Các phương pháp phân tích định lượng A.Xác định thành phần axit béo có trong dầu mỡ bằng pp sắc ký khí B.Xác định hàm lượng chất không xà phòng hóa C.Phân tích chất béo bằng pp định lượn[r]
(1)Seminar Phân tích lý hoá thực phẩm Chủ đề: Phân tích lipid-các phương pháp phân tích định lượng Giáo viên hướng dẫn: Phạm Trần Thuỳ Hương Nhóm thực hiện: II.3 (2) Các phương pháp phân tích định lượng A.Xác định thành phần axit béo có dầu mỡ pp sắc ký khí B.Xác định hàm lượng chất không xà phòng hóa C.Phân tích chất béo pp định lượng cholesterol D.Xác định hàm lượng chất béo pp FOLCH (3) A.Xác định thành phần axit béo có dầu mỡ Nguyên lý: • Việc phân tích thành phần axit béo chất béo cho chúng ta biết chất chất béo đó là loại dầu gì mỡ gì vì loại chất béo khác đặc trưng thành phần axit béo khác Thành phần axit béo dầu thực vật mỡ động vật thay đỡi tùy theo giống, địa điểm trồng trọt chăn nuôi, tuổi mùa thu hoạch • Tiến hành methyl ester hóa trước chạy sắc ký mẫu????? (4) 2.Thiết bị: Máy sắc ký khí (5) 3.Cách tiến hành Làm khô este metyl 1.Pipet Pasto 2.Na2SO4 3.Bóng thuỷ tinh (6) 3.Cách tiến hành • Mẫu phân tích: hỗn hợp este methyl các axit béo • Pha tĩnh: CARBOWAV 20M • Pha động: Khí Nitơ khí Heli => Tiến hành chạy sắc ký khí (7) 4.Tính kết quả: • Sau đưa mẫu phân tích vào máy ta có phổ sắc ký Dựa vào phổ sắc ký, có nhiều cách để tính % trọng lượng các axit béo có mẫu phân tích Trường hợp tổng quát là có thể tính % trọng lượng axits béo biểu thị este metyl sau: % chất i = (Ai/∑Ai) 100 Trong đó: Ai tiết diện peak chất i; ∑Ai: tổng tiết diện tất các peak (8) 6.Ứng dụng: Xác định biến đổi hàm lượng và thành phần axit béo có dầu mỡ; từ đó xác định số axit đặc trưng cho sản phẩm dầu mỡ Với các loại dầu mỡ thực phẩm số axit không vượt quá 2.25, vượt qua mức an toàn này, cần phải tinh chế để hạ thấp số axit biện pháp trung hòa kiềm và đó số này dùng làm sở để tính toán lượng kiềm cần thiết để trung hòa (9) B.Xác định hàm lượng chất không xà phòng hóa 1.Nguyên tắc: Những chất không xà phòng hóa dầu thực vật là chất không tác dụng với kiềm, thường là các sterol, các rượu có phân tử lớn, cacbuahydro và các chất màu Nó biểu thị phẩm chất và độ tinh khiết dầu Dùng kiềm để xà phòng hóa dầu Sau đó dùng ete petrol để chiết các chất không xà phòng hóa khỏi dung dịch xà phòng (10) 2.Cách tiến hành: • Chuẩn bị mẫu, cân mẫu • Thêm vào 50ml KOH 2N pha ethanol, lăp ống sinh hàn khí đun sôi trên bếp cách thủy 60ph • Thêm vào 50ml nước để nguội, chuyển dd vào phểu chiết • Thêm 70ml ete petrol Để yên hỗn hợp cho phân thành lớp->tháo lớp dưới, lại cho 50ml ete petrol vào-lặp lại lần • Gộp lần ete chiết và tiến hành rửa xà phòng • Lọc ete petrol, cất ete petrol trên bếp cách thủy, phần còn lại đem sấy khô (11) 3.Tính kết quả: • Hàm lượng chất không xà phòng X tính % theo công thức: G1*100 X% G Trong đó: G1: trọng luợng chất không xà phòng thu đuợc,g G: trọng lượng mẫu cần phân tích; (12) C.Phương pháp định lượng cholesterol Cholesterol là gì? Nguyên tắc: Nguyên tắc phương pháp là phản ứng cholesterol và cholesterol este với anhydrit axetic và nồng độ axít sulfuric đậm đặc, dẫn đến hình thành phức hợp màu xanh-màu xanh lá cây Vì vậy, có thể xác định lượng cholesterol chiết xuất lipid với đường cong tiêu chuẩn nồng độ cholesterol biết đến (13) 2.Cách tiến hành: - Chuẩn bị ống tubes với 0,5 ml có chứa: + (Blank) chloroform: methanol (2:1, v / v) + 2,5 mM cholesterol + 5,0 mM cholesterol + 10 mM cholesterol, và mẫu số lipid chiết xuất, mẫu số 2,… - Thêm mL Liebermann-Buchard tinh khiết" từ từ trộn vào ống - Cần kiểm tra ống, vortex và đặt cốc nước 35 độ C 10 phút " - Đo độ hấp thụ 550 nm (Pha loãng với chloroform: methanol (1:1, v / v) có thể cần thiết.) (14) Kết quả: Cần phải ghi trọng lượng nguồn lipid (g), lượng lipid trích xuất (thấp giai đoạn, mL), trọng lượng ống rỗng (g), và trọng lượng ống với tổng số chất béo (g) cho lòng đỏ trứng và óc chó trừ trọng lượng ống nghiệm không có sản phẩm nào từ trọng lượng ống với dư lượng lipid khô, chính xác cho số lượng loại bỏ để định lượng cholesterol và trình bày kết là "g tổng số chất béo / g óc chó" và "g tổng số chất béo / g lòng đỏ trứng " (15) D.PHƯƠNG PHÁP FOLCH 1.Mục đích: Phương pháp này dùng để xác định hàm lượng chất béo các sản phẩm rắn và lỏng 2.Cách tiến hành: -Chuẩn bi mẫu, cân mẫu -Thêm vào 20ml hỗn hợp CHCl3/CH3OH (2:1) lăc mạnh phút -Thêm vào 80µl HCl 6N để yên 2h -Thêm 4,2 ml KCl 0,37M lăc mạnh, đưa vào máy ly tâm khoảng 10ph - Phần cho vào 10ml H20/CH3OH/CHCl3 (47:48:3) lăc mạnh ly tâm-lặp lại lần - Loại phần trên, phần còn lại cho thêm CHCl3 + nước cất, lăc mạnh>thu hồi lấy phần dưới->cân - Cho thêm CHCl3 + nước vào phần còn lại, lắc đều->thu hồi chất béo - Phần đuổi CHCl3 sau đó cho ít cồn tuyệt đối và cất khô Phần còn lại là chất béo->cân (16) D.PHƯƠNG PHÁP FOLCH 3.Tính kết Hàm lượng chất béo theo % tính công thức sau: G2- G1 X%= 100 G Trong đó: G1: trọng lượng bình cầu chứa chất béo, g; G2: trọng lượng bình không, g; G : trọng lượng mẫu phân tích, g (17) Ứng dụng: Xác định biến đổi hàm lượng và thành phần chất béo, axit béo buồng trứng suốt quá trình thành thục cua biển (18) Danh sách nhóm • • • • • • • Nguyễn Như Hảo Phan Thị Thu Hằng Nguyễn Thị Thu Hằng Hoàng Bách Hiệp Hoàng Ngọc Hiệp Trần Hoàng Giang Phan Thị Thanh Hà (19)