Khảo sát thành phần hóa học phân đoạn 2 cao hexane của lá mắm đen avicennia officinalis l

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN CAO HEXANE CỦA LÁ MẮM ĐEN AVICENNIA OFFICINALIS L Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Khoa Khoa học Chủ trì nhiệm vụ: TS NGUYỄN THỊ HỒI THU Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN CAO HEXANE CỦA LÁ MẮM ĐEN AVICENNIA OFFICINALIS L (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 28/5/2019) Cơ quan chủ quản (ký tên đóng dấu) Chủ trì nhiệm vụ (ký tên) Nguyễn Thị Hồi Thu Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI Nguyễn Thị Hồi Thu Bộ mơn Hóa – Khoa Khoa học Ca Thị Thúy Bộ mơn Hóa – Khoa Khoa học Nguyễn Lê Vũ Bộ mơn Hóa – Khoa Khoa học CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP HCM, ngày tháng năm 2019 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: Khảo sát thành phần hóa học phân đoạn cao hexane Mắm đen (Avicennia officinalis L.) Thuộc lĩnh vực (tên lĩnh vực): Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Nguyễn Thị Hoài Thu Ngày, tháng, năm sinh: 24/07/1985 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến sỹ Chức danh khoa học: Chức vụ Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: Mobile: 0904203342 Fax: E-mail: hoaithudhyd@gmail.com Tên tổ chức công tác: Đại học Y Dược TP HCM Địa tổ chức: 217, Hồng Bàng, Quận 5, TP HCM Địa nhà riêng: B1-13-10, Chung cư Lê Thành, 113/89, An Dương Vương, An Lạc, Bình Tân, TP HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ(1): Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Khoa Khoa học bản, ĐH Y Dược TP HCM Điện thoại: Fax: E-mail: Website: Địa chỉ: 217, Hồng Bàng, Quận 5, TP HCM Tên quan chủ quản đề tài: Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng năm 2018 đến tháng năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng năm 2018.đến tháng năm 2019 Khoa Khoa học bản, ĐH Y Dược TP HCM - Được gia hạn (nếu có): Từ tháng… năm… đến tháng… năm… Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 000 000 đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học nhà trường: 000 000 đ + Kinh phí từ nguồn khác: đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT … Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 5/2019 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 5/2019 Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Theo kế hoạch Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác Tổng NSKH Nguồn khác 5 5 5 5 - Lý thay đổi (nếu có): Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng q 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân Tên cá nhân đăng ký theo tham gia Thuyết minh thực Nguyễn Thị Nguyễn Thị Hoài Thu Hoài Thu Trần Hoàng Ca Thị Thúy Ca Thị Thúy Nguyễn Lê Vũ Nguyễn Lê Vũ Sản phẩm Ghi chủ yếu đạt chú* Thu hái mẫu cây, điều Mẫu chế cao, cô lập hợp Các loại cao chất, xác định cấu Cấu trúc hóa trúc hóa học, viết báo, học viết báo cáo Bài báo, Báo cáo Cô lập hợp chất, xác Hợp chất định cấu trúc hóa học tinh khiết Cơ lập hợp chất, xác Hợp chất định cấu trúc hóa học tinh khiết Cô lập hợp chất, xác Hợp chất định cấu trúc hóa học tinh khiết Nội dung tham gia Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, TT địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 16 đề cương, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thu hái Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Thực tế Theo kế đạt hoạch 6/2018- 6/20187/2018 7/2018 Người, quan thực Nguyễn Thị Hoài Thu 7/20188/2018 Điều chế cao 7/20188/2018 Cô lập hợp chất 8/20181/2019 8/20181/2019 Giải đoán cấu trúc hợp chất 1/20194/2019 1/20194/2019 Tổng hợp kết quả, viết báo, viết báo cáo 4/20195/2019 4/20195/2019 Nguyễn Thị Hoài Thu Nguyễn Thị Hoài Thu Trần Hoàng Ca Thị Thúy Nguyễn Lê Vũ Nguyễn Thị Hoài Thu Trần Hoàng Ca Thị Thúy Nguyễn Lê Vũ Nguyễn Thị Hoài Thu III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Theo kế hoạch Số lượng Thực tế đạt b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm A new iridoid from leaves of Avicennia officinalis L Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) Vietnam Journal of Chemistry, 57(2), 189-194 d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) Tiến sỹ đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) Kết sơ 2 Đánh giá hiệu đề tài mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: Kết hợp chất cô lập sử dụng làm chất đối chiếu Hơn nữa, kết nghiên cứu tiền đề cho nghiên cứu hoạt tính sinh học Mắm đen b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra đề tài: Số TT I II Nội dung Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Báo cáo tiến độ Lần … Báo cáo giám định kỳ Lần … Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) MỤC LỤC Trang Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng, hình vẽ, đồ thị ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 10 2.2 Hóa chất thiết bị 10 2.3 Phương pháp nghiên cứu tiến trình thí nghiệm 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 13 3.1 Giải đoán cấu trúc hợp chất velutin (H2.1) 13 3.2 Giải đoán cấu trúc hợp chất α-tocopherol (H2.2) 14 3.3 Giải đoán cấu trúc hợp chất hỗn hợp 6-methoxynaphtho[2,3-b]-furan4,9-quinone(H2.3.a) 7-methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9-quinone (H2.3.b)17 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 20 TÀI LIỆU THAM KHẢO 21 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ nguyên (One/Two Dimensional– Nuclear Magnetic Resonance) Proton Nuclear Magnetic Resonance Carbon Nuclear Magnetic Resonance Ý nghĩa Phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều/ chiều brd Broad doublet Mũi đôi rộng brs Broad singlet Mũi đơn rộng C Chloroform Dung môi d Doublet Mũi đôi dd Doublet–doublet Mũi đôi–đôi 1D/2D–NMR H–NMR 13 C–NMR Dimethyl sulfoxide DMSO Ethyl acetate EA Dung môi Heteronuclear Multiple Bond Coherence Heteronuclear Single Quantum Correlation HMBC HSQC H n–Hexane Dung môi m Multiplet Mũi đa Mass Spectrometer Phổ khối Methanol Dung môi Nuclear Magnetic Resonance spectrocopy Part per million Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Phần triệu Singlet Mũi đơn MS MeOH, Me NMR ppm s SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng t Triplet Mũi ba 26 56.07 56.03 121.39 120.53 115.82 110.29 104.71 103.38 98.00 92.72 165.15 164.03 161.18 157.28 150.93 148.09 181.98 6.55 2.02 0.97 0.97 2.02 1.00 0.97 0.97 2.02 2.02 6.358 6.354 6.944 6.927 6.781 6.777 7.595 7.591 7.575 3.895 3.865 7.595 7.591 7.575 6.944 6.927 6.781 6.777 6.358 6.354 12.951 Phụ lục 1.1 Phổ 1H-NMR hợp chất velutin (H2.1) DMSO-d6 Phụ lục 1.2 Phổ 13C-NMR hợp chất velutin (H2.1) DMSO-d6 f1 (ppm) f1 (ppm) Phụ lục 1.3 Phổ HSQC hợp chất velutin (H2.1) DMSO-d6 Phụ lục 1.4 Phổ HMBC hợp chất velutin (H2.1) DMSO-d6 27 40 38 170 36 160 34 32 150 140 30 28 f1 (ppm) 130 120 24.96 24.60 23.96 22.86 22.77 21.20 19.90 19.81 28.14 32.96 32.87 31.74 40.00 39.54 37.65 37.62 37.59 37.45 26 110 24 22 100 90 f1 (ppm) 28 80 12.35 11.91 11.41 74.68 122.78 121.18 118.64 117.52 145.73 144.70 70 60 50 40 30 12.63 28.26 2.09 9.00 1.88 0.85 12.63 0.884 0.871 0.859 0.855 0.846 2.166 2.117 1.549 1.293 1.285 1.236 1.154 0.884 0.871 0.859 0.855 0.846 2.624 2.610 2.597 4.177 Phụ lục 2.1 Phổ 1H-NMR hợp chất α-tocopherol (H2.2) CDCl3 20 10 Phụ lục 2.2 Phổ 13C-NMR hợp chất α-tocopherol (H2.2) CDCl3 650 600 550 500 450 400 20 350 300 250 200 150 100 50 f1 (ppm) f1 (ppm) Phụ lục 2.3 Phổ HSQC hợp chất α-tocopherol (H2.2) CDCl3 Phụ lục 2.4 Phổ HMBC hợp chất α-tocopherol (H2.2) CDCl3 29 30 125.73 126.57 130.84 130.11 129.48 129.40 134.71 135.57 56.00 119.59 119.53 111.46 111.10 108.79 108.54 180.54 179.79 173.55 173.10 164.32 164.30 153.17 152.70 148.63 148.14 3.12 1.00 1.06 1.00 1.04 0.97 0.97 1.04 1.04 1.00 1.06 1.00 6.981 6.977 6.975 6.971 7.207 7.201 7.199 7.193 7.190 7.184 7.181 7.176 8.170 8.153 8.141 8.124 7.753 7.749 7.733 7.729 7.677 7.671 7.649 7.644 7.201 7.199 7.193 7.190 7.184 7.181 3.967 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR hợp chất (H2.3a) (H2.3b) CDCl3 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR hợp chất (H2.3a) (H2.3b) CDCl3 f1 (ppm) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh f1 (ppm) Phụ lục 3.3 Phổ HSQC hợp chất (H2.3a) (H2.3b) CDCl3 Phụ lục 3.4 Phổ HMBC hợp chất (H2.3a) (H2.3b) CDCl3 31 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Cite this paper: Vietnam J Chem., 2019, 57(2), 189-194 Article DOI: 10.1002/vjch.201960021 A new iridoid from leaves of Avicennia officinalis L Nguyen Thi Hoai Thu1, Tran Hoang1, Nguyen Hoang Tien Vinh2, Nguyen Kim Phi Phung3* Faculty of Basic Sciences, University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City, Viet Nam Faculty of Environmental Science, Saigon University, Ho Chi Minh City, Viet Nam Faculty of Chemistry, VNUHCM – University of Science, Viet Nam Received August 9, 2018; Accepted for publication December 12, 2018 Abstract Avicennia officinalis L., Avicenniaceae,is a widespread plant in mangrove forests in Vietnam, Cambodia, Thailand, Indonesia,… A officinalis’s chemical compositions remain mostly unknown Therefore, we now report on the structural elucidation of six compounds isolated from this plant growing in Can Gio mangrove forest in Ho Chi Minh City by using a variety of chromatographic techniques The structures of these compounds were elucidated by NMR spectroscopy analysis as well as compared with data in the literature They areaviridoid(1), (1S,5R,8S,9R)-2'-(Ecoumaroyl)mussaenosidic acid (2), velutin (3), α-tocopherol (4), and a mixture of 6-methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9quinone (5) and 7-methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9-quinone (6) To the best of our knowledge, (1) is a new compound while (2), (4), (5) and (6) are obtained from Avicennia genus for the first time Further studies on this species are in progress Keywords Avicennia officinalis, Avicenniaceae, iridoid, flavonoid, terpenoid, quinone INTRODUCTION 4,9-quinone(5) and 7-methoxynaphtho[2,3-b]-furan4,9-quinone (6) (Fig 1) Avicennia officinalis L (Avicenniaceae) wildly grows in many mangrove forests in Viet Nam The bark, leaves, and fruits of A officinalis have been traditionally used as an aphrodisiac, diuretic, hepatitis, and leprosy treatment.Error! Reference source not found A methanol leaf extract of A officinalis showed significantly acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibitions with the IC50 values of 1.24 and 0.91 mg/mL, respectively, compared to donepezil with IC50 values of 3.96 and 8.87 mg/mL, respectively.[1] A.officinalis showed anti–HIV property by inhibiting the virus by two different mechanisms including interference with the gp120/CD4 interaction and inhibition of viral reverse transcriptase.[2] A number of compounds have been isolated from leaves and roots of A.officinalis.[4-7] Previously, we isolated some flavonoids, steroids, triterpenoids and a iridoid from A officinalis growing in Can Gio mangrove forest in Ho Chi Minh City.[8,9] In this paper, we display the structural elucidation of six compounds isolated from this species, including aviridoid(1), (1S,5R,8S,9R)-2'-(E-coumaroyl) mussaenosidic acid (2), velutin (3), α-tocopherol (4), and a mixture of 6-methoxynaphtho[2,3-b]-furan189 MATERIALS AND METHODS 2.1 General experimental procedures The NMR spectra were measured on a Bruker Avance III spectrometer, at 500 MHz for 1H NMR and 125 MHz for 13C NMR The HR–ESI–MS were recorded on a HR–ESI–MS MicroOTOF–Q mass spectrometer The APCI–MS were measured on a Varian 320–MS TQ Mass spectrometer The optical rotation values were measured on a Kruss digital polarimeter 2.2 Plant material Leaves of Avicennia officinalis were collected at Can Gio mangrove forest in Ho Chi Minh city, Vietnam in March 2012 The scientific name of the plant was authenticated by the botanist PhD Vo Van Chi A voucher specimen (No US–B008) was deposited in the herbarium of the Department of Organic Chemistry, University of Science, Vietnam National University – Ho Chi Minh City .m Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Vietnam Journal of Chemistry Nguyen Kim Phi Phung et al 2.3 Extraction and isolation reversed–phase RP–18 silica gel CC and eluted with water–methanol (stepwise, 20:1, 9:1, 4:1, 1:1) to obtain (25.0 mg) and (8.0 mg) Aviridoid (1): 1H– and 13C–NMR data see table [ ]25 D –129.6 (c 0.69, CH3OH) (1S,5R,8S,9R)-2'-(E-Coumaroyl)mussaenosidic acid (2): 1H– and 13C–NMR data see table [ ]25 D – 82.5 (c 0.43, CH3OH) Velutin (3): 1H– and 13C–NMR data see table α-Tocopherol (4): 1H–NMR (CDCl3), δH, (J in Hz): 1.77 (m, H–3), 2.61 (t, 7.0, H–4), 2.12 (s, H–5a, H–8b), 2.17 (s, H–7a), 1.24 (s, H–2a), 1.54 (m, H– 1’), 0.85 (d, 6.5, H–4’a), 0.86 (d, 6.5, H–8’a), 0.88 (d, 6.5, H–12’a, H–13’), 4.18 (s, 6–OH) 13C–NMR data see table 6-Methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9-quinone (5): H–NMR (CDCl3), δH, (J in Hz): 7.75 (d, 2.0, H-2), 6.98 (d, 2.0, H-3), 7.67 (d, 3.0, H-5), 7.20 (dd, 8.5, 3.0, H-7), 8.13 (d, 8.5, H-8), 3.97 (s, 6-OCH3) 13C– NMR(CDCl3), δC: 148.8 (C-2), 108.9 (C-3), 131.0 (C-3a), 173.7 (C-4), 134.8 (C-4a), 111.2 (C-5), 164.5 (C-6), 119.7 (C-7), 129.6 (C-8), 126.7 (C-8a), 179.9 (C-9), 152.8 (C-9a), 56.1 (6-OMe) 7-Methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9-quinone (6): H–NMR (CDCl3), δH, (J in Hz): 7.73 (d, 2.0, H-2), 6.97 (d,2.0, H-3), 8.15 (d, 8.5, H-5), 7.19 (dd,8.5, 2.5, H-6), 7.65 (d, 2.5, H-8), 3.97 (s, 7-OMe) 13C– NMR(CDCl3), δC: 148.3 (C-2), 108.7 (C-3), 130.2 (C-3a), 173.2 (C-4), 125.9 (C-4a), 129.5 (C-5), 119.7 (C-6), 164.5 (C-7), 111.6 (C-8), 135.7 (C-8a), 180.7 (C-9), 153.3 (C-9a), 56.1 (7-OMe) The air–dried powder of leaves (11,205.0 g) was macerated with methanol (50 L x 3) at room temperature for 48 hours and after filtration the methanolic solution was concentrated at reduced pressure to yield a residue of 1,317 g This crude extract was suspended in water with 10 % of methanol, and was partitioned first with n-hexane and then with ethyl acetate After evaporation at reduced pressure, three types of extracts were obtained: n–hexane (405 g), ethyl acetate (350 g) and remaining aqueous residue (512 g) The nhexane residue was subjected to silica gel column chromatography (CC) (column: 120 x cm) eluting with a solvent system of n–hexane:ethyl acetate (stepwise 9:1, 4:1, 1:1, 0:1) and then ethyl acetate:methanol (4:1, 1:1, 0:1) to give six fractions (H1–H6) Fraction H2 (14 g) was subjected to silica gel column chromatography, and eluted with a solvent system of n-hexane:chloroform (stepwise 98:2, 95:5, 9:1, 4:1, 1:1, 0:1) to give (25.1 mg), (10.7 mg), and a mixture of and (21.4 mg) The ethyl acetate residue was subjected to silica gel column chromatography (CC) (column: 120 x cm), eluted with a solvent system of n-hexane–ethyl acetate (1:4, 0:1), and then ethyl acetate–methanol (stepwise, 9:1, 4:1, 1:1, 0:1) to give fourteen fractions (A1–A14) Fraction A12 (15.5 g) was subjected to a silica gel CC and eluted with ethyl acetate–methanol (stepwise, 9:1, 4:1, 1:1, 0:1) to give five subfractions (A12.1–A12.5) The subfraction A12.2 (6.2 g) was further separated by Figure 1: COSY, HMBC and NOESY correlations of isolated compounds RESULTS AND DISCUSSION The compound was obtained as a colorless wax The ESI-HR-MS showed a pseudo molecular ion peak at m/z 575.1745, calcd for [C26H32O13+Na]+, y of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 190 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh A new iridoid from leaves of… Vietnam Journal of Chemistry 575.1741 The analysis of 1H– and 13C–NMR spectra of revealed that was an iridoid glucoside with two acetal proton signals at δH5.48 (1H, d, 2.5 Hz, H–1) and 4.91 (d, 8.0 Hz, H–1') They showed HSQC correlations with carbons at δC 95.1 (C–1) and 97.8 (C–1'), respectively By COSY experiment, signals in the zone from δH 3.41-4.91 were assigned for the β–D–glucose moiety In the low magnetic field, the 1H–NMR displayed signals of a caffeoyl unit, comprising of two doublet proton signals at δH 7.57 (d, 16.0 Hz, H–7'') and 6.31 (d, 16.0 Hz, H–8'') of a trans–double bond; three proton signals at δH7.17 (1H, d, 2.0 Hz, H-2''), 6.82 (1H, d, 8.0 Hz, H-5'') and 7.05 (1H, dd, 8.0, 2.0 Hz, H-6'') of a 1,3,4–trisubtituted benzene ring It corresponded to the observation of a carbonyl carbon signal at δC 168.2 (C–9'') of the caffeoyl moiety The complete assignments of the 1H– and 13 C– data of β–D–glucose and coumaroyl units were based on COSY, HSQC and HMBC correlations Table 1: NMR data of compounds 1-4 No 10 11 1' 2' 3' 4' 5' 6' 1m δH, J (Hz) 5.48 d (2.5) 7.29 s 2.99 m 2.20 m 1.45 m 1.68 m 1.62 m δc 95.1 151.2 114.0 31.3 30.2 41.3 79.9 2.24 dd (9.5, 2.5) 52.5 1.27 s 24.3 170.2 4.91 d (8.0) 97.8 4.81 dd (9.5, 8.0) 74.7 3.64 dd, (9.5, 9.0) 75.9 3.41 m 71.7 3.41 m 78.4 3.95 dd (12.0, 1.0) 62.7 3.72 dd (12.0, 5.5) 127.9 7.17 d (2.0) 111.9 150.4 149.0 6.82 d (8.0) 116.4 7.05 dd (8.0, 2.0) 124.1 7.57 d (16.0) 147.1 6.31 d (16.0) 115.3 168.2 1'' 2'' 3'' 4'' 5'' 6'' 7'' 8'' 9'' 7-OMe 3'-OMe 4'-OMe 3.90 s 5-OH Note: m: methanol-d4 2m δH, J (Hz) 5.46 d (3.0) 7.25 s 3.00 m 2.20 m 1.46 m 1.68 m 1.63 m δc 95.1 150.8 114.6 31.6 30.3 3d δH, J (Hz) 6.93 s 6.36 d (2.0) 41.3 80.0 2.24 dd (10.0, 3.0) 52.6 1.27 s 24.4 170.7 4.90 d (8.0) 97.8 4.80 dd (9.5, 8.0) 74.8 3.62 dd (9.5, 9.0) 76.1 3.39 m 71.8 3.39 m 78.5 3.92 dd (12.0, 1.5) 62.8 3.72 dd (12.0, 5.5) 127.4 7.44 d (8.5) 131.3 6.81 d (8.5) 116.8 161.0 6.81 d (8.5) 116.8 7.44 d (8.5) 131.3 7.57 d (16.0) 146.7 6.28 d (16.0) 115.1 168.2 6.78d (2.0) 7.58 brs 6.94 d (8.5) 164.0 103.4 182.0 161.2 4a 4c δc 74.7 31.7 20.9 118.6 117.5 98.0 144.7 165.1 121.2 92.7 157.3 104.7 8a 5a 7a 8b 2a 1' 2' 3' 122.8 145.7 11.4 12.3 11.9 24.0 40.0 21.2 37.7 4' 32.9 δc 121.4 110.3 148.1 150.9 115.8 7.59 dd (8.5, 2.5) 120.5 3.90 s 3.87 s 56.5 56.1 56.0 No 5' 37.5 6' 25.0 7' 37.6 8' 33.0 9' 37.6 24.6 10' 39.6 11' 28.1 12' 22.8* 13' 4'a 19.8# 8'a 19.9# 12'a 22.9* 12.95 s d: dimethylsulfoxide-d6 c: chloroform-d y of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 191 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh The exception of six carbon signals of glucose, nine carbons of caffeoyl parts andone carbon signal of a methoxy group, ten carbon signals left belonged to the iridoid skeleton Among them, there were a acetal carbon as shown in the previous part, a carboxyl carbon at δC 170.2, two olefinic carbon signals at δC 151.2 (O–CH=, C–3) and 114.0 (>C=, C–4) of a double bond at C–3, a methyl carbon at δC24.3 of C–10 as usual, and an oxygenated quaternary carbon signal at δC 79.9 (C–8) The COSY spectrum showed the connections of H–9/H– 5/H–6/H–7 A HMBC correlation of proton H–3 (δH 7.29, s) with carbon signal at δC 170.2 (C–11) indicated the position of the carboxylic acid group at C–11 The HSQC and HMBC experiments supported the iridoid skeleton of The caffeoylmoiety, attached to the iridoid aglycone at C–2', was confirmed via the HMBC correlation of proton H–6 at δH4.81 (1H.dd, 9.5, 8.0 Hz, H-2') with the carbon ester at δC 168.2 (C–9'') The NOESY spectrum of displayed the correlation of H–1/H–9/H–5 and H–9/H–10 Therefore, the protons H–1, H–5, H–9, H–10 were suggested to be on the same side of the ring and on the opposite side with sugar moiety The absolute configuration of the C–1 position in was determined by application of the 13C–NMR glycosylation shift rule of 1,1'–disaccharide which was found to be applicable to the dihemiacetal compounds If an (R)–molecule A combines with an (R)–molecule B (called the R/R–combination) at carbon C–1 and carbon C–1', respectively, to form a dihemiacetal compound, the difference of 13C–NMR chemical shift of C–1 (or C–1') before and after combining (called the glycosylation shift value, Δδ) is small about 1.7 ppm If it is the R/S combination, the glycosylation shift value is large about 6.5-7.8 ppm The rule was successfully applied for determining the absolute configuration of the C–1 position of iridoids.[10,11] The comparison of the 13C– NMR chemical shift of C–1' of compound (δC 97.8) with the anomeric carbon of a free β–D– glucose molecule (δC 98.9)[11] showed the characteristic of the R/R–combination, therefore the absolute configuration of the C–1 position of was determined to be an S configuration From that, the rest chiral carbons of iridoid skeleton were determined as 5R, 8S, 9R Based on all the aforementioned analysis, the structure of was assigned as (1S,5R,8S,9R)-2'-(4'''methylcaffeoyl)mussaenosidic acid was not reported previously and was thus named Aviridoid The NMR data analysis of showed that its structure also possessed the mussaenosidic acid skeleton as However, differed from with the presence of a coumaroyl unit instead of the 4'''methylcaffeoyl moiety This was evidenced by the observation of a series of signals of a coumaroyl moiety, comprising of two doublet proton signals δH 7.57 (1H, d, 16.0 Hz, H–7'') and 6.28 (1H, d, 16.0 Hz, H–8'') of a trans–double bond; two ortho– coupled proton signals at δH 7.44 (2H, d, 8.5 Hz, H– 2''/H–6'') and 6.81 (2H, d, 8.5 Hz, H–3''/H–5'') of a 1,4–disubtituted benzene ring It corresponded to the observation of two carbon signals at δC 131.3 (C– 2''/C–6'') and 116.8 (C–3''/C–5'') appearing as double intensity The COSY, HSQC and HMBC experiments supported the structure of The NOESY spectrum of also displayed the correlation of H–1/H–9/H–5 and H–9/H–10 as in Therefore, the configurations of chiral carbons in iridoid skeleton were assigned as (1S,5R,8S,9R) The ESIHR-MS of showed a pseudo molecular ion peak at m/z 545.1605, calcd for [C25H30O12+Na]+, 545.1635.The good compatibility between its NMR data and those reported in the literature[12] confirmed the structure of to be (1S,5R,8S,9R)-2'-(Ecoumaroyl)mussaenosidic acid The NMR spectra of compound showed signals of a flavonoid skeleton The 1H–NMR spectrum of displayed a downfield signal at δH 12.95 (1H, s) indicating the presence of a chelated hydroxyl group at C–5 position Two meta–coupled doublet proton signals at H 6.36 (1H, d, 2.0 Hz, H–6) and 6.78 (1H, d, 2.0 Hz, H–8) were assigned to ring A of 5,7– dihydroxyflavonoid An ABX system at δH 7.59 (dd, 8.5, 2.5 Hz, H–6'), 7.58 (brs, H–2') and 6.94 (d, 8.5 Hz, H–5') was the characteristic of a 1,3,4– trisubstituted benzene ring A singlet proton signal at H 6.93 was assigned to H–3 Additionally, 1H– NMR spectrum of possessed two methoxy proton signals at H 3.90 (3H, s, –OCH3) and 3.87 (3H, s, 3'–OCH3) It corresponded to the 13C–NMR spectrum revealing of 17 carbon signals, including two signals of two methoxy groups at C 56.0 and 56.1 The HSQC and HMBC experiments supported the structure of TheAPCI-MS showed apseudomolecular ion peak at m/z315.20 [M+H]+ Based on the spectral features and published data,[13] the chemical structure of was identified as velutin The 1H–NMR spectrum of showed singlet proton signals at δH 2.17 (3H, s, H-7a) and 2.12 (6H, s, H-5a, H-8b) of three methyl groups attached to sp2 carbon, one singlet methyl proton at δH 1.24 (3H, s, y of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de192 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh A new iridoid from leaves of… Vietnam Journal of Chemistry H-2a) At higher magnetic field, it displayed signals at δH 0.88 (6H, d, 6.5, H-12’a, H-13’), 0.86 (3H, d, 6.5, H-8’a), and 0.85 (3H, d, 6.5, H-4’a) of four other methyl groups The rest proton signals belonged to methylene and methine groups The 13 C–NMR spectrum revealed signals of 29 carbons Among them, there were two oxygenated quaternary carbons at δC 144.7 (C–6) and 145.7 (C–8a) and four quaternary carbons resonated in the zone from 117.5 to 122.8 ppm These suggested the presence of a hexasubstituted benzene ring The HMBC spectrum displayed the cross-peaks of methyl protons at δH 2.17 and 2.12, of methylene proton at 2.61 (2H, t, 7.0 Hz, H-4), and of hydroxyl proton at δH4.18 (1H, s, -OH) with aromatic carbons Therefore, all substitutions of the benzene ring were determined The rest HSQC and HMBC of supported its structure TheAPCI-MS showed a pseudomolecular ion peak at m/z431.47 [M+H]+ The NMR spectral data of compound agreed with its literature data,[14] therefore compound was identified as α– tocopherol The 1H– and 13C–NMR spectra of and showed signals in pairs These suggested the presence of a mixture of two isomers The 1H–NMR spectrum displayed five pairs of proton signals from 7.0 to 8.5 ppm Among them, two doublet proton signals at H 7.75 (1H, d, 2.0 Hz, H–2) and 6.98 (1H, d, 2.0 Hz, H–3) were assigned to a double bond of penta-ring An ABX system at δH8.13 (1H, d, 8.5 Hz, H–8), 7.67 (1H, d, 3.0 Hz, H–5) and 7.20 (1H, dd, 8.5, 3.0 Hz, H–7) was the characteristic of a 1,3,4–trisubstituted benzene ring of an naphthoquinon skeleton Moreover, the proton spectrum also showed signal of a methoxy group at δH 3.97 This corresponded to the observation of thirteen pairs of carbon signals in the 13C-NMR spectrum Exception of a methoxy carbon signal at δC 56.1, all others resonated in the zone from 100 to 180 ppm, including two pairs of conjugated carbonyl carbon signals at around δC 173 and 180 of C-4 and C-9 in naphthoquinon skeleton, three pairs of oxygenated carbon signals at δC 164, 153 and 148 The HSQC and HMBC of and supported their structures The APCI-MS showed a pseudomolecular ion peak at m/z 229.08 [M+H]+ Finally, the mixture of and was established as 6methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9-quinone and 7methoxynaphtho[2,3-b]-furan-4,9-quinoneby comparison of its NMR data with the ones in the literature.[15] REFERENCES W M Bandaranayake Bioactivities, bioactive compounds and chemicalconstituents of mangrove plants, Wetl Ecol Manag., 2002, 10, 421-452 N Suganthy, S K Pandian, K P Devi Cholinesterase inhibitory effects of Rhizophora lamarckii, Avicennia officinalis, Sesuvium portulacastrum and Suaeda monica: Mangroves inhabiting an Indian coastal area (Vellar Estuary), J Enzyme Inhib Med Chem., 2009, 24(3), 702-707 A A Rege, R Y Ambaye, R A Deshmukh In-vitro testing of anti–HIV activity of some medicinal plants, Indian J Nat Prod Resour., 2010, 1(2), 193-199 Ghosh, S Misra, A K Dutta, A Choudhury Pentacyclic triterpenoids and sterols from seven species of mangrove, Phytochemistry, 1985, 24, 1725-1727 G König, H Rimpler, D Hunkler Iridoid glucosides in Avicennia officinalis, Phytochemistry, 1987, 26(2), 423-427 M Sharma H S Garg Iridoid glycosides from Avicennia officinalis, Indian J Chem., Sect B, 1996, 35, 459-462 Subrahmanyam, S R Kumar, G D Reddy Bioactive diterpenes from the mangrove Avicennia officinalis L., Indian J Chem., Sect B, 2006, 45, 2556-2557 Nguyen T H T., Lam P K., Nguyen H T V., Thai H H., Pham N K T., Nguyen K P P Chemical constituents from leaves of Avicennia officinalis L., Vietnam J Chem., 2017, 55(4E23), 323-326 Nguyen H T V., Tran H., Nguyen K P P., Nguyen T H T Chemical constituents of the n-hexane extract of leaves of Avicennia officinalis L., Vietnam J Chem., 2018, 56(3E12), 331-335 10 X Haihui, M Toshio, M Hisashi, N Seikou, M Osamu, Y Masayuki Monoterpene constituents from Cistanche tubulosa - Chemical structures of Kankanosides A–E and Kankanol, Chem Pharm Bull., 2006, 54(5), 669-675 11 M Hisashi, S Hiroshi, U Toshiaki, U Tomohiko, Y Johji, Y Masayuki Chemical constituents from the leaves of Hydrangea macrophylla var thunbergii (III): absolute stereostructures of hydramacrosides A and B, seco–iridoid glucoside complexes with inhibitory activity on histamine release, Chem Pharm Bull., 1999, 47(12), 1753-1758 12 M Fauvel, C Moulis, M Bon, I Fourasté A new iridoid glucoside from African Avicennia germinans, Nat Prod Lett., 1997, 10(2), 139-142 .y of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 193 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Vietnam Journal of Chemistry 13 K Peng, L MeiWen, J Wu, F DaiHao Flavone from the stem of Aquilaria sinensis, J Trop Subtrop Bot., 2010, 18(1), 97-100 14 M Estork, D F Gusmão, M L Paciencia, I E Díaz, A D Varella, R N Younes, L F Reis, E F Montero, M M Bernardi, I B Suffredini First chemical evaluation and toxicity of Casinga–cheirosa Nguyen Kim Phi Phung et al to Balb–c male mice, Molecules, 2014, 19(4), 39733987 15 H S Santos, S M Costa, O D Pessoa, M O Moraes, C Pessoa, S Fortier, E R Silveira, T L Lemos Cytotoxic naphthoquinones from roots of Lippia microphylla, Z Naturforsch C., 2003, 58c, 517-520 Corresponding author: Nguyen Kim Phi Phung Department of Chemistry, University of Science Vietnam National University – HCM City 227, Nguyen Van Cu Street, District 5, Ho Chi Minh City, Viet Nam E-mail: kimphiphung@yahoo.fr Telephone: +84- 776966660 .y of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 194 ... DMSO-d6 27 40 38 170 36 160 34 32 150 140 30 28 f1 (ppm) 130 120 24 .96 24 .60 23 .96 22 .86 22 .77 21 .20 19.90 19.81 28 .14 32. 96 32. 87 31.74 40.00 39.54 37.65 37. 62 37.59 37.45 26 110 24 22 100 90... 0.846 2. 624 2. 610 2. 597 4.177 Phụ l? ??c 2. 1 Phổ 1H-NMR hợp chất α-tocopherol (H2 .2) CDCl3 20 10 Phụ l? ??c 2. 2 Phổ 13C-NMR hợp chất α-tocopherol (H2 .2) CDCl3 650 600 550 500 450 400 20 350 300 25 0 20 0... cao nước cịn l? ??i (5 12 g) Hình L? ? Mắm đen (Avicennia officinalis L. ) 2. 3.3 Cô l? ??p hợp chất từ Mắm đen Từ cao hexane (405 g) tiến hành tiến hành sắc kí cột silica gel pha thường giải ly hệ dung môi