Đánh giá tác động hạ lipid máu in vitro và in vivo của curcumin và nano curcumin

Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN HẢI MINH ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG HẠ LIPID MÁU IN VITRO VÀ IN VIVO CỦA CURCUMIN VÀ NANO CURCUMIN Luận văn Thạc sĩ Dược học Thành phố Hồ Chí Minh – 2018 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN HẢI MINH ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG HẠ LIPID MÁU IN VITRO VÀ IN VIVO CỦA CURCUMIN VÀ NANO CURCUMIN Ngành Dược lý – Dược lâm sàng Mã số: 8720205 Luận văn Thạc sĩ Dược học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Trần Mạnh Hùng Thành phố Hồ Chí Minh – 2018 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác TRẦN HẢI MINH i Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Luận văn thạc sĩ dược học – Khoá: 2016 – 2018 Ngành Dược lý – Dược lâm sàng – Mã số 8720205 ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG HẠ LIPID MÁU IN VITRO VÀ IN VIVO CỦA CURCUMIN VÀ NANO CURCUMIN Học viên: Trần Hải Minh Hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Mạnh Hùng Mục tiêu Khảo sát tác động hạ lipid máu in vitro in vivo curcumin nano curcumin qua ức chế hoạt tính HMG-CoA reductase Vật liệu phương pháp Ở mơ hình in vitro, curcumin nano curcumin thể tác động ức chế hoạt tính HMGR dịch đồng thể chứa enzym phân lập từ gan chuột nhắt trắng phương pháp đo quang tác động hạ chlolesterol triglycerid tế bào HepG2 gây tăng lipid nội bào acid oleic 1mM Ở mô hình in vivo, chuột gây tăng lipid huyết cách tiêm tĩnh mạch tyloxapol (250 mg/kg), cho chuột uống curcumin/nano curcumin; 24 sau định lượng lipid huyết hoạt tính HMG-CoA reductase Chất đối chứng hai mơ hình atorvastatin Kết bàn luận Curcumin nano curcumin ức chế HMG-CoA reductase dịch đồng thể với IC50 khoảng 24 28 g/ml, đồng thời làm giảm cholesterol triglycerid tế bào HepG2 nồng độ 15 g/ml, nhiên nano curcumin cho kết tốt so với curcumin Nano curcumin hàm lượng 25 50 mg/ngày cho tác động điều hồ lipid ức chế hoạt tính HMGR khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh, làm giảm 17,6 19,9%, curcumin cần liều 1000 mg/kg tác động rõ ràng Kết luận Curcumin nano curcumin thể tác động điều hoà lipid cách ức chế hoạt tính HMG-CoA reductase, nhiên nano curcumin cho hiệu tốt curcumin ii Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Final assay for the Master of Pharmacology – Course: 2016 – 2018 Specialization: Pharmacology – Clinical Pharmacy – Code: 8720205 EVALUATION OF LIPID – LOWERING EFFECT IN VITRO AND IN VIVO OF CURCUMIN AND NANO CURCUMIN Student: Tran Hai Minh Supervisor: Assoc.Prof PhD Tran Manh Hung Purpose The present work aimed at investigating the hypolipidemic effect of curcumin and nano curcumin through the inhibition of HMG-CoA reductase activity in vitro and in vivo Materials and methods In the in vitro setting, curcumin and nano curcumin inhibit HMG-CoA reductase enzyme isolated from livers of Swiss albino mice based on spectrophotomeric measurements and lower cholesterol and triglycerrid in HepG2 induced steatosis by oleic acid 1mM The in vivo hyperlipidemia was induced by a single intravenous ịnection of tyloxapol at the dose of 250 mg/kg b.w, followed by oral administration of curcumin/nano curcumin The determination of lipid profiles and HMG-CoA reductase activity were performed 24 hours later Atorvastatin is a positive control of both experiments Results and discussion Curcumin/nano curcumin demonstrated in vitro inhibitory effect on HMG-CoA reductase activity with IC50 value range of 24 and 28 g/ml respectively as well as reduced cholesterol and triglycerid levels of HepG2 with concentration at and 15 g/ml Nano curcumin containing 25 and 50 mg per day significantly regulated lipid profile and increased HMG-CoA reductase activity with reduction 17,6 and 19,9% respectively while curcumin 1000 mg/kg b.w showed difference Conclusion Curcumin and nano curcumin showed promising hypolidemic effect by inhibiting HMG-CoA reductase activity, however nano curcumin is more prospect iii Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC HÌNH viii matrix metallopeptidase x MỞ ĐẦU .1 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN RỐI LOẠN LIPID MÁU 1.1.1 Vai trò lipid 1.1.2 Rối loạn lipid máu .4 1.2 TỔNG QUAN VỀ MƠ HÌNH TYLOXAPOL VÀ MƠ HÌNH HEPG2 1.2.1 Mơ hình Tyloxapol 1.2.2 Mơ hình HepG2 .11 1.3 CURCUMIN 12 1.3.1 Nguồn gốc: .12 1.3.2 Tính chất: 13 1.3.3 Dược động học 13 1.3.4 Tác dụng dược lý .15 1.4 TIỂU PHÂN NANO VÀ NANO CURCUMIN 18 1.4.1 Khái niệm .18 1.4.2 Tương quan kích thước tiểu phân nano số thành phần sinh học thể 18 1.4.3 Đặc điểm hoạt chất nang hóa tiểu phân nano 18 1.4.4 Nano curcumin .19 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 20 2.1.1 Đối tượng thử nghiệm: 20 2.1.2 Hóa chất thuốc thử nghiệm: 20 iv Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu: 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Quy trình thu hỗn dịch enzym từ gan chuột nhắt xác định hoạt tính enzym hỗn dịch thu 23 2.2.2 Đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase curcumin nano curcumin dịch đồng thể: .26 2.2.3 Đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase ức chế tổng hợp cholesterol nội bào curcumin nano curcumin dòng tế bào HepG2 28 2.2.4 Đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase tác dụng hạ lipid máu curcumin nano curcumin chuột nhắt trắng 31 2.2.5 Phân tích kết xử lý số liệu thống kê .32 Chương – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Tác động ức chế in vitro HMGR curcumin nano curcumin dịch đồng thể enzym gan .33 3.2 Tác động ức chế curcumin nano curcumin tế bào HepG2 37 3.2.1 Đánh giá tỉ lệ tế bào sống test MTT .37 3.2.2 Tác động ức chế tổng hợp lipid curcumin, nano curcumin tế bào HepG2 38 3.2.3 Tác động ức chế HMGR tế bào HepG2 39 3.3 Tác động ức chế in vivo lipid máu HMGR curcumin nano curcumin chuột nhắt trắng 40 3.3.1 Ảnh hưởng tyloxapol lipid máu HMGR 40 3.3.2 Tác động ức chế in vivo curcumin nano curcumin curcumin 41 3.4.1 Tác động ức chế in vitro HMGR curcumin nano curcumin dịch đồng thể enzym gan 44 3.4.2 Tác động ức chế curcumin nano curcumin tế bào HepG2 .45 3.4.3 Tác động ức chế in vivo curcumin nano curcumin .46 Chương – KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 4.1 KẾT LUẬN 48 v Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 4.2 KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 vi Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Liệu pháp statin cường độ cao, vừa thấp Bảng 1.2 Mốt số nghiên cứu sử dụng mơ hình gây tăng lipid máu cấp tính in vivo tyloxapol 10 Bảng 1.3 Một số nghiên cứu sử dụng acid béo mơ hình in vitro .12 tế bào HepG2 12 Bảng 2.1 Thành phần định lượng protein toàn phần phương pháp Biuret .24 Bảng 2.2 Thể tích chất cuvet 25 Bảng 2.3 Hỗn hợp phản ứng xác định hoạt tính HMGR 27 Bảng 2.4 Thành phần chất phản ứng xác định hoạt tính HMGR 32 lô chuột 32 Bảng 3.1 Tác động ức chế in vitro HMGR atorvastatin 33 Bảng 3.2 Tác động ức chế in vitro HMGR curcumin nano curcumin 35 Bảng 3.3 Tỉ lệ tế bào sống tế bào HepG2 tiếp xúc với atorvastatin, curcumin nano curcumin nồng độ khác 37 Bảng 3.4 Ảnh hưởng curcumin, nano curcumin lên nồng độ lipid nội bào tế bào HepG2 môi trường ủ acid béo 1mM sau 24 38 Bảng 3.5 Nồng độ lipid máu lô 40 Bảng 3.6 Tác động curcumin nano curcumin lipid máu .41 Bảng 3.7 Tác động curcumin nano curcumin HMGR 42 vii Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Bột nghệ cấu trúc hố học curcumin 13 Hình 2.1 Sơ đồ tóm tắt thí nghiệm tiến hành nghiên cứu 22 Hình 3.1 % ức chế HMGR in vitro atorvastatin .34 Hình 3.2 Đường hồi quy tuyến tính liên quan % ức chế HMGR 34 log nồng độ atorvastatin .34 Hình 3.3 Đường hồi quy tuyến tính liên quan % ức chế HMGR 36 log nồng độ curcumin 36 Hình 3.4 Đường hồi quy tuyến tính liên quan % ức chế HMGR 36 log nồng độ nano curcumin 36 Hình 3.5 Tác động curcumin nano curcumin lên nồng độ lipid nội bào 39 tế bào HepG2 39 Hình 3.6 Tỉ lệ ức chế hoạt tính HMGR curcumin nano curcumin 43 viii ... MÁU IN VITRO VÀ IN VIVO CỦA CURCUMIN VÀ NANO CURCUMIN Học viên: Trần Hải Minh Hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Mạnh Hùng Mục tiêu Khảo sát tác động hạ lipid máu in vitro in vivo curcumin nano curcumin. .. cứu sâu nano curcumin với nội dung sau: - Đánh giá tác động hạ lipid máu khả ức chế in vivo HMGR nano curcumin mơ hình gây tăng lipid bán cấp - Đánh giá tác động hạ lipid máu khả ức chế in vivo. .. Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN HẢI MINH ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG HẠ LIPID MÁU IN VITRO VÀ IN VIVO CỦA CURCUMIN VÀ NANO CURCUMIN Ngành Dược