Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học và phân lập phân đoạn n hexane của thân cây đại tướng quân hoa trắng (crinum asiaticum l ) được thu hái tại địa bàn đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT N-HEXANE CỦA THÂN CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG ĐƯỢC THU HÁI TẠI ĐỊA BÀN ĐÀ NẴNG (Crinum Asiaticum L.) SVTH : VÕ THỊ VẠN LỢI LỚP : 16CHDE GVHD : TS TRẦN MẠNH LỤC Đà Nẵng, năm 2020 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Võ Thị Vạn Lợi Lớp : 16CHDE Tên đề tài: “Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học phân lập phân đoạn cao chiết n-Hexane thân Đại Tướng Quân hoa trắng (crinum asiaticum l.) thu hái địa bàn Đà Nẵng “ Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị - Nguyên liệu: thân Đại Tướng Quân hoa trắng thu mua địa bàn thành phố Đà Nẵng - Dụng cụ thiết bị: bếp cách thủy, cân phân tích, phễu Buchner, cốc thủy tinh, phễu chiết, chiết chưng ninh, tủ sấy, nồi hút ẩm, đèn UV, mỏng sắc ký … Nội dung nghiên cứu - Thu thập, tổng hợp, phân tích tài liệu, tư liệu nguồn nguyên liệu, thành phần hóa học, ứng dụng Đại Tướng Quân hoa trắng - Tổng hợp tài liệu phương pháp lấy mẫu, xử lý mẫu, phương pháp chiết tách, định tính phân lập hợp chất từ thực vật - Chiết mẫu phương pháp ngâm chiết với dung môi ethanol 96% - Định tính thành phần nhóm chức cao chiết - Xác định thành phần hóa học dịch chiết phương pháp GCMS Giáo viên hướng dẫn : TS Trần Mạnh Lục Ngày giao đề tài : 10/01/2020 Ngày hồn thành : 24/05/2020 Chủ nhiệm khóa Giáo viên hướng dẫn TS Trần Đức Mạnh Ts Trần Mạnh Lục Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày … tháng … năm 2020 Kết điểm đánh giá: …………… Đà Nẵng, ngày … tháng … năm … CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Để hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp này, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo TS Trần Mạnh Lục tận tình hướng dẫn, hỗ trợ giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo môn thầy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa trường Đại học Sư Phạm – Đại học Đà Nẵng, hỗ trợ kiến thức, sở vật chất, dụng cụ thí nghiệm giúp em hồn thành tốt cơng trình nghiên cứu khoa học Bước đầu làm quen với việc nghiên cứu nên báo cáo không tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp, bổ sung thầy để em thu nhận thêm nhiều kiến thức kinh nghiệm cho thân sau Cuối em xin chúc qúy thầy cô sức khỏe, hạnh phúc thành công sống nghiệp giảng dạy Em xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày … tháng … năm 2020 Sinh viên thực VÕ THỊ VẠN LỢI LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Sinh viên thực VÕ THỊ VẠN LỢI MỤC LỤC MỞ ĐẦU…………………………………………………………………… 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI………………………………………… MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU…………………………………………… ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU…………………………… PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………………………………… Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI………………… BỐ CỤC CỦA LUẬN VĂN……………………………………………… CHƯƠNG TỔNG QUAN………………………………………………… 1.1 TỔNG QUAN VỀ HỌ THỦY TIÊN VÀ CHI CRINUM…………… 1.1.1 Họ Thủy tiên…………………………………………………………… 1.1.2 Thực vật chi Crinum…………………………………………………… 1.2 TỔNG QUAN VỀ ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG (Crinum asiaticum L.)………………………………………………………………… 1.2.1 Tên gọi, phân loại thực vật…………………………………………… 1.2.2 Đặc điểm hình thái thực vật học……………………………………… 1.2.3 Phân bố……………………………………………………………… 1.2.4 Điều kiện sinh trưởng phát triển…………………………………… 10 1.2.5 Thuộc tính dược lý……………………………………………………… 10 1.2.6 Một số thuốc dân gian từ Đại tướng quân hoa trắng…………… 15 1.3 TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH HỢP CHẤT RA KHỎI MẪU CÂY…………………………………………………………………… 17 1.3.1 Lựa chọn xử lý mẫu………………………………………………… 17 1.3.2 Phương pháp chiết rắn - lỏng………………………………………… 17 1.3.3 Phương pháp chiết lỏng - lỏng………………………………………… 22 1.3.4 Phương pháp xác định thành phần nhóm chức cao chiết thuốc thử đặc trưng…………………………………………………………… 24 1.3.5 Phương pháp sắc ký…………………………………………………… 25 a Sắc ký mỏng…………………………………………………………… 25 b Sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) ……………………………………… 27 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…… 28 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ DỤNG CỤ………………………… 28 2.1.1 Nguyên liệu…………………………………………………………… 28 2.1.2 Hóa chất………………………………………………………………… 28 2.1.3 Dụng cụ thiết bị…………………………………………………… 29 2.2 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT TÁCH THU NHẬN CÁC MẪU CAO CHIẾT 30 2.2.1 Phương pháp ngâm dầm (chiết rắn - lỏng) điều chế tổng cao ethanol… 30 2.2.2 Phương pháp chiết lỏng - lỏng tách phân đoạn cao từ tổng cao ethanol………………………………………………………………………… 30 2.3 ĐỊNH TÍNH NHĨM CHẤT BẰNG CÁC THUỐC THỬ ĐẶC TRƯNG 31 2.3.1 Định tính alkaloid……………………………………………………… 31 2.3.2 Định tính flavonoid…………………………………………………… 31 2.3.3 Định tính sesquiterpen lacton………………………………………… 32 2.3.4 Định tính terpenoid - steroid…………………………………………… 32 2.3.5 Định tính chất béo……………………………………………………… 32 2.3.6 Định tính glycoside…………………………………………………… 32 2.3.7 Định tính hợp chất phenol……………………………………………… 33 2.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ………………………………………… 33 2.4.1 Sắc ký mỏng……………………………………………………… 33 2.4.2 Phương pháp sắc ký cột………………………………………………… 36 2.4.3 Sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) định danh chất……………… 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………………… 43 3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG CAO ETHANOL CÁC BỘ PHẬN CỦA CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG…………………………………… 43 3.1.1 Nguyên liệu phận Đại tướng quân hoa trắng…………… 43 3.1.2 Kết xác định hàm lượng cao chiết ethanol phận cây…… 43 3.2 KẾT QUẢ ĐIỀU CHẾ TỔNG CAO ETHANOL VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN TỪ TỔNG CAO ETHANOL………………………………………… 44 3.2.1 Kết điều chế tổng cao ethanol phương pháp ngâm chiết…… 44 3.2.2 Kết điều chế cao phân đoạn từ tổng ethanol phương pháp phân bố……………………………………………………………………… 45 a Chiết phân bố lỏng - lỏng dung môi hexane………………………… 45 b Chiết phân bố lỏng - lỏng dung môi dichloromethane……………… 46 c Chiết phân bố lỏng - lỏng dung mơi ethylacetate…………………… 46 d Dịch nước cịn lại………………………………………………………… 47 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN NHÓM CHẤT CÁC PHÂN ĐOẠN CAO TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL………………………… 48 3.4 KẾT QUẢ ĐỊNH DANH CÁC CHẤT CÁC PHÂN ĐOẠN CAO TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL CỦA THÂN CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG……………………………………………………………… 51 3.4.1 Kết định danh chất dịch chiết hexane tách từ tổng cao ethanol phần thân Đại tướng quân hoa trắng……………………… 51 3.4.2.Kết định danh chất dịch chiết dichlomethane tách từ tổng cao ethanol phần thân Đại tướng quân hoa trắng…………………… 52 3.4.3.Kết định danh chất dịch chiết ethylacetate tách từ tổng cao ethanol phần thân Đại tướng quân hoa trắng …………………… 53 3.4.4.Kết định danh chất dịch chiết nước phần thân Đại tướng quân hoa trắng ………………………………………………………… 55 3.5 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH CÁC CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN CAO HEXANE TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL……………… 61 3.5.1 Kết phân tích sắc ký mỏng thành phần nhóm chức có phân đoạn cao tách từ tổng cao ethanol……………………………………… 61 3.5.2 Kết chạy sắc ký cột phân đoạn cao hexane tách từ tổng cao ethanol 66 a Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TNH………………………………… 66 b Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TNH2……………………………… 67 c Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TNH.2.4……………………………… 68 3.5.3 Kết định danh chất phân đoạn cao hexane tách từ tổng cao ethanol phần thân Đại tướng quân hoa trắng…………………… 69 a Kết định danh chất mẫu TNH.2.1a …………………… … 70 b Kết định danh chất mẫu TNH.2.4.4………………………… 72 c Kết định danh chất mẫu TNH.2.6a …… 75 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………………………… 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………… 84 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT GC-MS: Gas Chromatography Mass Spectrometry (Sắc ký khí kết hợp với Khối phổ) GC: Gas Chromatography (Sắc ký khí) MS: Mass Spectrometry (Khối phổ) SKBM: Sắc ký mỏng SKC: Sắc ký cột STT: Số thứ tự HPLC: High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) UV: Ultraviolet CTPT: Công thức phân tử PHỤ LỤC PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN NHĨM CHỨC TRONG CÁC CAO PHÂN ĐOẠN TÁCH TỪ TỔNG CAO ETANHOL CỦA THÂN ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG PHỤ LỤC 1.1 Kết định tính nhóm chất cao hexane tách từ tổng cao ethanol thân Đại tướng quân hoa trắng NHÓM CHỨC THÂN CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO HEXANE THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayner Wagner Dragendorff Alkaloid Mẫu chuyển sang màu vàng nhạt (+) H2SO4 Mẫu chuyển sang màu đỏ đậm (+)(+)(+) 1% NaOH/C2H5OH Mẫu chuyển sang màu đỏ (+)(+)(+) 1% AlCl3/C2H5OH Flavonoid Mẫu thử chuyển sang màu vàng đục (+) Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu vàng nhạt đục (+) (+) (+) Mẫu thử không tượng (-) H2SO4 đậm đặc Tollens Mẫu thử tách thành hai lớp: lớp trên: màu đen, lớp dưới: màu cam đậm (+) (+) (+) Mẫu thử tách thành hai lớp: lớp trên: màu đen, lớp dưới: màu đà (+) (+) Lacton Rosenthaler Salkowski Steroid Mẫu thử tách thành hai lớp: lớp Mẫu thử tách thành hai lớp: lớp trên: màu cam, lớp dưới: màu đà trên: màu đen, lớp dưới: màu (+) (+) (+) cam đậm (+) (+) (+) Keller - Killiani Tollens Phenol –H2SO4 Glycosid Mẫu thử tách thành hai lớp: lớp trên: màu cam, lớp dưới: màu vàng đục (+) (+) (+) 5% FeCl3/H2O Mẫu thử tách thành Mẫu thử tách thành hai lớp: lớp trên: hai lớp: lớp trên: màu xanh đen, lớp màu trắng đục, lớp dưới: màu vàng dưới: màu vàng nhạt (+) (+) (+) đục (+) (+) Bortrager 1% Vanilin/HCl đặc Phenol Mẫu thử chuyển sang màu nâu (+) (+) Gelatin mặn Mẫu thử chuyển sang màu vàng , kết tủa màu nâu (+)(+) Stiasny Mẫu thử chuyển sang màu xanh đục (+) 5% FeCl3/H2O Tannin Mẫu thử chuyển sang màu xanh đục (+) Mẫu thử chuyển sang màu xanh đục (+) Mẫu thử chuyển sang màu nâu đậm (+)(+)(+) PHỤ LỤC 1.2 Kết định tính nhóm chất cao Dichlorometane tách từ tổng cao ethanol thân Đại tướng quân hoa trắng NHÓM CHỨC THÂN CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO DICLOROMETAN THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayner Wagner Dragendorff Alkaloid Mẫu chuyển sang màu vàng nhạt (+) Mẫu chuyển sang màu đỏ ( màu đỏ Wagnar) (+)(+)(+) H2SO4 1% NaOH/C2H5OH Mẫu chuyển sang màu đỏ (màu đỏ Dragendorff) (+)(+)(+) 1% AlCl3/C2H5OH Flavonoid Mẫu thử không phản Mẫu thử không phản ứng (màu nhạt ứng (màu đậm so với mẫu) (-) so với mẫu) (+) Mẫu thử không tượng (-) H2SO4 đậm đặc Tollens Mẫu thử tách thành hai lớp: Lớp trên: màu nâu đậm Lớp dưới: màu cam đậm (+) (+) (+) Mẫu thử tách thành hai lớp: Lớp trên: màu đen Lớp dưới: màu đà nhạt (+) (+) (+) Lacton Rosenthaler Salkowski Steroid Mẫu thử tách thành hai lớp: Mẫu thử tách thành hai lớp: Lớp trên: màu cam Lớp trên: màu nâu đậm Lớp dưới: màu đà nhạt Lớp dưới: màu cam đậm (+) (+) (+) (+) (+) (+) Keller - Killiani Tollens Phenol –H2SO4 Glycosid Mẫu thử tách thành Mẫu thử tách thành Mẫu thử tách thành hai lớp:lớp hai lớp: lớp màu hai lớp Lớp không màu, lớp cam (của Keller – màu đen (+)(+)(+) màu trắng đục Killiani) (+)(+)(+) (+)(+) 5% FeCl3/H2O Bortrager 1% Vanilin/HCl đặc Phenol Mẫu chuyển sang màu cam đậm (+)(+)(+) Gelatin mặn Mẫu chuyển sang màu cam (+)(+) Mẫu thử khơng có tượng (-) Stiasny 5% FeCl3/H2O Mẫu nhạt so với mẫu ban đầu (-) Mẫu chuyển sang màu nâu đậm (+)(+)(+) Tannin Mẫu đục so với mẫu ban đầu (+) PHỤ LỤC 1.3 Kết định tính nhóm chất cao Ethyl acetate tách từ tổng cao ethanol thân Đại tướng quân hoa trắng NHÓM CHỨC THÂN CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO ETHYL ACETAT THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayner Wagner Dragendorff Alkaloid Không tượng (-) H2SO4 Mẫu chuyển sang màu đỏ (+)(+)(+) 1% NaOH/C2H5OH Mẫu chuyển sang màu đỏ (+)(+)(+) 1% AlCl3/C2H5OH Flavonoid Mẫu chuyển sang Mẫu chuyển sang màu nâu đậm màu nâu (+)(+)(+) (+)(+)(+) H2SO4 đậm đặc Không tượng (-) Tollens Lacton Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu cam nhạt (+)(+) Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu đen (+)(+)(+) Rosenthaler Salkowski Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu nâu (+)(+)(+) Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu cam nhạt (+)(+) Steroid Keller - Killiani Tollens Phenol –H2SO4 Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu cam (+)(+)(+) Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu đen (+)(+)(+) Không tượng (-) 5% FeCl3/H2O Bortrager 1% Vanilin/HCl đặc Mẫu chuyển sang màu xanh đen (+)(+)(+) Xuất kết tủa Mẫu chuyển sang màu cam đục (+)(+) Gelatin mặn Stiasny Mẫu nhạt so với mẫu so sánh (+)(+) Mẫu chuyển sang màu vàng đục (+) Glycosid Phenol Mẫu thử tách thành hai lớp: Lớp trên: vàng Lớp dưới: vàng đục (+)(+) 5% FeCl3/H2O Tannin Mẫu chuyển sang màu xanh đen (+)(+)(+) PHỤ LỤC 1.4 Kết định tính nhóm chất cao nước tách từ tổng cao ethanol thân Đại tướng quân hoa trắng NHÓM CHỨC THÂN CÂY ĐẠI TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO NƯỚC THUỐC THỬ Mayner THUỐC THỬ Wagner THUỐC THỬ Dragendorff Mẫu chuyển sang màu đỏ đục (màu Wagner) (+)(+)(+) 1% NaOH/C2H5OH Mẫu chuyển sang màu đỏ (màu đỏ Dragendorff) (+)(+)(+) 1% AlCl3/C2H5OH Mẫu thử không Mẫu thử có kết tủa tượng (-) trầm đậm (+) (+) H2SO4 đậm đặc Mẫu thử không tượng (-) Tollens Alkaloid Mẫu nhạt so với mẫu so sánh (+) H2SO4 Flavonoid Lacton Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp chuyển sang màu cam nhạt (+) (+) Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu đen (+) (+)(+) Rosenthaler Salkowski Steroid Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp chuyển sang màu cam nhạt (+) (+) Tollens Phenol –H2SO4 Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu nâu (+) (+)(+) Keller - Killiani Glycosid Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu nâu (+) (+) 5% FeCl3/H2O Mẫu thử tách thành hai lớp Lớp màu đen (+) (+) (+) Bortrager Mẫu thử chuyển sang màu cam đậm (+) (+) (+) Gelatin mặn Mẫu thử chuyển sang màu vàng đục (+) (+) (+) Stiasny Mẫu thử không tượng (-) Mẫu thử không tượng (-) Mẫu thử không tượng (-) 1% Vanilin/HCl đặc Phenol Mẫu thử không tượng (-) 5% FeCl3/H2O Tannin Mẫu thử chuyển sang màu xanh đen (+) (+) (+) PHỤ LỤC KẾT QUẢ SẮC KÝ GC-MS CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC 2.1 Kết sắc ký GC-MS cao hexane thân Đại tướng quân hoa trắng 10 PHỤ LỤC 2.2 Kết sắc ký GC-MS cao dichloromethane thân Đại tướng quân hoa trắng 11 PHỤ LỤC 2.3 Kết sắc ký GC-MS cao ethyl acetate thân Đại tướng quân hoa trắng 12 PHỤ LỤC 2.4 Kết sắc ký GC-MS cao nước thân Đại tướng quân hoa trắng 13 PHỤ LỤC 2.5 Kết sắc ký GC-MS phân đoạn TNH.2.1a thân Đại tướng quân hoa trắng 14 PHỤ LỤC 2.6 Kết sắc ký GC-MS phân đoạn TNH.2.4.4 thân Đại tướng quân hoa trắng 15 PHỤ LỤC 2.7 Kết sắc ký GC-MS phân đoạn TNH.2.6a thân Đại tướng quân hoa trắng ... tài: ? ?Nghi? ?n cứu chiết tách, xác định thành ph? ?n hóa học ph? ?n l? ??p ph? ?n đo? ?n cao chiết n- Hexane th? ?n Đại Tướng Qu? ?n hoa trắng (crinum asiaticum l. ) thu hái địa b? ?n Đà N? ??ng “ Nguy? ?n liệu, dụng cụ... thành ph? ?n alkaloid l? ?, hoa củ Đại tướng qu? ?n hoa trắng [11] - Tr? ?n Bạch Dương cộng nghi? ?n cứu alkaloid Trinh n? ?? hoàng cung (Crinum latifolium) Đại tướng qu? ?n hoa trắng (Crinum asiaticum) ph? ?n l? ??p. .. thành ph? ?n hóa học chất thu từ Đại tướng qu? ?n hoa trắng (Crinum asiaticum L. ) ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHI? ?N CỨU 3.1 Đối tượng nghi? ?n cứu Đại tướng qu? ?n hoa trắng (Crinum asiaticum L. ) thu hái thành