Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc – Số 1/2021

Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc – Số 1/2021 được biên soạn thông tin đến người học một số bài viết như định hướng công tác kiểm tra và giám sát chất lượng thuốc năm 2021; xây dựng và thẩm định quy trình định lượng đồng thời guaifenesin, bromhexin hydroclorid và kali sorbat trong siro ho bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo; xây dựng quy trình xác định giới hạn tạp chất liên quan trong nguyên liệu polyphyllin D phân lập được từ cây bảy lá một hoa bằng phương pháp HPLC...

SỐ 1.2021 TẬP 19-SỐ 71 02 02 quản lý - trao đổi NGHIỆP VỤ ĐỊNH HƯỚNG CÔNG TÁC KIỂM TRA VÀ GIÁM SÁT CHẤT LƯỢNG THUỐC NĂM 2021 PGS TS ĐOÀN CAO SƠN Viện trưởng Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Trong năm 2020, bị ảnh hưởng đại dịch Covid 19 tác động đến mặt đời sống - kinh tế - xã hội, Hệ thống kiểm nghiệm nước hoàn thành xuất sắc nhiệm vụ giao, tích cực hưởng ứng phong trào thi đua, kết nhận nhiều thành tích đáng khích lệ, cụ thể: Hệ thống kiểm nghiệm Nhà nước bám sát tiêu kế hoạch giao, khắc phục khó khăn, hợp tác với phịng kiểm nghiệm doanh nghiệp, phối hợp chặt chẽ Hệ thống kiểm nghiệm - Quản lý dược - Thanh tra dược nhằm tăng cường công tác kiểm tra giám sát chất lượng thuốc Nhờ vậy, chất lượng thuốc thị trường ổn định kiểm sốt tốt, tỷ lệ thuốc khơng đạt chất lượng trì mức thấp (0,86%), tỷ lệ thuốc giả thấp so với nước khu vực (0,03%, không tính dược liệu bị nhầm lẫn) Hội đồng thi đua Hệ thống kiểm nghiệm đề nghị Viện trưởng Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tặng giấy khen cho 31 tập thể 60 cá nhân có thành tích xuất sắc cơng tác kiểm tra, giám sát đảm bảo chất lượng thuốc năm 2020 Các đơn vị gồm Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh, TTKN Thừa Thiên – Huế, TTKN Bình Dương, TTKN Đà Nẵng, TTKN Quảng Ninh TTKN Hà Tĩnh đề nghị tặng Cờ thi đua Bộ Y tế năm 2020 Về lực Hệ thống kiểm nghiệm: Đến tồn hệ thống có 16 đơn vị đạt tiêu chuẩn GLP 55 đơn vị đạt tiêu chuẩn ISO/IEC-17025 Hội thảo tổng kết công tác kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc năm 2020 Thành phố Đà Nẵng vào ngày 24 tháng năm 2021 trí đề định hướng cơng tác nhiệm vụ trọng tâm cho Hệ thống kiểm nghiệm năm 2021 Định hướng công tác 1.1 Tăng cường công tác kiểm tra giám sát chất lượng thuốc, mỹ phẩm địa bàn nước nhằm đảm bảo thuốc đến tay người dùng có chất lượng, hiệu lực an toàn Cần tăng cường kiểm tra chất lượng nguyên liệu đầu vào lấy mẫu thành phẩm cuối nguồn Dựa số liệu báo cáo đơn vị, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tổng hợp danh mục hoạt chất thường có vi phạm chất lượng danh sách cơng ty trong/ngồi nước có vi phạm chất lượng năm 2020 để đơn vị Hệ thống kiểm nghiệm có định hướng xây dựng kế hoạch lấy mẫu 1.2 Tiếp tục trì quản lý phịng thí nghiệm theo tiêu chuẩn ISO/IEC-17025 GLP đơn vị đạt tiêu chuẩn này; tiếp tục xây dựng cải tạo Trung tâm kiểm nghiệm để Trung tâm đạt tiêu chuẩn ISO/IEC-17025 GLP 1.3 Tăng cường thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu để mở rộng danh mục hoạt chất kiểm soát chất lượng 1.4 Củng cố trì phần mềm Hệ thống kiểm nghiệm địa để cung cấp tiêu chuẩn chất lượng sản phẩm thuốc cho Trung tâm kiểm nghiệm 1.5 Hoàn thành tốt chức nhiệm vụ kế hoạch giao, đồng thời mở rộng hoạt động chuyên môn kỹ thuật theo hướng sau: - Đối với Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh: ngồi cơng việc kiểm nghiệm thường quy, cần tăng cường triển khai nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học thuốc Tập trung thực kiểm nghiệm thuốc Biệt dược gốc, thuốc đấu thầu tập trung, thuốc có nguồn gốc sinh học enzym Tiếp tục mở lớp đào tạo, tư vấn kỹ thuật cho trung tâm kiểm nghiệm phòng kiểm nghiệm doanh nghiệp chuyên môn kỹ thuật, quản lý chất lượng; tổ chức chương trình thử nghiệm thành thạo so sánh liên phịng thí nghiệm; - Đối với Trung tâm kiểm nghiệm tỉnh, thành phố: Cần tiếp tục củng cố tăng cường sở vật chất kỹ thuật, đào tạo cán để tăng cường lực quản lý chất lượng thử nghiệm; Trung tâm kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn ISO/IEC 17025 GLP tích cực tham gia công tác tiền kiểm - Thực nghiêm công tác phòng chống dịch Covid-19 theo hướng dẫn yêu cầu Bộ Y tế quan chức Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Nhiệm vụ trọng tâm 2.1 Đối với Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ chí Minh - Củng cố nâng cấp Trung tâm đánh giá tương đương sinh học hai Viện theo chuẩn mực Quốc tế Khu vực; - Tăng cường thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu dược liệu chuẩn để phục vụ công tác kiểm nghiệm, nhằm tăng tỷ lệ kiểm tra chất lượng toàn hoạt chất, chế phẩm lưu hành thị trường 2.2 Đối với Trung tâm kiểm nghiệm - Tích cực tham gia chương trình thử nghiệm thành thạo lớp tập huấn kỹ thuật hai Viện tổ chức; - Xây dựng thực kế hoạch lấy mẫu theo định hướng đạo chuyên môn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương; - Củng cố việc thực chế độ báo cáo: Báo cáo kịp thời tình hình chất lượng thuốc, mẫu không đạt chất lượng Cục Quản lý Dược, Sở Y tế hai Viện để có hướng giải xử lý; báo cáo định kỳ hàng năm hoạt động đơn vị tình hình chất lượng thuốc địa phương cho Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương để tổng hợp báo cáo Bộ Y tế theo biểu mẫu gửi cho đơn vị, thời gian chốt số liệu 30/11 hàng năm, thời gian nộp báo cáo trước 20/12 hàng năm 2.3 Đối với sở sản xuất, kinh doanh - Rà soát tiêu chuẩn chất lượng thuốc cho phù hợp với Dược điển Việt Nam V phiên Dược điển hành; - Cần thực nghiêm túc việc kiểm tra chất lượng nguyên liệu đầu vào, đặc biệt dược liệu để tránh sử dụng dược liệu nhầm lẫn giả mạo NGHIÊN CỨU KHOA HỌC XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI GUAIFENESIN, BROMHEXIN HYDROCLORID VÀ KALI SORBAT TRONG SIRO HO BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG PHA ĐẢO NGUYỄN THỊ HỒNG, NGUYỄN VĂN BÌNH, DƯƠNG MINH TÂN, LÊ QUANG THẢO Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Từ khóa: Định lượng đồng thời, guaifenesin, bromhexin hydroclorid, kali sorbat, siro ho, RP-HPLC Đặt vấn đề Thuốc điều trị ho, long đờm thành phần thiếu tủ thuốc gia đình giao mùa, mùa đơng lạnh, mùa xuân ẩm, đặc biệt gia đình có trẻ nhỏ Các thuốc chống ho, giảm ho codein, dextromethorphan, pseudoephedrin, theophyllin, thường định trường hợp ho khan nhiều, kích thích gây ngủ người lớn, chống định cho trường hợp ho có đờm Các thuốc long đờm, tiêu đờm acetylcystein, ambroxol, bromhexin hydroclorid, guaifenesin giúp giảm ho sử dụng phổ biến dạng đơn thành phần phối hợp với thuốc điều trị ho khác [2] Nếu acetylcystein, ambroxol khuyến cáo cho trẻ tuổi bromhexin hydroclorid, guaifenesin định cho trẻ tuổi [1] Một dạng bào chế hay gặp siro ho dành cho trẻ em, phối hợp thành phần guaifenesin có tác dụng long đờm bromhexin hydroclorid có tác dụng tiêu đờm giảm tiết nhầy Dạng bào chế thường có thêm thành phần chất bảo quản kali sorbat Tuy nhiên, dược điển chưa thấy có chuyên luận riêng cho công thức thuốc chứa thành phần này, nghiên cứu cụ thể cho dạng thuốc chứa thành phần hạn chế [2],[3],[4],[5] Nhằm nâng cao công tác giám sát chất lượng thuốc phục vụ sức khỏe cộng đồng, nhóm nghiên cứu tiến hành xây dựng thẩm định qui trình định lượng đồng thời guaifenesin, bromhexin hydroclorid chất bảo quản kali sorbat siro ho kỹ thuật HPLC Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Thực nghiệm 2.1 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ Các thiết bị, dụng cụ hiệu chuẩn theo quy định ISO/IEC 17025 GLP - Máy sắc ký lỏng hiệu cao Shimadzu; - Cột phân tích: C18 (250 x 4,6 mm; μm); - Cân phân tích Mettler MS105 có độ xác 0,01 mg; - Máy đo pH Metrohm; - Các thiết bị, dụng cụ khác: máy lắc siêu âm, dụng cụ thủy tinh xác class A 2.1.2 Hóa chất, chất chuẩn - Methanol (HPLC) Merck; - Dinatri hydrophosphat dihydrat (PA) Scharlau; - Natri dihydrophosphat dihydrat (PA) Scharlau; - Acid phosphoric (PA) Scharlau; - Nước RO Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương - Chất chuẩn: + Bromhexin hydroclorid chất chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, hàm lượng: 99,32% (nguyên trạng), SKS: 0217273.02; + Guaifenesin chất chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, hàm lượng: 99,81% (nguyên trạng), SKS: WS.0212181.02; + Kali sorbat chuẩn USP, hàm lượng: 99,8% (theo khan), độ ẩm 0%, SKS: R030B0 2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu - Siro ho với công thức bào chế sau: Guaifenesin 100,0 mg; bromhexin hydroclorid 4,0 mg; kali sorbat 10,0 mg; tá dược vừa đủ ml - Mẫu placebo: Mẫu giả dược chuẩn bị lô mẫu thử khơng có ba thành phần guaifenesin, bromhexin hydroclorid, kali sorbat Mẫu placebo gồm glycerin, sorbitol 70%, acid tartric, natri saccharin, natri carboxymethyl cellulose, hương trái cây, red amaranth, nước tinh khiết 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.2.1 Điều kiện sắc ký Hiện chưa tìm thấy nghiên cứu công bố liên quan đến thuốc siro có thành phần với tỷ lệ trên, dựa vào việc tra cứu thơng số lý hóa (cơng thức phân tử, giá trị pKa, độ tan, …) trang thiết bị có sẵn, chúng tơi tiến hành khảo sát thành phần pha động, tỷ lệ pha động, cột sắc ký, tốc độ dòng, khảo sát bước sóng,… nhóm nghiên cứu lựa chọn điều kiện sắc ký sau: - Cột: C18 (250 x 4,6 mm; μm), nhiệt độ cột 40ºC; - Phát hiện: Detector DAD, bước sóng 220 nm; - Tốc độ dịng: 1,2 ml/phút; - Thể tích tiêm: 20 μl - Pha động: + Pha A: Đệm phosphat pH 4,2: Hòa tan 5,04 g dinatri hydrophosphat 3,01 g natri dihydrophosphat vừa đủ 1000 ml nước, điều chỉnh tới pH 4,2 acid phosphoric đậm đặc + Pha B: Methanol - Dung môi pha mẫu: Methanol - Pha động A (45 : 55) - Chương trình dung mơi: Thời gian (phút) - 10 10 - 15 15 - 30 % Pha động A % Pha động B 65 35 65 - 25 35 - 75 25 75 2.2.2.2 Phương pháp chuẩn bị mẫu - Dung dịch chuẩn gốc kali sorbat: Pha dung dịch chuẩn gốc kali sorbat mg/ml dung mơi pha mẫu Lọc qua màng lọc 0,45 µm - Dung dịch chuẩn gốc bromhexin hydroclorid: Pha dung dịch chuẩn gốc bromhexin hydroclorid 0,4 mg/ml dung môi pha mẫu Lọc qua màng lọc 0,45 µm - Dung dịch chuẩn hỗn hợp: Cân xác 50,0 mg chất chuẩn guaifenesin vào bình định mức 50 ml, hút xác 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc bromhexin hydroclorid 0,4 mg/ml 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc kali sorbat mg/ml, thêm khoảng 30 ml dung môi pha mẫu, lắc siêu âm hòa tan khoảng 10 phút, để nguội nhiệt độ phịng, thêm dung mơi pha mẫu vừa đủ đến vạch, trộn Lọc qua màng lọc 0,45 µm - Dung dịch thử: Hút xác 5,0 ml chế phẩm, tương ứng với mg bromhexin hydroclorid vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml dung mơi pha mẫu, lắc siêu âm hịa tan khoảng 10 phút, để nguội nhiệt độ phòng, thêm dung môi pha mẫu vừa đủ đến vạch, trộn Lọc qua màng lọc 0,45 µm - Dung dịch placebo: Hút xác 5,0 ml placebo vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml dung môi pha mẫu, lắc siêu âm hịa tan khoảng 10 phút, Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) để nguội nhiệt độ phịng, thêm dung mơi pha mẫu vừa đủ đến vạch, trộn Lọc qua màng lọc 0,45 µm đáp ứng từ lần tiêm lặp lại dung dịch chuẩn hỗn hợp không lớn 2,0% Kiểm tra tính thích hợp hệ thống: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn hỗn hợp, thứ tự rửa giải ba pic guaifenesin, kali sorbat, bromhexin hydroclorid; hệ số đối xứng pic không lớn 2,0; hệ số phân giải pic guaifenesin pic kali sorbat, pic kali sorbat pic bromhexin không nhỏ 2,0 độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic Tiêm 20 µl dung dịch placebo, dung dịch chuẩn hỗn hợp dung dịch thử vào hệ thống sắc ký Ghi lại sắc ký đồ đáp ứng pic dung dịch chuẩn hỗn hợp dung dịch thử Hình Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp Kết bàn luận 3.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký Hình Sắc ký đồ dung dịch thử Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn hỗn hợp dung dịch thử với điều kiện sắc ký xây dựng theo mục 2.2.2.1; sắc ký đồ thu thể Hình Hình Thứ tự rửa giải pic xác định cách tiêm dung dịch chuẩn đơn chất (với nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn hỗn hợp), guaifenesin, kali sorbat, bromhexin hydroclorid; sắc ký đồ cho thấy pic tách rõ ràng, đối xứng gọn Như việc lựa chọn điều kiện sắc ký phù hợp 3.2 Đánh giá phương pháp 3.2.1 Khảo sát tính đặc hiệu Tiêm dung dịch sau: dung môi pha mẫu, dung dịch placebo, dung dịch chuẩn guaifenesin, dung dịch chuẩn kali sorbat, dung dịch chuẩn bromhexin hydroclorid, dung dịch chuẩn hỗn hợp dung dịch thử vào hệ thống sắc ký Trên sắc ký đồ thu từ chương trình sắc ký, dung mơi pha mẫu khơng có pic đáp ứng, dung dịch placebo khơng có pic đáp ứng có thời gian lưu tương ứng với pic guaifenesin (khoảng 7,3 phút), kali sorbat (khoảng 8,9 phút) bromhexin hydroclorid (khoảng 27,1 phút) (Hình 3, 4, 5, 6, 8) Quét phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến dung dịch chuẩn dung dịch thử với detector DAD cho thấy quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến hoạt chất thu từ dung dịch thử phù hợp với quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến pic thu từ dung dịch chuẩn tương ứng, hệ số chồng phổ chuẩn thử xấp xỉ 1,0 (Hình 9, 10 11) Hình Sắc ký đồ dung mơi pha mẫu Hình Sắc ký đồ dung dịch placebo Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Hình Sắc ký đồ dung dịch chuẩn guaifenesin Hình Sắc ký đồ dung dịch chuẩn kali sorbat Hình Sắc ký đồ dung dịch chuẩn bromhexin hydroclorid Hình Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp Hình Hình ảnh chồng phổ UV – VIS pic guaifenesin Hình 10 Hình ảnh chồng phổ UV – VIS pic kali sorbat Với điều kiện sắc ký từ kết thu chứng tỏ phương pháp đặc hiệu để định tính định lượng hoạt chất guaifenesin, kali sorbat bromhexin hydroclorid chế phẩm siro ho 3.2.2 Tính thích hợp hệ thống sắc ký Hình 11 Hình ảnh chồng phổ UV – VIS pic bromhexin hydroclorid Tính thích hợp hệ thống sắc ký xác định cách tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ guaifenesin khoảng 1,0 mg/ml; kali sorbat khoảng 0,1 mg/ml; bromhexin hydroclorid khoảng 0,04 mg/ml Ghi lại giá trị thời gian lưu, diện tích pic, độ cân xứng pic (T) độ phân giải pic (R) Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký trình bày Bảng Bảng Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký Guaifenesin Kali sorbat Bromhexin HCl Thời gian lưu Diện tích pic Thời gian lưu Diện tích pic Thời gian lưu Diện tích pic (phút) (mAU.s) (phút) (mAU.s) (phút) (mAU.s) STT 7,387 30552894 8,907 3143317 27,237 1713020 7,400 30553974 8,922 3141262 27,250 1714126 7,396 30603609 8,916 3144491 27,249 1714075 7,394 30637410 8,916 3142521 27,227 1714023 7,394 30670271 8,918 3141938 27,200 1718047 7,411 30617223 8,941 3142900 27,165 1715832 Trung bình 7,397 30605897 8,920 3142738 27,221 1714854 RSD (%) 0,11 0,15 0,13 0,04 0,12 0,11 Hệ số đối xứng (T) 1,34 Độ phân giải (R) 1,01 1,02 4,5 (So với guaifenesin) 36,1 (So với kali sorbat) Các số liệu thu cho thấy hệ thống sắc ký phù hợp cho việc phân tích định tính, định lượng đồng thời guaifenesin, kali sorbat bromhexin hydroclorid chế phẩm (RSD ≤ 2,0%, hệ số bất đối T ≤ 2,0; hệ số phân giải R ≥ 2,0) 3.2.3 Khảo sát khoảng tuyến tính Khảo sát dung dịch chuẩn hỗn hợp gồm guaifenesin, kali sorbat bromhexin hydroclorid mức nồng độ khác Kết ghi Bảng Bảng Kết khảo sát khoảng tuyến tính guaifenesin, kali sorbat bromhexin hydroclorid Guaifenesin Kali sorbat Bromhexin hydroclorid STT Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic (mAU.s) Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic (mAU.s) Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic (mAU.s) 0,5050 15313205 0,0504 1581768 0,02007 864790 0,8081 25912016 0,0807 2519080 0,03212 1392076 1,0101 30861285 0,1008 3144006 0,04015 1735425 1,2121 36777348 0,1210 3767273 0,04817 2090743 1,5151 45698607 0,1513 4698497 0,06022 2615628 Phương trình hồi quy: y = 29642109 x + 971591 r = 0,9986 Phương trình hồi quy: y = 30912800 x + 24878 r = 1,0000 Phương trình hồi quy: y = 43598368 x - 10530 r = 1,0000 Nhận xét: Với điều kiện sắc ký chọn, khoảng nồng độ khảo sát, chất guaifenesin, kali sorbat, bromhexin hydroclorid có tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ diện tích pic đáp ứng với hệ số tương quan r ~ 1,0 3.2.4 Khảo sát độ xác phương pháp 3.2.4.1 Khảo sát độ lặp lại Tiến hành khảo sát chế phẩm siro ho với điều kiện sắc ký phương pháp chuẩn bị mẫu ghi mục 2.2.2.1 2.2.2.2, lặp lại thí nghiệm với mẫu thử Kết trình bày Bảng Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Bảng Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp Mẫu thử Guaifenesin Kali sorbat Bromhexin hydroclorid STT Thể tích (ml) Diện tích pic (mAU.s) Hàm lượng (%) Diện tích pic (mAU.s) Hàm lượng (%) Diện tích pic (mAU.s) Hàm lượng (%) 5,0 30259225 99,94 3097145 99,22 1663080 97,15 5,0 30239506 99,88 3099818 99,30 1661732 97,07 5,0 30313735 100,12 3105108 99,47 1668952 97,49 5,0 30177742 99,67 3094749 99,14 1662170 97,10 5,0 30331929 100,18 3113563 99,74 1673554 97,76 5,0 30230456 99,85 3106909 99,53 1667338 97,40 99,94%; n = 6; RSD = 0,19% Trung bình 99,40%; n = 6; RSD = 0,22% 97,33%; n = 6; RSD = 0,28% Với điều kiện sắc ký chọn, kết Bảng cho thấy phương pháp có độ lặp lại tốt chất (RSD < 2,0%), áp dụng để định lượng mẫu thành phẩm 3.2.4.2 Khảo sát độ xác trung gian Xác định độ xác trung gian cách xác định hàm lượng hoạt chất mẫu thử kiểm nghiệm viên khác, tiến hành thử nghiệm với điều kiện thực nghiệm thời điểm khác với điều kiện sắc ký cách xử lý mẫu mơ tả mục 2.2.2.1 2.2.2.2, lặp lại thí nghiệm với mẫu thử Kết kiểm nghiệm viên thứ kết xác định độ xác trung gian kiểm nghiệm viên thể Bảng Bảng Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp Guaifenesin Kali sorbat Bromhexin hydroclorid Mẫu thử (5 ml) Diện tích pic (mAU.s) Hàm lượng (%) Diện tích pic (mAU.s) Hàm lượng (%) Diện tích pic (mAU.s) Hàm lượng (%) 30434137 101,83 3123253 99,93 1649331 96,39 30457827 101,91 3113611 99,62 1657738 96,88 30405764 101,74 3110755 99,53 1649678 96,41 30377688 101,65 3103755 99,31 1652908 96,60 30439146 101,85 3121892 99,89 1655588 96,76 30648046 102,55 3171121 101,46 1675838 97,94 Trung bình 101,92%; n = 6; RSD = 0,32% 99,96%; n = 6; RSD = 0,77% 96,83%; n = 6; RSD = 0,60% KNV (n = 12) RSD = 1,05% RSD = 0,62% RSD = 0,52% Kết Bảng cho thấy, phương pháp có độ lặp lại độ xác trung gian tốt, RSD với 12 mẫu thử kiểm nghiệm viên nhỏ 2,0% Như vậy, phương pháp áp dụng để định lượng mẫu thành phẩm 3.2.5 Khảo sát độ Chuẩn bị mẫu tự tạo nồng độ khác (70%, 100% 130%) cách thêm vào lượng xác chất chuẩn guaifenesin, kali sorbat bromhexin hydroclorid vào mẫu placebo Mỗi mức nồng độ tiến hành lần Tiến hành sắc ký theo điều kiện ghi mục 2.2.2.1 tính lượng hoạt chất thu hồi, kết thể Bảng Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Bảng Kết khảo sát độ phương pháp STT % Thêm vào so với hàm lượng ghi nhãn % Thu hồi guaifenesin % Thu hồi kali sorbat % Thu hồi bromhexin HCl 70% 98,89 99,07 98,75 70% 99,55 99,27 98,27 70% 98,75 98,99 98,88 100% 99,22 98,59 98,80 100% 98,94 98,49 99,30 100% 99,50 98,90 99,27 130% 100,91 99,33 98,70 130% 99,03 98,71 98,96 130% 98,86 98,63 99,41 Trung bình (n = 9) 99,29% 98,89% 98,93% RSD (%) 0,67% 0,30% 0,36% Kết khảo sát Bảng cho thấy phương pháp có độ cao (tỷ lệ tìm lại 99,29% guaifenesin; 98,89% kali sorbat 98,93% bromhexin hydroclorid), kết nằm khoảng từ 98,0 - 102,0%, đảm bảo tốt cho việc định lượng đồng thời ba thành phần guaifenesin, kali sorbat bromhexin hydroclorid chế phẩm 3.2.6 Khoảng xác định Từ kết khảo sát độ độ tuyến tính, suy khoảng xác định quy trình định lượng xây dựng từ 70% đến 130% so với hàm lượng ghi nhãn Kết luận Qua khảo sát thực nghiệm, xây dựng hệ sắc ký lỏng hiệu cao để định lượng đồng thời ba thành phần guaifenesin, bromhexin hydroclorid kali sorbat chế phẩm siro ho Phương pháp xây dựng có tương quan tuyến tính chặt chẽ diện tích pic đáp ứng nồng độ hoạt chất, độ lặp lại, độ xác trung gian độ cao với điều kiện trang thiết bị, hóa chất thuốc thử phù hợp với đa số phịng thí nghiệm Với kết thu được, chúng tơi đề nghị áp dụng phương pháp định lượng nghiên cứu cho chế phẩm siro ho có thành phần guaifenesin, bromhexin hydroclorid kali sorbat Tài liệu tham khảo Bộ Y tế (2015), Dược thư quốc gia Việt Nam, Lần xuất thứ hai, tr.807-811, Nhà xuất Y học Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam, Lần xuất thứ năm, Nhà xuất Y học The British Pharmacopoeia Commission (2017), British Pharmacopoeia The United States Pharmacopeial Convention (2017), United states Pharmacopoeia 40 Prayas Acharya1, T Prasanth Kumar1, Immanuel Agasteen1, Sreerama Rajasekhar1, G Neelima1*, “A Review on Analytical Methods for Determination of Guaifenesin Alone and In Combination with Other Drugs in Pharmaceutical Formulations”, Saudi Journal of Medical and Pharmaceutical Sciences, DOI: 10.21276/sjmps.2017.3.3.7 ISSN 2413-4910 SUMMARY A Reversed-phase HPLC method for simultaneous dertermination of Guaifenesin, Bromhexine hydrochloride and Potassium sorbate in cough syrup was introduced: - The mobile phase was prepared as follows: Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Phase A: Phosphate buffer pH 4.2: Dissolve 5.04 g of Disodium hydrogen phosphate and 3.01 g of Sodium dihydrogen phosphate in 1000 ml of Water, adjust with Phosphoric acid to a pH 4.2 Phase B: Methanol Time (minute) % Phase A % Phase B - 10 65 35 10 - 15 65 - 25 35 - 75 15 - 30 25 75 - Dilute solution: Methanol – Phosphate buffer pH 4.2 (45 : 55) - Detection: Detector DAD at 220 nm - Column: RP C18 (250 x 4.6 mm; µm) - Flow rate: 1.2 ml/min - Injection volume: 20 µl The method was validated about the specificity, system suitability, linear range, prescision, accuracy and validation results proved that the method was suitable for simultaneous determination of Guaifenesin, Bromhexine hydrochloride and Potassium sorbate in cough syrup (Ngày nhận bài: 30/12/2019 ; Ngày phản biện: 08/04/2020 ; Ngày duyệt đăng: 30/03/2021) XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN TẠP CHẤT LIÊN QUAN TRONG NGUYÊN LIỆU POLYPHYLLIN D PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ CÂY BẢY LÁ MỘT HOA BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC THÁI NGUYỄN HÙNG THU Trường Đại học Dược Hà Nội ĐỖ THỊ HÀ Viện Dược liệu CAO NGỌC ANH, HOÀNG THỊ THANH THẢO Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Từ khóa: Polyphyllin D, tạp chất liên quan, HPLC, Bảy hoa Đặt vấn đề Bảy hoa (Paris polyphylla Sm.) dược liệu có nhiều tác dụng dược lý như: ức chế enzym tyrosinase, chữa bệnh Leishmania [1], cầm máu bệnh chảy máu bất thường tử cung, kháng khuẩn, ức chế tổn thương dày,… đặc biệt tác dụng chống ung thư ức chế phát triển khối u [2],[3] Polyphyllin D (polyphyllin I hay paris saponin I) có tên khoa học diosgenin-3-O-α-L-arabinofuranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-Dglucopyranosid chất đánh dấu để kiểm nghiệm dược liệu Bảy hoa theo Dược điển Trung Quốc 2015 [4] Polyphyllin D có tác dụng ức chế số dòng tế bào ung thư ung thư gan HepG2, ung thư gan kháng thuốc R-HepG2, ung thư vú [5], ung thư phổi [6], ung thư máu MOLT-4, u ác tính M14, ung thư trực tràng, ung thư đại tràng SW-620 [7] Vì cần thiết lập chất chuẩn Polyphyllin D phục vụ công tác kiểm tra, đánh giá chất lượng dược liệu sản phẩm từ Bảy hoa Để thiết lập chất chuẩn cần xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu sử dụng để kiểm tra chất lượng nguyên liệu, đánh giá đồng nhất, đánh giá liên phòng theo dõi độ ổn định chất chuẩn thiết lập Trong tiêu chuẩn chất lượng chất chuẩn cần có tiêu tạp chất liên quan Trong nghiên cứu này, xây dựng thẩm định phương pháp HPLC để xác định giới hạn tạp chất liên quan nguyên liệu polyphyllin D dùng để thiết lập chất chuẩn Thực nghiệm 2.1 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ Các thiết bị dụng cụ phân tích hiệu chuẩn, đáp ứng yêu cầu ISO/IEC 17025 GLP, bao gồm: - Cân phân tích MS105 độ xác 0,01 mg (Mettler, Thụy Sĩ); - Hệ thống máy sắc ký lỏng hiệu cao Water ARC; - Cột Phenomenex Luna RP 18 (250 × 4,6 mm; µm); - Các dụng cụ thủy tinh có độ xác phù hợp: bình định mức, pipet, Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Hình 1) Sau lựa chọn ion mẹ ion con, tiến hành khảo sát, tối ưu hóa điều kiện khối phổ để tín hiệu thu cao ổn định, kết ghi Bảng 3.1.2 Tiến hành phân tích để phát corticoid Tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn hỗn hợp, sử dụng kỹ thuật MRM ghi lại sắc ký đồ Yêu cầu: giá trị độ lệch chuẩn tương đối thời gian lưu không 1,0%, diện tích pic tỷ lệ cường độ ion khơng 10,0% [6] (1) (2) Phổ MS scan lần để chọn ion mẹ m/z 359,16 Phân tích mẫu thử khẳng định có mặt corticoid mẫu dựa tiêu chí: - Xuất pic thời gian lưu với chuẩn corticoid tương ứng (chênh lệch thời gian lưu không 5%) [5] - Xuất đồng thời tín hiệu ion mẹ ion theo dõi MRM - Tỷ lệ cường độ ion (Ion ratio) mẫu thử phải khoảng ± 10% (tuyệt đối) so với tỷ lệ cường độ ion tương ứng mẫu chuẩn tiến hành điều kiện [5] Phổ ion ion mẹ chọn m/z 147,02 m/z 171,01 m/z 355,17 m/z 393,16 (3) m/z 401,15 m/z 373,20 m/z 295,12 m/z 313,14 (4) m/z 403,14 m/z 343,14 m/z 163,06 (5) m/z 435,18 m/z 337,13 m/z 319,20 18 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) (6) m/z 405,17 (7) m/z 309,19 m/z 477,24 m/z 327,13 m/z 355,14 m/z 337,13 (8) m/z 453,09 m/z 413,18 m/z 120,96 (9) m/z 435,11 m/z 339,09 m/z 321,15 (10) m/z 505,25 m/z 411,22 m/z 337,13 (11) m/z 467,15 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) m/z 355,14 m/z 373,10 19 (12) m/z 355,14 m/z 521,08 m/z 503,18 (13) m/z 307,13 m/z 361,11 m/z 325,15 Hình Kết điển hình khảo sát phổ khối lần lần để chọn ion mẹ ion định tính corticoid: (1)-Prednison, (2)-Dexamethason, (3)-Prednison acetat, (4)-Cortison acetat, (5)-Dexamethason acetat, (6)-Hydrocortison acetat, (7)-Betamethason valerat, (8)-Fluocinolon acetonid, (9)-Triamcinolon acetonid, (10)-Betamethason diproprionat, (11)-Clobetason propionat, (12)-Mometason furoat, (13)-Prednisolon 3.2 Thẩm định phương pháp 3.2.1 Độ thích hợp hệ thống sắc ký lỏng kết nối khối phổ Độ thích hợp hệ thống sắc ký lỏng khối phổ đánh giá chuẩn hỗn hợp có nồng độ corticoid khoảng: cortison acetat 10 ng/ml; betamethason valerat 15 ng/ml; betamethason dipropionat 20 ng/ml; clobetasol propionat 30 ng/ml; prednison, prednisolon, dexamethason, prednison acetat, hydrocortison acetat, triamcinolon acetonid fluocinolon acetonid 50 ng/ml; dexamethason acetat 75 ng/ml; mometason furoat 150 ng/ml Kết cho thấy với 13 corticoid phân tích, độ lặp lại thời gian lưu (RSD nhỏ 1%), diện tích pic ion theo dõi (RSD nhỏ 5%) phù hợp với yêu cầu độ lặp lại tín hiệu theo FDA [6] Kết tóm tắt thể Bảng Bảng Đánh giá độ thích hợp hệ thống sắc ký lỏng kết nối khối phổ Hoạt chất Prednison Dexamethason Prednison acetat Cortison acetat Hydrocortison acetat Triamcinolon acetonid Dexamethason acetat Fluocinolon acetonid Clobetasol propionat Betamethason valerat Betamethason dipropionat Mometason furoat Prednisolon 20 Dao động thời gian lưu (RSD (%), n = 6) Dao động diện tích pic ion theo dõi (RSD (%), n = 6) Tỷ lệ cường độ ion đánh giá chuẩn (TB ± SD, n = 6) 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 2,1 - 2,9 2,2 - 3,2 2,1 - 3,5 2,2 - 3,7 2,8 - 4,2 1,9 - 2,5 1,9 - 2,7 1,9 - 2,8 2,9 - 4,3 2,8 - 4,0 1,8 - 1,9 2,6 - 3,0 3,4 - 3,9 0,585 ± 0,01 0,509 ± 0,01 0,662 ± 0,02 0,423 ± 0,02 0,938 ± 0,02 0,571 ± 0,01 0,722 ± 0,02 0,357 ± 0,01 0,741 ± 0,03 0,330 ± 0,01 0,739 ± 0,01 0,673 ± 0,02 0,826 ± 0,02 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Như vậy, phương pháp đạt yêu cầu độ thích hợp hệ thống sắc ký lỏng khối phổ để phân tích 13 corticoid 3.2.2 Độ đặc hiệu Để đánh giá độ đặc hiệu phương pháp, dung dịch chuẩn hỗn hợp corticoid, mẫu mỹ phẩm không chứa corticoid, mẫu mỹ phẩm không chứa corticoid thêm chuẩn corticoid mẫu mỹ phẩm phát có chứa corticoid sử dụng Kết thực nghiệm cho thấy sắc ký đồ mẫu thử khơng có corticoid thêm chuẩn, xuất pic tách riêng khỏi corticoid khác phân tích đồng thời thành phần mẫu với ion theo dõi chế độ MRM cho corticoid (với giá trị m/z Bảng 1) thời gian lưu tỷ lệ cường độ ion pic corticoid tương ứng với thời gian lưu pic corticoid chuẩn nằm khoảng giá trị dao động tỷ lệ cường độ ion thu sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp 13 corticoid Trong đó, mẫu thử phát corticoid xuất pic ion theo dõi thời gian lưu với pic corticoid chuẩn tương ứng tỷ lệ cường độ đáp ứng ion nằm khoảng giá trị dao động tỷ lệ cường độ ion thu sắc ký đồ chuẩn corticoid tương ứng Sắc ký đồ mẫu mỹ phẩm khơng có corticoid không xuất pic thời điểm với pic chuẩn corticoid tương ứng ion theo dõi (Hình 2) Như vậy, phương pháp xây dựng cho phép phát cách đặc hiệu có mặt corticoid mỹ phẩm Mẫu kem khơng có Clobetasol propionat Mẫu phấn khơng có Clobetasol propionat Mẫu tự tạo kem thêm Clobetasol propionat Mẫu tự tạo phấn thêm Clobetasol propionat Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 21 Mẫu chuẩn Clobetasol propionat Mẫu thử có Clobetasol propionat Hình Một số sắc ký đồ tiêu biểu đánh giá độ đặc hiệu phương pháp 3.2.3 Giới hạn phát (LOD) - Tiến hành phân tích mẫu chuẩn pha dung dịch mẫu nồng độ thấp dần Giá trị LOD xác định nồng độ có tỷ lệ tín hiệu chiều cao pic (với pic ion con) chất cường độ nhiễu lân cận pic Sau xác định sơ giá trị LOD, tiến hành phân tích mẫu tự tạo nồng độ LOD để xác nhận phù hợp giá trị - Kết thu giá trị LOD corticoid thể Bảng Bảng Giới hạn phát phương pháp Tên chất LOD mẫu kem (µg/g) LOD mẫu phấn (µg/g) Prednison 0,21 0,53 Dexamethason 0,22 0,55 Prednison acetat 0,21 0,52 Cortison acetat 0,04 0,10 Hydrocortison acetat 0,22 0,54 Triamcinolon acetonid 0,21 0,52 Dexamethason acetat 0,31 0,76 Fluocinolon acetonid 0,21 0,51 Clobetasol propionat 0,13 0,32 Betamethason valerat 0,06 0,15 Betamethason dipropionat 0,09 0,22 Mometason furoat 0,60 1,51 Prednisolon 0,21 0,52 22 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 3.3 Ứng dụng để phát có mặt corticoid mẫu mỹ phẩm thị trường Phương pháp áp dụng để phân tích phát corticoid có mặt trái phép 36 mẫu mỹ phẩm Trong đó, phát thấy mẫu có chứa corticoid (kết cụ thể tóm tắt Bảng 5) Nhóm corticoid hoạt chất có tác dụng dược lý khơng phép sử dụng mỹ phẩm, nên tất trường hợp bị coi vi phạm quy định quản lý chất lượng mỹ phẩm Bảng Kết phân tích corticoid số mẫu mỹ phẩm Chênh lệch thời gian lưu so với chuẩn (%) Chênh lệch tỷ lệ cường độ ion so với chuẩn (%) Clobetasol propionat 0,2 4,9 M13 Dexamethason 0,2 5,4 M13 Dexamethason acetat 0,3 2,1 STT Mẫu M11 Corticoid phát Kết luận Phương pháp phát corticoid LC-MS/MS xây dựng nhằm phát corticoid có mặt trái phép mỹ phẩm dạng kem dạng phấn Phương pháp thẩm định độ đặc hiệu, độ thích hợp hệ thống giới hạn phát Kết thẩm định chứng minh phương pháp thích hợp với mục đích ứng dụng dùng để phát corticoid mỹ phẩm dạng kem dạng phấn Những kết ban đầu việc lạm dụng trái phép corticoid mỹ phẩm tượng thực tế, đòi hỏi cần kiểm soát chặt chẽ để đảm bảo an toàn cho người dùng Tài liệu tham khảo Lê Thị Hường Hoa (2013), “Nghiên cứu xây dựng quy trình phát xác định hàm lượng số chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm”, Luận án Tiến sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nợi Hồng Thanh Tâm (2008), “Xây dựng phương pháp phát số chất thuộc nhóm glucocorticoid trộn trái phép mỹ phẩm”, Luận văn Thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội ASEAN, Annex of the Asean cosmetics directive, Version No: 2019-01, 15 July 2019 ASEAN (2005), Identification of hydrocortisone acetate, dexamethasone, betamethasone, betamethasone 17-valerate and triamcinolone acetonide in cosmetic products by TLC and HPLC (ACM 007, 02/12/2005) FDA (2003), Guidance for industry: Mass spectrometry for confirmation of the identity of animal drug residues FDA (2019), Guideline for the validation of chemical methods in food, feed, cosmetics and veterinary products SUMMARY A LC-MS-based method was developed for simultaneous screening detection of 13 glucocorticoids illegally used in cosmetic creams and powder Glucocorticoid were extracted from cream and powder matrices with a mixture of methanol and water (9:1, v/v) following by chromatographic separation on a C18 UPLC column with a mixture of methanol and 0.1% aquaeous solution of formic acid with gradient program as mobile phase, maintaining at flow rate of 0.2 ml per minute MS/MS detection of each glucocorticoid was done by monitoring simultaneously precursor ion and product ions in MRM mode The method was validated in terms of specificity and was proved as suitable for intended application (Ngày nhận bài: 07/04/2020 ; Ngày phản biện: 27/07/2020 ; Ngày duyệt đăng: 21/08/2020) Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 23 ĐỊNH LƯỢNG RISPERIDON TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LÊ ĐÌNH KHÁNH, HỒNG VĂN ĐỨC, TẠ MẠNH HÙNG, ĐOÀN CAO SƠN Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Từ khóa: Risperidon, LC-MS/MS, huyết tương, tương đương sinh học Đặt vấn đề Risperidon thuốc chống loạn thần khơng điển hình loại benzisoxazol (cịn gọi thuốc chống loạn thần hệ thứ hai) Thuốc có tác dụng đối kháng chọn lọc với thụ thể serotonin typ (5-HT2) với thụ thể dopamin typ (D2) Risperidon chấp thuận nhiều nước để điều trị tâm thần phân liệt Sau uống risperidon, nồng độ đỉnh huyết tương đạt vòng Sinh khả dụng uống 66 ± 28% người có chuyển hóa mạnh cao người có chuyển hóa yếu [1] Ở mức liều sử dụng viên nén mg risperidon, nồng độ tối đa (Cmax) huyết tương người khoảng từ 14 - 16 ng/ml [5] Do nồng độ risperidon thấp nên việc xác định nồng độ thuốc mẫu huyết tương người địi hỏi phải có phương pháp chiết tách phù hợp phương pháp phân tích có độ nhạy cao Do cần xây dựng phương pháp phân tích phù hợp để xác định nồng độ risperidon mẫu huyết tương người Dựa nguyên lý hoạt động phương pháp sắc ký lỏng – khối phổ (LC-MS), phương pháp chiết tách tham khảo tài liệu [2], tiến hành nghiên cứu xây dựng phương pháp UPLC-MS/MS có đủ độ nhạy, đặc hiệu, xác, định lượng risperidon mẫu huyết tương người Thực nghiệm Các thiết bị quản lý hiệu chuẩn theo quy định ISO/IEC GLP, bao gồm: - Máy sắc ký lỏng khối phổ Sciex Qtrap 6500+ (Sciex – Mỹ); - Cân phân tích Mettler Toledo (Thụy Sĩ, độ xác d = 0,01 mg); - Tủ lạnh sâu -35 oC ± oC (Panosonic – Nhật Bản); 24 - Chất chuẩn: + Risperidon (RPD): Chất chuẩn Sigma, SKS: LRAC2895, hàm lượng 99,8% tính theo nguyên trạng + Haloperidol: Chất chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, SKS: 0108241, hàm lượng 99,55%, độ ẩm 0,04% Haloperidol sử dụng làm chất nội chuẩn (IS) RPD phương pháp phân tích - Dung mơi, hóa chất: Đạt tiêu chuẩn tinh khiết dùng cho HPLC LC/MS 2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu Huyết tương trắng: Khơng có risperidon Bệnh viện Trung ương Qn đội 108 cung cấp 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.2.1 Điều kiện sắc ký - Cột Acquity BEH C18; 50 x 2,1 mm; 1,7 µm - Pha động: Acetonitril – dung dịch amoni bicarbonat mM, tỷ lệ 80 : 20 (v/v) - Tốc độ dòng: 0,2 ml/phút - Nhiệt độ autosampler (buồng tiêm mẫu): Nhiệt độ phòng 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ - Máy lắc xoáy, máy lọc nước, 2.1.2 Hóa chất, chất chuẩn - Thể tích tiêm mẫu: µl 2.1 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn - Máy ly tâm lạnh (Sigma 4-16KS – Đức); - Dụng cụ: Bình định mức, pipet loại A, ống ly tâm, 2.2.2.2 Điều kiện khối phổ Kiểu khối phổ hai lần (MS/MS), nguồn ion hóa ESI (+) Các thông số thiết bị khối phổ để phát RPD chất chuẩn nội (IS) trình bày Bảng 2.2.2.3 Phương pháp chuẩn bị mẫu - Dung dịch chuẩn gốc: Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc methanol có nồng độ RPD khoảng 200 µg/ml dung dịch chuẩn nội gốc methanol có nồng độ haloperidol khoảng 500 µg/ml Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Bảng Các thông số detector khối phổ dùng để định lượng RPD chuẩn nội Hoạt chất Thơng số Chế độ ion hóa Điện ion hóa (V) Khí phun sương (psi) Khí tăng cường (psi) Nhiệt độ hóa (oC) Điện chọn lọc ion (V) Khí làm (psi) Năng lượng phân mảnh (V) Ion ban đầu (parent ion) Ion tạo thành (product ion) Haloperidol Risperidon (IS) ESI(+) 4500 65 65 450 50 35 37 411 191 ESI(+) 4500 65 65 450 50 35 29 376 165 - Dung dịch chuẩn nội làm việc: Từ dung dịch chuẩn nội gốc chuẩn bị dung dịch chuẩn nội làm việc hỗn hợp methanol-nước (1:1) có nồng độ haloperidol khoảng 500 ng/ml - Dung dịch chuẩn làm việc huyết tương: Từ dung dịch chuẩn gốc RPD, chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc huyết tương có nồng độ RPD 50 ng/ml ng/ml - Từ dung dịch chuẩn làm việc huyết tương, chuẩn bị mẫu cách pha loãng với huyết tương trắng để thu mẫu đường chuẩn có nồng độ RPD từ 0,2 ng/ml đến 50 ng/ml mẫu LLOQ, LQC, SQC, MQC HQC chứa RPD có nồng độ tương ứng 0,2; 0,6; 4; 20 40 ng/ml 2.2.2.4 Phương pháp xử lý mẫu Mẫu HT để rã đơng nhiệt độ phịng Lấy 100 µl mẫu huyết tương vào ống ly tâm, thêm 20 µl dung dịch chuẩn nội làm việc Thêm ml acetonitril Lắc xốy 10 giây Ly tâm với tốc độ 6500 vịng/phút phút Lấy lớp dịch Tiêm vào hệ thống sắc ký 2.2.2.5 Phương pháp tính kết Xác định nồng độ RPD có mẫu thử (chưa biết nồng độ) dựa vào tỷ lệ diện tích pic tương ứng RPD/IS thu từ sắc đồ mẫu thử đường chuẩn tương ứng phân tích điều kiện Tiến hành thẩm định phương pháp phân tích theo quy định EMA US-FDA [3],[4] Kết bàn luận 3.1 Độ đặc hiệu – chọn lọc phương pháp Phân tích mẫu HT trắng mẫu HT tự tạo chứa chuẩn nội RPD với nồng độ khoảng 0,2 ng/ml theo phương pháp xây dựng Trên SKĐ mẫu HT trắng (Hình 1), thời điểm 0,83 phút 0,97 phút trùng với thời gian lưu RPD IS mẫu chuẩn (Hình 2) khơng xuất pic có mảnh phổ khối m/z = 411 → 191 (đặc trưng cho RPD), mảnh phổ khối m/z = 376 → 165 (đặc trưng cho IS) Do vậy, phương pháp phân tích có độ đặc hiệu - chọn lọc với RPD IS theo quy định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học [3],[4] Hình Sắc ký đồ mẫu huyết tương trắng Hình Sắc ký đồ mẫu huyết tương tự tạo chứa chuẩn RPD (0,2 ng/ml) chuẩn nội Chú thích hình (từ xuống): Sắc ký đồ tổng ion; sắc ký đồ chọn lọc ion Risperidon có m/z = 411 → 191; sắc ký đồ chọn lọc ion chuẩn nội có m/z = 376 → 165 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 25 3.2 Đường chuẩn khoảng tuyến tính Phân tích mẫu HT chứa chuẩn RPD có nồng độ khoảng từ 0,2 ng/ml đến 50 ng/ml chuẩn nội tương ứng theo quy trình xây dựng Xác định tương quan nồng độ RPD có mẫu tỷ lệ diện tích pic tương ứng RPD/IS phương pháp hồi quy tuyến tính, sử dụng hệ số tỷ trọng (1/nồng độ2) Kết xác định mối tương quan tuyến tính trình bày Bảng Bảng Kết xác định khoảng tuyến tính phương pháp Độ (%) Mẫu Nồng độ (ng/ml) Đường chuẩn Đường chuẩn Đường chuẩn Đường chuẩn Đường chuẩn S1 0,201 98,6 101,4 98,2 94,4 96,9 S2 0,403 102,8 95,5 100,3 109,8 105,9 S3 1,006 99,5 101,5 107,7 102,5 100,4 S4 2,013 100,9 105,8 102,8 102,3 100,7 S5 5,032 100,3 97,3 97,8 97,4 100,1 S6 10,065 102,5 103,1 99,1 104,0 101,7 S7 25,162 101,8 98,8 102,0 98,6 97,9 S8 50,324 93,7 96,5 92,2 90,9 96,4 a = 0,0423 a = 0,0404 a = 0,0409 a = 0,0416 a = 0,0420 b = 0,0007 b = 0,0012 b = 0,001 b = 0,0011 b = 0,0012 r = 0,9994 r = 0,9992 r = 0,9987 r = 0,9977 r = 0,9994 Phương trình hồi quy (y = ax + b) Kết xác định cho thấy khoảng nồng độ từ 0,2 ng/ml đến 50 ng/ml có tương quan tuyến tính nồng độ RPD với tỷ lệ diện tích pic tương ứng RPD/IS với hệ số tương quan xấp xỉ Nồng độ RPD xác định từ đường chuẩn so với giá trị lý thuyết đạt xấp xỉ 100% nằm giới hạn cho phép theo qui định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học 3.3 Giới hạn định lượng phương pháp Phân tích mẫu huyết tương trắng mẫu huyết tương chứa RPD với nồng độ khoảng 0,2 ng/ml (mẫu LLOQ) Xác định diện tích pic RPD chuẩn nội mẫu LLOQ xác định nồng độ RPD có mẫu từ đường chuẩn tiến hành làm song song điều kiện Tiến hành ngày khác Kết thẩm định giới hạn định lượng phương pháp trình bày Bảng (xem trang sau) Kết thẩm định cho thấy tỷ lệ đáp ứng pic RPD mẫu LLOQ (nồng độ khoảng 0,2 ng/ml) so với đáp ứng thời gian lưu tương ứng mẫu huyết tương trắng có thêm chuẩn nội (mẫu zero) > 5; tỷ lệ nồng độ RPD xác định từ đường chuẩn so với nồng độ thực có mẫu nằm khoảng từ 80 – 120% (trung bình = 90,9% CV = 12,3%) đáp ứng yêu cầu giới hạn định lượng phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học 3.4 Xác định độ đúng, độ lặp lại phương pháp Tiến hành thẩm định độ đúng, độ lặp lại lô mẫu thử LLOQ, LQC, SQC, MQC HQC chứa RPD có nồng độ tương ứng 0,2; 0,6; 4; 20 40 ng/ml Xác định hàm lượng RPD có mẫu phương pháp đường chuẩn tỷ lệ % nồng độ xác định từ đường chuẩn so với nồng độ lý thuyết Tiến hành ngày khác Kết xác định độ đúng, độ lặp lại phương pháp trình bày Bảng 26 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Bảng Kết xác định giá trị LLOQ Ngày thẩm Tỷ lệ diện tích định pic Ngày Ngày Ngày 0,008 0,007 0,009 0,007 0,009 0,009 0,009 0,008 0,008 0,009 0,008 0,008 0,008 0,007 0,008 0,007 0,008 0,007 Nồng độ xác định từ đường chuẩn (ng/ml) Độ so với nồng độ thực (%) 0,169 0,162 0,206 0,167 0,209 0,203 0,174 0,153 0,170 0,171 0,170 0,156 0,212 0,198 0,219 0,211 0,213 0,207 Trung bình độ (3 ngày) CV % (n = 18) Tỷ lệ đáp ứng LLOQ/Zero 82,2 78,5 100,0 81,3 101,7 98,3 84,4 74,0 82,6 83,1 82,4 75,8 102,9 95,9 106,2 102,4 103,4 100,7 Trung bình (%) 90,3% 32,6 CV= 11,9% 80,4% 18,5 CV= 5,4% 101,9% 11,5 CV= 3,4% 90,9% 12,3% Bảng Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày khác ngày Độ đúng, Độ lặp lại Mẫu LLOQ (0,2 ng/ml) Mẫu LQC (0,6 ng/ml) Mẫu SQC (4 ng/ml) Mẫu MQC (20 ng/ml) Mẫu HQC (40 ng/ml) Độ Độ Độ Độ Độ Độ Độ Độ Độ Độ lặp lại lặp lại lặp lại lặp lại lặp lại (%) (%) (%) (%) (%) (CV%) (CV%) (CV%) (CV%) (CV%) Ngày (n = 6) 90,3 Ngày (n = 6) 80,4 Ngày (n = 6) 101,9 Khác ngày (n = 3) 90,0 11,9 5,4 3,4 12,3 99,6 92,6 97,4 95,5 8,4 5,0 2,6 6,3 98,9 104,9 94,9 100,9 2,7 3,4 2,4 5,2 99,1 94,4 94,0 95,7 5,1 4,5 3,4 5,0 98,5 92,8 92,6 94,2 4,3 3,7 4,0 4,6 Kết thẩm định cho thấy khoảng nồng độ thấp; trung bình cao, phương pháp có độ ngày, khác ngày từ 85% đến 115% (ngoại trừ mẫu LLOQ từ 80% đến 120%); độ lặp lại ngày, khác ngày với giá trị CV < 15,0% (ngoại trừ mẫu LLOQ với CV < 20%); đáp ứng yêu cầu độ đúng, độ lặp lại phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học theo hướng dẫn US-FDA EMEA 3.5 Độ ổn định hoạt chất huyết tương Tiến hành nghiên cứu độ ổn định RPD HT lô mẫu LQC HQC Đánh giá độ ổn định RPD HT cách so sánh nồng độ RPD có mẫu bảo quản điều kiện định với nồng độ pha thực tế Kết nghiên cứu độ ổn định RPD huyết tương hai khoảng nồng độ thấp cao trình bày Bảng Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 27 Bảng Kết nghiên cứu độ ổn định RPD huyết tương Độ ổn định Sau chu kỳ đông – rã đông Độ ổn định thời gian ngắn (6 giờ; nhiệt độ phòng) Độ ổn định autosampler (48 giờ; nhiệt độ phòng) Độ ổn định thời gian dài (95 ngày; - 35 °C ± °C) Nồng độ trung bình (ng/ml) % độ ổn định CV% Nồng độ trung bình (ng/ml) % độ ổn định CV% Nồng độ trung bình (ng/ml) % độ ổn định CV% Nồng độ trung bình (ng/ml) % độ ổn định CV% LQC 0,664 109,8 1,0 0,599 99,0 4,6 0,672 108,5 12,0 0,596 98,4 1,7 HQC 42,418 105,2 3,2 38,902 96,5 2,7 42,045 101,9 2,8 36,039 89,4 4,3 Kết thẩm định cho thấy độ ổn định RPD huyết tương điều kiện bảo quản khác (sau chu kỳ đông – rã đông; bảo quản nhiệt độ phòng sau giờ; bảo quản autosampler sau 48 bảo quản - 35°C ± °C sau 95 ngày) đáp ứng yêu cầu độ ổn định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học Kết luận Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng risperidon huyết tương người LC/MS-MS với giá trị giới hạn định lượng 0,2 ng/ml; khoảng tuyến tính từ 0,2 đến 50 ng/ml; độ xấp xỉ 100% , độ lặp lại với CV < 15% đáp ứng yêu cầu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học EMA US-FDA [3],[4] Qui trình xử lý mẫu nhanh, đơn giản, thời gian phân tích ngắn (2,0 phút cho mẫu) Phương pháp phân tích ứng dụng nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học chế phẩm chứa hoạt chất risperidon Tài liệu tham khảo Bộ Y tế (2018), Dược thư quốc gia Việt Nam, lần xuất thứ hai, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, trang 1249-1251 Bhatt J, Subbaiah G, Singh S “Liquid chromatography/tandem mass spectrometry method for simultaneous determination of risperidone and its active metabolite 9-hydroxyrisperidone in human plasma” Rapid Communication in Mass Spectrometry 2006;20(14):2109-14 European Medicines Agency, Committee for Medicinal Products for Human Use (2012) Guideline on Validation of Bioanalytical Methods U.S Department of Health and Human Services Food and Drug Administration (2018): Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation Y Liu, M Zhang, J Jia, Y Liu, G Liu, S Li, W Wang, L Weng, C Yu, “Bioequivalence and Pharmacokinetic Evaluation of Two Formulations of Risperidone mg: An Open-Label, Single-Dose, Fasting, Randomized-Sequence, Two-Way Crossover Study in Healthy Male Chinese Volunteers” Drugs in R&D, volume 13, pages 29-36 (2013) SUMMARY A high throughput and specific method using Ultra Performance Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry for determination of Risperidone in human plasma was developed The Sciex Qtrap 6500+ LC-MS/MS was operated under the multi reaction-monitoring mode using the positive electrospray ionization technique Risperidone and internal standard were treated from human plasma by protein precipitate technique using Acetonitrile The samples were chromatographed on a C18 column (dimension 50 x 2.1 mm, particle 1.7 µm) with isocratic elution at a flow rate of 0.2 ml/min using 5mM Ammonium bicarbonate – Acetonitrile with suitable ratio The standard curves were found to be linear in the range 0.2 to 50 ng/ml, with mean correlation coefficient of ≥ 0.99 The intra-day and inter-day precision and accuracy were within 85% - 115.0% Total run time was 2.0 only This method can be used for BA-BE studies of Risperidone preparations (Ngày nhận bài: 14/12/2020 ; Ngày phản biện: 10/03/2021 ; Ngày duyệt đăng: 30/03/2021) 28 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) THÔNG TIN KHOA HỌC - TIN TỨC GIỚI THIỆU PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KÍCH THƯỚC TIỂU PHÂN BẰNG KÍNH HIỂN VI THEO QUY ĐỊNH TRONG DƯỢC ĐIỂN NGUYỄN THU PHƯƠNG, NGUYỄN HỮU THẢO, TRẦN THỊ HỒNG ANH Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Từ khóa: Tiểu phân, kích thước tiểu phân, kính hiển vi, xác định kích thước tiểu phân Giới thiệu chung phương pháp xác định kích thước tiểu phân ứng dụng Dược điển Tiểu phân thuốc tiêm thuốc tiêm truyền hạt nhỏ khơng hịa tan, linh động, khơng phải bọt khí, có nguồn gốc ngẫu nhiên từ bên [1] Các tiểu phân chia thành hai loại: loại nhìn thấy bằng mắt thường (xơ bông, hạt học,…) có thể phát cách soi đèn nền đen/trắng phù hợp; loại không nhìn thấy bằng mắt thường cần phải sử dụng thiết bị riêng để phát Theo quy định Dược điển Việt Nam Dược điển tham chiếu hành, chế phẩm thuốc tiêm, thuốc tiêm truyền chế phẩm thuốc nhỏ mắt cần kiểm soát tiểu phân qua tiêu “Xác định giới hạn tiểu phân” hai phương pháp: Phương pháp dùng thiết bị đếm tiểu phân có sử dụng tia Laser; Phương pháp dùng kính hiển vi [1],[2],[4] Phương pháp phương pháp sử dụng thiết bị hoạt động theo nguyên tắc cản sáng cho phép tự động xác định kích thước tiểu phân số lượng tiểu phân theo kích thước chọn Đây phương pháp đo gián tiếp, thường áp dụng kiểm tra tiểu phân khơng nhìn thấy mắt thường dung dịch thuốc tiêm thuốc tiêm truyền có nồng độ tiểu phân nhỏ [1] Phương pháp sử dụng kính hiển vi, nguyên tắc đo đếm trực tiếp tiểu phân lưu giữ màng lọc độ phóng đại thích hợp Phương pháp áp dụng cho chế phẩm khơng thật trong, có nồng độ tiểu phân lớn hay có độ nhớt cao, tạo bọt khí đưa vào thiết bị đếm tiểu phân Ví dụ: chế phẩm tiêm dạng nhũ tương, dạng hỗn dịch, dạng keo hay dạng liposom Nếu độ nhớt chế phẩm cao, cản trở phương pháp kiểm tra, pha lỗng với dung mơi thích hợp để tiến hành thử nghiệm [1] Theo quy định Dược điển tham chiếu hành, phương pháp sử dụng để đánh giá lại chế phẩm kết đo phương pháp không đạt Tuy nhiên, phương pháp thực tiễn áp dụng có phịng thí nghiệm đầu tư thiết bị Vì vậy, hiểu biết kinh nghiệm thực tiễn hạn chế Ưu nhược điểm phương pháp Phương pháp 1: Ưu điểm phương pháp hệ thống tương đối kín, thao tác dễ dàng kết tương đối xác Tuy nhiên có nhược điểm áp dụng với mẫu có nồng độ tiểu phân nhỏ (dung dịch thuốc tiêm tiêm truyền) bị ảnh hưởng bọt khí Phương pháp 2: Phương pháp quét trực tiếp tiểu phân có dung dịch lưu giữ màng lọc nên khơng có ảnh hưởng bọt khí đến kết phân tích, ngồi quan sát tiểu phân Mặc dù vậy, phương pháp địi hỏi điều kiện mơi trường tiến hành nghiêm ngặt [1],[2],[4] như: thiết bị phải đặt buồng thổi khí sạch, thao tác chuẩn bị mẫu cách xử lý dụng cụ sau lọc phải đảm bảo tránh lây nhiễm tạp tiểu phân từ môi trường bên ngồi vào Trong khn khổ báo, tập trung giới thiệu phương pháp xác định giới hạn tiểu phân khơng nhìn thấy mắt thường dung dịch tiêm truyền, thiết bị kính hiển vi Olympus Giới thiệu thiết bị kính hiển vi Olympus dùng để xác định tiểu phân theo phương pháp 3.1 Cấu tạo Thiết bị xác định kích thước tiểu phân sử dụng kính hiển vi bao gồm: Kính hiển vi Olympus (Model: BX51M), Camera CDD chuyên dụng (Model: XC 10), phần mềm phân tích đếm tiểu phân kèm theo quyền (Model: Particle inspector A-INSP-P-V-5.64), máy tính, hình, máy in trang thiết bị phụ trợ kèm theo bao gồm: Buồng thổi khí Esco (Model: LVG-5AG-F8), lọc chân không phụ kiện kèm theo (Merck Millipore, Model: XX1004700), bơm hút chân không (Merck Millipore, Model: WP6222050) Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 29 Các phụ kiện dùng cho thiết bị bao gồm màng lọc, khăn lau găng tay không bụi để tránh nhiễm tiểu phân từ môi trường hay thao tác Màng lọc loại đặc chủng, màu xám, khơng có đường vạch kẻ có đường kẻ dễ bị sai số có tiểu phân nằm đường kẻ Hình Hình ảnh tổng quan kính hiển vi Olympus Particle Inspector Đưa màng lọc làm khô vào gá màng lọc đưa vào vị trí bàn di mẫu Sau đặt giới hạn cho bàn di mẫu tiến hành cài đặt phương pháp Các bước để cài đặt phương pháp: chọn chế độ quét vòng tròn điểm (circle) chế độ khác tùy vào mục đích quét thường chọn chế độ circle; sau tiến hành cài đặt để loại bớt tiểu phân nhỏ hay loại bỏ tiểu phân dạng sợi (fiber); chọn tiêu chuẩn đánh giá Chọn ngưỡng phát tiểu phân “thresholds” công cụ Cài đặt tên mẫu Sau bấm “start”, máy báo “focus”một số điểm Tiến hành “focus” điểm theo yêu cầu Sau hoàn tất điểm máy tự động quét toàn bề mặt màng lọc để xác định tiểu phân Ngay sau máy hoàn thành việc quét tiểu phân cần tiến hành xử lý kết [3] Ứng dụng thực tế, xác định tiểu phân chế phẩm phương pháp để so sánh * Đối tượng thí nghiệm: Dung dịch Hetopartat (Số lô: 01417, NXS: 26/4/2017, HD: 26/4/2020) Nhà sản xuất: Công ty Cổ phần Dược Danapha * Chuẩn bị mẫu: - Mẫu 1: Tiến hành máy xác định kích thước tiểu phân dung dịch PAMAS (đã hiệu chuẩn) Mẫu chuẩn bị sau: trộn thể tích ống chế phẩm (thể tích ống 10 ml), siêu âm nhẹ 15 giây để loại bọt khí - Mẫu 2: Tiến hành thiết bị xác định kích thước tiểu phân sử dụng kính hiển vi (đã hiệu chuẩn) Lọc ống chế phẩm (thể tích 10 ml), đặt màng lọc đĩa petri để khơ màng lọc bình hút ẩm * Tiến hành: Trên thiết bị đo kích thước tiểu phân dung dịch (PAMAS): Tiến hành đo lần, lần ml, loại bỏ kết lần 1, lấy trung bình kết lần đo sau Đếm số tiểu phân có kích thước ≥ 10 µm ≥ 25 µm 01 đơn vị chế phẩm Trên kính hiển vi (OLYMPUS): Tiến hành quét mẫu màng lọc chuẩn bị vật kính có độ phóng đại 10x Đếm số tiểu phân có kích thước ≥ 10 µm ≥ 25 µm 01 đơn vị chế phẩm Kết đo kích thước tiểu phân hai phương pháp thể Bảng 3.2 Các bước tiến hành Trước tiến hành, thiết bị dụng cụ phải vệ sinh sẽ, đảm bảo khơng có tiểu phân gây ảnh hưởng đến kết phép thử 3.2.1 Chuẩn bị buồng thổi khí Sau cắm nguồn điện, đợi tủ làm ấm khơng khí quạt thổi tiểu phân bên ngoài, bật ổ điện cho kính hiển vi đèn, bật đèn UV trước khoảng 30 phút để loại vi sinh vật có mặt [3] 3.2.2 Chuẩn bị mẫu Ngay trước tiến hành, tráng rửa dụng cụ nước tiểu phân (trừ màng lọc) theo thứ tự từ xuống dưới, từ vào - Mẫu trắng: Lọc 50 ml nước khơng có tiểu phân qua màng lọc, đặt màng lọc đĩa petri để khô màng lọc bình hút ẩm - Mẫu thử: Chuẩn bị theo chuyên luận, lọc, ý phân bố lượng tiểu phân bề mặt màng lọc, đặt màng lọc đĩa petri để khô màng lọc bình hút ẩm Rửa dụng cụ chất tẩy rửa ấm; phễu lọc cần để khô, ngâm acid sulfocromic, tráng rửa nước RO tráng lại nước khơng có tiểu phân [3] 3.2.3 Tiến hành đo mẫu xử lý kết phần mềm phân tích Các bước thao tác bao gồm: chuyển bàn di mẫu đến vị trí thích hợp, bật cơng tắc điện thân máy kính hiển vi, bật máy tính, vào phần mềm Olympus Bảng Kết đo kích thước tiểu phân hai phương pháp Tiểu phân ≥ 10 µm/lọ Tiểu phân ≥ 25 µm/lọ Kết luận 30 Đo KTTP dung dịch Pamas Kết Yêu cầu 1065 ≤ 6000 tiểu phân 23 ≤ 600 tiểu phân Đạt Đo KTTP kính hiển vi Olympus Kết Yêu cầu 1086 ≤ 3000 tiểu phân 39 ≤ 300 tiểu phân Đạt Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Hình Kết xác định kích thước tiểu phân máy PAMAS Hình Kết xác định kích thước tiểu phân kính hiển vi Hình Một số hình ảnh hạt tiểu phân đặc trưng xác định kính hiển vi Nhận xét: Dựa vào kết so sánh thiết bị đo khác cho thấy hai phương pháp xác định giới hạn tiểu phân khơng nhìn thấy mắt thường có tương đồng kết Tài liệu tham khảo Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam, Lần xuất thứ năm, Phụ lục 11.8 “Xác định giới hạn tiểu phân” The British Pharmacopoeia Commission (2018), British Pharmacopoeia, “Particulate Contamination: Sub- visible Particles (Appendix XIII A)” Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương- Khoa Kiểm nghiệm dạng Bào chế (2018), Hướng dẫn sử dụng Thiết bị xác định kích thước tiểu phân dùng kính hiển vi (VKN/HLII/22.03) The United States Pharmacopeial Convention (2015), United states Pharmacopoeia 38, “Particulate Matter in Injections 〈788〉” Hướng dẫn sử dụng Kính hiển vi Olympus model BX51M SUMMARY “Particulate matter” stated in the current pharmacopoeias is an important parameter for parenteral preparations quality control To perform this test Vietnamese pharmacopoeia, British pharmacopoeia and the United States pharmacopoeia introduce methods including Method 1- Light obscuration particle count test and Method - Microscopic particle count test In fact, the second method is used less than the first one and there are not many laboratories equipped with microscope So the understanding about it is limited This article focuses on an overview about methods for particles count test stated in the current Pharmacopoeias, introduction of Olympus microscope and the application of two methods on the same sample The experimental results showed the similarity of these two methods (Ngày nhận bài: 18/3/2019 ; Ngày phản biện: 04/03/2020 ; Ngày duyệt đăng: 21/08/2020) Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) 31 MỤC LỤC ● Quản lý - Trao đổi nghiệp vụ - Định hướng công tác kiểm tra giám sát chất lượng thuốc năm 2021 PGS TS ĐOÀN CAO SƠN – VIỆN TRƯỞNG VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TRUNG ƯƠNG ● Nghiên cứu khoa học - Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời Guaifenesin, Bromhexin hydroclorid Kali sorbat siro ho kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo NGUYỄN THỊ HỒNG, NGUYỄN VĂN BÌNH, DƯƠNG MINH TÂN, LÊ QUANG THẢO - Xây dựng quy trình xác định giới hạn tạp chất liên quan nguyên liệu Polyphyllin D phân lập từ Bảy hoa phương pháp HPLC CAO NGỌC ANH, HOÀNG THỊ THANH THẢO, ĐỖ THỊ HÀ, THÁI NGUYỄN HÙNG THU Trang - Xây dựng phương pháp phát đồng thời 13 Corticoid dùng trái phép mỹ phẩm sắc ký lỏng kết nối khối phổ (LC-MS/MS) NGÔ THỊ DUYÊN, NGUYỄN VĂN HÀ, NGUYỄN VĂN BÌNH, 15 DƯƠNG THỊ KHÁNH HUYỀN, LÊ ĐÌNH CHI, TẠ MẠNH HÙNG - Định lượng Risperidon huyết tương người phương pháp LC-MS/MS LÊ ĐÌNH KHÁNH, HỒNG VĂN ĐỨC, TẠ MẠNH HÙNG, ĐOÀN CAO SƠN 24 ● Thông tin khoa học - Tin tức - Giới thiệu phương pháp xác định giới hạn kích thước tiểu phân kính hiển vi theo quy định dược điển NGUYỄN THU PHƯƠNG, NGUYỄN HỮU THẢO, TRẦN THỊ HỒNG ANH 29 CONTENTS Page ● Management - Professional exchange - Objectives and activities of the drug quality control and monitoring for the year 2021 Associate Prof ĐOÀN CAO SƠN, Ph.D., Director of NIDQC ● Scientific researches - Development and validation of the procedure for simultaneous determination of Guaifenesin, Bromhexine hydrochloride and Potassium sorbate in cough syrup by Reverse Phase Liquid Chromatography technique NGUYỄN THỊ HỒNG, NGUYỄN VĂN BÌNH, DƯƠNG MINH TÂN, LÊ QUANG THẢO - Development a process for determination the limits of related substances in Polyphyllin D raw materials, isolated from “Bảy hoa - Paris polyphylla var Chinensis Smith.” plant by HPLC method CAO NGỌC ANH, HOÀNG THỊ THANH THẢO, ĐỖ THỊ HÀ, THÁI NGUYỄN HÙNG THU - Development a method of simultaneous identification of 13 Glucocorticoids illegally used in cosmetics by LC-MS/MS NGÔ THỊ DUYÊN, NGUYỄN VĂN HÀ, NGUYỄN VĂN BÌNH, 15 DƯƠNG THỊ KHÁNH HUYỀN, LÊ ĐÌNH CHI, TẠ MẠNH HÙNG Determination of Risperidon in human plasma by LC-MS/MS method LÊ ĐÌNH KHÁNH, HOÀNG VĂN ĐỨC, TẠ MẠNH HÙNG, ĐOÀN CAO SƠN 24 ● Technical information – News - Introduction of the method of determining the particle size limit by microscope specified in Pharmacopeia NGUYỄN THU PHƯƠNG, NGUYỄN HỮU THẢO, TRẦN THỊ HỒNG ANH 29 32 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) ... Bộ Y tế quan chức Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 1.2021; Tập 19.(71) Nhiệm vụ trọng tâm 2.1 Đối với Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ chí Minh - Củng cố nâng... học thuốc Tập trung thực kiểm nghiệm thuốc Biệt dược gốc, thuốc đấu thầu tập trung, thuốc có nguồn gốc sinh học enzym Tiếp tục mở lớp đào tạo, tư vấn kỹ thuật cho trung tâm kiểm nghiệm phòng kiểm. .. chuyên môn kỹ thuật theo hướng sau: - Đối với Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh: ngồi cơng việc kiểm nghiệm thường quy, cần tăng cường triển khai nghiên