ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG.

ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG. ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG. ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG. ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG. ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Hồ Nguyễn Quỳnh Chi ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MÔ PHỎNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Tp Hồ Chí Minh – Năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Hồ Nguyễn Quỳnh Chi ĐÁNH GIÁ SỰ THAY ĐỔI TĂNG SINH VÀ CẤU TRÚC KHUNG XƯƠNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ CUỐNG RỐN NGƯỜI TRONG ĐIỀU KIỆN VI TRỌNG LỰC MƠ PHỎNG Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS TS Hồng Nghĩa Sơn Tp Hồ Chí Minh – Năm 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chƣa đƣợc sử dụng để bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn đƣợc rõ nguồn gốc rõ ràng đƣợc phép cơng bố Tp Hồ Chí Minh, ngày 19 tháng 04 năm 2021 Học viên thực Hồ Nguyễn Quỳnh Chi LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc đến Thầy PGS.TS Hồng Nghĩa Sơn, ngƣời ln tận tâm dẫn, tạo điều kiện cho học tập, nghiên cứu hoàn chỉnh đề tài Xin chân thành cảm ơn Học Viện Khoa học Công nghệ tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài Xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện Sinh học Nhiệt đới tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài Xin chân thành cảm ơn đề tài: “Nghiên cứu đánh giá thay đổi cấu trúc khung tế bào thể sống điều kiện mô trạng thái vi trọng lực (simulated microgravity)”, thuộc Chƣơng trình Khoa học công nghệ vũ trụ, mã số: CNVT/16-20 hỗ trợ cho nghiên cứu Tôi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Lê Thành Long, ngƣời hƣớng dẫn tận tình giúp tơi có hội đƣợc thực đề tài Tôi xin cảm ơn Thầy, Cô, anh chị đồng nghiệp, bạn sinh viên nghiên cứu Viện Sinh học Nhiệt đới ln động viên giúp đỡ tơi q trình công tác nghiên cứu Con xin cảm ơn ba, mẹ, em bên con, động viên lúc khó khăn Tp HCM, ngày 19 tháng 04 năm 2021 Hồ Nguyễn Quỳnh Chi MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC THUẬT NGỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH .ix TÓM TẮT .xii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vai trò nghiên cứu sinh học không gian 1.2 Giới thiệu vi trọng lực vi trọng lực mô 1.2.1 Vi trọng lực 1.2.2 Vi trọng lực mô 1.3 Các hệ thống mô vi trọng lực 1.3.1 Clinostat 10 1.3.2 Buồng quay 13 1.3.3 Máy định vị ngẫu nhiên 14 1.4 Tế bào gốc trung mô cuống rốn 15 1.4.1 Khái niệm 15 1.4.2 Lợi ích tế bào gốc trung mô cuống rốn .16 1.5 Sự tăng sinh tế bào 17 1.5.1 Định nghĩa 17 1.5.2 Các yếu tố điều hòa chu kỳ tế bào .18 1.5.3 Các nghiên cứu ảnh hưởng vi trọng lực lên tăng sinh tế bào .19 1.6 Quá trình apoptosis 20 1.6.1 Khái niệm 20 1.6.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến apoptosis 22 1.6.3 Phương pháp đánh giá apoptosis 23 1.7 Nhân tế bào chất 26 1.7.1 Định nghĩa vai trò nhân tế bào chất 26 1.7.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến hình thái nhân tế bào chất 26 1.8 Bộ khung xƣơng tế bào 27 1.8.1 Khái niệm 27 1.8.2 Cấu trúc khung xương tế bào .27 1.8.3 Các nghiên cứu ảnh hưởng vi trọng lực lên khung xương tế bào 29 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Vật liệu 31 2.1.1 Thiết bị dụng cụ cần thiết 31 2.1.2 Môi trường hóa chất sử dụng 32 2.1.3 Tế bào gốc trung mô 33 2.1.4 Hệ thống vi trọng lực mô (clinostat 3D) 33 2.2 Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 35 2.2.1 Nuôi cấy tế bào 36 2.2.1.1 Phương pháp giải đông 36 2.2.1.2 Phương pháp cấy chuyền 36 2.2.1.3 Phương pháp đông lạnh .36 2.2.2 Đánh giá thị marker tế bào gốc trung mô .37 2.2.3 Thử nghiệm vi trọng lực .38 2.2.4 Đánh giá tăng sinh tế bào .39 2.2.4.1 Đánh giá mật độ tế bào 39 2.2.4.2 Đánh giá chu kỳ tế bào 39 2.2.5 Đánh giá trình apoptosis 44 2.2.5.1 Thu hoạch tế bào 44 2.2.5.2 Đánh giá tỉ lệ apoptosis 44 2.2.5.3 Đánh giá biểu mức phiên mã gene liên quan đến apoptosis 45 2.2.6 Đánh giá thay đổi hình thái nhân tế bào chất 46 2.2.6.1 Thu hoạch cố định tế bào 46 2.2.6.2 Đánh giá thay đổi hình thái nhân .46 2.2.6.3 Đánh giá thay đổi hình thái tế bào chất 46 2.2.7 Đánh giá thay đổi cấu trúc khung xương tế bào 47 2.2.7.1 Thu hoạch tế bào 47 2.2.7.2 Đánh giá biểu mức phiên mã gene mã hóa vi ống, vi sợi .47 2.2.7.3 Đánh giá biểu mức dịch mã gene mã hóa vi ống, vi sợi 48 2.2.7.4 Đánh giá tái cấu trúc khung vi ống, vi sợi tế bào 49 2.2.8 Phương pháp thống kê .50 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 3.1 Đánh giá thị marker tế bào gốc trung mô .51 3.2 Đánh giá tăng sinh tế bào 52 3.2.1 Sự thay đổi mật độ tế bào 52 3.2.2 Sự thay đổi chu kỳ tế bào 53 3.2.2.1 Tỉ lệ pha chu kỳ tế bào 53 3.2.2.2 Biểu mức độ phiên mã gene điều hịa chu kì tế bào 54 3.2.2.3 Biểu mức độ dịch mã gene điều hịa chu kì tế bào 55 3.3 Đánh giá trình apoptosis 58 3.3.1 Tỉ apoptosis .58 3.3.2 Biểu mức phiên mã gene liên quan đến apoptosis .58 3.4 Đánh giá thay đổi hình thái tế bào 59 3.4.1 Sự thay đổi hình thái nhân 59 3.4.2 Sự thay đổi hình thái tế bào chất .63 3.5 Đánh giá cấu trúc khung xƣơng tế bào 66 3.5.1 Biểu mức phiên mã gene mã hóa vi ống, vi sợi 66 3.5.2 Biểu mức dịch mã gene mã hóa vi ống, vi sợi 67 3.5.3 Đánh giá tái cấu trúc khung vi ống, vi sợi tế bào 67 3.6 Tóm tắt ảnh hƣởng vi trọng lực mơ lên tế bào hucMSC phƣơng thức ức chế tăng sinh tế bào môi trƣờng vi trọng lực mô 73 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .77 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO .79 PHỤ LỤC DANH MỤC THUẬT NGỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt 7-AAD 7-amino-actinomycin 7-amino-actinomycin ATP Adenosine triphosphate Adenosine triphosphate Bax Bcl-2-associated X protein Protein X liên kết Bcl-2 Bcl-2 B-cell lymphoma Protein lymphoma tế bào B-2 bmMSC Bone marrow CDKs mesenchymal stem cell Cyclin-dependent kinases DMEM Dulbecco's modified Eagle medium DNA Deoxyribonucleic acid deoxyribonucleic FBS Huyết thai bị GVHD Tế bào gốc trung mơ tủy xƣơng Kinase phụ thuộc cyclin Môi trƣờng Dulbecco's modified Eagle Axit Fetal bovine serum Graft versus host disease Bệnh ghép chống chủ hucMSC Human umbilical cord Tế bào gốc trung mô cuống rốn mesenchymal stem cell ngƣời International Society for Hiệp hội liệu pháp tế bào quốc Cellular Therapy tế LSCM Laser scanning confocal Kính hiển vi quét laser đồng tiêu mRNA microscopy Messenger ribonucleic acid Axit ribonucleic thông tin MSC Mesenchymal stem cell Tế bào gốc trung mô NASA National Aeronautics and Cơ quan Hàng không Vũ trụ Space Administration Hoa Kỳ OD Optical density Mật độ quang PBS Phosphate-buffered saline Phosphate-buffered saline Pen/Strep Penicillin-Streptomycin Penicillin-Streptomycin PI Propidium iodide Propidium iodide PS Phospholipid Màng phospholipid phosphatidylserine phosphatidylserine Polyvinylidene fluoride Polyvinylidene fluoride ISCT PVDF qRT-PCR Quantitative reverse Phản ứng định lƣợng chuỗi transcription polymerase polymerase phiên mã ngƣợc chain reaction RNA Ribonucleic acid Axit ribonucleic RPM Random positioning machine Máy định vị ngẫu nhiên RWV Rotating wall vessel Buồng quay SDS-PAGE Điệ n di Sodium dodecyl sulfate– gel sod po iu ly m ac dod ry ecy la l mi de sulf ate ge – l pol el yac ec ryl tr ami op de ho re sis SMG microgravity Simulated Vi trọng lực mơ TEM Transmission Kính hiển vi truyền qua electron microscopy TUNEL Kĩ thuật Termin al dUTP Nick EndLabeli ng ucMSC Umbili cal cord mesen chyma l stem cell gắn nhãn cuối dUTP Nick Tế bào gốc trung mô cuống rốn 6909949 6227119 6182829 7169021 8002455 4745162 4670792 4662690 4817588 5210972 5386146 5870009 5633073 5429876 4745344 4811504 4176897 4923755 4824412 5144658 5168013 5647054 5320893 4818490 4988958 5064327 4773694 4548650 4721450 4599142 5029560 5450553 4736440 4918385 5572918 4999341 4396503 4541368 4350478 5301734 7280572 7274014 5755167 7659817 8133362 7423253 5681815 6346790 7538447 7761314 8208033 8094551 7329029 7281246 7094277 7228249 7680828 7205211 6811627 4744284 5029433 4229146 4681814 4965976 5156089 4718904 5343796 5009996 4346509 4848259 4844053 5144343 2794669 4880158 4577024 4211078 3701720 5392256 2706551 4468120 3647541 3887886 2410586 4062432 4580301 4607176 4635554 4753667 4243312 4664550 5303261 5224569 4069069 4184943 5080109 4550467 4888851 4504889 4688247 4758345 5383051 4134470 4515633 5824106 5079067 5242255 5252326 5194553 4716784 4899281 4810600 3506652 5562375 4972479 4347817 4509021 6020029 3495261 4685466 4445256 4788610 2988105 3968046 4854857 4658868 4223868 3730474 4331580 4560799 4890498 5016355 4663781 5141308 5125846 5234823 5347638 5218402 5384354 5158963 4974118 4887139 4792455 5047113 4644114 5240945 4472783 4778531 4757530 4536778 4966653 1376649 4413649 4287967 5087572 4921173 4477708 1247590 4846335 4120248 4996464 3721458 3970169 5234713 4920763 4712995 5636882 4601586 5002154 5930621 5035217 4639435 4162132 4823761 4891811 4672748 5120935 4212907 4356878 5667721 4866375 4463380 5145987 5162242 4764772 5330127 4319225 4491133 4680750 4610975 2721082 5032362 4470047 8268585 4000473 6550482 7249470 7601784 7316526 5403758 5294105 4672603 4933583 5064716 4032410 4612749 5555296 4918433 4561002 5224013 4791650 4830292 5230576 4798748 4826512 4297010 4112739 5132876 4074438 4439998 4382673 4247054 4245091 4848222 4708977 4247548 4793207 2884214 4416126 5175031 5919193 5414190 4763616 5063133 4847072 4911939 5313653 4719317 4653163 3677790 4442750 4814804 4674053 4853991 4544285 3554986 4600697 5059589 1981384 4122112 4520766 4983371 4661310 5012727 5531464 5205662 5573339 5429708 4599944 5353773 4984205 4776200 4458395 4595168 3591380 4088665 3574841 4615252 4713363 4631711 4562644 1967680 5019371 5103723 4356095 4459248 4864066 4562430 5838752 4797784 4470205 5196552 4995481 5155709 4499088 4627104 4690280 4648793 5114131 4718447 4690617 5275973 5396799 5065903 5489929 4909327 4922710 5000574 5324198 5876333 5220481 5283141 5245901 4961266 5109368 4959230 5167909 5087453 4931971 5080424 5440967 4977998 4844923 4711361 4579514 5639019 4876384 4642704 5280856 4983839 4950982 4789320 4958659 5036434 4642539 4781496 4359121 4719226 4621169 4413050 4845179 4319897 5187228 4713345 4664548 4995967 6554202 5733831 7089551 6800346 6119740 7810841 6777524 6495892 6302594 6709988 4833922 5004742 4588670 5133434 4748731 4997953 4976379 5145713 3951966 5983238 6419857 4911103 837981 977017 6539019 8583456 12008869 6251468 8609175 7339995 8372614 1131902 6090788 5769694 6321257 4713843 5999571 5604103 6410885 5695991 6022199 4562974 6897828 4339093 8317675 6263899 7660240 7663346 7700893 6001659 7087844 12950723 12729381 11534779 4569327 8203376 7082226 8209893 5959439 9315741 6310327 8474054 7311074 7798094 6840221 4928598 4250918 7248040 5011803 7295120 6728423 11579017 6463888 5083427 5028796 5788806 5172228 5567903 4671271 4532800 4301353 5572078 3968738 4528407 4687530 4426709 4757241 5024521 5430433 5349097 4843595 5269077 5165008 4920792 5307310 4597781 5392821 5564432 4644177 5191976 5087597 4779256 5169751 5620458 5314436 4396182 5435766 4879407 4894117 4635449 4612233 7090997 7600098 8295396 8054237 7313722 6926615 7164868 6355910 7838185 5465321 7125810 6482128 5469994 6871757 6826638 6982941 6684658 7426229 7094453 4884675 5492302 4966975 5636575 5981265 5228615 5310737 6000717 5365731 5742886 5579588 5030209 5327868 5685673 4973884 5125348 5398267 5777324 5766910 9158803 4293947 3046724 10036848 12318979 8720308 8178981 10490649 11313544 9282757 9159579 11599010 11174137 12971629 9998622 8042687 13873774 7435190 7696884 8364327 7628789 7940772 7388198 8252075 6418848 7740932 7395046 7041135 6247695 6867479 7792454 8601559 8326637 8167929 7899149 8126045 8874670 7303630 8137563 12726422 4758409 8550945 8957454 7818721 9573817 7879308 9488732 8860872 6254187 6913564 8899810 10304292 10660436 8756786 9068968 7479679 9790585 7130471 8178366 7160302 5070410 5052217 7661131 6246882 6274469 7710238 7141404 7218822 6961624 6627734 6924104 8305495 7556717 6978321 7899469 6778956 4325406 5116210 4909219 6089717 5253017 5417923 5696058 4899342 4854731 4900598 5305433 4902230 5421271 2531909 4999052 4868774 4347744 3435656 5064214 5315853 4083734 5449187 6362538 7854468 6766766 6541116 7419767 7796655 6121391 7122687 6931874 6766918 5979452 5425866 5541052 6466485 2927137 6549957 5473445 4846059 5022967 5083740 5755798 4485061 7562603 9224776 8995431 9097591 3803109 10595772 8016422 8243932 8855584 1242424 4826429 8216745 7103104 6321994 7695620 6887880 6183112 5554439 6454656 5997959 6283070 5425434 6530825 6559199 6484982 6596744 6345885 7096681 6453685 6789586 6086347 7965571 6566077 7441877 6544693 6032149 6033200 7324984 3244917 6514903 6453123 8410665 9897104 10450212 6314869 6032096 5275700 5978232 4807418 5379446 4807321 4559316 6063594 6525810 6285842 6770084 6618651 5227211 6418128 5204738 955220 5885595 5810768 5776159 5840489 6661618 9126529 7554860 6758859 8125153 7474913 7693382 6044711 5371885 7368192 7441636 6304854 6367312 6771441 6835564 6891962 7832824 7137134 7563397 5530597 7871321 5826752 6614534 5175140 5003832 5072341 4732689 5416270 7077565 7159012 6926947 8147924 7391634 8959066 8251793 876631 928083 605590 2747835 841281 7708052 7405486 6690626 6365224 6737475 6933564 6440622 5860386 5371172 4630339 4312034 5944716 4645349 4468242 6493986 6529726 5984709 5851578 5855905 5211434 6722675 8810168 5415602 6491087 7696463 7531595 6633417 6264366 6551993 7397831 6997079 7827635 6845332 7089717 8090006 7146877 5770555 5730839 6075862 7546717 7121374 6125725 6965655 6414474 7314782 7992853 7777756 7425264 5864419 6361316 5900206 5821260 5748807 5490621 6642526 8563159 6859281 6940623 6581283 6050069 6287036 5596891 5260631 6079748 8247480 6492090 6047089 6811059 5398971 6595622 7630036 5444847 6065300 6701587 6839248 6799617 4831989 6146733 4539602 6414680 7396424 7001227 7865181 5123071 6340645 7686252 3219687 7048355 4975414 6710106 6228682 6135521 7114141 6029930 6441848 5487144 6461844 6691380 6777105 5581658 6755539 7952417 5958143 4569801 4837493 6595637 6568914 6606359 4572214 7469472 7652819 5489058 5308152 4936889 5318506 6258084 8599467 7526729 5942137 7285927 4767430 4933093 4969960 7472823 6177207 6276301 6094149 6808106 6668025 5009797 6527734 6469601 6255327 6102203 5506533 7127474 6157186 6957961 6306465 5640089 5873348 7207527 6200948 7197222 5849753 6217826 6500484 5581830 6414524 6318382 7747040 6856959 7048161 6283782 6738154 5967235 6195311 6844088 5919340 6963850 5015130 5947313 6624469 5421743 5021439 5492513 6395700 6869902 6062350 6255681 5668475 6284580 7210943 8410019 7546138 6021553 7379599 5945992 6262300 6136773 6967550 5959774 6395091 6949511 6467803 7132446 6955859 6508278 6831050 7713775 6481908 7159796 6103707 7222345 5203362 6594315 6456358 7756737 6884165 6627027 6449320 6607512 6451271 7403173 7669861 7375199 7399557 7946078 7179592 6816359 6384060 4976598 5210354 7392578 6143276 5767095 6649283 5652518 7957419 5096617 6225142 5417271 5714790 4971387 5552579 6321195 6268025 6801857 6594382 6695981 7047907 6533210 5429092 7083973 6529686 5458884 5953284 5842324 6314029 7255340 5506184 5882475 5850739 7521839 6012867 6752270 5688491 5966760 6518319 6343213 7837496 6481646 6585488 5712843 7118076 5486410 7905880 5711390 4973311 5915848 6914014 5342959 6326490 7834709 6554873 7258143 6348593 7231839 6001574 6348768 6199552 7673837 6756909 6468646 6727555 6923593 6348972 6682436 6186469 6541010 6670507 5826146 7802835 8731800 6393452 5534487 5579932 5663836 6020568 6482410 5811162 7206501 5551297 6862795 6189349 6095063 6153874 6020929 6132274 5480366 7033577 5807043 6383549 6039444 5547856 6230777 6798243 6941073 7075779 6595224 7227776 4883701 6006141 7675802 5655652 8531015 5206798 5317390 6016217 5363968 6554859 7678322 8005165 6818111 6207647 6392838 7410796 8085008 6985231 6021717 7069068 6091829 6587548 6875994 7088354 6620175 5580352 7649458 7448676 5630874 6513252 5225289 6751053 6677507 6222112 5498092 9547529 7462722 6901573 7136967 7057128 5696645 6654078 9646995 5128499 6833559 5146562 5788785 6142184 5704408 5123335 7054546 5444195 6672198 6877724 7435238 6253189 5802284 3346889 5800997 6034676 5283806 5341384 6197986 6848277 5740268 8786094 6422786 5566500 5949941 6193703 6379853 6425111 5907578 4534175 7873373 6922823 6438456 6157414 7264225 7072950 5406501 5154501 5493957 6849218 4915341 5244145 4718675 6209678 5628649 6402137 6849458 6735891 6620100 6905896 5521855 7302404 5061275 5931597 6680340 One Way Analysis of Variance Data source: Data in Notebook1 Normality Test: Equal Failed (P < 0.050) Variance Test: Failed (P < 0.050) Group Name N Col 784 Col 815 Source of Variation Between Groups Residual Total Missing 0 DF 1597 1598 Mean 5967253.571 5629317.186 SS 4.563E+013 3.632E+015 3.678E+015 Std Dev 1821776.295 1126784.347 MS 4.563E+013 2.274E+012 SEM 65063.439 39469.534 F 20.065 P