Nghiên cứu mô tả sự phát triển phôi và ấu trùng của cá KCLYN từ trứng thụ tinh đến khi phôi nở được phân chia theo các giai đoạn phát triển của cá xương. Giai đoạn kích hoạt trứng đánh dấu bằng sự xuất hiện 1 tế bào ở cực động vật (1h30’ sau thụ tinh). Giai đoạn phân cắt, khối noãn hoàng giữ nguyên không tham gia quá trình phân cắt, quá trình phân cắt trứng chỉ diễn ra ở khu vực đĩa phôi nằm phía cực động vật, chia nguyên phôi bào thành 64 phôi bào trên đĩa phôi (5h20’ sau thụ tinh).
Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2019 THÔNG BÁO KHOA HỌC CÁC GIAI ĐOẠN PHÁT TRIỂN PHÔI VÀ ẤU TRÙNG CỦA CÁ KHOANG CỔ LƯNG YÊN NGỰA – Amphiprion polymnus (Linnaeus, 1978) TRONG ĐIỀU KIỆN THÍ NGHIỆM EMBRYOLOGY AND EARLY ONTOGENY OF SADDLEBACK CLOWNFISH – Amphiprion polymnus (Linnaeus, 1978) IN THE LABORATORY Nguyễn Thị Hải Thanh¹, Huỳnh Minh Sang², Ngơ Anh Tuấn³, Nguyễn Văn Quang¹, Võ Thị Hà¹, Lê Thị Kiều Oanh¹ Ngày nhận bài: 6/11/2018; Ngày phản biện thông qua: 24/11/018; Ngày duyệt đăng: 30/11/2018 TÓM TẮT Cá khoang cổ lưng yên ngựa (KCLYN) Amphiprion polymnus (Linnaeus, 1978) thuộc nhóm cá đẻ trứng dính Cá đẻ trứng giá thể vật dụng đặt sẵn bể đẻ điều kiện nuôi dưỡng nhân tạo Cá bố mẹ chăm sóc phơi ấu trùng suốt trình ấp nở Các trình quan sát thực điều kiện phịng thí nghiệm nhiệt độ 27–28ºC; độ mặn 33-34‰ Nghiên cứu mô tả phát triển phôi ấu trùng cá KCLYN từ trứng thụ tinh đến phôi nở phân chia theo giai đoạn phát triển cá xương Giai đoạn kích hoạt trứng đánh dấu xuất tế bào cực động vật (1h30’ sau thụ tinh) Giai đoạn phân cắt, khối nỗn hồng giữ ngun khơng tham gia q trình phân cắt, trình phân cắt trứng diễn khu vực đĩa phơi nằm phía cực động vật, chia nguyên phôi bào thành 64 phôi bào đĩa phôi (5h20’ sau thụ tinh) Kết thúc giai đoạn phôi nang biến eo thắt tế bào phơi mọc phủ che phần nỗn hồng (18h15’ sau thụ tinh) Cuối giai đoạn phôi vị, thần kinh hình thành chồi mắt xuất cực động vật (1 ngày 3h20’ sau thụ tinh) Sau quan hệ thần kinh, tuần hồn, tiêu hóa, tiết dần hình thành tiếp tục hoàn thiện sau cá nở (7 ngày 5h20’) Từ khóa: cá khoang cổ lưng yên ngựa, Amphiprion polymnus, phôi, ấu trùng ABSTRACT Amphiprion polymnus (Linnaeus, 1978) belongs to the group of spawning fish Fish lay eggs on substrates that are placed in the spawning tank under artificial feeding conditions The breeding pairs care for embryos and larvae during hatching Observations were made under laboratory conditions at 27-28°C; salinity 33-34‰ The present study describes the embryonic development and early ontogeny of Saddleback Anemonefish from fertilized eggs to a lavar Stage of oocytes and egg activation marked by a cell in the animal pole (1h30' post fertilization) The cleavage occurs only in the embryonic region at the animal pole; dividing the blastocyst into multiple blastocysts until the blastocysts 64 blastocysts on the embryo plate (5h20’) The end of blastocyst stage is the disappearance of the ligament and the embryonic cells partially cover the yolk sac (18h15’) At the end of the gastrula stage, the nerve and eye buds appear at the animal pole (1 day 3h20') The organs and nervous system, circulation, digestion, excretion gradually formed and continued to improve after the fish hatch (7 days 5h20' post fertilization) Key words: Saddleback Anemonefish, Amphiprion polymnus, embryology, early ontogeny I ĐẶT VẤN ĐỀ Nghiên cứu vòng đời phát triển cá thể có giai đoạn phơi chưa thật ¹ Chi nhánh Ven biển, Trung tâm Nhiệt Đới Việt - Nga ² Viện Hải dương học ³ Thành phố Nha Trang trọng tập trung nghiên cứu nhiều nhà khoa học Quan sát trình phát triển phơi ấu trùng yếu tố quan trọng trình sản xuất giống, làm sở cho tác động biện pháp kỹ thuật phù hợp nhằm tác động đến chất lượng cá giống chất bổ sung TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 57 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản thức ăn, môi trường ương nuôi phù hợp cho cá bố mẹ, phôi, ấu trùng cá bột, cá Cá KCLYN loài cá phân bố tự nhiên vùng biển Việt Nam, với suy thối rạn san hơ – rừng nhiệt đới biển – đồng nghĩa với nhà chung sinh vật rạn biến dẫn đến suy giảm đáng kể số lượng cá tự nhiên bên cạnh việc lặn thu gom phục vụ cho nhu cầu xuất làm cảnh thực tiếp tục diễn Điều tất yếu dẫn đến suy giảm quần đàn cá tự nhiên Việc nghiên cứu trình phát triển phôi ấu trùng, tạo tiền đề cho nghiên cứu thử nghiệm sinh sản nhân tạo nhằm bước phát triển làm chủ công nghệ sinh sản nhân tạo cá, tạo sở cho việc xuất chủ động cá KCYN khai thác từ tự nhiên gây suy thoái nguồn lợi việc làm cần thiết II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Phôi cá KCLYN - Amphiprion polymnus (Linnaeus, 1978) cá bố mẹ đẻ thụ tinh điều kiện nhân tạo Phôi thu từ cặp cá bố mẹ dưỡng sinh sản nhân tạo bể kính theo cặp, bể có hệ thống lọc sinh học tuần hồn Trong bể có đặt giá thể dùng làm tổ cho cá sinh sản (lọ hoa, viên gạch, san hô chết, vỏ ốc ) tích bể 500L/bể Cá bố mẹ có kích thước ≥ 11,7cm khối lượng ≥ 33,83g Quan sát q trình phát triển phơi cách thu ngẫu nhiên 10 trứng/ lần đưa vào phòng thí nghiệm đặt cốc thủy tinh có sục khí Trứng quan sát từ thụ tinh đến ngày sau nở Ổ trứng tiếp tục cặp cá bố mẹ chăm sóc nở thành cá bể nuôi 2.2 Phương pháp nghiên cứu Phôi quan sát cá bố mẹ đẻ thụ tinh bể thí nghiệm có giá thể Nhấc giá thể cá đẻ trứng vào đưa nhẹ lên phía gần mặt Sử dụng dao lam khẽ tách phôi khỏi giá thể; sử dụng pipet nhựa đưa phôi vào cốc thủy tinh quan sát phịng thí nghiệm Phơi ln đặt cốc thủy tinh thể tích 2L sục khí 24/24 quan sát, mơ tả q trình phát triển phơi ấu trùng Đặt phơi 58 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Số 1/2019 đĩa cầu lõm lam kính quan sát loại kính phù hợp Lần lượt quan sát, xác định thời gian, đặt phôi lại cốc thủy tinh để tiếp tục sử dụng cho lần quan sát sau Cá KCLYN lồi đẻ trứng dính, cá bố mẹ chăm sóc phơi ấu trùng suốt giai đoạn ấp trứng, vậy, thường xun loại bỏ phơi quan sát điều kiện phịng thí nghiệm bị chết dị hình cách thu phơi cá bố mẹ ấp bể kính để tiếp tục xác định q trình phát triển phơi ấu trùng Hình ảnh phát triển phơi thai thực khoảng thời gian phút 24 đầu tiên, vào khoảng thời gian 10-15 phút vào ngày thứ 2, thứ sau thụ tinh khoảng 30 phút trứng nở Việc phân chia giai đoạn phát triển trứng, ấu trùng dựa phân chia giai đoạn phát triển xương [1, 3-4,] Ngồi ra, mơ tả bước phát triển giai đoạn tham khảo nghiên cứu phát triển phôi cá xương cá khoang cổ [1-5, 9-10,12-14] Phơi cá quan sát kính soi Olympus SZ61 có độ phóng đại tối đa: 14 đến 90 lần kính hiển vi soi ngược CKX41 Chụp ảnh máy ảnh kỹ thuật số Canon EOS 650D Q trình phát triển phơi diễn hồn tồn màng phơi, kích thước phơi khơng đổi suốt q trình phát triển cá nở, cần đo kích thước bắt đầu quan sát Đo kích thước phơi trắc vi thị kính kính soi có độ xác 1µm III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Cá KCLYN thuộc nhóm cá đẻ trứng dính, trứng cá có màu vàng, vàng cam cam đậm Trứng có hình van với phân biệt hai cực tế bào dựa lớp màng gắn kết trứng cá với vật bám Cực động vật trứng đặc trưng gắn kết phần với chất cá đẻ trứng cực thực vật có nỗn hồng hạt chất béo khác phân tán hạt nỗn hồng giọt dầu có kích cỡ khác Phơi cá có kích thước chiều dài 1398±270µm chiều rộng 523±43µm 3.1 Sự thụ tinh kích hoạt trứng Sau tinh trùng xâm nhập vào tế bào trứng, màng thụ tinh xoang thụ tinh hình thành (Hình 1) Đồng thời, nước xâm Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản nhập vào khoảng trống lớp vỏ lớp màng đệm trứng, cực động vật đến cực thực vật Sự xâm nhập nước làm nỗn hồng lớp vỏ trứng tách biệt tạo thành khoang quanh nỗn hồng (perivitelline) tách biệt vỏ tế bào trứng nỗn hồng khoảng trống, khoảng trống cực thực vật lớn so với cực động vật Phần nỗn hồng co lại kích thước trứng cá không Số 1/2019 thay đổi Tế bào chất phần khác trứng dồn cực động vật, lúc đầu đĩa phơi mỏng phía cực động vật (Hình 1.2), sau lượng tế bào chất tăng dần lên tạo thành đỉnh chóp cực động vật hình dạng tương tự mái vịm lớn đánh dấu q trình kích hoạt trứng hoàn tất thường gọi giai đoạn tế bào (Hình 1.3) Hình 1: Các giai đoạn phát triển phôi (từ trứng vừa thụ tinh đến tế bào) Trứng thụ tinh; Đĩa phơi mỏng phía cực động vật; Giai đoạn phôi tế bà 3.2 Giai đoạn phân cắt trứng Trứng cá khoang cổ lưng yên ngựa (KCLYN) loại trứng cá thuộc dạng trứng đoạn hoàng, phân cắt trứng thuộc dạng khơng hồn tồn (dạng đĩa) Q trình phân cắt trứng diễn khu vực đĩa phơi, nằm phía cực động vật, khối nỗn hồng giữ ngun khơng tham gia q trình phân cắt Giai đoạn phơi bào: Sự phân cắt bắt đầu cách chia đĩa phơi thành hai ngun bào phơi, kích thước ngun bào phơi ½ ngun bào ban đầu Quan sát rõ tế bào chất bên Các giọt dầu nhỏ di chuyển phía cực thực vật (Hình 2.4) Hình 2: Các giai đoạn phát triển phôi (Từ giai đoạn đến 16 phôi bào) Giai đoạn phôi bào; Giai đoạn phôi bào; Giai đoạn phôi bào; Giai đoạn 16 phôi bào; 8: Giai đoạn 32 phôi bào; Giai đoạn 64 phôi bào Giai đoạn phôi bào: nguyên phôi bào tương ứng xuất lần phân bào thứ hai mặt phẳng thẳng đứng vuông góc với rãnh phân bào thức Các phơi bào nhỏ có kích thước (Hình 2.5) Giai đoạn phôi bào: nguyên phôi bào xuất khoảng hai sau thụ tinh, kết từ xuất đường phân chia vuông TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 59 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản góc với đường có chia ngun phơi bào thành phơi bào với kích thước nhỏ kích thước giai đoạn trước (Hình 2.6) Giai đoạn 16 phơi bào: 16 phôi bào xuất khoảng ba sau thụ tinh đường phân chia ngang Các phơi bào nhỏ có nửa kích thước phôi bào giai đoạn trước Các giọt dầu quan sát thấy nỗn hồng (Hình 2.7) Các phôi bào tiếp tục phân chia theo cấp số nhân lần so với số phôi bào trước Số lượng phơi bào 32 (Hình 2.8) 64 phơi bào (Hình 2.9) Ở giai đoạn 64 phôi bào, phôi bào xếp lại phơi bào thành hai lớp, đánh dấu hồn thành giai đoạn phân cắt Giai đoạn phân cắt hoàn thành sau khoảng 30 phút trứng thụ tinh 3.3 Giai đoạn phôi nang Số 1/2019 Các phôi bào mở rộng theo chiều ngang xếp lớp phẳng gọi bì phơi đĩa phơi Phôi phát triển từ phôi bào tiếp tục phân chia theo cấp số nhân đến kích thước chúng trở nên nhỏ xếp chồng thành nhiều lớp tạo thành khối hình bán cầu nằm phía cực động vật tách biệt với phần nỗn hồng phía cực thực vật Ở giai đoạn phơi nang, chia thành giai đoạn phơi nang cao, phôi nang thấp phôi nang muộn với phân biệt dựa vào vị trí đĩa phơi Phơi nang cao: đĩa phơi nhơ lên cao túi nỗn hồng, eo thắt phơi khối nỗn hồng nhìn thấy rõ rệt Số lượng phôi bào tiếp tục tăng lên, cuối giai đoạn này, phân cắt nhiều lần, kích thước phơi bào nhỏ dần nên khơng nhìn rõ ranh giới phơi bào (Hình 10, 11, 12) Hình 3: Các giai đoạn phát triển phôi nang cao 10 Phôi nang cao (128 phôi bào); 11 256 phôi bào; 12 Giai đoạn nhiều phôi bào Phơi nang thấp: đĩa phơi có xu hướng phủ xuống túi nỗn hồng, eo thắt phơi khối nỗn hồng bớt rõ rệt dần (Hình 13, 14) Phôi nang muộn: đĩa phôi phủ xuống dần, eo thắt phơi khối nỗn hồng hồn tồn biến (Hình 15) Hình 4: Các giai đoạn phát triển phôi nang thấp, phôi nang muộn 13 Phôi nang thấp (eo thắt bớt rõ dần); 14 Phôi nang thấp (eo thắt biến mất); 15 Phơi nang muộn 60 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Như vậy, phôi nang cá KCLYN gồm phơi bì hình thành mũ viền phơi phía tiếp xúc chặt chẽ với nỗn hồng 3.4 Giai đoạn phơi vị Khi đĩa phơi phủ từ ⅓ đến ½ túi nỗn hồng q trình tạo phơi vị bắt đầu Phơi vị hóa q trình vận động, đó, khu vực phôi nang thay đổi cấu trúc vị trí để tạo nên phơi mầm mống tổ chức quan tương lai thể Q trình gọi phơi vị hóa Cá KCLYN thuộc lớp cá xương, trứng thuộc kiểu tận hồng, nghĩa nỗn hồng nằm lệch bên mà q trình phơi vị hóa trở nên đặc biệt [8] Ở giai đoạn phơi nang, có phơi thượng bì hạ bì Giai đoạn phôi vị làm tiêu biến xoang phôi nang tạo thành xoang phôi xoang phôi vị Phôi gồm phơi ngoại bì, nội bì trung bì Trong đó, trung bì hình thành thời kỳ phơi vị hóa sau ngoại bì Số 1/2019 nội bì Khi hình thành xong trung bì tồn tế bào nằm ngoại bì Các phôi bào di chuyển xuống từ cực động vật để che phần nỗn hồng gọi mọc phủ Các tế bào phôi bắt đầu di chuyển vào bên để tạo thành ba lớp mầm gọi hình thành phơi vị hay hình thành phơi thứ (Hình 16) Khi phơi vị hóa, đĩa phơi trở nên mỏng cịn mép phơi ngồi lại dày lên tạo vịng rìa Đĩa phơi lớn dần, đĩa phơi lớn vịng rìa lan dần từ cực động vật xuống cực thực vật Vào đầu phơi vị hóa, phơi giống lưỡi tiến phía trước lớp ngồi đĩa phơi, mọc phủ lên nỗn hồng, trùm lấy tồn khối Đến gần cuối phơi vị hóa, mép mọc phủ khép gần kín phần thân phơi, thần kinh hình thành (Hình 17) Cuối giai đoạn này, mép phôi bao trùm tồn khối nỗn hồng, mầm mắt xuất báo hiệu hình thành quan Hình 5: Các giai đoạn phát triển phôi vị 16 Đầu phôi vị; 17 Hình thành thần kinh; 18 Cuối phơi vị (Xuất mầm mắt) 3.5 Biệt hóa hình thành quan Sự hình thành quan giai đoạn phát triển bắt đầu sau giai đoạn phơi vị Sự hình thành quan, lúc đầu hình thành quan đặc thù cho ấu trùng phát triển, cá dần hoàn chỉnh thể Đặc trưng trình phát triển phơi cá KCYN từ lúc cá đẻ ngồi mơi trường ln nằm màng phôi, thời gian phát triển tương đối dài (7 ngày tuổi+) Vì vậy, phân chia trình phát triển phơi cá giai đoạn hình thành quan theo ngày mang tính chất tương đối phụ thuộc vào quan sát xuất quan qua lớp màng phôi 3.5.1 Giai đoạn phôi cá ngày tuổi Tấm thần kinh rõ ràng dần, rãnh thần kinh xuất Các ống thần kinh theo chiều dọc hình thành gắn vào nỗn hồng Lúc đầu thể suốt khơng có cấu trúc (H6 19) Đầu với hai mắt tách bật so với phần cịn lại thể Mầm xuất hiện, đốt sống xương sống hình thành (H6 20) Tim xuất hiện, đuôi phát triển dài chưa có sắc tố Phần đầu rõ ràng áp chặt vào phần nỗn hồng, xuất túi não sơ khai xuất (não trước, não não sơ khai) nếp gấp lớn đỉnh đầu phơi (H 6.21) TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 61 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2019 3.5.1 Giai đoạn phôi cá ngày tuổi Hình 6: Các giai đoạn phát triển quan phơi ngày tuổi 19 Hình thành rãnh thần kinh; 20 Mầm đuôi rõ ràng; 21 Tim xuất hiện, đuôi cử động Đầu cá tách khỏi khối nỗn hồng Đi dài tách khỏi nỗn hồng, thể dính vào nỗn hồng Đá tai rõ ràng Quan sát mắt, chồi đuôi, tế bào sắc tố đen nằm đầu bề mặt nỗn hồng rõ rệt (H 22) Miệng nguyên thủy xuất hiện, mắt có sắc tố đen dần lên Ở giai đoạn phơi phát triển mạnh Cơ thể cịn dính nỗn hồng giảm dần diện tích tiếp xúc Đi cử động nhẹ ít, tim đập chậm (H7 23) Tim hoạt động mạnh hơn, phổi xuất hiện, hệ thống tuần hoàn với động mạch, tĩnh mạch xuất hiện, lúc đầu chưa có hồng cầu, sau hồng cầu xuất làm phần cá dần có cụm máu màu hồng nhạt Chiều dài thể cá tăng lên rõ rệt Đá tai nhỏ quan sát dễ dàng Các tế bào sắc tố đen tăng lên khu vực đầu (H7 24) Hình 7: Các giai đoạn phát triển quan phôi ngày tuổi 22 Đầu tách khỏi nỗn hồng; 23 Miệng rõ ràng; 24 Phổi xuất 3.5.2 Giai đoạn phôi cá 4-7 ngày tuổi Kích thước nỗn hồng giảm dần phôi phát triển thể lớn dần lên Đầu đuôi tách rõ ràng khỏi nỗn hồng Ba túi chứa não chính: não trước, não não sau nhìn thấy rõ vùng đầu Nắp mang xuất (H8 25) 62 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Đôi mắt to bật có sắc tố màu nâu đen Phần đầu có nhiều sắc tố vùng Trục cột sống rõ ràng Các tế bào máu đỏ chạy mạch máu quan sát cho thấy hoạt động hệ tuần hồn Đầu phôi mở rộng chạm vào nang trứng Ống hậu mơn xuất (H8.26) Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2019 Hình 8: Các giai đoạn phát triển quan phôi 4-7 ngày tuổi 25 Nắp mang rõ ràng (phôi ngày); 26 Hậu mơn xuất (phơi ngày); 27 Hệ tuần hồn hoạt động khắp thể (phôi ngày); 28 Phôi vận động mạnh (phơi ngày) Hình 9: Giai đoạn phơi nở, cá ngồi mơi trường 29 Phôi nở (phôi ngày); 30 Cá ngày tuổi; Kích thước quan phát triển lớn lên, nỗn hồng nhỏ dần Bụng lớn phủ lên nỗn hoàng Các tế bào sắc tố đen phân bố tồn thể (H8 27) Phơi mở rộng chứa đầy hầu hết nang trứng Vây ngực lớn Mang hoạt động mạnh Phôi chuyển động mạnh thường xuyên (H8.28) 3.5 Giai đoạn cá nở Phôi bắt đầu nở cách đuôi vận động mạnh để phá vỡ nang trứng Ấu trùng giải phóng khỏi nang trở thành cá nở (H9 29) Vây lưng, vây đuôi vây hậu môn liên tục theo đường dọc Vây bụng không rõ ràng giai đoạn (H9 30) Thảo luận Cá khoang cổ nhóm lồi sớm nghiên cứu thử nghiệm sinh sản nhân tạo thành công giới Kết quan sát trình phát triển phôi cho thấy, thời gian phát triển phôi cá A polymnus dài so với cá khoang cổ A ocellaris (152 sau thụ tinh) [11, 13]; kết cho thấy thời gian phát triển phôi dài so loài cá KCLYN A polymnus vịnh Thái Lan (6 ngày+), điều lý giải nhiệt độ quan sát trình phát triển phơi cá 27-28 độ, nhiệt độ phịng thí nghiệm nên thấp TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 63 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2019 Bảng Các giai đoạn phát triển phôi cá khoang cổ yên ngựa, Amphiprion polymnus 64 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản so với nhiệt độ trời tác giả khác So sánh thời gian giai đoạn phát triển phôi, ấu trùng cá khoang cổ đỏ A frenatus cá khoang cổ A ocellaris Việt Nam kích thước trứng cho thấy, thời gian phát triển cá A.polymnus dài hơn, kích thước phơi cá nhỏ so với loài [5-8, 11] IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Sự phát triển phôi ấu trùng cá khoang cổ lưng yên ngựa từ trứng thụ tinh đến cá nở trải qua giai đoạn: Giai đoạn kích hoạt trứng; giai đoạn phân cắt; giai đoạn phơi nang Số 1/2019 phôi vị tiếp đến hình thành quan đến cá nở với đến cá nở với thời gian ngày+ Kết nghiên cứu làm sở khoa học cho việc nghiên cứu sinh sản xuất giống nhân tạo cá KCLYN Kết nhằm cung cấp sở liệu thực tiễn để tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng biện pháp kỹ thuật phù hợp nhằm tác động đến chất lượng cá giống chất bổ sung thức ăn, môi trường ương nuôi phù hợp cho cá bố mẹ, phôi, ấu trùng cá bột, cá hướng đến sinh sản nhân tạo thành công cá KCLYN TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Tường Anh, (1996) Sinh học đại cương: Sự đa dạng, sinh sản phát triển động vật, Đại học Khoa học tự nhiên Lê Hoàng Thị Mỹ Dung & Hùng Phạm Quốc, (2015) Sinh học động vật thủy sản thực hành, Nhà xuất Nơng nghiệp Lê Hồng Thị Mỹ Dung & Phạm Quốc Hùng, (2015) Sinh học động vật thủy sản thực hành Sinh học sinh sản phát triển Nhà xuất Nông nghiệp Lưu Thị Dung & Phạm Quốc Hùng, (2005) Mô Phôi Động vật Thủy sản, Nhà Xuất Bản Nông nghiệp Hà Lê Thị Lộc, (2004) Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản cá khoang cổ đỏ (Amphiprion frenatus Brevoort, 1856) vùng biển Nha Trang, NXB KHKT Hà Lê Thị Lộc, (2005) Nghiên cứu sở sinh học phục vụ cho sinh sản nhân tạo cá khoang cổ (Amphirion spp.) vùng biển Khánh Hòa, Viện Hải dương học Nha Trang Hà Lê Thị Lộc, Nguyễn Thị Thanh Thủy & Hồ Ngọc Huỳnh, 2009 Q trình phát triển phơi biến thái ấu thể cá khoang cổ Nemo A ocellaris Cuvier 1830 điều kiện thí nghiệm Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Biển, T9, 103-115 Hồ Ngọc Huỳnh, (2010) Mô tả q trình phát triển phơi, biến thái ấu thể cá khoang cổ nemo (Amphiprion ocellaris Cuvier, 1830) nghiên cứu ảnh hưởng chế độ dinh dưỡng, độ muối cá từ 15 đến 60 ngày tuổi, Trường Đại học Nha Trang Tiếng Anh Allen G R., (1985) Anemo fishes: Their classification and biology 10 Arezo M.J., Pereiro, & L & Berois N., 2005 Early development in the annual fish Cynolebias viarius Journal of Fish Biology,, 66, 1357-1370 11 Chuan T S., 2006 Embryonic development of clownfish Amphiprion ocellaris under laboratory conditions Journal of Sustainability Science and Management, 1, 64-73 12 Holliday F G T., (1969) The Effects of Salinity on the Eggs and Larvae of Teleosts in W S Hoar & D J Randall editors Fish Physiology Academic Press 13 Inayah Yasir & Jian G Qin, 2007 Embryology and early ontogeny of an anemonefish Amphiprion ocellaris Journal of the Marine Biological Association of the United Kingdom, 87, 1025-1033 14 Rattanayuvakorn S., Mungkornkarn P., Thongpan A & Chatchavalvanich K., 2005 Embryonic development of saddleback anemonefish, Amphiprion polymnus, Linnaeus (1758) Kasetsart J (Nat Sci), 39, 455-463 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 65 ... Hình 2: Các giai đoạn phát triển phôi (Từ giai đoạn đến 16 phôi bào) Giai đoạn phôi bào; Giai đoạn phôi bào; Giai đoạn phôi bào; Giai đoạn 16 phôi bào; 8: Giai đoạn 32 phôi bào; Giai đoạn 64 phôi. .. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Sự phát triển phôi ấu trùng cá khoang cổ lưng yên ngựa từ trứng thụ tinh đến cá nở trải qua giai đoạn: Giai đoạn kích hoạt trứng; giai đoạn phân cắt; giai đoạn phôi nang... gian giai đoạn phát triển phôi, ấu trùng cá khoang cổ đỏ A frenatus cá khoang cổ A ocellaris Việt Nam kích thước trứng cho thấy, thời gian phát triển cá A .polymnus dài hơn, kích thước phơi cá nhỏ