,01430 25 0 F 5,14600 25 0 Ký hiệu Khối lượng Thể tích (µL) mẫu mẫu (g) chuẩn 100 ppm A 5,03029 250 B 5,00266 C Do mẫu thực khơng thêm chuẩn khơng cho tín hiệu AO RB nên pha chuẩn hỗn hợp 1,0 ppm dung môi chiết để khảo sát hệ số thu hồi Bảng 3.22 Hệ số thu hồi AO RB mẫu thịt gà Mẫu Diện tích peak Hệ số thu hồi (%) AO RB AO RB Chuẩn 1,0 ppm 2651,37 3162,76 - - A 2307,74 2902,54 89,18 92,86 B 2362,03 2941,80 87,04 91,77 C 2427,96 2501,3 89,09 93,01 88,4  3,0 92,6  1,7 TRUNG BÌNH 3.3.4.2 Tính chọn lọc AO RB phân tích mẫu thịt gà Kết khảo sát tính chọn lọc có tương đồng thời gian lưu AO RB mẫu thêm chuẩn không thêm chuẩn Ngồi ra, peak tạp mẫu có thêm chuẩn mẫu khơng thêm chuẩn có tương đồng thời gian lưu 53 Sử dụng chức kiểm tra độ tinh khiết peak đầu dò PDA cho thấy peak AO RB mẫu có thêm chuẩn có độ tinh khiết 100% Như vậy, quy trình định lượng AO, RB có tính chọn lọc 3.3.5 Kết khảo sát mẫu thực tế Hàm lượng chất phân tích tính thơng qua biểu thức sau: X (mg Co (mg ) L  25 (mL)  L  1000 g ) kg mo (g) 1000 mL kg Trong đó: Co nồng độ chất phân tích tính theo phương trình đường chuẩn, mo khối lượng mẫu phân tích Sau tiến hành phân tích mẫu thực phẩm (măng, cải chua, thịt gà) sử du ̣ng quy trình đươ ̣c đề xuấ t, không phát AO RB thành phầ n của mẫu 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau trình nghiên cứu, khảo sát điều kiện thực nghiệm, sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) kết nối đầu dò PDA để xác định đồng thời Auramine O Rhodamine B số mẫu thực phẩm, hồn thành cơng việc sau: Khảo sát điều kiện tối ưu cho phương pháp phân tích sắc ký tách Auramine O Rhodamine B o Cột tách: Cột Zorbax Eclipse XDB – C18 o Detector: PDA với vùng quét phổ từ 400 – 600 nm o Thành phần dung môi pha động: Methanol – H3PO4 (0,03%) o Chương trình hóa dung mơi: Gradient Thời gian %MeOH %H3PO4 Tốc độ dòng (mL/phút) Curve 30 70 1 30 70 16 80 20 20 30 70 1 Thẩm định phương pháp  Khoảng đường chuẩn Auramine O Rhodamine B: 0,05 ppm – 2,00 ppm  Giới hạn phát Auramine O Rhodamine B: 0,02 ppm  Giới hạn định lượng Auramine O Rhodamine B: 0,05 ppm  Hệ số biến thiên: với nồng độ 2,00 ppm, RSD% diện tích AO 8,8.10-1 % RB 1,1% Thực khảo sát mẫu thực tế  Đã đề xuất quy trình thích hợp để xử lý số mẫu thực phẩm (thịt gà, măng, cải chua), hệ số thu hồi chất phân tích mẫu măng, cải chua, thịt gà đạt từ 79,67% – 92,55%  Sử du ̣ng quy triǹ h đề xuấ t để phân tích mẫu (măng, cải chua, thịt gà) Kết phân tích khơng phát Auramine O, Rhodamine B mẫu đươ ̣c khảo sát  Đã gửi mẫu măng đến Công ty TNHH thành viên Khoa học Cơng nghệ Hồn Vũ để phân tích đối chứng phương pháp LC – MS/MS Kết phân tích đối chứng phù hợp kết phịng thí nghiệm 55 Với kết đạt được, nhận thấy phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao kết nối đầu dị PDA có độ nhạy cao, phù hợp phân tích đồng thời Auramine O Rhodamine B mẫu thực phẩm, quy trình xử lý mẫu đơn giản, thời gian xử lý phân tích mẫu ngắn 4.2 Kiến nghị Trong q trình thực đề tài, hạn hẹp thời gian điều kiện thiết bị hạn chế nên số giai đoạn phân tích chưa thể tiến hành phân tích lặp, chưa bố trí đầy đủ thí nghiệm khảo sát độ xác phương pháp phân tích (độ đúng, độ chụm) Vì vậy, để nâng cao độ tin cậy phương pháp nên tiến hành bố trí thêm thí nghiệm khảo sát độ chụm, độ (hệ số thu hồi) quy trình phân tích Sử dụng quy trình phân tích đề xuất để phân tích nhiều mẫu 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Huỳnh Tuấn Anh, Mai Thanh Bình, Đinh Thị Hạ Long, Đỗ Vũ Phương Thảo, Vương Quang Huy, Nguyễn Vũ Khí, Phạm Thị Ánh, Diệp Ngọc Sương, Chu Phạm Ngọc Sơn (n.d.) Phân tích phụ gia thực phẩm chất có liên quan cơng ty dịch vụ khoa học công nghệ Sắc ký Hải Đăng Thành Phố Hồ Chí Minh: Cơng ty cổ phần dịch vụ khoa học công nghệ Sắc Ký Hải Đăng Phạm Tuấn Anh, Nguyễn Thị Kim Thường (2017, 9-10) Nghiên cứu xác định hàm lượng Auramine O mẫu thực phẩm phương pháp Volt Ampere hòa tan hấp thụ xung vi phân Thử nghiệm ngày nay, 6-10 Lê Thị Hường Hoa (2013) Nghiên cứu xây dựng quy trình phát xác định hàm lượng số chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung, Từ Vọng Nghi (2003) Hóa học phân tích- Phần (Các phương pháp phân tích cơng cụ) Hà Nội: Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Bùi Thị Ngoan, Trần Thắng, Bùi Thị Kim Ngân (2010) Xác định Rhodmine B thực phẩm kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Y học thực hành (732) QCVN 4-10/2010 Quy chuẩn Quốc Gia phụ gia thực phẩm – phẩm màu TCVN ISO/IEC 17025:2005 Yêu cầu chung lực phòng thử nghiệm hiệu chuẩn TCVN 6910 1-6 (2005) Độ xác(độ độ chụm) phương pháp đo kết 10 Tạ Thị Thảo (2005) Thống kê hố phân tích Đại học Quốc gia Hà Nội Tiếng Anh 11 AOAC International (2007) How to meet ISO 17025 requirements for method verification, USA 12 AOAC International (1990) Official methods of analysis, USA 13 Chen, H.-s (2007) Identifcation of Rhodamine 6g and Rhodamine B dyes Forensic Science Journal 6(1), 21-37 57 14 Hewlett Packard (HP) (1993) Peak purity analysis in HPLC and CE using diode array technology Germany 15 ISO 5725 – (1994) Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results 16 ISO/IEC 17025 (2005) General requirements for the competence of testing and calibration laboratories 17 ICH (1996) Validation of Analytical Procedures: Text and methodology ICH Hamonised Tripartite Guideline 18 Jared Anderson (2015) Analytical Separation Science, Wiley –VCH, December 19 Jie Liu, Xiashi Zhu (2014) Ionic liquid-immobilized silica solid phase extraction coupled with high performance liquid chromatography for the analysis rhodamine B Open Science Journal of Analytical Chemistry, 10-16 20 KM Gray, MJ Walker, MJS Burn, M Mazur, K Niedzwiedzka, K Liszka and D Thorburn Burns (2016) Illegal Dyes in Food and Spices – A 2006 LGC LCUV/Visible Method Reviewed and Journal of the Association of Public Analysts, 18-39 Tiếng Trung Quốc 21 张海琪, 梁丽军, 何中央, 等.(2010) 水产品中碱性嫩黄 O 残留量的液相色 谱—串联质谱定[J] 质谱学报 31(1), 4852 Lin Q (2010) Simultaneous determination of chrysoidine and auramine O in bean products by ultra performance liquid chromatography [J] Chin J Chromatogry 31(1), 4852 22 罗美中, 李碧芳, 何小青 (2005) 高效液相色谱-二极管阵列法测定豆制品中 的碱性嫩黄 O 的含量[J] 分析实验室 26(8), 166170 Luo MZ, Li BF, He XQ, et al (2005) Determination of soy auramine O content by high performance liquid chromatography combined with diode array [J] Chin J Anal Lab 26(8), 166170 23 范文锐, 吴 青, 劳 扬, 卢玉珊 (2012) 高效液相色谱法同时测定食品中7 种 非食用色素 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究 40(2), 292 – 297 FAN Wen-Rui, WU Qing , LAO Yang, LU Yu-Shan (2012) Determination of 58 Seven Inedible Pigmentsin Food Using High Performance Liquid Chromatography Chinese Journal of Analytical Chemistry 40(2), 292 – 297 24 林清荷，陈鑫，吴忠兴 (2012) 辣椒粉中罗丹明 B 液相色谱检测方法的研 究 农产品加工·学刊, 157-164 25 牛华，牛之瑞，冯雷，鲁燕骅，马雪涛，谭建林，张学忠，俸金梅 (2014) 高效相色谱法测定辣椒粉中罗丹明B的测量不确定度评估 35 (18), 165-168 NIU Hua, NIU Zhi-rui, FENG Lei, LU Yan-hua, MA Xue-tao, TAN Jian-lin, ZHANG Xue-zhong, FENG Jin-mei (2014) Evaluation of Uncertainty in Rhodamine B Determination in Chili Powder by HPLC 35(18), 165-168 26 杨 爽, 俞子萱, 王永芳, 葛宝坤 (2015) 低温离心净化-高效液相色谱法快速 测定腐竹中的碱性橙 II 和碱性嫩黄 O.食 品 安 全 质 量 检 测 学 报 6(2), 427 - 431 YANG Shuang, YU Zi-Xuan, WANG Yong-Fang, GE Bao-Kun (2015) Rapid determination of chrysoidine II and auramine O in dried bean curd Journal of Food Safety and Quality 6(2), 427 - 431 27 卫兰兰, 晏嫣, 康学军 (2017) 纳米固相微萃取应用于干红辣椒、 水果饮料 及红酒中罗丹明 Ｂ 的定量分 38(6), 935-941.WEI Lanlan YAN Yan KANG Xuejue (2017) Application of Packed-nanofibers Solid-phase Extraction for Determination of Rhodamine B in Dry Chilli, Fruit Drink and Red Wine Chemical Journal of Chinese Universities 38(6), 935-941 59 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Bảng Hệ số thu hồi chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC) STT Hàm lượng (%) Tỉ lệ chất Đơn vị Hệ số thu hồi (%) 100 100% 98-102  10 10-1 10% 98-102 1 10-2 1% 97-103  0,1 10-3 0,1 % 95-105 0,01 10-4 100 ppm 90-107 0,001 10-5 10 ppm 80-110 0,0001 10-6 ppm 80-110 0,00001 10-7 100 ppb 80-110 0,000001 10-8 10 ppb 60-115 10 0,0000001 10-9 ppb 40-120 Bảng Quy định hệ số thu hồi hội đồng châu Âu STT Hàm lượng chất Đơn vị Hệ số thu hồi (%) ≤ μg/kg ≤ ppb 50%-120% > μg/kg đến < 10 μg/kg 1-10 ppb 70%-110%  10 μg/kg  10ppb 80%-110% PHỤ LỤC Quang phổ hấp thụ chuẩn AO RB MeOH Hình Quang phổ hấp thụ chuẩn đơn AO 60 Hình Quang phổ hấp thụ chuẩn đơn RB Hình Quang phổ hấp thụ chuẩn hỗn hợp RB AO 61 Hình Quang phổ chuẩn đơn AO, chuẩn đơn RB chuẩn hỗn hợp PHỤ LỤC Quang phổ hấp thụ chất chuẩn AO,RB ACN Hình Quang phổ hấp thụ chuẩn đơn AO 62 Hình Quang phổ hấp thụ chuẩn đơn RB Hình Quang phổ hấp thụ chuẩn hỗn hợp RB AO 63 Hình Quang phổ chuẩn đơn AO, chuẩn đơn RB chuẩn hỗn hợp PHỤ LỤC Một số sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp AO RB nồng độ ppm qua nhiều lần đo lặp (n = 7) điều kiện tối ưu (khảo sát RSD(%)) Hình Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 1) Hình 10 Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 2) 64 Hình 11 Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 3) Hình 12 Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 4) Hình 13 Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 5) Hình 14 Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 6) Hình 15 Sắc đồ chuẩn hỗn hợp (AO, RB) nồng độ ppm (đo lần 7) 65 PHỤ LỤC Hình 16 Sắc đồ phân tích mẫu cải chua a) thêm chuẩn ppm b) khơng thêm chuẩn Hình 17 Sắc đồ phân tích mẫu gà a) thêm chuẩn 1ppm b) không thêm chuẩn 66 ... CƯƠNG NGHIÊN CỨU TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI AURAMINE O VÀ RHODAMINE B TRONG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM B? ??NG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KẾT NỐI DETECTOR TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN Cán hướng... khóa luận: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI AURAMINE O VÀ RHODAMINE B TRONG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM B? ??NG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KẾT NỐI DETECTOR TỬ NGOẠI KHẢ KIẾN Sinh viên thực hiện: Nguyễn... hành thực đề tài: ? ?Nghiên cứu quy trình xác định đồng thời Auramine O Rhodamine B số mẫu thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng kết nối detector tử ngoại khả kiến? ?? Đề tài nhằm mục đích nghiên cứu xây