Tỷ lệ rụng trứng đóng một vai trò quan trọng trong việc xác định hiệu quả sinh sản. ở cừu, có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ rụng trứng và dinh dưỡng là một trong những yếu tố đó. Cho gia súc ăn ở các mức khác nhau sẽ dẫn đến thể trạng khác nhau. Những thay đổi về thể trạng và trọng lượng của gia súc trước rụng trứng ảnh hưởng đến tỷ lệ trứng rụng. Tỷ lệ rụng trứng khác nhau ở những cừu cái có thể trạng khác nhau có liên quan đến nang...
Các yếu tố ảnh hưởng đến gây rụng trứng nhiều cừu Đặt vấn đề Tỷ lệ rụng trứng đóng vai trị quan trọng việc xác định hiệu sinh sản cừu, có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ rụng trứng dinh dưỡng yếu tố Cho gia súc ăn mức khác dẫn đến thể trạng khác Những thay đổi thể trạng trọng lượng gia súc trước rụng trứng ảnh hưởng đến tỷ lệ trứng rụng Tỷ lệ rụng trứng khác cừu trạng khác có liên quan đến nang trứng lớn có mặt, nhiên tảng chế mà thơng qua dinh dưỡng thể trạng ảnh hưởng đến rụng trứng chưa rõ Các yếu tố khác mùa vụ, tuổi gia súc, loại hormone có ảnh hưởng quan trọng đến tỷ lệ trứng rụng Từ vấn đề tiến hành nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến kết gây rụng trứng nhiều thể trạng gia súc, tuổi gia súc, mùa vụ loại hormone sử dụng Vật liệu phương pháp nghiên cứu Các thí nghiệm tiến hành trường Viện Đại học New England mùa xuân 2000 mùa thu 2001 2.1 Gia súc thí nghiệm dùng cừu Merino với nhiều thang điểm thể (dao động từ 1,5 đến 4,0 điểm) trọng lượng sống trung bình 40,8kg Thí nghiệm thứ tiến hành vào mùa xuân (tháng 10 - tháng 11 năm 2000) mùa thu (tháng - tháng năm 2001) thí nghiệm này, 34 cừu trưởng thành sử dụng Những cừu chia thành nhóm trạng (1,5 - 2,5 điểm) thể trạng tốt (3,0 - 4,0 điểm) thí nghiệm gây siêu noãn cho 29 cừu trưởng thành PMSG hay PMSG + FSH thí nghiệm dùng 20 cừu chưa sinh sản lần (15 tháng tuổi) trạng tốt (trọng lượng bình quân 37,5 kg) thể trạng 27,3 kg ) 2.2 Gây siêu noãn cừu Chu kỳ động dục cừu gây đồng pha CIDR (CIDR có chứa 0,3g Progesterone) 13 ngày thay CIDR ngày thứ PMSG PMSG +FSH dùng để gây rụng trứng nhiều Lịch gây rụng trứng nhiều trình bày bảng Bảng 1: Gây rụng trứng nhiều PMSG Ngày Đặt CIDR Ngày Thay CIDR Ngày 12 Tiêm 1200 iu PMSG ngày 13 Rút CIDR ngày 14 Quan sát động dục/phối giống ngày 16 Phẫu thuật/thu phôi Bảng 2: Gây rụng trứng nhiều PMSG+FSH Đặt CIDR Ngày Thay CIDR Ngày Ngày 11 Tiêm 500 iu PMSG+ 12,5iu FSH Ngày 12 Tiêm 400 iu PMSG + ngày 13 8,3 iu FSH ngày 14 Tiêm 4,2 iu FSH, rút ngày 16 CIDR Quan sát động dục/phối giống Phẫu thuật/thu phôi 2.3 Quan sát động dục phối giống cừu đực thả vào nhóm cừu ngày sau rút CIDR Cừu đực buộc dụng cụ đánh dấu ngực Quan sát động dục thực đặn thời gian phối giống nghi lại Tất đực kiểm tra chất lượng tinh trùng vào tháng 9- tháng 10 năm 2000 2.4 Thu phôi từ cho 2.4.1 Chuẩn bị phẫu thuật Thu phôi phẫu thuật ngày sau phối Cho cừu nhịn ăn nhịn uống 12 trước phẫu thuật Sau đưa cừu vào giá mổ, chúng cắt lông sát trùng vùng mổ Vùng phẫu thuật sát trùng Batadine, 70% cồn Iod 2.4.2 Gây mê Cừu tiêm 0,2ml Rompun 0,1ml Ketamine phút trước phẫu thuật Gia súc cung cấp oxy 4,0% khí Halothan Khi cừu mê sâu giảm khí Halothan xuống 2,5% trì đến lúc mổ xong 2.4.3 Phẫu thuật thu phôi Cắt đường song song với đường bụng dài - 6cm, sau dùng đầu kéo tù đâm xuyên qua lớp bụng Lơi sừng tử cung buồng trứng ngồi đếm thể vàng nang trứng Dùng ống nhựa mềm có đường kính mm đưa vào loa kèn dùng xi lanh nối với kim cỡ 18 G để bơm khoảng 10ml dung dịch rửa vào ngã thân tử cung sừng tử cung Dung dịch chảy đựng vào đĩa petri Dung dịch rửa gồm PBS chứa 20% huyết thai bê trì 370C 2.4.4 Hậu phẫu Sau phẫu thuật cừu tiêm kháng sinh chậm thuốc giảm đau (Flunixin 2mg/kg, Bivatop 200) Cừu sau nhốt chuồng yên tĩnh để theo dõi - Sau thả đồng cỏ kiểm tra lại tuần sau phẫu thuật 2.4.5 Phân loại phôi Phôi trứng chuyển từ môi trường dội rửa sang mơi trường dịch tử cung tổng hợp có thay đổi mSOF (modified Synthetic Oviductal Fluid) dùng kính hiển vi soi (Nikon - Japan) với độ phóng đại 20 x 40 để phân loại hình thái phơi kiểm tra độ phóng đại 50 lần phôi phân loại theo giai đoạn phát triển (trứng không thụ tinh, phôi 2, 4, 8, 10 tế bào) chất lượng phôi đánh giá theo tiêu chuẩnđánh giá phơi bị (Lindner Wright 1983) kết ảnh hưởng mùa thu phôi ảnh hưởng mùa thu phôi lên tiêu sinh sản cừu trưởng thành đựoc trình bày bảng Bảng 1: ảnh hưởng mùa thu phôi lên tiêu sinh sản cừu trưởng thành Các tiêu Mùa vụ Mùa xuân Mùa p thu Số gia súc 15 19 Tỷ lệ phôi/trứng+phôi 49,3 24,2 thu đươc (%) ±17,24 0,26 ±10,55 0,94 Tỷ lệ trứng+phôi/tỷ lệ 60,1±10,42 48,6 0,99 rụng trứng (%) ±6,38 46,1 ±4,0 Tỷ lệ trứng rụng 49,0 buồng trứng phải/tổng 31,5 ±2,45 0,16 ±11,43 số trứng rụng (%) 0,17 7,0 ±1,09 Tỷ lệ phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) 13,9 0,16 15,4 ±2,17 ±6,99 0,04 Số trứng rụng buồng 4,67 ±1,78 6,9 0,35 trứng phải ±0,67 4,53 ±2,46 0,61 Tổng số trứng rụng 14,05 9,2 ±2,51 ±1,32 Số phôi thu 2,0 Số trứng thu ±1,09 Tổng số trứng phôi 5,16 thu ±1,51 7,16 ±1,54 Bảng cho thấy khác biệt tỷ lệ số phơi/tổng số trứng+phôi, tổng số trứng+ phôi/số trứng rụng, số trứng rụng buồng trứng phải/tổng số trứng rụng số phôi/số trứng rụng mùa Số phôi thu mùa xuân gấp đôi so với mùa thu (4,67 so với 2,0, P= 0,04) khơng có ý nghĩa thống kê tiêu tỷ lệ trứng rụng trung bình, số trứng + phơi trứng thu mùa xuân mùa thu ảnh hưởng thể trạng thể cừu trưởng thành ảnh hưởng thể trạng thể lên tiêu sinh sản cừu trưởng thành trình bày bảng bảng Bảng 2: ảnh hưởng thể trạng thể lên tiêu sinh sản cừu trưởng thành Các tiêu Thể trạng Tốt Kém p Số gia súc lệ Tỷ 24 10 32,6±9,3 41,6±17,95 0,5 47,7±5,62 67,9±10,85 0,38 46,3±2,16 51,1±4,17 0,25 18,9±6,16 28,3±11,89 0,28 6,67±0,59 7,6±1,14 0,1 14,75±1,17 14,4±2,25 0,45 2,54±0,96 4,7±1,85 0,07 4,71±1,33 5,3±2,56 0,64 7,25±1,35 10,0±2,61 0,39 phôi/trứng+phôi thu đươc (%) lệ Tỷ trứng+phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) Tỷ lệ trứng rụng buồng trứng phải/tổng số trứng rụng (%) Tỷ lệ phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) Số trứng rụng buồng trứng phải Tổng số trứng rụng Số phôi thu Số trứng thu Tổng số trứng phôi thu Bảng cho thấy khơng có khác biệt tiêu sinh sản cừu trưởng thành trạng thể tốt xấu mùa xuân mùa thu Tuy nhiên số phôi thu gia súc trạng có xu hướng co so với gia súc trạng tốt (4,7 so với 2,54, P= 0,07) Qua bảng cho thấy số trứng rụng buồng trứng phải gia súc trạng tốt cao so với gia súc trạng Tổng số trứng rụng gia súc trạng tốt cao khơng có ý nghĩa thống kê (P = 0,08) Khơng có khác biệt số sinh sản khác gia súc trạng tốt Bảng 3: ảnh hưởng trạng thái thể cừu trưởng thành lên tiêu sinh sản cừu gây siêu noãn vào mùa thu FSH hay FSH+PMSG Các tiêu Thể trạng Tốt Số gia súc p lệ Tỷ Kém 21 70,8±20,3 0,68 54,3±10,97 42,1±12,86 0,48 53,4±6,94 43,9±6,32 0,38 34,8±8,07 38,9±14,94 0,82 4,43±0,43 4,25±0,8 0,01 10,19±0,97 9,37±1,79 0,08 phôi/trứng+phôi thu đươc (%) lệ Tỷ trứng+phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) Tỷ lệ trứng rụng 44,0±3,41 buồng trứng phải/tổng số trứng rụng (%) Tỷ lệ phôi/tỷ lệ 2,95±0,94 3,63±1,73 0,18 2,91±1.02 0,25±1,89 0,27 5,86±0,98 3,86±1,82 0,88 rụng trứng (%) Số trứng rụng buồng trứng phải Tổng số trứng rụng Số phôi thu Số trứng thu Tổng số trứng phôi thu Phương pháp gây rụng trứng nhiều ảnh hưởng phương pháp gây rụng trứng nhiều lên tiêu sinh sản cừu trưởng thành trình bày bảng Bảng 4: ảnh hưởng phương pháp gây rụng trứng nhiều lên tiêu sinh sản cừu trưởng thành Các tiêu PMSG PMSG+FSH Số gia súc Tỷ lệ phôi/trứng+phôi thu p 15 14 64,4±13,11 52,9±18,99 0,52 40,4±8,3 60,9±12,03 0,46 42,6±4,08 45,4±5,91 0,38 38,1±9,65 33,7±13,98 0,89 2,07±0,52 6,86±0,75 0,001 4,93±1,16 15,36±1,68 0,001 1,4±1,12 5,0±1,62 0,14 đươc (%) lệ Tỷ trứng+phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) Tỷ lệ trứng rụng buồng trứng phải/tổng rụng (%) số trứng Tỷ lệ phôi/tỷ lệ 0,2±1,22 4,27±1,77 0,29 1,6±1,17 9,29±1,70 0,01 rụng trứng (%) Số trứng rụng buồng trứng phải Tổng số trứng rụng Số phôi thu Số trứng thu Tổng số trứng phôi thu Bảng cho thấy khơng có khác biệt tỷ lệ phôi/số trứng+phôi, tổng số trứng+\phôi/ số trứng rụng, số trứng rụng buồng trứng phải/tổng số trứng rụng số phôi/số trứng rụng thu phương pháp gây rụng trứng nhiều Số trứng rụng buồng trứng phải, tổng số trứng rụng số phôi thu phương pháp PMSG + FSH lần cao so với phương pháp dùng PMSG Tổng số trứng số phôi thu phương pháp PMSG + FSH 4lần cao so với PMSG mmột ảnh hưởng thể trạng thể cừu hậu bị ảnh hưởng thể trạng thể lên tiêu sinh sản cừu hậu bị gây siêu nỗn vào mùa thu trình bày bảng Bảng 5: ảnh hưởng thể trạng thể lên tiêu sinh sản cừu hậu bị gây siêu noãn vào mùa thu Thể trạng Các tiêu Tốt Kém Số gia súc 9 55,6±16,77 22,2±16,77 0,16 69,3±13,28 36,4±13,28 0,12 70,0±10,26 41,4±10,26 0,05 Tỷ lệ phôi/trứng+phôi thu p đươc (%) lệ Tỷ trứng+phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) Tỷ lệ trứng rụng 50,0±15,10 16,7±15,10 0,13 1,56±0,43 1,44±0,43 0,47 2,33±0,67 2,68±0,67 0,57 0,89±0,92 0,33±0,32 0,24 0,56±0,5 1,11±0,58 0,40 1,44±0,55 1,44±0,55 0,85 buồng trứng phải/tổng số trứng rụng (%) Tỷ lệ phôi/tỷ lệ rụng trứng (%) Số trứng rụng buồng trứng phải Tổng số trứng rụng Số phôi thu Số trứng thu Tổng số trứng phôi thu Bảng cho thấy phần lớn tiêu sinh sản không khác biệt cừu non trạng tốt Tuy nhiên tỷ lệ rụng trứng buồng trứng phải/tỷ lệ rụng trứng tổng số cừu non trạng tốt cao so với cừu non trạng (70,0% so với 41,4%, P = 0,05) Tỷ lệ phôi thu được, tỷ lệ tổng số trứng phôi thu tỷ lệ phôi/tỷ lệ trứng rụng có khuynh hướng cao gia súc trạng thể tốt so với gia súc trạng thể Thảo luận Kết nghiên cứu thí nghiệm cho thấy thể trạng thể ảnh hưởng đến tiêu sinh sản cừu trưởng thành gây siêu noãn vào mùa xn mùa thu Có tài liệu nói mối quan hệ thể trạng thể phản ứng siêu noãn Boland cs (1993) báo cáo thể trạng thể cừu tăng có ảnh hưởng dương đến phản ứng rụng trứng số phôi ảnh hưởng thể trạng đến tỷ lệ rụng trứng coi thay đổi nồng độ FSH số nang trứng lớn phát triển phát triển đến giai đoạn cuối ảnh hưởng hormone phù hợp - ngày trước rụng trứng Nồng độ FSH cao pha thể vàng cừu trạng tốt, mà loại cừu có nhiều nang trứng lớn cừu trạng xấu cho thấy ảnh hưởng thể trạng thể lên quần thể nang trứng lớn thơng qua FSH (Rhind Meneilly, 1986) ở thí nghiệm chúng tơi khác biệt nhóm cừu trạng tốt xấu khơng lớn Điều lượng gonadotrophin dùng đủ để vượt qua khác biệt nồng độ FSH LH đôi với thể trạng thể dẫn đến khơng có khác biệt phản ứng rụng trứng nhóm gia súc trạng khác Nhiều nghiên cứu tiến hành để nghiên cứu nhữnh ảnh hưởng mùa vụ lên phản ứng rụng trứng nhiều động vật nhai lại với kết trái ngược Nghiên cứu cừu Manchega Tây Ban Nha cho thấy khơng có khác biệt mùa vụ tỷ lệ rụng trứng, số phôi thu số phôi sống/cừu gây rụng trứng nhiều 16 mg FSH-P (LopezSebastian cs 1990) Kết giống kết Fernie cs (1993) Fernie cs (1993) báo cáo khác biệt tỷ lệ rụng trứng cừu Sulfok Texel chúng gây rụng trứng nhiều vào đầu mùa sinh sản (10,0 so với 8,8 8,3 so với 8,5, tương ứng) Ngược lại, Greaney cs (1991) cho thấy tỷ lệ trứng rụng cao mùa không sinh sản so với mùa sinh sản (7,8 so với 6,6) số khác (tỷ lệ thu phôi, tỷ lệ thụ tinh) nhật, Fukui cs (1994) nhận thấy có tỷ lệ rụng trứng cừu gây rụng trứng nhiều mùa xuân thấp so với mùa thu (8,4 so với 14,7) Sự dao động chức sinh sản mùa vụ khác cừu thay đổi lượng gonadotrophin tiết (Legan cs 1977) Sự thoái hoá thể vàng sớm thường nhận thấy cừu gây rụng trứng nhiều (Trouson cs 1976) Rayn cs (1991) nhận thấy tỷ lệ cừu Merino gây rụng trứng nhiều vàng thối hố mùa thu nhiều mùa xuân Như ảnh hưởng mùa vụ lên phản ứng rụng trứng thay đổi dinh dưỡng gonadotrophin Tỷ lệ trứng phôi thu được/sô trứng rụng, số phôi/trứng rụng tổng số trứng rụng gây rụng trứng nhiều PMSG thí nghiệm chúng tơi tương đương với kết báo cáo trước (Mutiga Baker, 1982, Evans Robinson, 1980) Tỷ lệ số phôi+trứng/trứng rụng phôi/ytứng rụng thấp báo cáo báo cáo trước phản ánh số trứng phơi cịn lại đường sinh dục kỹ thuật thu phơi Có thể loa kèn không thu hết trứng Điều đặc biệt phản ứng buồng trứng làm buồng trứng to điều gây khó khăn cho loa kèn thu trứng lúc trứng rụng thí nghiệm 900 iu PMSG kết hợp với 25 iu FSH dùng tỷ lệ trứng rụng, tổng số trứng phôi thu số trứng rụng buồng trứng phải tăng lện Số phơi thu có khuynh hướng cao so với sử dụng PMSG Kết giống kết Rayn cs (1991) báo cáo họ sử dụng 800 iu PMSG kết hợp với 18mg FSH-P Kết khẳng định lại kết tác giả khác báo cáo kết hợp PMSG FSH vượt qua nguy nang trứng lớn không vỡ dùng PMSG (Jabbour cs 1991) Tuy nhiên kết ngược với kết mà Cseh Seredi (1993) báo cáo Theo tác giả khơng co khác biệt gây rụng trứng nhiều PMSG PMSG+FSH số thể vàng, số phơi thu được, phơi cấy, trứng khơng thụ tinh phơi thối hố Tuy nhiên, tỷ lệ trứng rụng trung bình nghiên cứu họ nửa (8,6 so với 15,4) Trong thí nghiệm chúng tơi, hầu hết tiêu sinh sản gia súc trạng tốt cao gia súc trạng Tuy nhiên nhìn chung giá trị thấp so với kết Amstrong Evans (1983) báo cáo tỷ lệ trứng rụng sản lượng phôi, cao kết Quirke Hanrahan (1977) tỷ lệ trứng phôi/tỷ lệ rụng trứng tỷ lệ trứng rụng Phản ứng gây rụng trứng nhiều gia súc nhai lại hậu bị khác Betteridge (1977) Amstrong Evans (1983) nhận thấy gia súc hậu bị gây rụng trứng nhiều cho kết gia súc trưởng thành, Wolf Myle (1994) báo cáo tỷ lệ rụng trứng thu phôi cừu Texel nhiều tuổi cừu tuổi Những lý phản ứng cừu hậu bị thí nghiệm thí nghiệm khác chưa rõ Kết luận - Mùa vụ, thể trạng tuổi gia súc không ảnh hưởng đến kết gây rụng trứng nhiều cừu - Sử dụng PMSG+FSH để gây rụng trứng nhiều cừu làm tăng tổng số trứng rụng, tổng số trứng phôi thu số trứng rụng buồng trứng phải ... 0,88 rụng trứng (%) Số trứng rụng buồng trứng phải Tổng số trứng rụng Số phôi thu Số trứng thu Tổng số trứng phôi thu Phương pháp gây rụng trứng nhiều ảnh hưởng phương pháp gây rụng trứng nhiều. .. gia súc không ảnh hưởng đến kết gây rụng trứng nhiều cừu - Sử dụng PMSG+FSH để gây rụng trứng nhiều cừu làm tăng tổng số trứng rụng, tổng số trứng phôi thu số trứng rụng buồng trứng phải ... thấy cừu gây rụng trứng nhiều (Trouson cs 1976) Rayn cs (1991) nhận thấy tỷ lệ cừu Merino gây rụng trứng nhiều vàng thối hố mùa thu nhiều mùa xuân Như ảnh hưởng mùa vụ lên phản ứng rụng trứng