Nghiên cứu phân lập một số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform của hoa đu đủ đực thu hái tại quảng nam – đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM LÊ THỊ THANH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM-ĐÀ NẴNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC Đà Nẵng- Năm 2017 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM LÊ THỊ THANH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM-ĐÀ NẴNG Chuyên ngành : Hóa hữu Mã số : 60 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM VĂN VƯỢNG TS GIANG THỊ KIM LIÊN Đà Nẵng-Năm 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Lê Thị Thanh Phương MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Bố cục luận văn CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ TRONG NƯỚC 1.3 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ NGOÀI NƯỚC 1.4 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ 11 1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO 15 1.5.1 Phương pháp MTT 16 1.5.2 Phương pháp SRB 16 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 19 2.2.2 Phương pháp tách tinh chế chất 20 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 20 2.3 ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ LỚP CHẤT TRONG HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 21 2.3.1.Akaloid 21 2.3.2 Flavonoid 21 2.3.3 Coumarin 22 2.3.4 Saponin 22 2.3.5 Đường khử 22 2.3.6 Polyphenol 23 2.3.7 Steroid 23 2.3.8 Axit hữu 23 2.3.9 Chất béo 23 2.3.10 Carotene 24 2.3.11 Polysaccarid 24 2.3.12 Iridoid 24 2.4 SƠ ĐỒ ĐIỀU CHẾ CÁC CAO CHIẾT 24 2.5.THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA DỊCH CHIẾT CHLOROFORM 26 2.5.1 Quy trình chiết xuất dịch chiết hoa Đu đủ đực để nghiên cứu tác dụng ức chế tề bào ung thư 26 2.5.2 Các dòng tế bào 28 2.5.3 Phương pháp 27 2.5.4 Thử độc tế bào 28 2.6 ĐỊNH DANH SƠ BỘ MỘT SỐ HỢP CHẤT CÓ TRONG CÁC CAO CHIẾT 28 2.7 CHẠY CỘT SẮC KÝ PHẦN CAO CHLOROFORM 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 32 3.2 THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC DỊCH CHIẾT TỪ HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 33 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT CHLOROFORM HOA ĐU ĐỦ BẰNG PHƯƠNG PHÁP GC-MS 35 3.4 PHÂN LẬP CÁC CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………54 QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN (Bản sao) PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT d: Doublet (NMR) J(Hz): Hằng số tương tác (NMR) Rf: Retention factor s: Singlet (NMR) ppm: Parts per million δ: Độ chuyển dịch hóa học (NMR) BuOH: Butanol CD3OD: Methanol- D CHCl3: Chloroform D: Dichlomethane DMSO: Dimethyl sunfoxide DEPT: Distortionless enhancement by polarisation transfer EtOAc: Ethyl acetate EtOH: Ethanol GC-MS: Gas chromatography-Mass spectrometry HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC: Heteronuclear Single Quantum Corelation MeOH: Methanol Me: Methyl MMT: 3-[4,5-dimetylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide NMR: Nuclear magnetic resonance SRB: Sulforhodamine B UV: Ultraviolet C1, C2: Tên hai hợp chất phân lập DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng bảng 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 Định tính lớp chất hoa Đu đủ đực Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết chloroform Thành phần hóa học dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất C1 hợp chất tham khảo Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz) và13C-NMR (125 MHz) chất C2 chất so sánh Trang 32 33 36 42 49 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Hình ảnh Đu đủ 2.1 Hoa Đu đủ đực Bột hoa Đu đủ đực 18 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 2.3 3.1 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực Phổ MS 2(3H)-Furanonedihydro-3-hydroxy-4,4dimetyl 30 35 38 3.3 Phổ MS 3,3,5,5-tetrametylcyclohexanol 38 3.4 Phổ MS 2H-Quinolizine-1-metanol, octahydro 39 3.5 Phổ MS C1 40 3.6 Phổ 1H-NMR C1 40 3.7 Phổ 13C-NMR C1 41 3.8 Phổ 13C-NMR-DEPT chất C1 42 3.9 Phổ IR chất C2 44 3.10 Phổ 1H-NMR C2 45 3.11 Phổ 13C-NMR C2 46 3.12 Phổ HSQC C2 47 3.13 Phổ HMBC C2 48 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây đu đủ (Carica papaya Linn) loại ăn có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới châu Mỹ Hiện nay, đu đủ trồng nước vùng nhiệt đới, nơi có nhiệt độ bình qn năm khơng thấp 15 0C Sản lượng đu đủ giới khoảng triệu quả/năm Ở Việt Nam, đu đủ trồng hầu hết tỉnh miền Bắc miền Nam Tuy nhiên, chúng trồng nhiều tỉnh đồng bằng, dọc theo sông, loại đất phù sa Các tỉnh trồng nhiều đu đủ như: Hà Nội, Hưng Yên, Hà Nam, Vĩnh Phúc, Tiền Giang, Cần Thơ, tỉnh Tây Nguyên,… Diện tích trồng đu đủ nước ước khoảng 10000 – 17000 hecta với sản lượng khoảng 200 – 350 nghìn Cây đu đủ có lợi loại dễ trồng, sớm, suất cao đồng thời toàn thân, lá, sử dụng với nhiều mục đích khác Ngồi việc lấy tươi, dùng làm nguyên liệu cho chế biến, đu đủ trồng để lấy nhựa, dùng làm thức ăn chăn nuôi Trong dân gian đu đủ sử dụng để sát khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, chữa sốt rét, trừ giun sán… Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt tính sinh học đu đủ Lá đu đủ chứng minh có khả chống oxy hóa mạnh Hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phenol gây Lá đu đủ có hoạt tính kháng khuẩn tốt, có khả kháng nhiều loại vi khuẩn gram âm, gram dương, loại nấm Ngồi ra, đu đủ cịn có khả kháng viêm, giảm đau Ở nước ta, cao chiết với cồn từ đu đủ nghiên cứu số mơ hình ung thư thực nghiệm chứng minh có tác dụng ức chế phát triển khối u gây tế bào ung thư Sarcoma TG-180 chuột nhắt trắng Phụ lục Phổ MS Glycyl-L-proline Phụ lục Phổ MS 4(1H)-pyrimidinone, 6-amino-2-metyl-5-nitroso Phụ lục Phổ 1H-NMR giãn rộng C1 Phụ lục Phổ 13C-NMR giãn rộng C1 Phụ lục Phổ 13C-NMR-DEPT giãn rộng C1 Phụ lục Phổ 1H-NMR giãn rộng C2 Phụ lục 10 Phổ 1H-NMR giãn rộng C2 Phụ lục 11 Phổ 13C-NMR giãn rộng C2 Phụ lục 12 Phổ 13C-NMR giãn rộng C2 Phụ lục 13 Phổ HMBC C2 Phụ lục 14 Phổ HMBC C2 Phụ lục 15 Phổ HMBC C2 Phụ lục 16 Phổ HMBC C2 Phụ lục 17 Phổ HMBC C2 Phụ lục 18 Phổ HSQC C2 Phụ lục 19 Phổ HSQC C2 ... tài ? ?Nghiên cứu phân lập một số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform của hoa Đu đu? ? đực thu hái tại Quảng Nam – Đà Nẵng? ?? làm đề tài luận văn thạc sĩ Mục tiêu nghiên cứu Phân. .. ảnh Đu đủ 2.1 Hoa Đu đủ đực Bột hoa Đu đủ đực 18 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 2.3 3.1 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết chloroform. .. tượng phạm vi nghiên cứu - Hoa đu đủ đực thu hái Quảng Nam- Đà Nẵng - Phân đoạn dịch chiết từ lồi hoa với dung mơi chloroform - Các hợp chất phân lập từ dịch chiết nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu