BG sinh san gia suc DHNL Hue

McMilan (1998) đã thu thập các trường hợp dựa trên phân tích thống kê các bộ số liệu nơi cấy truyền phôi được sử dụng để tạo song thai, có những sự khác biệt lớn trong số các con nhậ[r]

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUẾ -

Bài giảng

(Dùng cho sinh viên ngành chăn nuôi – thú y)

Giảng viên: ThS PHAN VŨ HẢI

Bộ môn Thú y học Lâm sàng, Khoa Chăn nuôi thú y E-mail: vu.phan@graduates.jcu.edu.au

HUẾ - 2006

HỌC PHẦN I

SINH LÝ SINH SẢN GIA SÚC - - -

Yêu cầu chung: Nắm vững trình sinh lý sinh sản bản, làm

tảng cho kiến thức ứng dụng điều khiển sinh sản vật nuôi

CHƯƠNG I.

SINH LÝ SINH DỤC ĐỰC VÀ CÁI

Mục đích: Giới thiệu cấu tạo giải phẫu chức máy sinh dục đực

và cái, trình hình thành phát triển trứng, trình thụ tinh, làm tổ hợp tử mang thai gia súc

Thời lượng giảng dạy: tiết I SINH LÝ SINH SẢN GIA SÚC ĐỰC

1 Cấu tạo chức máy sinh dục đực

Hình Cấu tạo quan sinh dục đực [3]

Chú thích: a Bầu tinh

bu Tuyến Cowper cap Đầu phụ dịch hồn

caud Đi phụ dịch hồn

dd Ống dẫn tinh es Qui đầu pg Tuyến tiền liệt r Trực tràng s; bìu

t Tinh hồn up Ống niệu vg Tuyến tinh nang

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

1.1 Dịch hồn cịn gọi tinh hoàn

Cấu tạo: Bên lớp giác mạc riêng gồm lớp sợi vững phúc mạc

kéo đến hình thành Bên màng trắng (tổ chức liên kết mỏng), từ màng trắng có vách sâu vào chia dịch hồn thành nhiều múi, múi chứa nhiều ống sinh tinh uốn khúc bên có tinh trùng hình thành Trong ống sinh tinh gia súc trưởng thành ln có dạng tinh trùng phân chia phát triển từ tinh nguyên bào đến tinh bào, rối đến tiền tinh trùng Ngoài ra, đáy ống sinh tinh cịn có tế bào đáy (cịn gọi tế bào đỡ, tế bào Sertoli) nơi biến thái tinh trùng từ tiền tinh trùng thành tinh trùng non Chính tế bào Sertoli cung cấp dinh dưỡng cho tinh trùng phát dục Quanh ống sinh tinh có tế bào kẽ Leidig (tiết hormone sinh dục đực), nhu mô mạch máu nhỏ Các ống sinh tinh cong tiểu thùy hướng phía trung tâm, chuyển thành ống thẳng, chúng liên hệ tạo thành lưới tinh

Hình dáng kích thước dịch hồn tiêu chuẩn để đánh giá phẩm chất giống

* Dịch hồn có chức năng:

- Ngoại tiết (quan trọng nhất) sản sinh tế bào sinh dục đực - Nội tiết: sản xuất kích tố sinh dục đực (androgen)

1.2 Phụ dịch hồn

Cịn gọi dịch hồn phụ hay mào tinh Cơ quan gắn bờ bờ sau dịch hoàn Tinh trùng sản sinh ống sinh tinh tinh hoàn đưa phụ dịch hoàn Ở dịch hoàn phụ, tinh trùng phải di chuyển quãng đường dài (dê, bò 60 m, ngựa 70 m, lợn 100 m)

Hình Cấu tạo dịch hồn [2]

*Chức năng:

- Là kho để chứa tinh trùng giúp tinh trùng sống lâu thể Trong phụ dịch hồn thường có khoảng 200 tỉ tinh trùng 70% nằm phần phụ hồn Ở độ pH toan (6.2 – 6.8) nhiệt độ thấp

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

hơn làm cho tinh trùng hoạt động sống lâu Ngoài vách dịch hồn phụ có nhiều mạch quản lâm ba quản nguồn cung cấp lượng cho tinh trùng Nếu đến giai đoạn mà đực khơng sử dụng tế bào lưu giữ đây, già cỗi, khơng sử dụng bị hấp phụ làm tiêu biến sau 40 – 60 ngày

- Là nơi mà tinh trùng thành thục trước xuất tinh, đặc biệt q trình vận chuyển phụ dịch hồn tinh trùng hoàn thiện màng bán thấm lipoproteid

1.3 Ống dẫn tinh

Phần kéo dài đuôi phụ dịch hoàn, qua ống bẹn vào xoang bụng tới bầu tinh (là nơi phình to nằm cuối ống dẫn tinh, nằm bàng quang) Ống dẫn tinh có chức pha loãng chất tiết đường sinh dục với tinh trùng trước phóng ngồi từ bầu tinh

1.4 Dương vật

Dương vật lồi có vú chủ yếu gồm thể hang, thỏi xốp có cấu tạo từ mơ liên kết vững chắc, có lẫn sợi đàn hồi tế bào trơn Tác dụng dương vật tiết nước tiểu, phương tiện giao phối phóng tinh dịch

1.5 Các tuyến sinh dục phụ

Các tuyến sinh dục phụ bao gồm: tuyến tiền liệt, tuyến cầu niệu đạo tinh nang Chất tiết chúng gọi tinh với chức (i) Kích thích gây hưng phấn sinh dục (ii) Các dịch tiết tuyến sinh dục rửa đường niệu đạo sinh dục nuôi sống tế bào sinh dục đực thể

<= Hình Vị trí

các tuyến sinh dục phụ bò đực.

1 Tuyến Cowper; Tuyến tiền liệt; Tuyến tinh nang; Bầu tinh; Niệu đạo; Bàng quang; Niệu quản

Hình Dương

vật số gia súc =>

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

a Tuyến cầu niệu đạo (tuyến Cowper): Còn gọi tuyến củ hành (bulbourethral), nằm cuối niệu đạo, xoang chậu, vịng cung ngồi Ở chó khơng phát triển

Chức năng: với độ pH trung tính, có tác dụng sát trùng, làm trơn niệu đạo sinh dục

và có mùi đặc biệt gây hưng phấn sinh dục

b Tuyến tiền liệt (prostate): nằm cuối ống dẫn tinh phần đầu niệu đạo, phát triển chó, ngựa phát triển phát triển trâu, bò lợn Sự phát triển liên quan mật thiết đến hoạt tính sinh dục: lúc chưa thành thục nhỏ thành thục tuyến phát triển nhanh chóng

Chức năng: tiết dịch có tính chất kiềm nhằm trung hòa độ axit lòng niệu

đạo axit Cacbonic sản sinh hoạt động tinh trùng Trong dịch tiết

còn có Prostaglandin F2α có tác dụng làm co bóp trơn để thực phản xạ phóng

tinh

c Tuyến tinh nang (seminal vesicles): Còn gọi túi tinh, gồm đôi nằm phần cuối ống dẫn tinh Tuyến phát triển lợn, ngựa; phát triển trâu, bò cừu

Chức năng: Dịch tiết tuyến tinh nang có dạng keo phèn màu trắng, vàng,

gặp chất tiết tuyến tiền liệt ngưng kết lại thành cục để nút cổ tử cung không cho tinh dịch chảy ngược ngồi Chất tiết cịn có γ globulin có tác dụng chống vi khuẩn xâm nhập cịn có thành phần khác frutoza, lipit… cung cấp lượng cho tinh trùng hoạt động

* Trình tự phân tiết tuyến gia súc phóng tinh

Trước gia súc phóng tinh, dịch tuyến Cowper tiết trước, dịch nhiều khác tùy loài gia súc Tiếp đến tinh trùng dịch tiết tuyến tiền liệt, giai đoạn chất tiết có màu màu nồng độ tinh trùng định Cuối dịch tiết nang tuyến, dịch có keo dính

2 Sinh lý sinh dục đực

Dịch hồn có chức sinh lý ngoại tiết sinh tinh trùng chức sinh lý nội tiết sinh hormone sinh dục đực (testosteron)

2.1 Chức sản sinh tinh trùng

Gia súc đực từ sinh lúc có khả nhảy xuất tinh lần tinh dịch thường chưa 50 triệu tinh trùng với hoạt lực tiến thẳng khoảng 10%: đực thành thục tính Thời gian sinh lúc gọi tuổi thành thục tính Tuổi thành thục tính phụ thuộc nhiều yếu tố như: giống, cá thể, thời tiết khí hậu chế độ chăm sóc ni dưỡng Nhìn chung tuổi thành thục tính sớm tuổi thành thục thể vóc (xem bảng sau)

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Loài gia súc Tuổi thành thục sinh dục Tuổi thành thục thể vóc

Trâu Bò Lợn Dê, Cừu

1,5 – năm 12 - 18 tháng - tháng - tháng

3 – 3.5 năm – 2.5 năm - 10 tháng 12 – 18 tháng

Bảng Tuổi thành thục tính thể vóc gia súc [4]

Hoạt động sinh dục đực quanh năm theo mùa vụ Tinh trùng sản sinh từ ống sinh tinh dịch hoạt suốt đời sống sinh dục đực tác dụng hormone hướng vào sinh dục tuyến yên tuyến sinh dục Mỗi ngày tinh hồn có khả sản sinh khoảng 300 triệu tinh trùng

2.1.1 Sự tạo thành tinh trùng a Thời kỳ tinh hoàn

So với trứng, tinh trùng nhỏ nhiều Nhà khoa học Kelliker (1817-1905) chứng minh tinh trùng tế bào

Thành ống sinh tinh có chứa số tế bào biểu mô mầm gọi tinh nguyên bào (tế bào sinh dục nguyên thuỷ) Khi động vật bước vào tuổi thành thục tính tinh ngun bào tiến hành giảm phân để tạo thành tinh trùng (trải qua hai lần phân bào liên tiếp) (Hình 5) Trước xảy trình giảm phân tinh nguyên bào (2n) trải qua thời kì sinh trưởng để tạo thành tinh bào cấp I (2n) Tinh bào cấp I tiến hành phân chia giảm nhiễm lần thứ để tạo hai tế bào gọi tinh bào cấp II (n) Tinh bào cấp II tiếp tục phân chia lần thứ hai để tạo bốn tinh tử đơn bội Các tế bào khơng cịn phân chia biến thành tinh trùng hoạt động, có tinh trùng mang NST giới tính X tinh trùng mang NST giới tính Y Điều nói lên số lượng hai loại tinh trùng Tất giai đoạn hình thành tinh nguyên bào, tiền tinh trùng tinh trùng xảy tế bào sertoli (Hình vẽ) Tế bào trực tiếp ni dưỡng, bảo vệ kiểm sốt trình sinh sản tinh trùng [1]

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

(A)

Hình Sơ đồ A hình

vẽ B trình sinh tinh [1]

A Gián phân giảm số B Gián phân nguyên số Tinh nguyên bào (2n NST)

2 Tinh bào I (2n NST) Tinh bào II (n NST) Tiền tinh trùng (n NST với X với Y)

Trong thời kì tinh hồn, tinh trùng có đặc điểm sau: (i) Khơng có khả thụ thai; (ii) Khơng có vận động có vận động yếu ớt Tuy nhiên tinh trùng có dao động đặc biệt tiếp xúc với khơng khí; (iii) Phản ứng gram âm, có số nhỏ phản ứng gram dương, pH mơi trường trung tính nghiêng kiềm

b Thời kì mào tinh

Trong thời kì tinh trùng trạng thái ức chế trao đổi chất bị giảm chúng khơng có đủ chất

dinh dưỡng (fructoza) Trong thể sống chúng nằm bất động chồng sít lên đoạn định ống mào tinh Thời gian lưu lại phụ dịch hoàn, tinh trùng tiếp tục phát dục hoàn thiện (được xem trình thành thục sinh dục) Chất tiết phụ dịch hồn chất điện giải nên tinh trùng sống lâu hơn, màng bán thấm hình thành, hồn thiện Tinh trùng mào tinh nằm chờ đợi xuất ngồi nhờ có phản xạ phóng tinh đực, khơng xuất tinh trùng bị già cỗi tiêu biến

(B)

Người ta tính thời gian hình thành tinh trùng khoảng 53-69 ngày [5]

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

2.1.2 Sự điều hồ q trình sinh lý sinh sản đực

a Các hormone

- Hypothalamus tiết hormone giải phóng kích dục tố GnRH (Gonadotropin Releasing Hormone)

Hình Cơ chế TK-TD điều khiển sinh sản đực [1]

- Tuyến yên : (i) FSH (Follicle Stimulating Hormone) gọi kích tố tạo tinh có tác dụng kích thích tế bào sinh tinh ống cong nhỏ dịch hoàn sản sinh tinh trùng; (ii) LH (Luteinizing Hormone) có tác dụng kích thích tế bào kẽ Leidig dịch hoàn tiết hormone sinh dục đực Androgen

- Tuyến sinh dục:

Các tế bào kẽ (tế bào Leydig) tinh hồn có chức sản sinh hormone sinh dục đực thường gọi chung androgen bao gồm hormone như: testosteron, dihydrotestosteron androstenedion, quan trọng testosteron Ngồi tinh hồn cịn tiết số hormone khác như: inhibin

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Testosteron hợp chất steroid có 19 C tổng hợp từ cholesteron axetyl CoA Testosteron tiết tác dụng HCG (hormone thai) thời kỳ bào thai LH tuyến yên thời kỳ trưởng thành Tác dụng testosteron sau:

+ Trong thời kỳ bào thai: Kích thích phát triển quan sinh dục thai như: dương vật, tuyến tiền liệt, túi tinh… Kích thích để đưa tinh hồn từ xoang bụng xuống bìu ngồi

+ Làm xuất bảo tồn đặc tính sinh dục đực thứ phát kể từ tuổi thành thục như: phát triển dương vật, tuyến tiền liệt, mọc lông quan sinh dục…

+ Kích thích sản sinh tinh trùng: Testosteron kích thích hình thành tinh ngun bào phân chia giảm nhiễm lần hai từ tinh bào II thành tinh trùng Testosteron kích thích tổng hợp protein tiết dịch từ tế bào Sertoli Hai tác dụng có liên quan đến việc sản sinh tinh trùng Nếu lượng testosteron bị giảm xuống thấp dẫn đến vơ sinh

+ Ngồi testosterone cịn có tác dụng lên chuyển hoá protein cấu tạo

b Cơ chế trình sinh sản đực

Sự điều khiển chức tinh hoàn theo chế nội tiết minh hoạ hình bên Nhìn chung, tác động yếu tố ngoại cảnh như: ánh sáng, nhiệt độ, thời tiết, thức ăn, mùi… vùng với yếu tố nội tác động thần kinh trung ương (vỏ đại não) Các kích thích truyền đến vùng đồi (hypothalamus) tiết yếu tố giải phóng GnRH (Gonadotropin-releasing hormone) GnRH kích thích thuỳ trước tuyến yên tiết FSH LH (còn gọi ICSH – Intertitial cell stimulating hormone) LH kích thích tế bào kẽ Leydig sản xuất Androgen (chủ yếu testosterone) Androgen vào máu bạch huyết, giúp cho phát triển đặc tính sinh dục thứ cấp đực phát triển đường sinh dục đực Androgen gây nên kìm hãm sản sinh GnRH LH tác động ngược âm tính lên tuyến n vùng đồi Testosterone tiết vào ống sinh tinh giúp cho trình hình thành tinh trùng

FSH tương tác với thụ quan (receptor) tế bào Sertoli để tạo ABP (androgen binding protein) ABP liên kết với testosterone kích thích q trình sinh tinh ống sinh tinh Từ tế bào Sertoli, inhibin tiết vào máu bạch huyết, gây nên tác động ngược âm tính lên vùng đồi tuyến yên làm giảm lượng FSH

II SINH LÝ SINH DỤC CÁI

1 Cấu tạo chức quan sinh dục gia súc

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Qúa trình sinh lý quan sinh dục quan trọng chức sinh sản gia súc Gia súc có cấu tạo quan sinh dục có tính chung lồi

Hình Cấu tạo quan sinh dục

1.1 Bộ phận bên

a Buồng trứng (Ovary): Buồng trứng gồm đôi đối xứng với nhau, gắn liền với dây chằng rộng tử cung thường nằm xoang chậu độ cao với độ cao xương chậu

- Chức năng:

+ Sản xuất tế bào trứng (Là tế bào lớn thể: 0,15-0,25mm) + Sản xuất số kích dục tố tham gia vào điều hòa chức sinh sản gia súc)

b Ống dẫn trứng (Oviduct): Hay cịn gọi vịi Fallop, có đường kính nhỏ, to lên kích thước vào thời kỳ động dục đón nhận trứng Phần đầu loe phễu nên gọi loa kèn có chức hứng trứng trứng rụng hướng trứng vào ống dẫn trứng Ống dẫn trứng tiết dịch tiết nhu động lông mao thành ống dẫn trứng giúp tinh trùng trứng tiến gần giúp hoạt hóa tế bào Ống dẫn trứng nơi thụ tinh (1/3 phần ống dẫn trứng) Khả nhu động thành ống dẫn trứng giúp trứng thụ tinh di chuyển đến tử cung làm tổ

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Đường kính ống dẫn trứng: 0,2 - 0,4 mm

c Tử cung (Uterus): Tử cung có cấu tạo phù hợp với chức phát triển dinh dưỡng bào thai Trứng thụ tinh ống dẫn trứng trở tử cung làm tổ, hợp tử phát triển nhờ chất dinh dưỡng từ thể mẹ thông qua lớp niêm mạc tử cung cung cấp cho

Tử cung cịn có nhiệm vụ đẩy thai ngồi q trình sinh đẻ nhờ vào lớp trơn (Myometrium) tử cung Lớp trơn có cấu tạo phức tạp lớp khỏe thể

Tử cung tất lồi động vật có vú chia loại sau:

- Tử cung hai sừng : Tử cung có hai sừng thân cổ tử cung Ví dụ: Bị, ngựa, lợn, chó

- Tử cung phân nhánh: Tử cung phân làm hai nhánh, có cổ tử cung thơng với âm đạo Ví dụ: lồi gặm nhấm

- Tử cung kép: Tử cung có hai sừng trái phải, bên có cổ tử cung, hai cổ tử cung thơng với âm đạo Ví dụ: Voi

- Tử cung đơn: Tử cung không phân biệt sừng tử cung, thân tử cung Ví dụ: Linh trưởng, người

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Hình Cấu tạo quan sinh dục số loài gia súc [6] Tử cung bao gồm phần: Cổ tử cung, thân tử cung, sừng tử cung

Cổ tử cung bị có 3-5 vịng nhăn, lợn vòng nhăn Là nơi ngăn cách mơi trường bên ngồi với bên Bình thường cổ tử cung đóng kín tránh xâm nhập vi trùng tác nhân bên để bảo vệ bào thai Cổ tử cung mở gia súc động dục đẻ

Bào thai làm tổ cư trú sừng (lợn, trâu, bị, chó), thân (ngựa) Bảng Kích thước tử cung số loài [4]

Gia súc Sừng tử cung Thân tử cung Cổ tử cung

Ngựa Trâu, bò Lợn

20 - 25 cm 15-20 cml 50cm -1m

30-35 cm 2-4 cm 6-10 cm

5-7 cm 6-8 cm 10-18 cm d Âm đạo (Vagina)

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Âm đạo có nhiệm vụ tiếp nhận dương vật giao phối lối thai nhi sinh sản Cũng nơi tiết nước tiểu

Kích thước âm đạo: Ngựa: 15-20 cm; Bị: 22-25 cm; Lợn: 10-12 cm; Dê, cừu: 8-10 cm

1.2 Bộ phận bên

Là quan sinh dục mà người ta nhìn thấy, sờ thấy, quan sát Bao gồm: Âm môn, âm vật, tiền đình

a Âm mơn (Vulva): Là quan phận sinh dục cái, làm nhiệm vụ tiếp nhận thay đổi môi trường, đặc biệt xuất phản xạ tình dục Khi động dục, niêm mạc âm môn thay đổi màu sắc dựa vào thay đổi mà ta biết động dục vào thời kỳ mà có q trình phối thích hợp

b Âm vật (Clitoris): Giống dương vật đực thu nhỏ lại, dài khoảng 4-5 cm Trên âm vật có nếp da tạo thành mũ âm vật, phía bẻ quặp xuống nơi tập trung nhiều đầu mút dây thần kinh

c Tiền đình (Vestibule): Là biên giới âm mơn âm đạo, có màng trinh (Hymen) qua màng trinh có lỗ niệu đạo

2 Sinh lý sinh dục

2.1 Các giai đoạn chu kỳ động dục

* Thành thục tính: Gia súc sinh sau thời gian sinh trưởng phát triển

định (tuỳ lồi) có khả sinh sản Tuổi vật bắt đầu có khả sinh sản gọi tuổi thành thục tính Tuổi ghi nhận lần động dục có rụng trứng

* Chu kỳ sinh dục: Chu kỳ sinh dục bắt đầu gia súc thành thục tính,

nó tiếp tục xuất chấm dứt hoàn toàn thể già yếu Chu kỳ sinh dục trình sinh lý phức tạp sau tồn thể phát triển hoàn hảo, quan sinh dục khơng có bào thai khơng có tượng bệnh lý bên buồng trứng có q trình nỗn bao thành thục, trứng chín thải trứng

Sau thành thục tính gia súc bắt đầu có hoạt động sinh sản Dưới điều hồ hormon tiền yên nang trứng tăng trưởng, thành thục, chín rụng Mỗi lần xuất trạng thái rụng trứng tồn thể nói chung, đặc biệt quan sinh dục phát sinh hàng loạt biến đổi hình thái cấu tạo, chức sinh lý Các biến đổi lặp lặp lại theo chu kỳ gọi chu kỳ động dục (chu kỳ tính) Thời gian chu kỳ tính ngắn tính từ lần thải trứng trước đến lần thải trứng sau

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Chu kỳ sinh dục cảu gia súc tượng sinh vật học có quy luật, tạo hàng loạt điều kiện cần thiết để tiến hành giao phối, thụ tinh phát triển bào thai Ở cá thể có thai khơng có chu kỳ tính lại tiếp tục sau sinh sản xong thời gian, tùy thuộc vào loài gia súc, giống điều kiện ngoại cảnh

Cần phát kịp thời tượng động dục nhằm tránh việc bỏ qua chu kỳ, nâng cao tỉ lệ thụ thai, góp phần phát triển đàn gia súc Từ điều khiển chủ động kế hoạch sinh sản, kế hoạch thức ăn, nuôi dưỡng khai thác sản phẩm toàn đàn gia súc Ngồi góp phần phịng tránh tượng vơ sinh

Chu kỳ động dục tuỳ lồi mà có thời gian khác nhau: Bò 21-22 ngày; trâu: 27-28; lợn: 19-21; ngựa: 19-25; cừu: 16-17; dê: 21; chó:180 ngày [4] -> Phụ thuộc loài, giống, ngoại cảnh: dinh dưỡng, thời tiết khí hậu

Thời gian động dục khác tùy theo lịai:

Ví dụ: Trâu, bò: ngày; Lợn: 3-5 ngày; Ngựa: 7-10 ngày; Dê, cừu: 1,5-2 ngày Chó mèo: 11-15 ngày (chó chịu đực lần, ngày 11, giao phối kiểu giăng dây) Biết rõ thời gian động dục để có thời điểm phối giống thích hợp

Triệu chứng chu kỳ động dục khác loài với loài khác chia làm giai đoạn

2.2.2 Cơ chế thần kinh-thể dịch điều khiển sinh sản gia súc

Bình thường gia súc sinh trưởng phát dục đến giai đoạn định bắt đầu thành thục tính có khả sinh sản Hoạt động sinh dục khác với đực mang tính chất chu kỳ Quá trình động dục gia súc có tính chất chu kỳ có tác động nhân tố nội ngoại cảnh thông qua điều khiển hệ thống thần kinh tuyến nội tiết

Nhân tố nội tại: Chủ yếu buồng trứng sản sinh lượng Oestrogen

Oestrogen tác động lên trung khu vỏ đại não ảnh hưởng tới hypothalamus tạo điều kiện cho xuất lan truyền xung động thần kinh gây tiết GnRH chu kỳ Cũng thời gian Oestrogen ảnh hưởng trực tiếp đến tới tuyến yên, làm tăng tốc độ mẫn cảm tế bào hướng sinh dục tuyến yên GnRG

Yếu tố ngoại cảnh: ánh sáng, nhiệt độ, thức ăn, chế độ chăm sóc ni dưỡng…

đặc biệt Steroid tự nhiên từ thức ăn vào thể qua đường tiêu hoá qua da nhờ ánh sáng gây nên kích thích hố học tác động lên vỏ đaị não Ngoài ra,

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

con chịu tác động đực thơng qua thính giác, khứu giác xúc giác… gây nên kích thích mãnh liệt tác động lên vỏ đại não Vỏ đại não sau tiếp thu kích thích ngoại cảnh truyền đến hạ khâu não (Hypothalamus) gây tiết yếu tố giải phóng GnRH - GnRH gồm thành phần FRH (Follicle releasing hormone) LRH (Luteinizing releasing hormone), ngồi cịn có PRH (Prolactin releasing hormone) số loài động vật, tác động đến tuyến yên (Hypophysis) kích thích thùy trước tuyến yên tiết FSH LH

FSH (còn gọi Prolan A) tuần hồn theo máu, kích thích buồng trứng làm cho noãn nang phát triển lượng Oestrogen tiết nhiều Lượng dịch tiết nhiều làm cho thể tích bao nỗn tăng lên lên mặt ngồi buồng trứng, bao nỗn chín Oestrogen vào máu tuần hồn khắp thể, tác động lên trung khu đại não làm hưng phẩn sinh dục (thể triệu chứng động dục bên ngoài) tác động đến quan sinh dục làm biến đổi máy sinh dục (vú nở to, âm hộ sưng, xung huyết, tử cung dày lên…) Oestrogen với nồng độ cao tác động ngược dương tính lên Hypothalamus thuỳ trước tuyến yên làm giải thoát GnRH, LH FSH

LH (còn gọi Prolan B) tác động vào buồng trứng làm trứng chín muồi có tác dụng hoạt hố enzim để phân giải protein làm phân giải vách bao noãn, kết hợp với FSH (với tỉ lệ LH/FSH khoảng 3/1) làm noãn bao vỡ ra, trứng chín rơi khỏi mặt buồng trứng gọi rụng trứng Ngoài tác dụng hormone ra, rụng trứng chịu ảnh hưởng tác động giao phối (vd: chó, mèo rụng trứng sau giao phối)

Trứng rụng hình thành thành thể vàng Thể vàng phân tiết Progesteron Ở số lồi (gặm nhấm…) PRH kích thích tuyến yên phân tiết LTH (Luteinotrofic hormone) LTH tác động vào buồng trứng giúp cho trì tồn thể vàng, kích thích thể vàng phân tiết Progesteron Progesteron tác động lên Hypothalamus thuỳ trước tuyến yên (gọi tác động ngược âm tính), ức chế tuyến yên phân tiết FSH, LH làm cho trình động dục chấm dứt Progesteron lại tác động vào tử cung, làm tử cung dày lên tạo điều kiện tốt cho làm tổ hợp tử dễ dàng lúc đầu Nếu vật có chửa thể vàng tồn suốt thời gian mang thai trước đẻ khoảng 18-20 ngày, nhân tố bảo vệ an toàn cho thai phát triển Nếu khơng có chửa, thể vàng tồn khoảng 10-16 ngày (tùy giống) sau teo dần Hàm lượng Progesteron từ mà giảm, giảm đến mức độ định lại với nhân tố khác kích thích vỏ đại não, Hypothalamus tuyến yên tăng cường phân tiết FSH, chu kỳ lại tiếp tục hình thành

Hình 10 Sơ đồ chế thần kinh thể dịch điều hồ chu kì sinh sản gia súc

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Bảng Triệu chứng giai đoạn chu kỳ động dục [7] (Chủ yếu Bò)

Các giai đoạn

Dấu hiệu

Trước đông dục (Proestrus)

Động dục (Estrus)

Sau động dục (Postestrus)

Yên lặng sinh dục

(Unestrus)

Biểu bên ngoài, dáng vẻ

Băn khoăn, ngơ ngác, không yên, lại - Đái rắt - Kêu (hoặc không) Nhảy lên khác, không cho khác nhảy Bỏ rơng

Tìm đực đến gần khác Chịu cho nhảy, mê ỳ

Còn chịu cho nhảy phối giống (một thời gian ngắn)

Bình thường

Ăn uống Kém ăn - gặm cỏ lơ Ăn khơng ăn

Ăn Ăn uống bình

thường

Âm hộ Xung huyết, phù, bóng ướt Mép âm hộ

Bớt sưng, se Hết sưng Bình thường

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

hé mở dính cỏ rác

Biến đổi bên buồng trứng

Có nang trứng phát triển

Nang trứng nhơ căng Trứng rụng

Trứng rụng bị 10 - 12 sau chịu đực

Có thể vàng nhô lên

Tử cung Màng nhầy tử cung dày

lên, tụ huyết Màng nhầy tử cung dày

Trương lực tối đa

Trương lực

bớt căng Bình thường

Cổ tử cung

Hé mở, đỏ hồng, bóng ướt Niêm dịch lỏng, nhiều, suốt, dễ đứt

Mở rộng,

niêm dịch đặc dính, có màu nửa trong, nửa đục, kéo dài 5-7 cm Bớt đỏ

Hẹp dần Niêm dịch đặc, giảm độ keo dính, màu đục bã đậu

Khép kín bình thường

Âm đạo Đỏ hồng, bóng ướt Bớt đỏ Dần dần trở

về bình thường

Bình thường

Nội tiết

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Hình 11 Xác định động dục với có mặt lợn đực

2.3 Các pha chu kì tính

Nhiều tác giả chia chu kỳ sinh dục làm pha:

a Pha nang trứng (Folliculin): Bao gồm giai đoạn trước động dục động dục

Sự phát triển, phát sinh nang trứng (còn gọi noãn bao, noãn nang, nang noãn) trứng (noãn bào) tác động FSH thuỳ trước tuyến yên, noãn bao nguyên thuỷ qua số giai đoạn phân chia thành noãn bao sơ cấp - noãn bao thứ cấp- nang De graff (thành thục chín)

Nang trứng tác dụng LH thúc cho noãn bao chín, lồi lên mặt buồng trứng -> vỡ phóng nỗn ngồi

Hoạt động coi quan trong pha nang trứng việc tiết hormone Oestrogen

Sự tăng cao Oestrogen làm tăng nhảy cảm tuyến yên GnRH, kích thích tiết chế mạnh mẽ LH, tạo nên đỉnh cao LH vào trước ngày trứng rụng

Oestrogen vào máu tới quan sinh dục làm tăng thể tích mao mạch nhỏ niêm mạc đường sinh dục, điều làm tăng thêm nguồn máu, kích thích q trình phân chia tế bào giai đoạn đầu chu kỳ sinh dục niêm mạc đường sinh dục (Tử cung, âm đạo, âm hộ) có màu đỏ, tăng sinh (phù), vách tử cung dày lên co tự phát phần

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Sau Oestrogen kích thích tế bào niêm mạc cổ tử cung tiết chất nhầy loãng Ở số lồi bị chất nhầy nhiều chảy từ âm hộ với niêm mạc âm đạo Oestrogen hấp thu vào máu cịn tác động đến tồn thể, đặc biệt hệ thần kinh trung ương làm thay đổi hoạt động gia súc biểu triệu chứng động dục thích gần đực, ăn, ngơ ngác, kêu rống, nhảy lên lưng khác có tư chịu đực

b Pha thể vàng (Lutein): Bao gồm sau động dục yên lặng sinh dục

Sau tế bào trứng rụng, biểu động đực Oestrogen biến mất, niêm mạc cổ tử cung âm đạo ngừng tiết niêm dịch chất nhầy chảy giảm Cơ cổ tử cung hồi phục sức căng đóng kín lại cũ Các triệu chứng động dục biến

Thể vàng tiết Progesteron với tác dụng an thai

III SINH LÝ QUÁ TRÌNH THỤ TINH 1 Sinh lý trình rụng trứng

Năm 1827, Cac Macmovits Ber (1782-1872), nhà sinh học xuất sắc người Nga (được xem người khai sinh môn phôi thai học) nghiên cứu chó vừa giao cấu xong Khi xem buồng trứng, nang Graff vốn chứa nước, ơng thấy có nang đặc biệt lớn Ơng phá vỡ nang ra, khéo léo tách hạt tròn màu vàng đặt vào đĩa thủy tinh chứa nước Ông tả lại: "Hồi hộp xem kính hiển vi, tơi bàng hồng người sung sướng Sợ ảo giác nên phải ngồi định thần lúc xem tiếp Té - trứng giống lịng đỏ trứng chim kích thước bé nhiều" [8]

Trứng tế bào to thể Nó có màng, nguyên sinh chất, nhân Khi chín, trứng có kích thước 0,2-0,3 mm (linh trưởng), hình cầu, màu vàng nhạt Các tổ chức ban đầu noãn bào (buồng trứng) noãn nguyên bào, cho noãn bào cấp Trong lần phân chia thứ giảm phân, tạo thành hai tế bào có nhân đơn bội kích thước khác nhau, noãn bào cấp 2, chứa khối lượng lớn tế bào chất; hai cực thứ nhất, chứa tế bào chất Trong lần phân chia thứ hai giảm phân, noãn bào cấp lại phân thành hai tế bào không nhau, tạo thành tế bào trứng đơn bội cực thứ hai bé Kết noãn bào cấp cho tế bào trứng hoàn chỉnh với tất phần tế bào chất dự trữ cần thiết, ba cực phụ teo

a Cơ chế điều hồ q trình rụng trứng

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Rụng trứng trình sinh lý phức tạp Quan niệm rụng trứng động dục gắn liền với bị bác bỏ có có động dục mà khơng có rụng trứng (động dục giả), có có rụng trứng mà lại khơng có biểu động dục (động dục ngầm) Q trình rụng trứng giải thích sau:- FSH (tuyến yên) làm tế bào trứng chín, nang trứng phát triển nhanh lên bề mặt buồng trứng (nang De Graff) - LH (tuyến yên) kích thích làm tăng tiết dịch nang trứng, tăng áp lực nang trứng

- Prostaglanding F2α tế bào tử cung tiết có tác dụng kích thích việc hình thành

tổ chức chế tiết enzim phân huỷ vách nang trứng

- Relaxin (Hormone tử cung) có tác dụng tương tự LH Prostaglanding F2α

Khi LH cao làm cho áp lực dịch nang trứng có trị số lớn nhất, vách nang trứng thời điểm khơng thắng áp lực dẫn đến nang trứng vỡ, giải phóng tế bào trứng

b Số trứng rụng thời gian rụng trứng

* Ở động vật đơn thai: Bình thường chu kì rụng 1-2 trứng Tuy nhiên cơng nghệ sinh sản người ta tác động loại hormone gây siêu nỗn chu kì động dục rụng nhiều trứng

* Ở động vật đa thai: Số trứng rụng thay đổi theo giống, tuổi, dinh dưỡng, khí hậu… Ở nái tơ thường nái (ví dụ lợn nái tơ trung bình 13.5, nái 21.4) Sự có mặt đực giống ảnh hưởng đến số trứng rụng Bị thường rụng vào khoảng 10-14 sau có chấm dứt triệu chứng động dục bên ngoài, lợn thải trứng không lúc thường vào ngày thứ có biểu động đực Biết thời gian rụng trứng gia súc để có biện pháp cho gia súc đực nhảy dùng phương pháp TTNT đạt kết thụ thai cao

2 Sự di chuyển tế bào sinh dục

* Sự di chuyển tinh trùng do:

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

- Khả tự vận động

Hình 11 Sơ đồ chu kỳ động dục bò - Đặc tính lội ngược dịng nước

- Dịng chảy dịch tiết

- Nhu động đường sinh dục - Nhung mao đường sinh dục

Tinh trùng có mặt nơi thụ tinh nhanh sau thụ tinh (khoảng sau thụ tinh, gọi pha chuyển động nhanh), thông thường khoảng 4-6 bị dê, lợn…

* Sự di chuyển tế bào trứng do: - Sự co bóp đường sinh dục - Dịng chảy xi niêm dịch - Nhung mao đường sinh dục

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

- Di chuyển đường sinh dục

3 Khả sống thụ thai tế bào sinh dục

- Trứng: thời gian ngắn Ở bò: 20 giờ; lợn : 12-15 giờ; ngựa: 10 giờ; thỏ: - Tinh trùng: thời gian dài gấp đơi thời gian sống thụ thai trứng (tuỳ lồi) thụ tinh cần đưa tinh trùng vào sớm Thời gian sống tinh trùng đường sinh dục chịu ảnh hưởng số nhân tố như: tinh trùng đưa vào đường sinh dục phận nào? (âm đạo hay tử cung), trạng thái sinh lý, bệnh lý đường sinh dục biểu thể giao phối, chất lượng tinh trùng… Chỉ có số lượng (khoảng 1/20-1/30 số lượng tinh trùng phóng vào âm đạo bò, dê, cừu, thỏ) vào tử cung để đến ống dẫn trứng lại bị chết q trình chọn lọc (thực bào, chảy ngược ngồi không vượt qua chướng ngại vật cổ tử cung…) [9]

4 Sinh lý qúa trình thụ tinh

+ Khái niệm: Là trình sinh lý phức tạp tế bào trứng tinh trùng thành thục, phát sinh đồng dị hoá để tạo tế bào gọi hợp tử mang 2n NST, hợp tử phát triển thành thể mang đặc điểm di truyền bố mẹ với giống lồi + Điều kiện: - Có trứng rụng - Tinh trùng khoẻ, đủ số lượng có mặt 1/3 phía ống dẫn trứng vào thời điểm trứng rụng

+ Quá trình thụ tinh xảy gồm có giai đoạn: - Phá vỡ vành phóng xạ - Xâm nhập vào tế bào trứng - Đồng hoá tế bào trứng tinh trùng tạo thành hợp tử tóm tắt sau:

Từ âm đạo, cần vài phút tinh trùng vào đến con, sau 2-3giờ hết ống dẫn trứng Sau đó, chúng cịn sống vài ngày để đợi trứng rụng Trong số tinh trùng dùng "lao tới" tới gặp trứng, có tinh trùng "dại dột" luẩn quẩn âm đạo bị dịch toan giết chết Rất nhiều tinh trùng lạc lối vào nếp nhăn niêm mạc con, khơng tìm đường lên ống có trứng Một nửa số cịn lại phải vào bên ống dẫn trứng rụng lại ngờ nghệch sang ống bên cách cầu may Cuối cịn vài chục đấu thủ chạy đường, với đấu thủ phép chui vào trứng Thực ra, chẳng vượt qua khó khăn khơng có hỗ trợ hàng vạn, hàngtriệu tinh trùng khác

Chú tinh trùng may mắn tiết men hyaluronidada để công phá màng trứng (men phân lập được, thường dùng để chữa vô sinhở đàn ông thiếu tinh trùng, giúp cho tinh trùng dễ dàng lọt vào trứng) Có người tính phải có triệu tinh trùng tiết đủ số men cần thiết để làm việc Bởi vậy, thực thụ tinh ban đầu phải có 80 triệu tinh trùng, 60% phải chuyển động khỏe

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Thực ra, có vài ba tinh trùng lọt vào trứng việc thụ tinh dành cho đầu tiên; khác tự tiêu hủy trở thành chất dinh dưỡng cho trứng Nhân tinh trùng dịch lại gần nhân trứng; hai dốc tồn "của cải q giá" (AND) góp vốn chung Dưới kính hiển vi, người ta thấy nhân chúng tan ra, quyện vào làm một; NST khẩn trương xếp thành cặp Khoảng sau nửa giờ, tế bào trứng thụ tinh xong đủ tư cách thể Lúc này, giới tính thai khẳng định, chưa có cách thay đổi

* Chú ý: Tinh trùng sau xuất khỏi thể khơng có khả thụ tinh ngay mà cần phải trải qua thời gian (có thể in vivo in vitro) để trải qua số q trình biến đổi lý, hố học để trở thành đủ điều kiện thụ tinh (capacitation)

[10]

Hình 12 Biến đổi tinh trùng đường sinh dục

5 Quá trình hình thành thể vàng

Sau nỗn nang vỡ, dịch nang chảy nang Graff xẹp xuống, nếp nhăn vách nang ăn sâu vào làm thu hẹp khoang nang trứng, khoang chứa đầy dịch máu chảy từ vách nang (Thể huyết, thể hồng) Các tế bào hạt khoang phân chia thành khối tế bào lớn có chứa lipoit sắc tố vàng lấp kín xoang hình thành nên thể vàng Thể vàng tiết hormone Progestreron có tác dụng ức chế tuyến yên, kích thích niêm mạc tử cung tăng cường chất dinh dưỡng, ức chế trơn co bóp, thúc đẩy tuyến vú phát triển

* Các loại thể vàng

- Thể vàng sinh lý

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

Đối với trâu bị chu kỳ hình thành 1-2 thể vàng, lợn hình thành nhiều khoảng 15-30

- Thể vàng chửa: Tồn qúa trình chửa tiêu biến trước đẻ khoảng 18-20 ngày

- Thể vàng thối hố: Sau hồn thành chức thối hố

- Thể vàng tồn tại: Tồn gia súc không mang thai Thường gặp gia súc rối loạn nội tiết kế phát từ bệnh sản khoa

- Thể vàng giả: Thai chết thể vàng tồn

- Bạch thể: Sau hoàn thành chức sinh lý, thể vàng teo lại thành vết sẹo gọi bạch thể

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Mai, N.Q., Sinh lý học Động vật Người 2004, Hà Nội: NXB Khoa học Kỹ

thuật

2 Martin, H.J and J.E Barry, Essential Reproduction Fifth ed 2000: Blackwell

Science 1-274

3 Hafez, E.S.E., Reproduction in Farm Animal 6th ed 1993, Philadelphia:

Lea&Febiger 525

4 Dũng, T.T., D.Đ Long, and N.V Thanh, Sinh sản Gia súc 2002, Hà Nội: NXB Nông nghiệp

5 Xưxoep, A.A., Sinh lý sinh sản gia súc 1985, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 429

6 Joe, B and W.F John, Applied Animal Reproduction 1996

7 Giao, H.K., et al., Cơng nghệ Cấy truyền phơi Bị 1997, Hà Nội: NXB Nông

nghiệp

8 Dân, T.T., Công nghệ sinh học chăn nuôi gia súc 2005: NXB Nông

nghiệp 127

9 Knobil, E and J.D Neill, The Physiology of Reproduction Second ed 1994,

New York: Raven Press

10 Hải, P.V., The distribution, capacitation status and motility characteristics of

ram spermatozoa in the reproductive tract of ewes within three hours after mating, in Australia Institute of Tropical Veterinary and Animal Science 2004,

James Cook University

CÂU HỎI ƠN TẬP

1 Vẽ hình cấu tạo quan sinh dục bò đực trình bày chức máy sinh dục đực (trừ tuyến sinh dục phụ)?

2 Chức tuyến sinh dục phụ (vẽ hình)?

3 Cơ chế thần kinh-thể dịch điều khiển sinh sản đực (Vẽ hình)?

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

4 Trình bày tên, tuyến tiết chức sinh lý hormone tham gia q trình sinh lý sinh sản đực?

5 Vẽ hình cấu tạo quan sinh dục bò trình bày chức phận bên trong?

6 Cơ chế thần kinh-thể dịch điều khiển sinh sản gia súc (Vẽ hình)? Các pha chu kì tính (vẽ hình)?

8 Sinh lý q trình rụng trứng?

9 Các hormone tham gia điều khiển trình sinh sản gia súc (tên, tuyến tiết, tác dụng sinh lý chính)?

10 Quá trình hình thành thể vàng loại thể vàng?

ThS Phan Vũ Hải, Bài giảng Sinh sản Gia súc

23

CHƯƠNG II.

QUÁ TRÌNH MANG THAI Ở GIA SÚC

Mục đích: Trình bày biến đổi mang thai gia súc mẹ (cùng với

bào thai) phương pháp chẩn đốn gia súc có thai, từ có biện pháp chăm sóc, quản lý hợp lý

Thời lượng giảng dạy: tiết

I THỜI GIAN MANG THAI VÀ SỐ LƯỢNG THAI 1 Thời gian mang thai

Thời gian mang thai tính từ lúc vật thụ thai (thường tính từ phối giống) đến đẻ

Bò: tháng 10 ngày; Trâu: 11 tháng; Ngựa: 11 tháng; Dê, cừu: tháng; Lợn: tháng tuần ngày; Chó, mèo: tháng; Hươu: – 7.5 tháng, thỏ: tháng [3]

Số liệu tương đối thực tế phụ thuộc nhiều yếu tố: tuổi (già >non, lứa 1>lứa 2), giống, thời tiết khí hậu, dinh dưỡng, số thai (1 thai>2 thai), thai đực>cái

2 Số lượng thai

+ Đơn thai: 1-2 trâu bò, ngựa + Đa thai:

- Tuỳ theo giống lồi chí cá thể: Lợn nội trung bình 12-16 con, lợn ngoại từ 8-12 con, dê cừu: 3-5 con, thỏ 2-4 con, chó 2-5 con, mèo: 2-4

- Do tuổi khác nhau, gia súc đa thai lứa đầu thường lứa sau - Do điều kiện chăm sóc, nuôi dưỡng mùa vụ

II QUÁ TRÌNH PHÁT TRIỂN CỦA THAI 1 Sự làm tổ hợp tử

Hình 15 Quá trình làm tổ phôi [4]

Sau thành hợp tử, hợp tử sống ống dẫn trứng tiếp tục phát triển nhờ dinh dưỡng nỗn hồng dịch tiết ống dẫn trứng Ít ngày sau (tuỳ loài gia súc, khoảng 3-4 ngày) hợp tử di chuyển làm tổ nơi cư trú tử cung Sự di chuyển hợp tử nhờ chất dịch vịi trứng, hoạt động lơng nhung vòi trứng tác dụng co giãn vòi trứng tác động hormone Progesteron Trong trình di chuyển hợp tử thực nhiều giai đoạn trình phân chia, đến tử cung hợp tử có dạng phơi dâu (32-64 tế bào) Khi đến nơi cư trú hợp tử tiết loại men ăn mòn niêm mạc tử cung cư trú phát triển thành bào thai Thời gian làm tổ hợp tử tuỳ loài gia súc, ví dụ bị 1-3,4 tháng, ngựa 7-14 tuần, cừu 30-80 ngày, lợn 12-24 ngày…

Ngay giai đoạn phát triển đầu phôi nằm sát dính với niêm mạc tử cung, lúc đầu liên kết cịn yếu sau bền chặt Vì giai đoạn đầu gia súc có chửa cần ý chăm sóc, ni dưỡng sử dụng gia súc hợp lý để tránh sẩy thai

2 Màng thai

Sau làm tổ thành tử cung, phôi tiếp tục phát triển thai hình thành Trong số tuần đầu tế bào bề mặt túi phôi tiết enzim để 24

25

phân huỷ tế bào thành tử cung vùng xung quanh phôi để cung cấp chất dinh dưỡng cho phôi tiếp tục sinh trưởng phát triển Trong thai bắt đầu cung cấp chất dinh dưỡng oxy từ tuần lễ đầu, sau thai hồn tồn đảm nhiệm chức dinh dưỡng cho phôi Máu mẹ máu thai không trộn lẫn với mà trao đổi chất dinh dưỡng, qua màng ngăn cách thông qua cuống rốn sinh đẻ

2.1 Màng ối: Là màng cùng, gần thai nhất, có hình bầu dục, lỗ rốn thai

màng ối da thai dính lại Màng ối thường suốt, qua màng nhìn thấy thai nhi

Giữa màng ối màng niệu có mạng lưới huyết quản phân bố từ dây rốn lại Túi màng ối có nước ối Nước ối lúc đầu có màu sau vàng nhạt Nước ối giảm vào thời kì cuối có thai bị: 5-7 lít, ngựa 3-4 lít, lợn Thành phần hố học chủ yếu nước ối chủ yếu chất: Protein, Ure, kích tố thai, sinh tố, muối, đường Trong nước ối cịn chứa chất giống kích tố hậu n (oxytoxin) có tác dụng làm bóp tử cung -> đẻ thường lấy nước ối cho uống để kích thích bong

Tác dụng nước ối:

- Giữ cho thai nhi vị trí cân tránh chèn ép quan phủ tạng mẹ - Giúp cho thai nhi tránh tác nhân học bên ngồi

Hình 16 Mối liên hệ mẹ thai qua hệ thống

2.2 Màng niệu

Nằm màng đệm màng ối Màng niệu coi bóng đái ngồi thể Trong màng niệu có nước niệu có thành phần hố học chủ yếu Ure số muối Thời kỳ đầu nước ối lớn nước niệu, thời kì sau ngược lại

* Lưu ý: Sự khác màng niệu ngựa loài gia súc khác

- Ở ngựa: lớp màng niệu phủ lên toàn bề mặt màng ối đỡ đẻ cần ý đẻ màng niệu đệm rách, túi màng niệu ối bao mặt thai nhi với thai nhi lọt vào chỗ rách màng niệu đệm để sổ ngoài, ngựa đẻ thường nằm nên thai nhẹ, màng niệu ối dầy không rách dễ làm cho thai nhi bị ngạt Gặp trường hợp phải xé màng niệu ối để cứu thai nhi

- Màng niệu gia súc khác khơng bao tồn bề mặt màng ối mà che phủ mặt hai bên, gia súc đẻ trước tiên màng ối ló âm mơn nên bị vỡ trước

2.3 Màng nhung (còn gọi màng đệm)

Là màng cùng, màng nhung có lơng nhung (núm nhau) Cấu tạo núm trâu bị theo hình đít bát khác với số loài gia súc khác nên dễ bị sát Lông nhung tiếp xúc với mẹ niêm mạc tử cung xảy trao đổi chất thể mẹ con

26

Hình 17 Sơ đồ màng thai gia súc [5]

27

3 Sự biến đổi gia súc có thai

3.1 Sự biến đổi tồn thân

Khi gia súc có thai, kích tố thai kích tố thể vàng làm ảnh hưởng đến tuyến khác Do thời kỳ đầu trình trao đổi chất tăng lên, dẫn đến vật ăn khoẻ, tiêu hoá manh, khả tích luỹ lớn dần dẫ đến vật nhanh béo Ở thời kỳ cuối thai yêu cầu phát triển mạnh bào thai phải hấp thụ chất dinh dưỡng từ mẹ, nên mẹ thường gầy Vì vậy, thực tế chăn ni giai đoạn chửa cuối cần phải ý chăm sóc ni dưỡng chu đáo chế độ dinh dưỡng Trong thời gian có chửa Glycogen tích luỹ gan, mỡ trung tính Colesteron máu tăng lên Lượng Hemoglobin máu bình thường, máu nhanh đơng Lượng Ca, P máu giảm xuống vào thời kỳ có chửa sau (có thể dẫn đến bại liệt), lượng K lại tăng lên Hoạt động tim, phổi trở nên khó khăn áp lực bào thai đè lên xoang bụng xoang ngực Qúa trình lưu thông máu, hô hấp tiết bị ảnh hưởng Do vậy, kỳ cuối có chửa vật thường bị phù nề, khó thở, hay tiểu tiện, mệt mỏi, tốt mồ Sự chèn ép thai làm thay đổi tuần hoàn xoang chậu, phù thũng hai chân sau

3.2 Sự biến đổi máy sinh dục

- Buồng trứng: thể tích buồng trứng to lên, khám qua trực tràng ta thấy thể vàng, trâu bị thường thể vàng cịn lợn số thể vàng thường nhiều thai nhi trứng rụng mà không thụ thai bị sẩy thai

28

- Tử cung: thể tích trọng lượng tử cung tăng lên, dây chằng tử cung căng buồng trứng kéo phía trước xuống thấp Máu lưu thông đến tử cung nhiều tạo điều kiện tăng chất dinh dưỡng để nuối bào thai

- Cổ tử cung: bình thường cổ tử cung đóng kín tách biệt tử cung với âm đạo Nhưng có chửa tử cung đóng chặt hơn, niêm mạc dày lên, niêm mạc có tế bào thượng bì tiết niêm dịch keo dính gây tượng đóng nút cổ tử cung Niêm dịch lúc đầu có màu trăng sau chuyển sang màu vàng, đến nâu tuỳ theo tuổi thai Trước đẻ khoảng tuần dịch long chảy ngồi

4 Chẩn đốn có thai gia súc

Gia súc cần chẩn đốn có thai sớm, xác Nếu khơng có quan sinh dục, tượng động dục, rụng trứng, thời gian, phương pháp phối, phẩm chất tinh Nếu có thai có kế hoạch ni dưỡng chăm sóc, sử dụng, khai thác

4.1 Chẩn đoán theo phương pháp lâm sàng

4.1.1 Dùng đực thí tình

Người ta cho đực thí tình vào chuồng gia súc thụ tinh qua chu kỳ, chịu đực chưa có thai Thường dùng cho trâu bị thuận lợi cho sở chăn nuôi tập thể, chăn nuôi công nghiệp

4.1.2 Quan sát bên

Kết hợp quan sát với sờ, nắn, gõ, nghe Khi vật có thai thì:

29

Hình 18 Khám thai qua trực tràng - Không động dục chu kỳ

tiếp theo

- Thời gian đầu vật ăn tốt, hay uống nước -> béo sau gầy

- Ép tay vào thành bụng, nghe tim thai thấy máy động bào thai

30

- Phù tứ chi, phía thành bụng, tuyến vú

- Thay đổi trạng thái cân bằng, đối xứng hai bên thành bụng, độ lớn bụng Phương pháp thường phát tháng chửa cuối

4.1.3 Phương pháp khám qua âm đạo

Dùng mỏ vịt đưa vào quan sinh dục cái, mở thơng qua hệ thống đèn soi hay ánh sáng tự nhiên để phát có thai qua thay đổi thể tích, màu sắc, dịch tiết Phương pháp khó, khơng phát tuổi thai dễ dàng làm sẩy thai, gây viêm đường sinh dục nên làm

4.1.4 Phương pháp khám qua trực tràng

Dùng tay đưa vào trực tràng thơng qua kiểm tra phận quan sinh dục bào thai Được áp dụng cho trâu bò, lợn ngoại, ngựa Đây phương pháp tiên tiến, dễ tiến hành sở sản xuất khơng có trang thiết bị chẩn đốn

a Mục đích

- Chẩn đốn vật có thai hay khơng - Đốn thai tháng thứ

- Xác định phát gia súc mang bệnh sản khoa

b Các để khám thai

- Sự thay đổi rãnh tử cung

- Sự thay đổi thể tích sừng tử cung - Hoạt động động mạch tử cung

- Kích thước thai thể tích núm - Vị trí bào thai

- Thể tích thay đổi bề mặt buồng trứng

31

Chẩn đốn có thai cung cấp cơng cụ hữu ích quản lý hệ thống chăn ni bị thịt Trong chương này, lợi ích kỹ thuật nhà chăn nuôi bò vùng Bắc Australia việc đưa đánh giá giai đoạn khác trình có chửa bị thịt thảo luận ngắn gọn

Không đánh giá thấp tầm quan trọng việc xác định tuổi thai Tỷ lệ có chửa lần phối giống đầu tiên, liên quan với tuổi giống lượng mưa, hình thành nên sở cần thiết để giải thích kết Lập chương trình cách hợp lý để tác động đến tỷ lệ sinh sản thực với ghi chép đầy đủ

Những lợi ích đạt từ việc chẩn đốn có chửa hiệu bao gồm:

1 Lựa chọn bị giống khơng có chửa để loại thải, thay loại thải tuổi

2 Phát đánh giá những yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh sản đàn

3 Đưa biện pháp nhằm giảm nhẹ ảnh hưởng hạn hán bị giống Hình thành nhóm bị theo giai đoạn mang thai, theo mục đích bán, hay đơn giản để quản lý

5 Lựa chọn cách có hiệu để điều trị có bệnh chậm sinh

6 Tránh phối giống bị có biểu động dục lúc có chửa

7 Mua bán hợp lý, ví dụ, bán giống bị loại thải, bán lại bị khơng có chửa

8 Lựa chọn cho mục đích thí nghiệm mà tình trạng, và/hay giai đoạn có chửa ảnh hưởng đến kết

9 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sinh sản

Kiểm tra bò sờ khám qua trực tràng chấp nhận rộng rãi phương pháp thực tế đáng tin tưởng để phát có chửa, ước lượng tuổi thai khơng có số liệu phối giống Điều xác tốc độ nhanh sờ khám qua trực tràng tuổi

Mức độ dễ mà theo chẩn đốn thực cá thể gia súc phụ thuộc vào yếu tố:

1 Giai đoạn có chửa

2 Sự kháng cự gia súc (nhu động)

3 Sự kháng cự gia súc phụ thuộc vào tính khí phương pháp cố định gia súc

4 Số lứa đẻ gia súc

Mỗi yếu tố, đặc biệt kháng cự gia súc, ảnh hưởng đến tốc độ kiểm tra số lượng lớn bò Những yếu tố bổ xung quan trọng bao gồm:

1 Thiết kế xây dựng gióng giá sân kiểm tra

32

Tỷ lệ có chửa đàn

4 Sự có mặt, tỷ lệ đàn hồi phục tử cung sau đẻ hay sẩy thai,

5 Sự thống người kiểm tra có kinh nghiệm kiểm tra số lượng lớn gia súc

Các bước tiến hành, dấu hiệu đặc biệt có chửa để phát việc có chửa, việc xác định tuổi thai, dao động cá thể Vì hầu hết dao động phụ thuộc vào giai đoạn có chửa, nên xác định có chửa giai đoạn đầu thuận lợi so với việc xác định có chửa giai đoạn giai đoạn cuối q trình có chửa

Những đặc điểm khơng có chửa

Bốn đặc điểm phân biệt tử cung bình thường khơng có chửa: Khơng có dịch sừng tử cung

2 Cả hai sừng tử cung có thành dày

3 Cả hai sừng tử cung thn nhỏ phía cuối Cả hai sừng tử cung cong nhẹ

Kích thước, ổn định vị trí tử cung bình thường khơng có chửa thành thục giới tính, lứa đẻ, giống, giai đoạn chu kỳ động dục

Kích thước sừng tử cung từ trước thành thục giới tính đến bắt đầu có chửa có đường kính khoảng 12,7mm dài khoảng 203mm Tăng kích thước tử cung xuất bắt đầu có chửa đến sừng tử cung đạt tới đường kính 38mm, độ dài 356mm Có khác biệt nhỏ xuất kích thước sừng tử cung tương ứng.Trương lực tử cung nhỏ thời kỳ không động dục trước gia súc thành thục giới tính Trương lực tử cung dao động gia súc có chu kỳ Trương lực tăng đặc tính phổ biến gia súc lúc động dục, trương lực trung bình chu kỳ động dục

Tử cung khơng có chửa thường nằm xương chậu Khoảng 5% gia súc đẻ nhiều lứa có tử cung nằm lại xoang bụng sau kết thúc hồi phục sinh lý Phát có khuynh hướng xuất phổ biến bò Brahman giống lai

Phát có chửa sớm

Những thay đổi sớm sờ khám tử cung có chửa là: Thành tử cung mỏng

2 Có dịch tử cung,

3 Không sờ thấy sừng tử cung thon phía cuối

33

Khi sừng tử cung lấp đầy dịch màng ối vào lúc tuần tuổi, sừng tử cung cong lên phía mạch máu màng ối Sức căng tử cung tác động đến thành tử cung làm độ cong sừng có thai khơng làm độ cong sừng khơng có thai

Sự diện núm có mặt thai yếu tố để khẳng định có chửa

Núm xuất thai tuần tuổi Tuy nhiên, thường vào lúc 13 tuần có chửa kích thước núm đủ to để xác định sờ khám qua trực tràng Nhu động thai vào lúc 10 tuần tuổi để xác định có chửa khám thai Trước giai đoạn này, kích thước thai mạch máu màng ối bao quanh làm cho việc xác định thai khó khăn, chí khơng thể xác định

Nhịp đập động mạch tử cung, phía sừng có thai xác định vào lúc 13 tuần tuổi hầu hết bò hậu bị ấn ngón tay lên thành động mạch xác định nhịp đập động mạch Động mạch tử cung có giá trị để xác định có chửa

Kiểm tra Finscher: trượt màng thai xác định tuần thứ 5, sức căng thành tử cung làm cho khó xác định phương pháp thai tuần tuổi

Trong phương pháp kiểm tra phổ biến Mỹ, nhiều người cho phương pháp khơng cần thiết, phương pháp dễ làm bong kết dính núm giai đoạn đầu có chửa, phương pháp kiểm tra nên hạn chế để chẩn đoán phân biệt nghi ngờ có chửa

Có thể sờ khám màng ối có chửa tuần số người dùng để phát có chửa để xác định tuổi thai Vì tim thai dễ xác định hơn, vào mạch máu, màng ối bị bong ra, phương pháp kiểm tra mạch máu màng ối không khuyên dùng

Xác định tuổi thai giai đoạn có chửa

Tuổi thai đốn xác vào tuần thứ đến tuần 13 thời kỳ có chửa Đặc điểm phát triển tử cung sử dụng để đốn tuổi thai mơ tả Bảng Mức độ dịch sừng tử cung để xác định tuổi thai đến tuần tuổi Giữa tuần thứ 13 kích thước tuyệt đối tương ứng sừng tử cung dùng cho xác định tuổi thai

Ở số cá thể, có khơng có màng phát triển sừng khơng có chửa Trong trường hợp này, kích thước tuyệt đối sừng mang thai tăng lên nhanh bình

thường Sừng tử cung cong lên phía căng cứng xuất bên sừng có thai, thành sừng khơng có thai dầy khơng có dịch, khác phát triển bình thường

Khám thai sau có chửa tháng

34

chửa

Sự chửa phải khẳng định sờ khám thai, núm động mạch tử cung

Khám thai phụ thuộc vào kích thước vị trí xác định tất giai đoạn Tuy khơng phải phổ biến, khó chạm đến thai vào tháng thứ thứ 7, đặc biệt từ tháng có chửa thứ đến tháng thứ

Xác định núm không khó Sờ vào phía khối thai xác định núm Động mạch tử cung- số trường hợp, mà thai núm khơng sờ thấy khơng chắn, xác định động mạch tử cung điều cần thiết động mạch tử cung

Ở tháng có chửa thứ 3, động mạch phía sừng tử cung chứa thai có đường kính 3,2mm mờ nhạt Đường kính động mạch tử cung gấp đôi xác định rõ thai tháng Động mạch tử cung tiếp tục phát triển đường kính đạt 12.7mm vào lúc thai tháng, lúc động mạch tử cung đập mạnh, dễ xác định

Ở sừng tử cung không chứa thai, mạch đập động mạch tử cung mờ nhạt thai tháng tuổi xác định rõ thai tháng tuổi

Xác định tuổi thai giai đoạn sau tháng chửa thứ

Kích thước thai dùng để đốn tuổi đến tháng Khi xác định cong xuống thấp tử cung

Xác định tuổi vào giai đoạn cuối có chửa chủ yếu dựa vào kích thước núm Kích thước núm chiều dài tử cung khác cần thiết phải lựa chọn vị trí tiêu chuẩn để đánh giá Vì người ta quy định chung khám núm phía sát cổ tử cung có kết thống thuận tiện việc khám thai

Vị trí thai, nhiều người dùng để xác định tuổi thai, nhiều bị nhầm lẫn biến động lớn Đặc biệt ý khám cho bị bị đói ăn, thiếu nước uống thời gian Trong trường hợp vị trí thai khác so với bị ăn uống đầy đủ

Kích thước thai cần bổ xung thêm để xác định tuổi thai

Ở mức độ hạn chế, quan sát bên ngồi cơng cụ để xác định có chửa giai đoạn đầu Sự phát triển bầu vú sưng mọng âm hộ tốt trước bò đẻ Khi có biểu thai tháng

Các để xác định tuổi thai tổng kết Bảng

Chẩn đốn phân biệt

Bóng đái

• Bóng đái khơng có rãnh chia đơi

• Cổ bóng đái phía hay song song với cổ tử cung, gắn đối ngược với thân tử cung

• Khơng có núm

35

• Tiếp tục kiểm tra xác định tử cung

Tử cung giai đoạn đầu hồi phục

• Khơng có núm khơng xác định động mạch đập • Khơng có va động thai

• Thành tử cung dày • Cổ tử cung to tồn

• Dịch tử cung chất thải dễ thấy âm hộ

• Thể trạng thể phát triển bầu vú để xác định bò đẻ hay sẩy thai

Tử cung giai đoạn cuốí hồi phục

• Thành tử cung dày

• Có dịch thành tử cung khơng căng • Ít vàng buồng trứng

• Đơi quan sát thấy dịch âm hộ • Kiểm tra Finscher- âm tính

Tích mủ , tích nước viêm tử cung

• Thành tử cung dày

• Dịch âm hộ biểu viêm tử cung • Tử cung phía khơng căng lên • Kiểm tra Finscher- âm tính

Viêm nội mạc tử cung

• Thành sừng tử cung dày mềm phía cuối sừng cong nhẹ • Khơng có dịch

• Kiểm tra Finscherếs-âm tính

Viêm tử cung

• Phân biệt với giai đoạn kỳ chửa • Tử cung có thành dày • Khơng có núm

• Khơng thể phát khối thai • Phân biệt với giai đoạn chửa sớm • Tử cung có sừng dày

• Sừng tử cung khơng cong lên phía • Kiểm tra Finscher-âm tính

Thai gỗ

36

• Khối thai “chắc nhão” hay “Cứng đá”

Buồng trứng

• Phân biệt với núm

• Có hình dáng đẹp, có mặt thể vàng • Cứng đồng so với núm • Có vị trí phía bên so với thân tử cung

Các thiết bị gióng giá

Thiết kế xây dựng gióng giá khác ảnh hưởng lớn đến thuận tiện, tốc độ độ an toàn kiểm tra

Cổng bên người kiểm tra tốt Cổng xoay hay kết hợp với cổng trượt ưa thích Nên dùng cổng bên để ngăn cách bò đợi, cổng phải xoay chắn, vừa với người kiểm tra

Việc cố định gia súc lúc kiểm tra nên hạn chế tối thiểu Giữ bò phía đầu thường nhiều thời gian, làm khuấy động đàn Nếu gia súc phải cô lập để kiểm tra cần phải có dây thừng, dây xích hay gỗ chắn ngang phía sau để tránh bị đá

Ở nơi mà hai hay ba bị giữ gióng giá phía trước lối vào phía bên, dây thừng hay gỗ để đề phòng bò đá khơng cần thiết khó thực Với bố trí này, bị kiểm tra giữ lại róng giá để giữ bị lúc kiểm tra

Phương pháp loại bỏ việc cần thiết phải vào chuồng gia súc lần khám an tồn người khám tốc độ khám Khi phương pháp cần thiết,

bò kiểm tra nên giữ lại đến đầy chuồng, sau thả lần khám

Bảng Đặc điểm phát triển bình thường tử cung bò giai đoạn 35-90 ngày tuổi [1]

Dây cố định bị thường buộc từ phía bên qua phía sau gióng giá nơi khơng có cổng trượt Phương pháp áp dụng nơi mà lối vào trượt phía trước gióng giá

37

thứ hai muốn lao phía trước

Xác định tuổi thai cách quan sát mắt

Xác định tuổi thai cách quan sát mắt thường xác định kích thước thai, độ dài chóp mơng, nhận biết phát triển giải phẫu Kích thước hình dáng mạch máu màng ối dẫn hữu ích giai đoạn có chửa sớm

Cho điểm thể trạng chẩn đoán có chửa bị tơ bị cái: nên cho điểm thể trạng bị điểm thể trạng giúp giải thích tượng chửa giúp đưa định quản lý

38

Bảng Đặc điểm bào thai bò qua tháng tuổi [1]

39

Hình 19 Khám thai bị qua trực tràng [2]

d Phương pháp khám thai trâu (tương tự khám thai bò song xê dịch chút trâu

chửa 11 tháng)

e Phương pháp khám thai ngựa

Ở ngựa người ta thương dùng phương pháp khám thai qua âm đạo, kết hợp vởi khám thai qua trực tràng Vì ngựa sau có chửa niêm mạc âm đạo nhợt nhạt, có 40

41

một lớp nhầy trắng đục keo phủ Cổ tử cung co bé lại, nút niêm dịch trắng đục bít hết lỗ ngồi tử cung 75% ngựa phối giống tháng có chửa có triệu chứng

* Chú ý khám thai qua trực tràng cần phân biệt có chửa với khơng có chửa, có chửa với viêm tử cung bệnh phụ khoa khác: viêm tích mủ, viêm tích nước, thai thối

4.2 Chẩn đốn có thai phương pháp phịng thí nghiệm

4.2.1 Phương pháp giáo sư Nguyễn Tấn Ghi Trong (ĐH Y Hà nội)

Dùng axit H2SO4, HNO3, HCl kết hợp với ProlanB có nước tiểu tạo

các phức chất có màu đặc trưng

4.2.2 Phương pháp sinh học phản ứng Galli Mainini

Lấy nước tiểu nghi có chửa tiêm từ 3-5 ml vào túi bạch huyết lưng ếch đực Dưới tác dụng Gonadotropin Estrogen (nếu có) sau thấy tinh trùng nước tiểu ếch lấy từ bóng đái

4.2.3 Phương pháp miễn dịch học

Trong nước tiểu lợn chửa có chứa Prolan (hormone kích sinh dục) có tính kháng ngun mạnh Theo ngun lý miễn dịch học ta gây phản ứng ngưng kết (hoặc ngăn cản trở phản ứng ngưng kết) để phát kháng nguyên Prolan có sẵn nước tiểu để phát kháng thể máu gia súc có thai

Nói chung phương pháp phóng thí nghiệm tốn kém, độ xác chưa cao nên dùng

4.3 Dùng máy khám thai

Hiện việc sử dụng máy siêu âm để khám thai phổ biến trang trại lớn mang lại kết chẩn đoán cao chẩn đốn thai giai đoạn đầu

42

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Joe, B and W.F John, Applied Animal Reproduction 1996

2 Petes, A.R and P.J.H Ball, Reproduction in Cattle Second ed 1998:

Blackwell Science 227

3 Dũng, T.T., D.Đ Long, and N.V Thanh, Sinh sản Gia súc 2002, Hà Nội: NXB Nông nghiệp

4 Giao, H.K., Công nghệ Cấy truyền phôi Gia súc 2003, Hà Nội: NXB Khoa

học Kỹ thuật

5 Knobil, E and J.D Neill, The Physiology of Reproduction Second ed 1994,

New York: Raven Press

CÂU HỎI ÔN TẬP

1 Thời gian mang thai số lượng thai số loài gia súc học? Các loại màng thai (vẽ hình)?

3 Sự biến đổi gia súc có thai?

42

CHƯƠNG III.

QUÁ TRÌNH SINH ĐẺ Ở GIA SÚC

Mục đích: Trình bày biến đổi mang thai gia súc mẹ (cùng với

bào thai) phương pháp chẩn đốn gia súc có thai, từ có biện pháp chăm sóc, quản lý hợp lý

Thời lượng giảng dạy: tiết

I NHỮNG YẾU TỐ THÚC ĐẨY QUÁ TRÌNH SINH ĐẺ

Khái niệm: Gia súc mang thai thời gian định (tuỳ theo giống

loài), bào thai phát triển đầy đủ, gia súc mẹ đẩy thai ngồi với màng nhau, dịch thai Q trình gọi đẻ

1 Học thuyết áp lực

Khi thai tử cung mẹ phát triển đầy đủ thời kỳ cuối, bào thai áp sát vào tử cung cổ tử cung làm cho áp lực đường sinh dục thay đổi Đồng thời bào thai dị vật với máy động thai nhi gây kích thích mạnh làm cho đường sinh dục mẹ tăng cường trình hưng phấn Khi áp lực kích thích giới bào thai đạt đến mức độ định gây cho gia súc xuất co bóp tử cung làm cho cổ tử cung mở xuất trình sinh đẻ

2 Học thuyết kích tố

2.1 Kích tố từ mẹ

Vào thời kỳ trước đẻ có thay đổi hàm lượng kích tố máu nước tiểu, tăng lên cao Oestrogen ngược lại hàm lượng Progesteron lại giảm thấp Sự thay đổi làm cho tăng hưng phấn mạc làm cho mạc trở nên nhạy cảm với kích thích bên ngồi, đặc biệt có mặt Oestrogen làm tăng co bóp tử cung

43

2.2 Kích tố từ (thai)

Các xung động thần kinh từ Hypothalamus bào thai kích thích tuyến n bào thai giải phóng ACTH (Adromo-corticotrophic Hormone) Điều tác động thúc đẩy sản xuất Corticosteroid từ tuyến thượng thận bào thai Corticosteroid tác động lên thai tử cung, kích thích sản xuất Prostaglandin làm cho phân giải thể vàng xảy nhanh chóng, dẫn đến hàm lượng Progesteron khơng cịn Sự co rút tử cung khơng bị kìm hãm, nội mạc tử cung co rút theo nhịp điệu dẫn đến tượng đẻ [2]

Nói chung, nguyên nhân gây tượng đẻ cịn có nhiều điều chưa giải thích đầy đủ xác có khác lồi nên cịn nghiên cứu

II VỊ TRÍ, CHIỀU HƯỚNG VÀ TƯ THẾ THAI 1 Vị trí

Động vật nhai lại thường nằm sừng tử cung bên phải (trường hợp song thai bên sừng tử cung)

Thai ngựa nằm thân gốc sừng tử cung

Thai lợn nằm rải rác cách sừng tử cung, thường số lượng thai sừng không

2 Chiều thai

Chỉ mối quan hệ xương sống mẹ xương sống thai

2.1 Thai dọc: Xương sống thai song song với xương sống mẹ (đây trường

hợp đẻ dễ)

+ Thai dọc đầu: đẻ đầu trước (đẻ xuôi)

+ Thai dọc đuôi: đẻ trước (đẻ ngược) Thường thấy bị, dê, cừu

2.2 Thai ngang: Xương sống mẹ thai ngang

vng ta có thai thẳng góc thợ Do ta có thai thẳng góc thợ hơng, thẳng góc thợ bụng thẳng góc thợ lưng

Đây trường hợp đẻ khó, cần phải can thiệp

3 Hướng thai: Chỉ mối quan hệ lưng thai lưng mẹ

+ Thai sấp: lưng mẹ lưng thai phía + Thai ngửa: bụng thai quay lên

+ Thai nghiêng: nêu lưng thai quay sang bên lưng mẹ

4 Tư thai: Chỉ mối quan hệ phận: đầu, đuôi, chân thân thai

Nếu tư thai khơng bình thường gây nên tượng đẻ khó Trước đẻ, chiều hướng tư thai phải đạt yêu cầu sau:

- Chiều thai: dọc đầu hay dọc đuôi - Hướng thai: sấp

- Tư thế:

+ Thai dọc đầu, sấp đầu cổ thai phải gác lên chân trước, duỗi thằng

và

+ Thai dọc đi, sấp thai phải nằm chân sau duỗi thẳng

và

Hình 20 Thai bình thường

44

Qua vị trí móng ta phân biệt chân trước hay chân sau, sấp hay ngửa…, để từ phán đốn tư thai Nếu tư thai không tư thai đẻ khó

Hình 21 Một số trường hợp thai đẻ khó

III QUÁ TRÌNH ĐẺ

1 Những biểu gia súc trước sinh đẻ

a Biểu toàn thân: Trước đẻ (đối với trâu bò khoảng tuần, lợn khoảng vài ngày) vật thường tỏ băn khoăn, ăn uống thất thường Ở lợn có tượng tha rác làm tổ Ở trâu bị có tượng sụt mơng Con vật thường đái dắt, đại tiện nhiều phân khơng có khn (đặc biệt trâu bị) Nhiệt độ, tuần hồn hơ hấp thể tăng chút

b Biểu cục đường sinh dục: Trước đẻ khoảng tuần đến ngày (tuỳ loài) nút niêm dịch cổ tử cung lỗng có dịch chảy ngồi Khi đẻ, quan sinh dục có thay đổi, rõ âm môn, âm hộ trở nên phù mềm, bầu vú căng to, xệ xuống, tĩnh mạch vú rõ

45

46

2 Quá trình sinh đẻ

a Giai đoạn trước đẻ (Thời kỳ mở cổ tử cung)

Là thời kỳ q trìnhg sinh đẻ tính từ co bóp đến lúc cổ tử cung mở hồn tồn Mỗi lần tử cung co bóp khoảng 1-2 giây khoảng cách lần co bóp khoảng 20-30 giây Đối với trâu bò (động vật đơn thai) co bóp tử cung đầu mút sừng tử cung Đối động vật đa thai lợn co bóp bọc thai gần cổ tử cung nhất, bọc thai khác xa trạng thái yên tĩnh Thai bọc thai dần vào cổ tử cung phân tách Màng niêu màng ối căng phồng đè lên kích thich cổ tử cung khung xương chậu mở tạo điều kiện cho thai

Kết thúc giai đoạn này, cổ tử cung khung xương chậu mở hồn tồn tạo thành đường thơng suốt Nước ối chảy từ bọc ối bị vỡ Giai đoạn mở tử cung trâu bò ngựa khoảng (1-12 giờ), lợn khoảng 3-6 Con vật thường đau, kêu la vật vã

b Giai đoạn đẩy thai

Giai đoạn từ cổ tử cung mở hoàn toàn thai Đây giai đoạn quan trọng q trình sinh đẻ Giai đoạn co bóp tử cung đặc biệt mạnh Ở gia súc đơn thai thời gian co bóp khoảng 2-5 giây khoảng cách co bóp 2-5 phút

Nếu tư thế, chiều hướng thai bình thường, quan sinh dục khơng có tượng bệnh lý, hệ thống nội tiết hoạt động bình thường thai lọt ngoài, ngược lại chuyển sang tượng đẻ khó Đối với trâu bị ngựa thời gian đẩy thai khoảng 15-30 phút, chậm 30 phút cần can thiếp khơng thai chết ngạt Đối với lợn, thời gian kéo dài 1-4 giờ, bình thường xổ cách 5-10 phút, mà thai không xổ, xổ khơng hết phải can thiệp

Con vật rặn đẻ để đẩy thai với tượng đứng ngồi không yên, chân cào đất, kêu la, trang thái đau đớn cong lưng rặn, đuôi, nghiến răng, nín thở…

c Giai đoạn bong

47

Thời gian bong trâu, bò khoảng 4-6 sau đẻ, ngựa 20-60 phút, lợn 10-60 phút, dê cừu 1-2

Đối với trâu bị khơng bong hết sau 12 cần phải can thiệp sau thời gian cổ tử cung đóng lại khó can thiệp, mặt khác bị hoại tử khó lấy Đối với lợn, không đẩy hết, nhiều hay cịn tồn lại gây viêm tử cung, vài trường hợp dẫn đến viêm vú

d Giai đoạn hồi phục tử cung

Đối với trâu bò sau đẻ ngày nước thai cịn màu đỏ sẫm có chất lợn cợn Nếu sau 10 ngày sản dịch viêm tử cung Đối với lợn sản dịch hơn, lúc đầu đỏ, 2-3 ngày ngừng chảy

Thời gian hồi phục tử cung sau đẻ phụ thuộc lớn vào giai đoạn trinh đẻ

IV PHƯƠNG PHÁP ĐỠ ĐẺ CHO GIA SÚC 1 Đỡ đẻ bình thường

1.1 Đỡ đẻ cho lợn

Gần đến ngày đẻ lợn ta phải cử người trực ngày lẫn đêm 60-70% lơn bắt đầu đẻ vào ban đêm Chuồng trại đảm bảo vệ sinh, yên tĩnh

a Chuẩn bị dụng cụ

- Bông băng, buộc rốn, giẻ lau, thúng nhốt lợn - Panh, keo, kìm (hoặc bấm móng tay)

- Cồn sát trùng, số loại thuốc (Oxytoxin, vitamin K, B1, C…)

b Phương pháp đỡ

48

Chú ý: Trong đẻ lợn mẹ ăn lợn con, ăn đè chết nên phải có người trực

Khi lợn đẻ xong khoảng ta cho dự định để nuôi vào bú sữa đầu Cần cố đinh vú cho lợn, yếu nên cho bú gần ngực

Để tránh tượng sót nhau, ta gom lại sau lợn đẻ hết, số lợn nhau, khơng sót [3] [4]

1.2 Phương pháp đỡ đẻ cho trâu bò a Chuẩn bị dụng cụ chuồng trại

- Bông băng, buộc rốn, giẻ lau

- Cồn sát trùng, số loại thuốc (Oxytoxin, vitamin K, B1, C…)

- Chuẩn bị dụng cụ sản khoa (nếu cần thiết) - Chuồng trại vệ sinh, yên tĩnh

b Phương pháp đỡ

- Dùng nước muối 5% thuốc tím 1l rửa âm hộ, bầu vú phần thân sau - Nếu trâu bị gầy yếu tiêm thuốc trợ tim, trợ sức trước đẻ

- 30 phút - sau vỡ ối thai không ta phải can thiệp

- Khi bê nghé vừa đẻ dùng ngón tay kẹp dây rốn, vuốt ngược phía bụng thai cắt dây rốn khoảng 10-12 cm, dùng cột dây rốn sau sát trùng cồn Iod 5%, dùng tay móc nhớt miệng, dùng rơm rạ, bao tải lau nhớt người, lau ngược lông để tạo điều kiện cho tuần hồn, hơ hâp lưu thơng (nếu bị sữa tách ngay, trâu bị gia đình mẹ liếm con)

- Nếu bê nghé bị ngạt ta hô hấp nhân tạo

- Nửa sau đẻ cho trâu bị uống nước ối pha thêm muối - Dùng nước muối rửa phận sinh dục, bầu vú, thân sau

- Sau cho bê nghé bú sữa mẹ, thiết phải cho bê, nghé bú sữa đầu

2.1 Các trường hợp đẻ khó

- Vị trí, tư thế, chiều hướng thai khơng bình thường

- Rặn đẻ yếu - Đẻ khô

- Xương chậu hẹp

- Cổ tử cung hẹp số trường hợp khác

2.2 Nguyên nhân

2.2.1 Nguyên nhân mẹ

- Do vật gầy yếu dẫn đến rặn đẻ yếu

- Do phần mêm cổ tử cung, âm đạo, âm hộ dãn nở không tốt

- Do khung xương chậu hẹp méo, khớp bán động háng khơng bình thường

- Do tử cung bị xoắn, vặn [5] Hình 22 Dùng thừng kéo hàm tư đầu

cổ bị nghẹo sang bên

Hình 23 Tay nắm chặt đầu móng, kéo thăng

trước 2.2.2 Nguyên nhân thai

49

- Kích thước thai tro

- Vị trí, tư thế, chiều hướng thai khơng bình thường - Do qi thai

2.2.3 Can thiệp

* Chú ý: Kiểm tra thai sống hay chết Nếu thai chết phải can thiệp ngay, thai sống chờ thời gian cở tử cung mở hoàn toàn kiểm tra sửa lại tư thế, chiều hướng thai

50

Hình 25 Tư khuỷu chân sau trước, dùng

cần đẩy sản khoa để kéo thẳng chân sau

- Dùng thuốc để can thiệp: Tiêm kích tố hậu yên Oxytoxin với liều lượng 5-10 UI/5-100kg P để tăng cường co bóp tử cung Nếu thai có phần qua cổ tử cung khơng tiêm tránh vỡ tử cung chết thai

a Phương pháp đỡ đẻ qua âm đạo

* Phương pháp đỡ đẻ cho lợn

+ Chuẩn bị dụng cụ đỡ đẻ thường

+ Vô trùng phận sinh dục lợn phần sau Vô trùng tay người can thiệp cồn Iod 5% cồn 70% Xoa Vazơlin paraphin dầu vào tay

định đưa vào tử cung

Hình 24 Dùng cần đẩy biến xương ngồi

trước thành khuỷu chân sau trước

+ Cách đỡ: Đưa tay trực tiếp qua âm đạo, vào tận cổ tử cung, thân tử cung vào tận sừng tử cung đỡ (chú ý vị trí cần để kéo) Khi thai kéo khỏi đường sinh dục tiếp tục đỡ đỡ đẻ bình thường

+ Sau đỡ xong thụ vào tử cung Peniciline 500.000 UI, Streptomicin 1g 20 ml nước

* Phương pháp đỡ đẻ cho trâu bò

Như cho lợn ý đỡ đẻ dùng tay kiểm tra, sửa lại chiều hướng tư thai (có thể dụng cụ sản khoa) cho bình thường kéo thai theo nhịp rặn mẹ Khi kéo vừa kéo vừa nâng không mắc kẹt xương háng không

b Phương pháp mổ bụng lấy thai

Hình 26 Mổ bụng lấy thai a Phương pháp mổ hông bên phải

b Phương pháp mổ bụng lấy thai

PHỤ LỤC

KỸ THUẬT MỔ BỤNG LẤY THAI

Nếu gia súc đẻ khó, thai q to thai cịn sống mà khơng thể lấy biện pháp tốt mổ bụng lấy thai kịp thời, cứu mẹ [6]

• Các trường hợp sau định mổ bụng lấy thai

51

52

- Cổ tử cung hẹp, phần màng thai vào âm đạo cổ tử cung không

mở to thai không

- Tử cung bị xoắn không sờ vào thai

- Rặn đẻ yếu, tiêm thuốc kích thích khơng có hiệu

- Thai to tư thế, hướng, vị tri thai khơng bình thường mà khơng thể

xoay lấy thai

- Thai bị thủy thũng nặng

- Nước thai nhiều, nguy hiểm đến tính mạng bị mà khơng thể lấy

thai

• Khơng mổ bụng lấy thai trường hợp:

- Thai chết lâu, thối Nếu mổ bụng mẹ lấy thai gây viêm phúc mạc, nhiễm

trùng huyết làm chết bò mẹ

- Bò mẹ đẻ kéo dài kiệt sức

1 Yêu cầu mổ bụng lấy thai

- Phải tiến hành sớm tốt - Chuẩn bị dụng cụ, thuốc men đầy đủ

- Thao tác nhanh, xác tránh để ruột bị mẹ lịi ngồi

- Khơng để nước chảy vào xoang bụng, gây viêm phúc mạc - Vết khâu tử cung phải thật kín

- Điều trị chống nhiễm trùng toàn thân sau mổ

2 Phương pháp mổ

Có phương pháp: Mổ bụng mổ bên hơng Vị trí mổ: Có thể chọn vị trí mổ sau đây:

- Phía trái, cách tĩnh mạch vú trái từ 5-8 cm

53

- Đường trắng bụng

- Cách tĩnh mạch vú phải từ 5-8 cm

Mổ vị trí phái phải đường trắng có ưu điểm cỏ khơng trở ngại cho việc lơi tử cung ra, vị trí vết mổ thành bụng nên dễ làm cho ruột lòi

Chuẩn bị: Đặt vật bên trái đệm cỏ khô, dày, sạch, bên phủ vải sạch, trói hai chân trước với nhau, hai chân sau với Đè chặt đầu bị xuống Nếu có bàn mổ thỉ đặt bị lên bàn

Sát trùng: Cạo lông chỗ mổ, rửa xà phịng, lau khơ bơi cồn Iod Xung quanh chỗ mổ đặt vải vơ trùng Tồn nơi mổ, dụng cụ mổ tay người mổ vô trùng cẩn thận theo phương pháp ngoại khoa

Gây tê: Gây tê theo dọc vết mổ dung dịch Novocain 2%, tiêm da Trước vật nằm cần tiêm gây tê màng cứng tủy sống

3 Tiến hành mổ: Xem tài liệu Giáo trình ngoại khoa thú y 4 Hộ lý

- Tiêm kháng sinh trự sức cho bị ngày

- Vết thương khơ, liền mép sau 10 ngày cắt - Nuôi dưỡng tốt giữ vệ sinh chuồng trại

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Xưxoep, A.A., Sinh lý sinh sản gia súc 1985, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 429

2 Martin, H.J and J.E Barry, Essential Reproduction Fifth ed 2000: Blackwell

Science 1-274

3 Dân, T.T., Sinh sản heo nái sinh lý heo 2004, Hà Nội: NXB Nông

nghiệp 80-90

4 Hughes, P.E and M.A Varley, Reproduction in the Pig 1986?

5 Petes, A.R and P.J.H Ball, Reproduction in Cattle Second ed 1998:

Blackwell Science 227

6 Lăng, P.S and B.Đ Phong, Bệnh Sinh sản Kỹ thuật thực hành ngoại khoa

ở bò sữa 2002, Hà Nội: NXB Nông nghiệp

54

Yếu tố thúc đẩy trình sinh đẻ gia súc theo thuyết áp lực thuyết kích tố từ

mẹ?

2 Yếu tố thúc đẩy q trình sinh đẻ theo thuyết kích tố từ con? Vị trí, chiều hướng tư thai?

4 Những biểu gia súc chuẩn bị sinh đẻ giai đoạn trình sinh đẻ?

HỌC PHẦN II

CÔNG NGHỆ SINH SẢN - - - - - -

Yêu cầu chung: Nắm kỹ thuật tiên tiến nhằm chủ động điều khiển

trình sinh sản theo ý muốn người

GIỚI THIỆU

Kỹ thuật sinh sản biện pháp then chốt để trì phẩm giống, phát triển đàn, tạo nhiều sản phẩm thịt, sữa, trứng… phục vụ nhu cầu thực phẩm ngày tăng số lượng chất lượng Năng suất sinh sản chăn ni nước ta cịn thấp Theo tổng kết Hội Chăn nuôi VN (2000) lợn nái lứa đẻ (1,5 – 1,6 lứa đẻ/nái/năm), số lợn sinh ni thấp khả sản xuất thịt bình quân l nái đạt 550-600 kg thịt/nái/năm 1/3 tiêu nước khu vực Khoảng cách lứa đẻ đàn trâu bị sinh sản bình qn 20-24 tháng (tỉ lệ đẻ 50-60%), nước chăn nuôi tiên tiến tiêu 14-15 tháng/bê/cái sinh sản (tỉ lệ đẻ 80-85%)… Năng suất sinh sản thấp nguyên nhân hàng đầu làm cho hiệu chăn ni thấp chí cịn bị thua lỗ

Những nguyên nhân ảnh hưởng trực tiếp gián tiếp đến suất sinh sản gia súc có nhiều ý có nguyên nhân sau:

a Chế độ nuôi dưỡng không hợp lý

Dinh dưỡng đầy đủ (không thiếu, không thừa), phần thức ăn hợp lý, đáp ứng nhu cầu mẹ giai đoạn sinh trưởng phát dục, mang thai, trước sau đẻ, nuôi con… làm biện pháp hữu hiệu đẻ nâng cao suất sinh sản gia súc

b Trình độ quản lý tay nghề thấp

Trong chăn ni hộ gia đình (nhất trâu, bị, dê) khơng thực phân đàn, phân lô cách, chuồng trại chật chội dẫn đến vấn đề cản trở việc phát sớm gia súc động dục, gia súc có chửa dễ bị sẩy thai, chí bê nghé sơ sinh bị dẫm chết… Mặt khác hàng năm không tiến hành loại thải gia súc còi cọc có bệnh đường sinh dục can thiệp nhiều lần không khỏi làm cho suất sinh sản đàn thấp

c Thời tiết khí hậu

Điều kiện khí hậu mơi trường khơng thuận lợi có ảnh hưởng đến hoạt động sinh dục gia súc mức độ khác Trâu cái, dê cừu nhạy cảm với thay đổi nhiệt độ- ẩm độ khơng khí Mùa hè oi mùa đông giá lạnh trâu cái, dê ngừng động dục, đến lúc thời tiết trời mát mẻ (từ tháng 9-11 từ tháng 2-5) trở lại động dục (mùa động dục) Ở bò hoạt động sinh sản quanh năm thường tập trung vào mùa hè hè thu Vì vậy, mùa động dục (đối với trâu dê cừu cái) nêu ta không tập trung cố gắng đẻ phát kịp thời phối giống lúc cho gia súc se làm cho suất sính sản chúng giảm sút

d Bệnh lý

Một số bệnh làm giảm khả sinh sản gia súc

- Các bệnh sản khoa đặc biệt bệnh liên quan đến đường sinh dục Ví dụ: nhiễm bệnh máy sinh dục sau đẻ nhiễm trùng cục hay toàn bộ, sát nhau, lộn tử cung, âm đạo…; tượng khả sinh sản (liệt dục, ngừng hoạt động tính dục, động dục ngầm, chù kì khơng rụng trứng…)

- Mất cân nội tiết Ví dụ tồn lưu thể vàng làm cho gia súc không động dục; tỉ lệ FSH/LH khơng thích hợp làm cho gia súc động dục mà không rụng trứng; cân đối Progesteron Oestrogen q Progesteron làm khơng bảo đảm điều kiện tốt nội mạc tử cung để phôi làm tổ nhiều Oestrogen gây nên động dục mức liên tục…

- Rối loạn di truyền Đột biến di truyền, tương tác kết hợp gen khơng bình thường đực tác động điều kiện sống bên ngồi (ánh sáng, nhiệt độ, hố chất…) làm biến đổi hệ thống gen (chuyển đoạn, hoà tâm…) đưa đến hoàn toàn giảm khả sinh sản vật nuôi

Khắc phục nguyên nhân nêu biện pháp tương ứng có hiệu (chế độ dinh dưỡng hợp lý, cải tiến nâng cao trình độ quản lý kinh tế-kỹ thuật chăn nuôi thú y, thực tốt quy trình cơng nghệ TTNT, cấy truyền phơi, điều hồ sinh sản hormone…) chắn nâng cao suất sinh sản đàn gia súc

CHƯƠNG IV.

KỸ THUẬT THỤ TINH NHÂN TẠO GIA SÚC

Mục đích: Trình bày kỹ thuật huấn luyện đực giống, kỹ thuật khai thác tinh dịch,

kỹ thuật kiểm tra đánh giá chất lượng tinh dịch, đặc tính tinh trùng, pha chế, bảo quản tinh dịch kỹ thuật dẫn tinh

Thời lượng giảng dạy: 20 tiết (15 tiết lý thuyết tiết thực hành)

* Khái niệm

Thụ tinh nhân tạo biện pháp khoa học chăn nuôi, thông qua số biện pháp kỹ thuật, người lấy tinh từ đực giống để thụ tinh nhân tạo cho nhằm phát huy khả sản xuất gia súc tốt

I LỊCH SỬ CỦA KHOA HỌC THỤ TINH NHÂN TẠO 1 Lịch sử giới

Lich sử phát triển kỹ thuật thụ tinh nhân tạo (TTNT) gia súc giới trải qua nhiều giai đoạn Thời kỳ sơ khai phải kể đến I.I Ivanov (Nga), L Spallanzani (Italia) sau Bibbiena người làm thí nghiệm tằm để thụ tinh nhân tạo Truyền thuyết kể thụ tinh nhân tạo bắt nguồn từ kỷ XIV nói rằng: Một tù trưởng lạc muốn có dịng ngựa tốt lạc thù địch, đêm tối sai người hứng tinh dịch ngựa đực đối thủ vào nắm nhét vào âm hộ ngựa Ít lâu sau ngựa ơng ta có chửa sinh ngựa ông mong muốn Năm 1898 Heape (Anh) phát chu kỳ sinh dục gia súc làm tảng khoa học cho kỹ thuật thụ tinh nhân tạo Ở Mỹ, Pearson Harrison phát phương pháp dẫn tinh ngựa bò

Sự bùng nổ kỹ thuật thụ tinh nhân tạo đạt sau Joseppe Amantea, người Italia phát minh âm đạo giả năm 1914 Phát minh giải loạt khó khăn việc lấy tinh loại gia súc ngựa loài cỏ

I.I Ivanov (1917) với V.K Milovanov (1934) người đưa sở khoa học thực nghiệm pha loãng bảo tồn tinh dịch với dung dịch điện giải (NaCl, KCl), Phillips (1940), Salisbury (1943) cải tiến mơi trường pha lỗng bảo tồn với lòng đỏ trứng gà, Na-Citrate, kháng sinh thúc đẩy phát triển lĩnh vực thụ tinh nhân tạo gia súc ngày hoàn thiện theo thời gian có phát triển mặt quy mô lẫn chiều sâu ngày [2-4]

2 Lịch sử Việt nam

Ở Việt nam, kỹ thuật TTNT năm 1957 Học viện Nông - Lâm, trường Đại học nông nghiệp I thuộc huyện Gia Lâm - Hà Nội Năm 1958, TTNT tiến hành cho lợn An Khánh - Hà Tây Đầu năm 1960, TTNT cho bò, 1961 TTNT cho trâu, 1964 cho ngựa Vào năm 70, sở đông lạnh tinh dịch bò dạng viên Cuba viện trợ tiến hành Moncada thuộc Ba Vì - Hà Tây Năm 1986, Viện Chăn nuôi ứng dụng thành công TTNT cho gà, năm 1990 cho ngỗng, 1991 TTNT lai xa ngan vịt, 1995 TTNT cho dê, 1997 TTNT cho chó nghiệp vụ

Cho đến nay, TTNT cho lợn, bị phát triển Cả nước có 79 trạm (năm 1999) 36 phân trạm với 2.000 cán kỹ thuật hàng vạn dẫn tinh viên, số lượng lợn, bò đực giống sử dụng vào TTNT 1.500 [5, 6]

II LỢI ÍCH VÀ BẤT LỢI CỦA TTNT GIA SÚC 1 Lợi ích

- Nâng cao khả truyền giống đực

Bằng cách TTNT lợn đực phụ trách 250 - 350 lợn (đực nội) 1000 - 2000 lợn (đực ngoại) Đối với bị, đực phụ trách hàng vạn bị (vì lần xuất tinh bò đực cho 200 liều tinh lợn đực cho 30 - 40 liều tinh)

- Nâng cao phẩm chất chung đàn gia súc

Vì dùng số đực giống chọn lọc kỹ càng, với chất lượng tinh dịch tốt đem dẫn cho gia súc đặc điểm tốt truyền cho đời sau - Có thể mang tinh dịch xa

Vì tinh dịch dùng chất thích hợp để pha chế dùng nhiệt độ thích hợp để bảo tồn Ví dụ :Tinh dịch lợn nhiệt độ 16-18 oC giữ 3-4 ngày (lợn ngoại), lợn nội giữ 1-2 ngày Đặc biệt tinh dịch bò, phương pháp ướp lạnh giữ 8-10 năm

- Tránh lây lan số bệnh qua đường tiếp xúc

- Khắc phục khó khăn chênh lệch lớn tầm vóc giao phối trực tiếp

Ví dụ lợn đực ngoại nặng chừng 300-400 kg lợn nội nặng trung bình 50-60kg hay bị đực ngoại nặng - 1,5 bò nội khoảng 180-250 kg nên khó giao phối trực tiếp

- Trong công tác lai tạo chăn nuôi công nghiệp với số lượng gia súc động dục đồng loạt với công thức lai tạo giống khác có biện pháp TTNT giải vấn đề

- Kéo dài thời gian sử dụng đực giống

Ví dụ nhảy trực tiếp lợn đực ngoại sử dụng khoảng 1,5-2 năm TTNT dùng 4-5 năm

- Có hiệu kinh tế lớn hẳn gia súc đực nhảy trực tiếp

Ví dụ: Giá trị tiền thu từ TTNT gấp từ 5-6 lần so với nhảy trực tiếp lợn hàng trăm lần bò

2 Bất lợi

- Kỹ thuật TTNT đòi hỏi người làm kỹ thuật nắm sinh lý sinh sản thú y, người trung thành, yêu nghề, đào tạo

- Cần vốn ban đầu cao

- Đòi hỏi thời gian lâu hơn, cơng đoạn qúa trình thụ tinh diễn nhịp nhàng ăn khớp với

- TTNT khơng có kiểm tra tốt làm lây lan bệnh tật thông qua sinh sản

III MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM VỀ SINH LÝ SINH SẢN CỦA GIA SÚC ĐỰC

(Đã nghiên cứu Học phần 1)

IV KỸ THUẬT KHAI THÁC TINH DỊCH CỦA GIA SÚC

1 Phản xạ tính dục đực

Phản xạ tính dục chuỗi phản xạ, biểu hành vi động tác mn hình mn vẻ, để kích thích lồi, thơng qua đực thực chức sinh sản

1.1 Phản xạ săn đuổi (trò sơ bộ)

Phản xạ săn đuổi phản ứng tồn thân đực để kích thích loài dẫn đến khả giao phối với Đực giống bình thường đến giai đoạn thành thục sinh dục có phản xạ này, khơng có đực giống khơng bình thường khả sinh sản Thường đực phát quan cảm thụ thính giác, thị giác, khứu giác Khi tiếp xúc với thường ngửi phân, ngửi nước tiểu, ngửi phận sinh dục dùng mõm hích vào lưng, vào bụng để kích thích Ở gia cầm đực tiếp xúc với thường đạp chân, xả cánh đuổi theo Nhìn chung lồi gia súc khác cách thể phản xạ khác Đây phản xạ ban đầu sở để thực phản xạ khác ta cần tạo điều kiện để gia súc thực phản xạ cách đầy đủ

Gia súc có phản xạ biểu thời kỳ động dục, vật thường bỏ ăn, phá chuồng, kêu la tìm đực, biểu rõ bị

1.2 Phản xạ cương mơ giao cấu

Phản xạ bắt nguồn từ phản xạ săn đuổi làm trương phồng quan giao cấu Ở gia súc đực máu động mạch phân nhánh nhiều đến dương vật kết thúc quan cương tạo thành xoắn ốc, dẫn đến tượng trương phồng cương cứng dương vật Đây phản xạ tạo điều kiện cho phản xạ giao cấu phản xạ phóng tinh tốt ngược lại Chính mà ta cần tạo điều kiện gia súc thực phản xạ thật tốt

Ở có phản xạ hưng phấn sinh dục đến đỉnh cao máu dồn lên tiền đình âm đạo làm cho tiền đình âm đạo trương phồng

* Chú ý: nhiều đực hăng : ta đưa vào giá vội vã nhảy lên ngay, thường nhảy khơng thành cơng

1.3 Phản xạ giao cấu

Phản xạ xảy đực cái, hai quan sinh dục tiếp xúc với nhau, toàn thể đực, hưng phấn mức độ cao (mất phản xạ thường ln phản xạ phóng tinh)

+ Ngựa có kiểu giao cấu có cưa, đạt tới trạng thái hưng phấn cao dương vật đưa sâu vào tử cung để thực phản xạ phóng tinh

+ Bị có phản xạ tìm ngắn hơn, biểu cử động nhịp xương chậu kết hợp với cử động dương vật đưa dương vật tiếp xúc với mơi to âm đạo Lúc kích thích tiểu thể xúc giác (nằm niêm mạc dương vật) bị bắt đầu thực phản xạ phóng tinh

+ Lợn động tác tìm lâu hơn, dương vật xoay nhiều lần, đưa vào rút cuối dương vật đưa qua cổ tử cung để thực phản xạ phóng tinh

1.4 Phản xạ phóng tinh

Phản xạ phóng tinh phản xạ cuối chuỗi phản xạ sinh dục Nó liên quan đến nhiều phản xạ nâng dịch hoàn lên để co bóp phóng tinh ngồi Đây phản xạ quan trọng nhất, trực tiếp ảnh hưởng đến phẩm chất tinh dịch ta phải đặc biệt ý tạo điều kiện để gia súc xuất tinh tốt, đặc biệt yếu tố kỹ thuật nhiệt độ, áp suất, độ nhớt âm đạo giả yếu tố kỹ thuật khác Phản xạ động vật khác biểu khác nhau:

+ Ngựa phóng tinh cử động nhịp đi, có lúc rên khẽ, phóng tinh phần Giai đoạn đầu dịch lỗng khơng có tinh trùng, giai đoạn thứ hai dịch có màu trắng sữa, nồng độ tinh trùng mức độ cao, giai đoạn thứ ba dịch nhầy keo, tinh trùng

+ Bị trâu phóng tinh thực phản xạ thúc Thời gian phóng tinh trâu, bị ngắn vòng 3-4 giây (cần lưu ý: trâu, bị chưa thực phản xạ thúc chưa phóng tinh)

+ Lợn suốt thời gian phóng tinh nằm im giá, dương vật cử động Lợn lượng tinh dịch nhiều nên tinh dịch chảy trực tiếp vào tử cung Theo Burger 1952 mổ khám tử cung sau 15 phút thực phản xạ phóng tinh tử cung đầy tinh dịch Lợn phóng tinh phần giống ngựa thời gian phóng tinh lợn lâu hơn, kéo dài từ 10 - 15 phút, có kéo dài tới 30 phút

* Một số đặc điểm cần lưu ý:

- Hưng phấn sinh dục giảm sau đực hoàn thành "bài thể dục" nghĩa thực xong tồn q trình giao phối

- Ngừng giao phối nghỉ khai thác tinh dịch thời gian đực tăng hưng phấn sinh dục phẩm chất tinh dịch lại giảm có nhiều tinh trùng già Nếu tượng kéo dài gây nên tượng tự dâm Thí dụ lợn cạ dương vật vào tường chuồng để phóng tinh, bò trâu qùy hai chân trước thúc dương vật vào yếm để phóng tinh

2 Điều kiện để huấn luyện tốt đực giống

2.1 Tuổi huấn luyện

Đực giống đưa vào huấn luyện tuổi phải non (tuổi dậy thì) tuổi dễ cảm hóa vật đồng thời tuổi vật có tinh hăng sinh dục, cịn tuổi trưởng thành thi khó huấn luyện tính bảo thủ cao

+ Lợn nội 5-6 tháng tuổi, lợn ngoại 7-8 tháng tuổi

+ Trâu, bò 18-24 tháng tuổi, hai năm thường khó huấn luyện

2.2 Chế độ chăm sóc ni dưỡng

Trước đưa đực giống vào huấn luyện khoảng 20 ngày cần cho gia súc ăn theo chế độ đực giống làm việc, phần ăn phải đảm bảo cân đối chất, đặc biệt protein, canxi, phốt loại Vitamin A, D, E

Cùng thời gian người huấn luyện phải tiếp xúc với đực để làm quen cách cho gia súc vận động, tắm chải, xoa bóp dịch hồn

2.3 Lịch huấn luyện

Phải đảm bảo tuần không hai lần qui định (tốt khoảng từ 5-7 sáng)

2.4 Người huấn luyện

Người huấn luyện phải kiên trì tránh nơn nóng, tránh hành vi thơ bạo : đánh đập gia súc phải cố định người huấn luyện có cố định người huấn luyện theo dõi cá tính để chiều theo ý thích chúng

2.5 Phịng giá huấn luyện

Phòng huấn luyện phải rộng đủ cho gia súc lại thực phản xạ Giá huấn luyện phải phù hợp với loại gia súc

3 Phương pháp huấn luyện

* Nguyên tắc huấn luyện

Thành lập cho gia súc đực phản xạ có điều kiện nhảy giá thường xuyên củng cố phản xạ

Các lồi gia súc khác có phương pháp huấn luyện khác

3.1 Đối với trâu, bò: lúc đầu cho nhảy động dục, tiếp cho nhảy thường, cuối cho nhảy giá nhảy với đực khác

3.2 Đối với lợn: lúc đầu cho nhảy với động dục, tiếp cho nhảy với mồi, cuối cho nhảy với giá

* Chú ý: - Mỗi giai đoạn nhảy ta cho củng cố đến lần, gia súc thành thạo ta

sẽ chuyển sang giai đoạn khác

- Một số ta cần cho tham quan sau tự tự nhảy giá

được có cho vào giá nhảy giá cho chúng nhảy trực tiếp giá khơng cần áp dụng cách máy móc quy trình để rút ngắn thời gian huấn luyện

4 Kỹ thuật khai thác tinh dịch

4.1 Các yêu cầu

Trong Kỹ thuật TTNT đối tác số đực Trong kỹ thuật khai thác tinh dịch có yêu cầu sau:

a Dùng phương pháp nào, kỹ thuật phải khai thác tồn tinh dịch đực lần khai thác

Nếu việc khơng xảy gây tượng: + Lãng phí tinh dịch

+ Phản xạ tính dục đực bị ảnh hưởng, làm khoái cảm sinh dục, dẫn đến làm phản xạ có điều kiện tạo nên

b Đảm bảo phẩm chất tinh dịch

- Để đạt số lượng chất lượng phải đảm bảo điều kiện sống, sinh lý, chế độ khai thác đực Sau khai thác xong phải đảm bảo điều kiện sống cho tinh trùng ngồi thể đặc biệt khơng có tạp khuẩn, chất sinh học gây ảnh hưởng đến chất lượng tinh trùng Phải tránh lây lan bệnh truyền nhiễm, ký sinh trùng thông qua khai thác tinh dịch

Có ý sau khâu vệ sinh trình khai thác tinh dịch: + Dụng cụ khai thác tuyệt đối vô trùng

+ Không khai thác tinh dịch gia súc ốm, bị bệnh

+ Phải tắm rửa đực trước lần khai thác tinh dịch + Vệ sinh giá nhảy, phòng lấy tinh

+ Nhân viên lấy tinh dịch phải cố định không mắc bệnh truyền nhiễm c Không gây ảnh hưởng thô bạo đến quan sinh đực

d Dụng cụ an toàn cho quan sinh dục gia súc, dễ thao tác, dễ kiếm giá thành hạ

4.2 Khái quát phương pháp khai thác a Dùng hải miên

Đây phương pháp cổ xuất cách gần ngàn năm trước Người ta dùng hải miên sau sát trùng nhét vào âm đạo chịu đực, sau thực giao phối, tinh dịch ngấm vào hải miên đực phóng tinh, xong ơng lấy hải miên ngồi, vắt lấy tinh dùng cho thụ tinh nhân tạo

Kết chất lượng tinh dịch giảm, dễ nhiễm bẩn, dễ gây xây xát cho Chỉ sử dụng nghiên cứu động vật: cáo, chồn, khỉ (Câu chuyện lạc Ả rập)

b Phương pháp âm đạo

Người ta nút cổ tử cung trước giao phối sau cho gia súc nhảy trực tiếp, tinh dịch phóng trực tiếp vào âm đạo dùng cán dài ống hút lấy tinh sử dụng Còn gọi phương pháp cho giao phối trực tiếp

Dĩ nhiên phương pháp chất lượng tinh dịch không đảm bảo vệ sinh Hiện sử dụng nghiên cứu, vd: hổ

c Phương pháp dùng túi

Năm 1903, Sand Stribold dùng dùng túi cao su mỏng lắp sẵn vào dương vật đực hưng phấn, cho gia súc giao phối, sau phóng tinh lấy tinh từ bao cao su để sử dụng

Phương pháp bảo đảm chất lượng tinh dịch làm giảm cảm giác, khó lấy tinh, đặc biệt trâu, bị Phương pháp khơng sử dụng

64

d Phương pháp kích thích qua trực tràng

Phương pháp Muller Stribolf thử nghiệm thành công năm 1934 Đầu tiên dùng tay móc phân khỏi trực tràng sau kích thích âm nang làm cho dịch tiết, rửa ống phóng tinh gây kích thích

thần kinh chậu hông làm cho gia súc xuất tinh Phương pháp dùng cho trâu bị kết khơng cao khó Phương pháp khơng sử dụng

Hình 27 Lấy tinh lợn điện

e Phương pháp dùng điện

Ý tưởng băt đầu từ Battelli, năm 1922 đối tượng lợn, sau năm 1936 Gunn (Úc) hồn thiện cơng trình thành cơng bò

* Nguyên tắc: Dùng dòng điện xoay chiều kích thích vào hệ thần kinh thực vật đực làm hưng phấn cao độ có phản xạ tính dục

Phương pháp cho kết tốt, chấp nhận thực tế sử dụng khơng nhiều Sau thời gian sử dụng gây nên bệnh lý Hiện có máy sử dụng điện pin Nga, Mỹ, Pháp

Đối với gia súc đưa máy vào trực tràng sau lấy hết phân Đặc biệt sử dụng đực giống tốt bị què hay liệt

Đối với gia cầm chia làm hai cực, cực đặt đốt sống lưng thứ 3, cực khác đặt ổ nhớp (lỗ huyệt) Dùng dịng điện có cường độ biến đổi từ 41-62 mA, trung bình 55 mA với điện 30 vôn Gia cầm thường tinh sau phút

f Phương pháp Massage (lấy tinh tay, giới)

Phương pháp xuất xứ từ Hà lan Pháp đến năm 1974 áp dụng Việt nam Cho đến nông nghiệp in thành qui trình áp dụng rộng rãi tất trạm thụ tinh nhân tạo lợn nước

65 - Nguyên tắc:: Theo dòng chung: Đại não tác động, kích thích lên dây TKTV tạo nên phản xạ xuất tinh Tuy nhiên, người lấy tinh lợi dụng kích thích từ lịng bàn tay (ma sát, ôn độ, áp suất) lên quan sinh dục đực tạo nên hưng phấn TKTV, từ tác động lên đại não gây nên phản xạ xuất tinh

Phương pháp sử dụng phổ biến lợn, cá, gia cầm Ở trâu, bò, dê, cừu cho kết không cao Phương pháp lấy tinh massage phương pháp đơn giản tiện lợi, bất lợi kỹ thuật không tốt dễ bị làm xây xát dương vật gây viêm nhiễm

Hình 28 Âm đạo giả lấy tinh cho chó Amantea

g Phương pháp sinh vật (dùng âm đạo giả)

Phương pháp Amantea áp dụng thành cơng để lấy tinh cho chó vào năm 1914, sau số nhà khoa học cải tiến lấy tinh hầu hết cho loài gia súc

Nguyên tắc: Dựa phản xạ tự nhiên đực mà người ta chế tạo

âm đạo giả thỏa mãn điều kiện:

+ Nhiệt độ lòng âm đạo giả: tùy loài gia súc khác mà yêu cầu nhiệt

độ lòng âm đạo giả khác Ở bò, trâu nhiệt độ cần 400C đến 410C, lợn

ngựa cần 390C đến 400C Nhiệt độ qúa cao thấp làm cho gia súc xuất

tinh khơng tốt, chí khơng xuất tinh ảnh hưởng đến chất lượng tinh dịch Chính lắp âm đạo giả, cần tạo nhiệt độ thích hợp cho lồi chí tới gia súc

+ Áp suất lòng âm đạo giả

Khi giao phối trực tiếp, dương vật đực chịu áp lực ma sát âm đạo Do gây kích thích, dẫn đến phóng tinh Để tạo áp lực ma sát âm đạo gây kích thích dẫn đến phóng tinh Để tạo áp suất tương tự

cần bơm vào vách âm đạo áp lực tương đương 35 đến 65 mmHg Khi áp lực 80mm Hg, trình xuất tinh bị trở ngại

+ Độ nhớt âm đạo giả

Khi giao phối tự nhiên, cọ sát dương vật vào âm đạo, tuyến âm đạo cổ tử cung tiết chất nhờn bôi trơn âm đạo Để tạo điều kiện cho dương vật đực giao cấu âm đạo giả Khi lắp âm đạo giả ta cần bơi trơn 2/3 kể từ phía miệng số loại

chất nhờn dầu paraphin, dầu vazơlin dầu thực vật

Hình 29 Cấu tạo âm đạo giả Tóm lại: ba yếu

tố điều kiện cần đủ gia súc xuất tinh tốt, thiếu ba yếu tố

gia súc khơng xuất tinh chất lượng tinh dịch giảm ta cần phải ý Đây phương pháp mang tính tối

ưu nay, áp dụng với gia súc, có số ưu nhược điểm sau:

Hình 30 Một số dụng cụ lấy tinh cho gia súc + Đảm bảo an toàn quan

sinh dục đực

+ Chất lượng tinh dịch đảm bảo tốt

+ Dụng cụ phức tạp, chuẩn bị cầu kỳ Vì phương pháp người ta áp dụng lấy tinh cho trâu bò

4.3 Một số phương pháp khai thác tinh dịch 3.1 Phương pháp lấy tinh âm đạo giả (ÂĐG) a Cấu tạo ÂĐG: (thực tập)

b Cách lắp ráp đạt yêu cầu: (thực tập)

Trước lấy tinh phải chuẩn bị âm đạo giả (sau vô trùng phận âm đạo giả) cách bơm nước nóng thổi khơng khí qua van cho nhiệt độ

lịng ÂĐG đạt 39-40oC mép ngồi ruột cao su ÂĐG phồng lên thít lại thành

khía Sau ta bơi vadơlin vào ruột cao su khoảng 1/3 chiều dài ÂĐG kể từ miệng ÂĐG

c Tập luyện đực để lấy tinh phương pháp ÂĐG

- Chọn tuổi: sau thành thục tính, trước thành thục thể vóc lúc Testostogen cao đực hăng Ở bò khoảng 18-24 tháng tuổi - Phương pháp huấn luyện (sử dụng phương pháp sinh vật) : Dựa phản xạ giao phối tự nhiên đực cái, sở người ta thiết lập phản xạ lấy tinh cách đánh lừa vật (thay quan sinh dục thật giả.)

Cụ thể sử dụng ÂĐG lấy tinh cho bò sau: Cho động dục vào giá đỡ cố định

Để đực định huấn luyện cách xa 18-20m để đực nhìn phía đồng thời dùng khăn nhúng dung dịch thuốc tím 1%o ấm

(40oC) vệ sinh vùng bụng kích

thích nhẹ qui đầu vật làm cho đực hưng phấn dương vật thò

67 Người giúp việc đưa đực giống đến chỗ cái, có người lấy tinh Người cầm ÂĐG đứng tư sẵn sàng: Đứng theo hình chữ đinh (để diện tiếp xúc với vật nhỏ nhất), ÂĐG vác vai

Bị đực sau nhảy lên giá có phản xạ cương cứng dương vật Lúc đó, kỹ thuật viên phải bình tĩnh, thơng minh, khéo léo cảnh giác chuyển chân sang hình chữ bát tay trái cầm lấy bao dương vật bẻ chếch phía bên phải (nếu thuận bên phải) cịn tay phải đưa ÂĐG vào dương vật để tránh xây xát đầu dương vật vừa tránh nhiễm bẩn đầu dương vật đồng thời tránh trường hợp vật hăng phóng tinh Khi dương vật bị đực thúc vào ÂĐG với áp suất nhiệt độ thích hợp vật nhún tới trước xuất tinh Thời gian xuất tinh bò đực ngắn (khoảng 1-2 giây) Sau

Hình 31 Sử dụng ÂĐG lấy tinh cho bị cho dê

xuất tinh bò đực từ từ tuột khỏi giá, ta không rút ÂĐG mà từ từ lái tay cầm theo dương vật

Chú ý: Tuyệt đối khơng để vật giao phối tự nhiên, điều làm khó cho lần tập

sau

Dần dà thay động dục không động dục đực phương pháp lấy tinh

Để gây cho đực phản xạ có điều kiện ổn định phải ổn định tất tín hiệu phòng lấy tinh, người lấy tinh, quần áo trang phục người lấy tinh Khi lấy tinh, kỹ thuật viên phải nhẹ nhàng, cẩn thận bị đực có tiếng phản chủ Bình thường chúng hiền lành, chúng “cáu” tợn Cần phải kiên trì tập luyện thành cơng

3.2 Phương pháp lấy tinh lợn tay: Trước người ta lấy tinh lợn đực âm

đạo giả ngày người ta lấy tinh tay

a Các phương pháp huấn luyện:

Sử dụng đực tuổi: 7-9 tháng lợn ngoại, 5-7 tháng lợn nội

68 Tùy theo cá tính đực

mà ứng dụng biện pháp huấn luyện sau:

- Phương pháp thăm quan: Cho lợn tập xem lợn khác nhảy giá Sau lại cho lơn tập tiếp xúc với giá nhảy Chỉ vài lần lợn đực biết nhảy giá

- Phương pháp sinh vật: tương tự bò, sử dụng

động dục làm mồi dùng tay kích thích dương vật xuất tinh Khi quen chuyển sang giá nhảy

- Phương pháp cưỡng bức: cưỡng lợn trèo lên, ôm giá, đồng thời dùng tay kích thích bao dương vật để lợn thị dương vật ngồi Sau vài lần lợn quen tự nhảy giá Cần đề phòng phản ứng lợn đực

b Kỹ thuật lấy tinh

Dụng cụ lấy tinh gồm cốc hứng tinh, khăn vải để lọc tinh, tất khử trùng Khi chuẩn bị xong, cho lợn vào phòng lấy tinh (lơn huấn luyên để lấy tinh), dùng khăn thuốc tím 1o/00 vô trùng phận trùng phân sinh dục sau cho lợn đực lên giá Dùng tay người lấy tinh vơ trùng kích thích ngồi bao dương vật Khi lợn đực thò dương vật khỏi bao dương vật ta dùng bàn tay nhẹ nhàng nắm phần dương vật thò kéo cho dương vật lệch giá để tránh dương vật cọ xát vào giá gây thương tích, cần nắm dương vật vừa phải cho dương vật khỏi tuột khỏi lòng bàn tay, khơng bóp chặt làm cho vật đau, sợ khơng lấy tinh được, lợn sinh cáu gắt khơng cảnh giác cắn người Khi lợn xuất tinh, giai đoạn đầu yếu dịch tiết tuyến sinh dục phụ có màu trắng trong, khơng có tinh trùng ta khơng hứng vào cốc Khi tinh xuất có màu trắng sữa, ta dùng tay cịn lại cầm cốc hứng tinh kề vào sát quy đầu để gia súc phóng tinh qua lớp vải chảy xuống cốc hứng tinh Gần kết thúc q trình phóng tinh dịch tiết chủ yếu dịch lỗng keo phèn nên ta loại bỏ không hứng lẫn vào tinh dịch

* Chú ý:

- Không bịt ngón tay vào lỗ phóng tinh, tinh khơng bắn - Cho tinh dịch chảy theo thành cốc hứng tinh

- Trong q trình lợn phóng tinh tay giữ dương vật để ngun vị trí dùng ngón tay kích thích vào đầu dương vật để gây kích thích cho lợn xuất tinh tốt - Khi lấy tinh xong cần phải vệ sinh phòng lấy tinh dụng cụ

V.TINH DỊCH

1 Khái niệmvề tinh dịch

1.1 Quan niệm cũ tinh dịch

Trước đây, có thuyết tâm sinh sản, người thuờng dựa vào tơn giáo để giải thích tượng sinh giới Đặc biệt tôn giáo phương Đông,

người ta cho vạn vật đời trời sinh Vì vậy, quan sát đầm sen thấy nhiều ngỗng trời người ta cho ngó sen sinh ngỗng trời, giun sống đất cho đất sinh giun, thịt thối có giịi cho thịt thối sinh giòi, v.v

Khi ý thức tinh dịch người ta lại quan trọng hóa đời sống động vật Thí dụ cho tinh dịch chất tinh túy thể (là linh hồn) phần lại thể xác liên quan nhiều đến sinh thể Các nhà y học phương Đông cho tinh dịch sử dụng nhiều làm thủy suy hỏa vượng, thủy hỏa cân thể, dẫn đến người khơ héo gầy mịn Hoặc quan niệm người phụ nữ tiếp xúc nhiều với tinh dịch thủy thịnh hỏa suy, thể xanh xao ốm yếu

1.2 Quan niệm tinh dịch

Ivanốp, nhà bác học Nga, người có quan niệm tinh dịch Bằng lọat cơng trình nghiên cứu, ông đưa nhận định quan trọng sau :

+ Để đạt kết thụ tinh điều kiện cần đủ tinh trùng trứng phải thành thục, có khả thụ thai hịan cảnh tối thích chúng Ơng khẳng định gặp gỡ cách đặc biệt hai cá thể giống khác giới thành thục hình thức bên ngịai, tạo điều kiện cho hai tế bào sinh dục đực gặp nhau, đồng hóa lẫn để tạo thành hợp tử Như vậy, người làm thụ tinh nhân tạo

+ Trong trình thụ tinh di truyền tính trạng từ đời trước cho đời sau tinh dịch định mà tinh trùng thành thục có khả thụ thai để đồng hóa với trứng đủ Như vậy, dùng mơi trường nhân tạo để pha lõang tinh dịch

Bằng hàng lọat công trình nghiên cứu, nhà khoa học sau làm sáng tỏ nhận định Ivanov đắn ứng dụng cách sáng tạo vào thực tế Cho đến nay, thu thành tựu to lớn lĩnh vực góp phần đắc lực cho nghành chăn nuôi phát triển

2 Đặc điểm tinh dịch

2.1 Đặc điểm chung

Theo Ivanov, tinh dịch có ba đặc điểm chung

+ Tinh dịch dịch tiết quan sinh dục đực đực thực có kết phản xạ sinh dục

+ Tinh dịch hình thành cách tức thời đực phóng tinh, nghĩa lúc hưng phấn cao trình thực phản xạ giao phối

+ Tinh dịch gồm hai thành phần tinh trùng tinh - Tinh trùng tế bào sinh dục đực

- Tinh chất tiết tuyến sinh dục phụ, phụ hòan ống dẫn tinh

2.2 Các dặc tính tinh dịch 2.2.1 Tỷ trọng

Trong tinh dịch, tỷ trọng tinh trùng nặng tinh nên tỷ trọng tinh dịch thường chịu ảnh hưởng số lượng tinh trùng có tinh dịch Để biết tỷ trọngcủa tinh dịch người ta so sánh khối lượng tinh dịch với khối lượng nước cất hai lần có thể tích

Thơng thường tỷ trọng tinh dịch lợn 1,020 - 1,022, bò 1,03

Như vậy, mẫu tinh tỷ trọng cao tì nồng độ tinh trùng đậm đặc

2.2.2 Độ nhớt tinh dịch

Độ nhớt tinh dịch phụ thuộc vào tỷ trọng thành phần chất nhầy có tinh dịch Việc xác định độ nhớt tinh dịch có ý nghĩa cần thiết cho việc xây dựng môi trường pha lõang tinh dịch

Xác định độ nhớt chất lỏng dựa sở xác định thời gian chảy thể tích định chất lỏng qua mao quản so với thời gian chảy nước cất hai lần thể tích chảy qua mao quản

Tinh dịch lợn thường có độ nhớt 2,4 - 2,6, bò 2,8 - 3,2, cừu 4,5

Việc xác định độ nhớt có tác dụng lớn việc tạo môi trường pha lõang bảo tồn tinh dịch, mơi trường phải có độ nhớt tương đương với độ nhớt tinh dịch

2.2.3 Áp suất thẩm thấu tinh dịch (posm)

Áp suất thẩm thấu có vai trị quan trọng đời sống tinh trùng, tinh trùng pha lõang môi trường nhân tạo Nếu posm môi trường tương đương với posm nội tinh trùng (đẳng trương) sức sống tinh trùng thuận lợi Ngược lại, môi trường nhược trương ưu trương có hại cho tinh trùng, làm cho tinh trùng teo trương phồng chết cách nhanh

chóng Có nhiều cách xác định posm, dựa nguyên tắc xác định độ hạ băng điểm chất lỏng cần đo suy áp suất thẩm thấu

2.2.4 Độ pH tinh dịch

Độ pH tinh dịch có mối tương quan nghịch với mật độ tinh trùng

+ Khi phần phụ hòan (phần túi tinh), tinh trùng có mật độ cao nên pH tinh dịch thấp Ở lợn pH từ 6,4 - 6,8, trâu bò khỏang 6,2

+ Khi ngòai, tinh trùng pha lõang với tinh nên pH thường tăng lên Đối với lợn từ 7,2 - 7,8, trâu bò từ 6,4 - 6,8

+ Để xác định pH tinh dịch, người ta có nhiều phương pháp khác ; dùng pH metter, dùng dãy ống so màu, dùng thị màu

2.2.5 Năng lực đệm

Năng lực đệm chất khả ổn định lực toan, kiềm thêm tác nhân toan kiềm vào chất

Năng lực đệm tinh dịch lợn thường đạt 1.300 - 1.500

2.2.6 Thành phần hóa học tinh dịch

Tinh dịch chất lỏng phức tạp Cho tới nay, thành phần hóa học chưa nghiên cứu cách đầy đủ, nhiều chất người ta định tính mà chưa định lượng

Bảng Thành phần hóa học tinh dịch số lịai gia súc [7]

Lòai gia súc Thành phần %

Cừu Bị Lợn Ngựa Chó

Nước 85.2 90.5 95.4 97.6 97.6

Vật chất khô 14.8 9.5 4.6 2.4 2.4

Protein 11.6 4.7 3.8 0.7 0.9

Lipit 1.8 1.3 0.2 0.2

Fructoza 0.25 0.54 0.01 0.01 0.01

Acide citric 0.05

2.2.7 Men tinh dịch

Trong tinh dịch có nhiều loại men như: Hyaluronidaza,

mucidaza, catalaza, lipaza, amylaza, photphotaza tất

men tham gia vào trình sống hoạt động tinh trùng

73

3 Hình thái, cấu tạo, chức đặc điểm sinh vật học tế bào sinh dục đực

3.1 Hình thái

Tế bào sinh dục đực lồi gia súc khác khác nhau, đặc trưng ổn định theo lồi

Hình 33 Tinh trùng số loài gia súc

Tinh trùng gia súc:Có hình thái giống nịng nọc, có chiều dài gần gấp đơi đầu, bề dày khơng đáng kể nên nhìn nghiêng giống hạt gạo cong Có hình thái khác phần cổ thân

Thơng thường có độ dài nói chung: 45-90 µ (trong phần dài Về độ dài, kích thước, lượng tế bào sinh dục đực không phụ thuộc vào tuổi tác, trọng lượng đực mà phụ thuộc giống lòai

Trong thân tinh trùng chủ yếu nước- chiếm 75%, cịn lại vật chất khơ: 25% Trong vật chất khô chủ yếu Protein- chiếm 85%, lipit- 13.2%; ngồi khống, vitamin: 1.8%

3.2 Cấu tạo chức

Dưới góc độ sinh sản người ta chia tinh trung làm phần: - Phần đầu

- Phần cổ thân - Phần đuôi

* Cấu tạo phần đầu:

- Ngoài màng chung tinh trùng gọi màng bán thấm Lipoprotein Nó có lớp: protid - lipid - protid, có chức năng: (i) Định hình cho tinh trùng; (ii) Bán thấm: cho phép trao đổi chất bên bên ngồi Trên phần đầu màng có lớp màng mỏng gọi mũ trước chóp (galeapitis)

74 Dưới mũ trước có màng gọi thể giả thể đỉnh kết hợp với mũ trước chóp tạo nên xoang Acrosome thể khả thụ thai tế bào Acrosome dễ bong men Hyaluronidaza Acrosome tiết dễ thẩm xuất

Nhiệt độ cao Acrosome tác dụng mức độ sốc, lắc làm xoang Acrosome bong tác dụng Ở xoang Acrosome chứa nhiều men Hyaluronidaza không đặc hiệu chủng loại, có chức nhau, để tăng tỷ lệ thụ thai người ta thường bổ sung thêm men tổng hợp Hyaluronidaza vào tinh dịch Nó phá vỡ màng phóng xạ trứng q trình thụ tinh Sau hệ thống Acrosome nhân tinh trùng, chiếm gần hết phần đầu 76.7-86.3% thể tích đầu nơi chứa gen mật mã di truyền để truyền cho đời Bản chất hóa học nhân chủ yếu Nucleoprotid gồm thành phần acid nucleic histine, chúng nối với cầu nối NH2-P, cầu nối dễ bị đứt

yếu tố: áp suất thẩm thấu, nhiệt độ cao tới 420C, rung động sốc-lắc Nếu

NH2-P đứt tinh trùng bị chết Hình 33 Cấu tạo tinh trùng [1]

Ngồi cịn có ngun sinh chất

* Phần cổ - thân

Cổ tinh trùng gắn với đầu lỏng lẻo, có tác dụng lớn q trình thụ tinh, bất lợi trình bảo quản

Phần cổ tế bào sinh dục đực ngắn mảnh, chiều dài không đáng kể, coi phần cổ vạch biên thân đầu Về cấu trúc vi thể cổ tương đối giống thân Có trung tử, trung tử nằm đầu, trung tử nằm trung tử thân Về cấu trúc vi thể, theo Brestneither (1949) cắt ngang phần cổ thân tinh trùng , từ trung tử nằm hố thụ tinh xuất phát sợi trục trung tâm nơi xuất phát sợi fibrin vành trong, sợi bao bọc lấy hai sợi trung tâm Trung tử nằm thấp trung tử chút, nơi xuất phát sợi fibrin vành ngồi với

kích thước sợi fibrin khác nhau: sợi 1, 4, có kích thước to (1000 A0), sợi nhỏ

(180 A0), sợi 2, 3, 5, 6, có đường kính 700 A0 Nó chạy dọc từ cổ đến có

cơng thức cấu trúc vi thể 2+ 9+ giúp cho thể tinh trùng không thay đổi vị trí di chuyển Phần cổ thân chứa nhiều ty thể Các ty thể túi nhỏ chưa 50% protid, 30% lipid chất khác Trong ty thể chứa nhiều men giúp cho trình photpho-oxyhóa tế bào, nằm xếp vách ngăn từ phía ngồi vỏ vào phần trung tâm thân Có nhiều chất thể sắc tố Sytine Cytocrom tế bào sắc tố phần cổ thân giúp cho qúa trình oxyhóa tinh trùng Ngồi có lượng lipid đáng kể, trước (1856) người ta tưởng tượng lipid đáng kể Lơxitin, lượng Lơxitin giúp cho tế bào có khả thích nghi, thích ứng Đến năm 1952 lượng lipid đáng kể tác giả Bowguth khẳng định Lơxitin mà Plasmalogen, chất khơng có khă "chống lạnh" tế bào Plasmalogen có khản bảo vệ tế bào mà người ta bổ sung chất chống lạnh lịng đỏ trứng gà

Ở phần cổ thân kho chưa ATP, ATP lượng thu nhận qua q trình trao đổi chất tế bào kho cung cấp lượng cho tế bào sống

* Đuôi

Chia làm đoạn: trung đoạn, đuôi phụ

+ Trung đoạn nối thân với Về cấu trúc thể có cơng thức 2+9+9, có điểm khác sợi trung tâm sợi vành với vành ngồi có liên hệ với giống lip xe bánh xe đạp gọi mối liên hệ "nan hoa", sợi trung tâm với có mối liên hệ "bắt tay", có tác dụng thơng tin sợi chức với nhau, làm cho cấu trúc vi thể tế bào khăng khít, quan sát kính hiển vi thấy rối lên màng nhện

+ Ở có chưá ATP với lượng thân, nguyên sinh chất với số lượng có số men chủ yếu men giúp cho qúa trình fotforin hóa

+ Phần đuôi phụ tế bào không bao phủ lớp màng chung tế bào mái chèo giúp cho tế bào hoạt động

* Chức đi:

Đi có chức chịu trách nhiệm vân động tế bào

Đối với tế bào sinh dục đực sống nhờ trao đổi chất, thể sống vận động, mà vận động phải cần trao đổi chất nhờ lượng, vận động trao đổi chất tăng lên, tất tượng làm cho tế bào mau chết cạn kiệt lượng nhiều độc tố

Trao đổi chât trực tiếp sử dụng lượng tích lũy dạng ATP cổ, thân, Nó lấy cách nhờ phần protein sợi (có hai loại: spartine spermiogine) Nhờ thành phần protein sợi đuôi mà ATP dự trữ phần cổ thân nhờ spermiogine APTaza giải phóng ADP + E1, sau ADP với có mặt ADPaza giải phóng AMP + E2

2 lượng protid sợi đuôi thứ spartine rải lượng khắp sợi đuôi làm sợi đuôi co rút gây nên chuyển động tế bào

Bảng Kích thước tinh trùng số loại gia súc [8]

Gia súc Dài tổng số Đầu Cổ Thân Đuôi

(μ) Dài Rộng Dày

Cừu 60-75 1.5 10 42-43

Bò 65-72 1 13 49-53

Ngựa 58-60 - 10 42-43

Lợn 55-57 - 12 33-38

3.3 Đặc điểm sinh vật học a Đặc điểm vận động

Tế bào vận động nhờ đuôi, đuôi rung động làm cho tinh trùng vận động Bản thân có khả chuyên động chủ động nên dòng điện chạy dọc theo tế bào cuối xẽ xịe mái chèo dẫn đến vận động Tế bào sinh dục đực vận động phụ thuộc vào yếu tố:

- Cấu trúc hồn thiện hay khơng hồn thiện - Năng lượng vận động đủ, nhiều

- Môi trường sống bên tế bào, áp suất thẩm thấu, nhiệt độ làm cho mức độ, cường độ vận động thay đổi thơng qua người ta đánh giá chất lượng tế bào Có thể phân chia mức độ vận động:

+ Vận động tiến thẳng: bao gồm tế bào tốt nhất, gồm tế bào có phương thức hoạt động mà mức độ vận động mãnh liệt, vectơ vận động khơng thay đổi mà tiến lên phía trước mà thơi Dưới góc độ sinh sản tế bào tiến thẳng có khả thụ tinh Để đánh giá chất lượng tế bào sinh dục đực người ta đánh giá tỉ lệ % số lượng tế bào phương thức tiến thẳng

+ Vận động xoay vịng: Gồm có tế bào có cường độ vận động mạnh chuyển động vectơ chuyển động ln thay đổi, sức sống tót tốc độ sinh sản khơng tốt nên có khả thụ tinh

+ Vận động lắc lư: loại tế bào đứng chỗ sống, chúng vơ chuyển động, khơng có khả thụ tinh

b Đặc điểm trao đổi chất tế bào

Tinh trùng muốn sống phải trao đổi chất trao đổi chất xảy theo nhiều yếu tố kìm hãm làm tăng trình trao đổi chất dẫn đến có nhiều q trình trao đổi chất khác

Có hai q trình trao đổi chất sau: * Q trình hơ hấp yếm khí

Là q trình trao đổi chất xảy tất đường mà loại đường phải chuyển hóa trình xảy phức tạp tạo thành đường fructoza đường sử dụng hết trình trao đổi chất Yếu tố quan trọng khơng có Oxy đường fructoz tiến hành trao đổi chất tạo thành

axit lactic với lượng E1 = 50 Kcal dự trữ dạng ATP

Thiếu O2

C6H12O6 2C3H6O3 + E1

Axit lactic thải môi trường xem dao lưỡi Nếu với nồng độ thấp kéo dài thời igan sống tinh trùng có tác dụng ức chế tinh trùng hoạt động, với nồng độ cao gây chết cho tinh trùng hàng loạt

Trong mơi trường pha lỗng người ta bổ sung đường glucoza để tham gia trình đường phân xảy điều kiện yếm khí với có mặt enzim glucophotphataza hecxokinaza

* Q trình hơ hấp háo khí

Có O2

Q trình xảy đường fructoz điều kiện có Oxy:

C6H12O6 CO2 + H2O + E2

Giai đoạn đầu trình đường phân Giai đoạn sau trình axit pyruvic hoạt hố vào chu trình Kreb phân giải triệt để, cuối cho

CO2 nước lượng lớn gấp nhiều lần (670 Kcal) so với dạng khơng có Oxy,

năng lượng dự trữ dạng ATP (38 ATP)

Nồng độ CO2 tăng lên ức chế hoạt động tế bào Lượng nước sinh

thay đổi nhiệt độ, chất tan, áp suất thẩm thấu, giết tinh trùng thời gian ngắn

Muốn kéo dài thời gian sống tế bào giữ mơi trường khơng có Oxy Trước phối tinh cho cho tinh trùng tiếp xúc với khơng khí

c Các đặc điểm khác

- Đặc tính chuyển động tới trước

Tinh trùng sống ln ln chuyển động Tinh trùng chuyển động nhờ cổ hay thân đuôi để chuyển động quanh trục

Đuôi ngoằn ngoèo uốn khúc chuyển động gây xung động để tự tiến tới trước Ngồi ra, tinh trùng có đầu giống lê nên tự chuyển động xung quanh trục thân Sự rung động kết hợp với xuay trục làm cho tinh trùng vận động tiến thẳng tới trước

78 Tốc độ di chuyển tinh trùng thẳng tới trước phụ thuộc vào điều kiện nội ngoại cảnh nội niêm dịch đường sinh dục gia súc tiết nhiều hay ít, phương thức phóng tinh đực, độ co bóp phận bên mà chủ yếu sừng tử cung , ống dẫn trứng, mà tinh trùng di chuyển nhanh hay chậm

- Đặc tính lội ngược dịng nước

Tinh trùng chuyển động nhờ lái Do đó, vận động ngược dịng nước có xu hướng lội ngược dịng nước

Thí dụ: Nhỏ giọt tinh dịch lên phiến kính, nghiêng phiến kính để bên cao bên thấp, thấy tinh trùng chạy lên phía cao, ngược với trọng lực giọt tinh dich Nhờ đặc tính này, tinh trùng vào âm đạo gia súc cái, gặp dịch nhờn từ đường sinh dục tiết ra, tinh trùng có khả bơi lội ngược dịng, nhờ lơng nhung cổ tử cung ống dẫn trứng làm cho tinh trùng tiến thẳng vào 1/3 phía ống dẫn trứng để gặp tế bào trứng, tiến hành trình thụ thai

- Đặc tính tiếp xúc

Đối với vật lạ (hạt bụi, rác bọt khí ) tinh trùng có đặc tính bao vây xung quanh vật lạ Do tinh trùng vào đến ống dẫn trứng tìm nơi lõm tế bào trứng để vào

Thí nghiệm: Lấy tế bào trứng lợn động đực đặt vào kính hiển vi quan sát, cho tinh dịch lợn vào, thấy tượng tinh trùng bao vây lấy tế bào trứng phá màng phóng xạ để vào, có vào Chính nhờ đặc tính mà có tượng thụ thai

- Đặc tính tiếp xúc với hóa chất

Trong ống dẫn trứng có tiết chất hóa học, kích thích tinh trùng gây tinh trùng hưng phấn, làm tinh trùng tập trung lại tiến đến tế bào trứng Chất hóa học gọi Firtilzin

- Đặc tính tiếp xúc với điện

Trong ống dẫn trứng hay tử cung có điện mà thân tinh trùng mang điện, nên chúng có điện thế, đặc tính dịng điện chạy từ cao đến thấp (từ điện cao đến điện thấp) Cho nên làm tinh trùng lội có phương hướng định

Thí nghiệm: Cho dịng điện 3,55 V vào tinh dịch thấy tinh trùng hoạt động mạnh

Biết đặc tính tinh trùng nên việc bảo quản tinh trùng, pha chế tinh dịch cần phải ý

3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến sức sống tinh trùng 3.4.1 Khi tinh trùng thể gia súc

- Điều kiện chăm sóc ni dưỡng: Nếu đực giống chăm sóc ni dưỡng theo qui trình kỹ thuật (thức ăn đảm bảo chất cân đối thành phần, có chế độ tắm chải, vận động, tắm nắng) sức sống tinh trùng tốt ngược lại

- Điều kiện sức khoẻ đực giống: Nếu đực giống khoẻ mạnh tinh trùng tốt, tình trạng bệnh tật sức sống tinh trùng

- Điều kiện thời tiết khí hậu: Gia súc cần phải ni điều kiện khí hậu phù hợp

3.4.2 Khi tinh trùng thể gia súc a Nhiệt độ

Nhiệt độ cao bất lợi cho tinh trùng Nhiệt độ 420C giết chết tế bào tinh

trùng thời gian ngắn nhiệt độ cao qúa trình vận động, trao đổi chất lớn chất độc hại sản sinh, nguyên liệu cạn kiệt, hoạt hóa men, chất độc tố trực tiếp gián tiếp làm thay đổi áp suất thẩm thấu pH làm chết tinh trùng Do nên giữ tinh trùng nhiệt độ thấp, nhiệt độ thấp kỹ thuật đảm bảo người ta giữ đơng lạnh giữ vĩnh cửu Mỗi lồi gia súc ứng với biên độ nhiệt độ định

Ví dụ: Lợn hợp với nhiệt độ: 8-130C; Bò, trâu: 0-50C; Tinh trùng gia cầm: 12-160C

b Dinh dưỡng

Dinh dưỡng yếu tố quan trọng đốivới sức sống tinh trùng nói riêng phẩm chất tinh dịch nói chung

Bởi vậy, chế độ dinh dưỡng tốt khâu vật liệu cung cấp cho trình hình thành tinh trùng chất tiết tuyến sinh dục phụ đảm bảo, lượng thành phần tinh dịch tốt Ngược lại dinh dưỡng ảnh hưởng xấu đến chất lượng tinh trùng Ngoài , vitamin A, D, E vitamin cần thiết cho hình thành tinh trùng Trong dinh dưỡng ý đến hàm lượng đa khoáng vi khoáng, đặc biệt ngun tử Cu có vai trị quan trọng sản xuất tinh Sử dụng tốt có vai trò quan trọng kéo dài thời gian sử dụng đực giống

c Áp suất thẩm thấu

Tinh trùng mẫn cảm với áp suất thẩm thấu, chết nhanh áp suất thẩm thấu cao hay qúa thấp sinh lý Áp suất thẩm thấu yếu tố đảm bảo cho hình dạng tinh trùng định hình Đối với pha chế mơi trường, bảo tồn tinh phải điều chỉnh cho áp sực thẩm thấu môi trường tinh dịch môi trường bảo tồn, pha chế phải tương đương Môi trường pha chế nhược hay ưu trương so với tinh dịch có hại cho tinh trùng

d Độ pH

Tinh dịch gia súc có độ pH đặc trưng cho lồi Có giống lồi có sai khác rõ rệt thường định chất tiết tuyến sinh dục phụ Thường tinh dịch có tính kiềm yếu trình trao đổi chất

tinh trùng yếu hô hấp, H2CO3 tạo dễ dàng biến tạo tinh dịch có tính kiềm

yếu

Độ pH ảnh hưởng đáng kể đến hệ thống enzim trao đổi chất tinh trùng, mặt khác màng tinh trùng mang điện tích âm, nồng độ gion H+ môi trường cao gây đông với tinh trùng Ở môi trường acid yếu tinh trùng vận động yếu nên sức sống kéo dài Nhưng pH qúa thấp gần đơng với tinh trùng chúng tiết men Hyalumindase làm khả vận động giảm sức sống

Vì vậy, pha chế tinh dịch phải đảm bảo pH môi trường với tinh dịch Thực tiễn

sản xuất ứng dụng NaHCO3 để điều chỉnh pH môi trường

e Ánh sáng

Ánh sáng yếu tố bất lợi tinh trùng, đặc biệt tia tím, tử ngoại diệt tế bào tinh trùng nhanh, có ánh sáng ánh trăng an tồn

Vì vậy, bảo quản phải để tinh dịch bóng tối lọ màu có bọc giấy

f Các vật lạ

Đặc điểm tinh trùng ưa vật lạ, mơi trường tinh dịch có vật lạ tinh trùng tiến tới tiết men Hyalumidase đơng vón tinh trùng, làm khả thụ thai

g Các vi sinh vật

Nếu tinh dịch có vi sinh vật tinh trùng xem chúng vật lạ, số vi sinh vật có khả thực bào làm cho tỉ lệ chết kỳ hình tăng cao, sức sống tinh trùng giảm Vi sinh vật tranh chấp chất dinh dưỡng với tinh trùng, tế bào vi sinh vật không phân chia, sinh sản nên thải vào mơi trường chất độc hại tinh trùng Vì phải bổ sung kháng sinh pha chế môi trường để hạn chế vi sinh vật không gây hại cho tinh trùng, ngồi phải vơ trùng cẩn thận

h Khơng khí

Tinh trùng tiếp xúc với khơng khí dễ tăng q trình hơ hấp yếm khí với nguyên liệu glucose, hydrat cabon acid lactic có tinh dịch, thúc đẩy tinh trùng vận động mạnh, làm giảm sức sống

i Ảnh hưởng học

Bất kỳ rung động, xóc, lắc có hại cho tinh trùng như: bong xoang acrosome,

đứt cổ, đứt mạch nối NH2-P, đứt đuôi làm vơ giá trị tinh trùng Vì phải nhẹ nhàng

cẩn thận sử dụng tinh dịch

VI KỸ THUẬT KIỂM TRA PHẨM CHẤT TINH DỊCH

Kiểm tra phẩm chất tinh dịch gia súc có tầm quan trọng việc sử dụng đực giống Nhiều đực có ngoại hình đẹp khơng có khả sinh sản sinh sản (vô sinh, thụ thai thấp, gây sẩy thai quái thai ) Có trường hợp tinh dịch khơng có tinh trùng tinh trùng kỳ hình, lỗng, có mang mầm bệnh truyền nhiễm (xoắn trùng, sẩy thai truyền nhiễm )

Vì vậy, cần thông qua việc đánh giá chất lượng tinh dịch để có biện pháp can thiệp xử lý đốivới đực, đực giống dùng thụ tinh nhân tạo Sau số nội dung kỹ thuật kiểm tra phẩm chất tinh dịch gia súc

1 Những tiêu đánh giá thường xuyên

1.1 Thể tích tinh dịch (V, volume)

* Khái niệm: Thể tích tinh dịch (lượng xuất tinh ) lượng tinh dịch lần xuất

tinh sau lọc bỏ keo phèn Đây tiêu quan trọng cấu thành nên tiêu tổng hợp VAC

Riêng tinh dịch lợn, ngựa có lượng nhiều chất keo phèn hay gọi keo nhầy (chiếm 5-25%) thể tích tinh dịch ngun chưa lọc Chất có nguồn gốc từ chất phân tiết tuyến Cowper, gặp men Vedicunaza (từ tuyến tinh) đông đặc lại thành dạng hạt có đặc tính hấp phụ nước tinh dịch trương phồng lên nhanh chóng (kèm theo keo nhầy hấp phụ ln tinh trùng) Vì vậy, sau lấy tinh xong cần lọc bỏ chất keo phèn này, không cần sau 30 phút đến giờ, lượng tinh dịch giảm khoảng 50% nồng độ tinh trùng khoảng 30%

Khi xác định lượng xuất tinh chia làm hai trường hợp:

- Đối với lợn, ngựa: ta dùng cốc có chia độ (hoặc ống đong) để xác định, lọc bỏ keo phèn

- Đối với trâu, bò, dê, cừu: xác định tinh lọ hứng tinh lọ hứng tinh có vạch chia độ

Chú ý: đọc kết cần đặt lọ đựng tinh mặt phẳng nằm ngang đọc

kết vạch cong mặt tinh dịch để xác định lượng xuất tinh

a Những nhân tố ảnh hưởng đến lượng xuất tinh

- Loài gia súc

Các loài gia súc khác tích tinh dịch khác

Lượng tinh dịch phụ thuộc vào mức độ phát dục khác tuyến sinh dục phụ Ở lợn ngựa tuyến sinh dục phát triển nên thể tích tinh dịch nhiều ngược lại trâu, bị, cừu Chính vậy, thể tích tinh dịch thường tỉ lệ nghịch với nồng độ tinh trùng

Bảng Thể tích tinh dịch loài gia súc (theo H H Cole P T Papps, 1977)

Lồi g.s Bị Cừu Dê Lợn Ngựa Chó Thỏ

V (ml) 2-10 0.5-2 0.5-2.5 150-500 20-300 2-15 0.4-6

- Giống gia súc

Các giống gia súc khác cho thể tích tinh dịch khác Bảng 10 Thể tích tinh dịch giống lợn

Giống lợn Thể tích (ml)

Ỉ pha 80-150

Móng 150-200

Lang hồng 100-200 Đại bạch 150-300 Landrace 150-300 Yorkshire 150-300 Cornwall 150-350

Qua kết qủa bảng thấy tất giống lợn ngoại tích tinh dịch cao giống lợn nội Nhưng xét trị số tuyệt đối (chia lượng

tinh dịch cho trọng lượng) kg trọng lượng lợn nội lại có lượng tinh dịch cao lợn ngoại Đây ưu điểm lợn nội

- Tuổi gia súc

Thể tích tinh dịch thường tăng theo lứa tuổi gia súc Yếu tố biểu rõ lợn, lợn hậu bị thường thấy lượng tinh dịch só với lợn trưởng thành đặc biệt lợn già Tuy nhiên tăng đến mức độ giảm

Ở lợn ngoại: 12 tháng tuổi có V = 100-150ml

24 tháng tuổi có V = 200-300ml

36 tháng tuổi có V = 250-350ml

- Cá thể gia súc

Ngay giống, lứa tuổi cá thể khác cho lượng xuất tinh khác (nếu điều kiện sống tình trạng sức khỏe, sinh lý cá thể khác nhau)

- Kỹ thuật lấy tinh

Khi lấy tinh điều kiện cần đủ cho gia súc xuất tinh đảm bảo, gia súc xuất tinh thoải mái tinh dịch thu nhiều ngược lại

Khi theo dõi khoảng cách lấy tinh lợn, kết thu sau:

+ 4-5 ngày lấy tinh lần: V = 150-200ml

+ 2-3 ngày lấy tinh lần: V = 60-100ml

+ Hằng ngày lấy tinh: V = 50-60ml

+ ngày lấy tinh lần: V = 20-50ml

Trong thụ tinh, có tác nhân kích thích khác thường, làm giảm khơng có lượng xuất tinh Ví du: lấy tinh lợn âm đạo giả mà nước nóng

(ơn độ lịng âm đạo giả 450C) nguội (dưới 350C), áp lực

lòng âm đạo giả cao thấp Hoặc lấy tinh tay cầm nắm dương vật chặt lỏng lẻo ảnh hưởng đến qúa trình xuất tinh lợn

- Thời tiết, mùa vụ

Điều kiện thời tiết khí hậu mùa vụ ảnh hưởng đến thể tích tinh dịch Trong điều kiện Việt nam, thấy vào vụ đơng xn lượng tinh dịch thường cao vụ hè thu

- Điều kiện chăm sóc ni dưỡng

Đây yếu tố quan trọng, ảnh hưởng lớn đến lượng tinh dịch Vì q trình chăm sóc ni dưỡng ta cần ý đến chế độ ăn uống, vận động, tắm chải

1.2 Màu sắc tinh dịch

Màu sắc tinh dịch định nồng độ tinh trùng hạt lipoit có tinh dịch Xác định màu tinh dịch ta sơ biết phẩm chất tinh dịch, màu sắc đậm nồng độ tinh trùng cao

1.2.1 Màu bình thường

Màu sắc tinh dịch tùy thuộc vào loại gia súc Bảng 11 Màu tinh dịch loài gia súc

Loài gia súc Màu tinh dịch

Ngựa Trắng xám

Bò Kem sữa

Cừu Kem Lợn Trắng xám

Chó Trắng xám

1.2.2 Màu khác thường

+ Màu đỏ lẫn máu (khi ta lấy tinh làm dương vật bị xây xát) Vì khai thác tinh dịch đặc biệt trường hợp lấy tinh tay không để dương vật gia súc cọ xát vào giá lây tinh làm xây xát dương vật

+ Màu xanh lam thường lẫn mủ, thường xảy trường hợp gia súc bị viêm nhiễm đường sinh dục

+ Màu vàng thường lẫn nước tiểu Để khắc phục trường hợp cần ý lấy tinh tránh hứng nước tiểu vào tinh dịch

+ Màu đen thường lẫn phân chất bẩn

Chúng ta phép sử dụng mẫu tinh có màu bình thường, cịn tất mẫu tinh có màu khác thường khơng sử dụng

1.3 Độ vẩn tinh dịch

Ta dùng tiêu đánh giá sơ mức độ hoạt động, mật độ, nồng độ tinh trùng có tinh dịch tiêu quan sát mắt thường kiểm tra thường xuyên Người ta cầm lọ tinh dịch quan sát từ thành bình bên quan thành bên Người ta đánh giá độ vẩn theo mức:

+ Khi tinh dịch có độ vẩn mức nhất, nồng độ, hoạt lực (Ta ghi nhận độ đậm đặc mẫu tinh +): người ta thấy từ thành bình sang thành bình bên kia, khơng nhìn thấy chuyển động Độ đậm đặc thường gặp lợn nội chó

+ Khi tinh dịch có độ đậm đặc trung bình quan sát khơng thấy thành bình bên kia, khơng nhìn thấy chuyển động đó, ta ghi nhận độ đậm đặc mẫu tinh ++ Độ đậm đặc thường gặp lợn ngoại

+ Khi tinh dịch đậm đặc (nồng độ, mức độ, hoạt lực tốt nhất) quan sát khơng thấy thành bình bên có cuộn sóng chuyển động Độ đậm đặc thường gặp tinh dịch trâu, bò, dê, cừu số trường hợp lợn ngoại

1.4 Mùi tinh dịch

- Mùi bình thường: Bình thường tinh dịch có mùi nồng, hắc, Mùi tinh dịch chủ yếu chất tiết tuyến sinh dục phụ định

- Mùi khác thường

+ Mùi khai có lẫn nước tiểu + Mùi thối lẫn phân

+ Mùi thối khẳn có lẫn dịch tuyến nacosi

* Chú ý: Chúng ta sử dụng mẫu tinh có mùi bình thường

1.5 Độ pH tinh dịch

86 pH chất lỏng xác định nồng độ ion H+ có Số lượng ion H+ tăng chất lỏng toan ngược lại kiềm tính Tinh dịch bình thường phải có pH bình thường, pH q cao thấp ảnh hưởng đến chất lượng tinh dịch

Bảng 11 pH loài gia súc [9]

Lồi g súc Bị Cừu Lợn Ngựa Chó Thỏ

pH 6.4 - 6.9 5.9 - 6.3 6.8 - 7.9 6.2 - 7.8 6.1 - 7.0 6.6 - 7.5

Để xác định pH tinh dịch ta có nhiều phương pháp khác * Phương pháp xác định pH pH meter

Đưa cực máy đo pH vào dung dịch chuẩn điều chỉnh kim đồng hồ để pH pH dung dịch chuẩn Lấy cực máy khỏi dung dịch chuẩn, rửa nước cất Sau nhúng cực máy vào cốc tinh dịch, máy báo pH tinh dịch đồng hồ

* Phương pháp dùng giấy thị màu hệ thống ống màu

Chuẩn bị giấy thị sau dùng đũa thủy tinh nhỏ giọt tinh nguyên lên giấy thị màu, màu giấy thị thay đổi, ta so sánh với màu chuẩn cuộn giấy thị ta có kết (chú ý kết đọc vòng 2-3 giây để lâu, kết khơng xác)

* Dùng pH kế

Nhúng đầu pH kế vào nước đọc kết

1.6 Sức hoạt động tinh trùng (A, active)

a Khái niệm

Sức hoạt động tinh trùng tỷ lệ % tinh trùng có hoạt động tiến thẳng so với tổng số tinh trùng có vi trường quan sát Việc đánh giá sức hoạt động tinh trùng cso ý nghĩa quan trọng việc đánh giá phẩm chất tinh dịch tiêu cấu thành nên tiêu tổng hợp VAC mà tiêu cho biết tổng số tinh trùng có khả thụ thai lần xuất tinh gia súc

b Phương pháp đánh giá

Ngày có nhiều phương pháp đánh giá sức hoạt động tinh trùng Các nước có điều kiện người ta sử dụng hệ thống máy tính để kiểm tra, phương pháp rõ ràng xác Trong điều kiện Việt nam đánh giá sức hoạt động tinh trùng cách quan sát qua kính hiển vi có độ phóng đại từ 200-600 lần Việc đánh giá cho điểm theo thang 10 điểm Milavanov V K sau:

Bảng 12 Thang điểm đánh giá sức hoạt động tinh trùng

Điểm 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1

Số % t.t t thẳng 95-100 85-95 75-85 65-75 55-65 45-55 35-45 25-15 15-25 5-15 Phương pháp tiến hành sau:

Dùng đũa thủy tinh sạch, lấy giọt tinh nhỏ lên phiến kính sạch, dùng la men khơ đậy lên giọt tinh cho giọt tinh dàn mỏng, Đặt tiêu lên kính hiển vi xem độ phóng đại 160-600 lần Trong kiểm tra, tiêu sưởi ấm

nhiệt độ 40-410C (ta dùng máy ổn nhiệt để nâng nhiệt độ) Khi đưa tiêu lên

kính ta quan sát ba điểm vi trường, điểm ta quan sát đếm 10 tinh trùng xem có tinh trùng tiến thẳng tính theo tỉ lệ % Kết ba điểm cộng lại chia trung bình kết sức hoạt động tinh trùng

* Chú ý:

- Tinh trùng cần phải kiểm tra sức hoạt động sau lấy khỏi thể gia súc sau lấy khỏi nơi bảo tồn

- Khi kiểm tra phải nhiệt độ 40-410C

- Độ chênh lệch cho phép 0.1 lần kiểm tra

- Sức hoạt động tinh trùng số loài gia súc sau khai thác xong phải đạt: dê, cừu A ≥ 0.9, trâu bò A ≥ 0.8, lợn A ≥ 0.7 sử dụng tinh dịch đo thụ tinh nhân tạo

1.7 Nồng độ tinh trùng (C)

88

a Khái niệm

Nồng độ tinh trùng tổng số tinh trùng có ml tinh nguyên Đây tiêu quan trọng tiêu cấu thành nên tiêu tổng hợp VAC

b Phương pháp kiểm tra

- Phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm hồng, bạch cầu

Tùy theo loài gia súc: Đối với lợn ta dùng buồng đếm bạch cầu, đốivới trâu bò ta dùng ống hồng cầu Đây phương phá

khá xác sử dụng phổ biến Có nhiều buồng đếm hồng bạch cầu Toma, Gariaep, Niubaoơ hình dạng cấu tạo chúng tương tự ngun tắc sử dụng diện tích ô bé buồng đếm là: S = 1/400 mm2 độ sâu buồng đếm 1/10mm Chúng ta phải đếm số tinh trùng quan sát trung bình (80 nhỏ) Đó số tinh trùng có TK thể tích 1/50m3 (= 1/40 1/10 80) Từ suy số

lượng tinh trùng có 1cm3 (1ml) tinh dịch Cách tiến hành sau:

+ Phương pháp tính nồng độ tinh trùng lợn * Phương pháp dùng buồng đếm bạch cầu

Đưa buồng đếm lên kính hiển vi có độ phóng đại từ 200-600 lần, sau chỉnh kính hiển vi cho nhìn rõ buồng đếm Đặt la men khô lên buồng đếm Dùng ống pha loãng bạch cầu rửa sấy khô hút tinh dịch đến vạch 0,5 vạch 1,0 Sau hút dung dịch nước muối NaCl 3% đến vạch 11 để giết tinh trùng pha lỗng tinh dịch Trong q trình hút tinh dịch hút nước muối cần ý không gây tượng sủi bọt Nếu có tượng phải làm lại Bịt hai đầu ống pha loãng ngón tay nhẫn, lắc nhẹ 5-6 lần cho Như đoạn phình ống pha lỗng bạch cầu, tinh dịch pha loãng 20 lần (nếu hút tinh dịch đến vạch 0,50 10 lần hút tinh dịch đến vạch 1,0) Bỏ đoạn nước muối 3% đoạn ống mao dẫn phía phần phình phần khơng có tinh trùng Sau nhỏ hỗn hợp vào khe buồng đếm Chú ý: cần đặt miệng ống pha loãng vào mép la men với lực mao dẫn hỗn dịch hút đầy vào buồng đếm (không làm hỗn hợp tràn lên mặt la men)

Dùng ốc vi cấp chỉnh cho rõ buồng đếm tinh trùng có Nguyên tắc đếm tinh trùng giống đếm hồng bạch cầu

* Chú ý: đếm tinh trùng nằm cạnh ô đếm hai cạnh hai cạnh nhường cho ô khác

Chúng ta đếm tinh trùng trung bình (80 nhỏ), kết tinh

trùng ta ghi nhận tính theo công thức sau: C = n D 400/N.p.106 (1)

Trong đó: C: nồng độ tinh trùng có tinh dịch

n: số tinh trùng đếm 80 nhỏ D: mức độ pha lỗng (10 20 lần)

P: độ sâu buồng đếm N: số ô đếm (80 ô)

Hình 35 Buồng đếm hồng bạch cầu

a Nhìn nghiêng

b Nhìn từ xuống

Hình 36 Thứ tự đếm tinh trùng: Trên xuống, từ trái sang phải

Để đơn giản hóa cách tính tốn, pha loãng tinh dịch 20 lần ống hút bạch cầu Số lượng tinh trùng đếm 80 ô n Như số lượng tinh trùng đếm ml tinh dịch là:

Hình 37 Ống Karas

C = n.50.20.103 = n.106

Và công thức (1) là:

C = n.106

Như ml tinh trùng đếm buồng đếm đại diện cho 1.000.000 tinh trùng

+ Phương pháp dùng Spermiodensimeter - Cấu tạo ống:

Spermiodensimeter gọi ống Karras Đầu ống thủy tinh hình chóp, miệng ống hình vng (1(1cm) Sau dùng pypet hút ml tinh ngun cho vào (mức độ pha lỗng 1/10) Dùng ngón tay bịt lấy miệng đảo cho Rót hỗn hợp vào ống Karras vạch 100 Đặt mảnh giấy trắng phía sau ống Karras để đọc kết Quan sát qua ống: độ dày lớp dung dịch dày dần từ lên nên độ đục lớp dung dịch ống khơng giống kể từ lên Vì vạch chữ số mờ tỏ khác

Trước hết cần xác định số hàng chục bảng số ống Karras mà mắt ta nhìn thấy phần tỏ mờ Thí dụ: vạch 65 nhìn thấy rõ, lên

phía vạch mờ dần sau khơng nhìn thấy Như ta ghi nhận vạch 65 đối chiếu với bảng tính sẵn để xác định nồng độ tinh trùng 1ml dung dịch

Trong trường hợp tinh dịch lỗng, đọc vạch 100 phải thay đổi mức pha lỗng Có thể pha lỗng với tỉ lệ 5/10 mà nhìn thấy rõ vạch 100 mẫu tinh có nồng độ tinh trùng q thấp, ta khơng nên sử dụng tinh trùng nhân tạo

* Chú ý: phương pháp tiện lợi cho sở sản xuất, mức đo xác bị hạn chế Vì định kỳ ta phải dùng buồng đếm kiểm tra lại để có độ xác cao

Bảng 13 Bảng đối chiếu nồng độ tinh trùng dùng cho ống Karras

Bảng Nồng độ loãng tinh trùng (106/ml) qua mức pha loãng

ống Karras 1/10 2/10 3/10 4/10 5/10

30 25 20 485,0 555,0 635,0 242,5 277,5 317,5 161,6 185,0 211,6 121,2 130,0 158,2 97,0 111,0 127,0

- Dùng máy so màu quang điện (Colometer) - Dùng máy vi tính để kiểm tra nồng độ

Hiện người ta sử dụng hệ thống máy vi tính để kiểm tra nồng độ tinh trùng số tiêu khác Sử dụng phương pháp tiện lợi, ta cần đưa vào máy 0,1 ml tinh dịch, máy lời kết hình in giấy thơng số: Nồng độ tinh trùng, mức độ pha loãng cần thiết, số liều tinh sản xuất

Tóm lại, việc kiểm tra nồng độ tinh trùng có nhiều cách tùy theo sở khác mà có phương pháp kiểm tra phù hợp

2 Những tiêu đánh giá định kỳ

2.1 Acrosome tinh trùng (Ac)

Đây tiêu quan trọng tinh trùng Acrosome khơng cịn khả thụ thai

92

Cách tiến hành kiểm tra tiêu sau:

Dùng phiến kính khơ, nhỏ lên giọt tinh 1-2 giọt dung dịch Acrota Đậy lamen lên giọt hỗn hợp Đặt phiến kính lên kính hiển vi có tụ quang kính đen (dùng ánh sáng đèn xem rõ hơn) Chúng ta nhận thấy Acrosome tinh trùng phát quãng sáng phía đầu, đo tinh trùng nguyên Acrosome Những tinh trùng mà Acrosome bị

tổn thương khơng có quầng sáng Những gia súc tinh trùng có tỉ lệ Acrosome hồn chỉnh cao chất lượng tinh trùng tốt Và ta có tể tính tỉ lệ theo cơng thức sau:

Ac = S 100/300 (500) Trong đó:

- Ac: tỷ lệ Acrosome nguyên vẹn (%)

- S: tổng số tinh trùng Acrosome nguyên vẹn đếm (thường người ta đếm tinh trùng Acrosome bị tổn thương nhanh hơn)

- 300 500 tổng số tinh trùng đếm

2.2 Sức kháng tinh trùng (R)

a Định nghĩa

Sức kháng tinh trùng khả chống chịu tinh trùng dung dịch nước muối 1% Nếu tinh trùng chịu mức độ pha loãng lớn chứng tỏ sức đề kháng tinh trùng cao tinh trùng tốt ngược lại

b Phương pháp tiến hành

Hiện thường sử dụng phương pháp Milovanov (1952)

- Phương pháp kiểm tra sức kháng tinh trùng lợn ngoại

Dùng ba ống nghiệm (hoặc ba lọ) có dung tích 10 ml đánh số thứ tự 1, 2, Dùng pipet hút dung dịch NaCl 1% (đã trùng từ trước) cho vào ống 1: ml, ống 2: ml, ống 3: 0,5 ml Dùng micropipet hút 0,01 ml tinh nguyên cho vào ống 1, lắc nhẹ cho Như ống tinh dịch pha loãng 500 lần (500.0,01) Hút ml hỗn dịch ống sang ống 2, lắc nhẹ để hỗn dịch Như hỗn dịch ống pha loãng 1000 lần (500, 2) Dùng ống hút khác hút 0,5 ml hỗn dịch ống sang ống Như ống pha loãng 2000 lần (1000, 2)

Dùng đũa thủy tinh khô lấy giọt hỗn hợp ống cho lên phiến kính rửa

sạch sấy khô, dàn mỏng nâng nhiệt độ 400 - 410C đưa lên kính hiển vi với độ

phóng đại 160 lần trở lên để kiểm tra (A) Nếu thấy tinh trùng tiến thẳng thêm 0,1 ml dung dịch NaCl 1% vào ống thứ 3, mức pha loãng 2.2000 lần (1,1 ml 2000) Sau lại kiểm tra A Nếu thấy tinh trùng tiến thẳng lại thêm 0,1 ml dung dịch NaCl 1%, River = 2400 (1,2 ml 2000)

Công việc tiến hành lặp lặp lại vào khơng cịn tinh trùng tiến thẳng dừng lại Sức kháng tinh trùng tính theo cơng thức Milovanov (1933)

R = V/v (1) Trong đó:

R : sức kháng tinh trùng

V : lượng dung dịch NaCl 1% sử dụng v : lượng tinh dịch dùng để kiểm tra

Trong trình tiến hành, phải pha chuyển ống, để khỏi nhầm lẫn, người ta biến đổi công thức trở thành công thức tổng quát sau:

R = r0 + r.n

R : sức kháng tinh trùng

r0 : mức pha loãng tinh dịch ống thứ (ở 2000 lần)

r : mức pha loãng lần cho thêm 0,1 ml dung dịch NaCl 1% (r = 200) nü : số lần thêm 0,1 ml dung dịch NaCl 1%

Công thức tổng qt sử dụng để tính sức kháng hầu hết loại gia súc gia cầm

- Phương pháp kiểm tra sức kháng tinh trùng lợn nội

Do sức kháng tinh trùng lợn nội thấp nên dùng phương pháp hai lọ Dùng hai ống nghiệm (hoặc hai lọ) có dung tích 10 ml rửa sạch, sấy khơ ghi thứ tự lọ 1, Dùng pipet lấy ml dung dịch NaCl 1% cho vào lọ 0,5 ml cho vào lọ Nhỏ 0,01 ml tinh nguyên vào lọ Lắc nhẹ cho đều, tinh dịch pha loãng 500 lần (5: 0,01) Hút 0,5 ml hỗn hợp từ lọ sang lọ 2, lắc nhẹ trộn Tinh dịch pha loãng 1000 lần (500.2)

Dùng phiến kính rửa sạch, sấy khơ Lấy giọt hỗn hợp lọ nhỏ lên phiến kính Dùng đũa thủy tinh dàn mỏng (nhẹ nhàng, mỏng tốt) Nâng nhiệt độ lên

400C - 410C đưa lên kính hiển vi có độ phóng đại 160 lần trở lên kiểm tra hoạt lực

Nếu tinh trùng tiến thẳng thêm 0,1 ml dung dịch NaCl 1% vào, tiếp tục kiểm tra A

và làm khơng cịn tinh trùng tiến thẳng ta dùng lại sử dụng cơng thức tổng qt (2) để tính, ro = 1000 r = 100

Trong thụ tinh nhân tạo người ta yêu cầu sức kháng tinh trùng lợn ngoại phải lớn 3000 lần, lợn nội phải lớn 1500 lần

- Phương pháp kiểm tra sức kháng trâu, bò, dê, cừu

Ta dùng ống nghiệm (hoặc lọ) có dung tích 10 ml rửa sạch, sấy khô Đánh số thứ tự 1, 2, Cho dung dịch NaCl nồng độ 1% vào: - ống 1:5ml, - ống 2: 1ml, -ống 3: 0,25ml Sau dùng micropipet hút 0,01ml tinh nguyên cho vào ống thứ nhất, lắc nhẹ cho đều, hút 1ml hỗn dịch ống thứ sang ống thứ 2, lắc nhẹ cho sau hút từ ống thứ hai sang ống thứ 3: 0,25ml Như vậy, ống thứ có mức độ pha lỗng 500 lần, ống thứ có mức độ pha lỗng 1000 lần ống thứ có mức độ pha loãng 2000 lần Dùng đũa thủy tinh lấy giọt hỗn dịch ống thứ cho lên phiến kính rửa sạch, sấy khơ, dàn mỏng nâng nhiệt độ lên

400C - 410C đưa lên kính hiển vi, kiểm tra (A) mức độ phóng đại 160 lần trở lên

Nếu tinh trùng tiến thẳng, ta cho thêm 0,5ml dung dịch NaCl 1% vào ống thứ 3, sau kiểm tra (A) Nếu tinh trùng tiến thẳng ta lại tiếp tục cho vào 0,5ml dung dịch NaCl 1% vào ống thứ 3, tiếp tục kiểm tra (A)

Cứ làm khơng cịn tinh trùng tiến thẳng ta dừng lại tính theo cơng thức tổng quát

Đối với tinh dịch trâu, bị, dê, cừu lần cho thêm 0,5ml dung dịch NaCl 1% sức kháng tinh trùng tăng 2000 lần

Trâu, bị, dê, cừu sức kháng tinh trùng thường phải đạt30.000 lần trở lên Chú ý:

- Sức kháng tinh trùng cần kiểm tra sau lấy tinh khỏi thể gia súc từ 5-10 phút, để lâu tác

động điều kiện ngoại cảnh khơng xác

95

Hình 39 Phương pháp phiết tiêu bản - Do trình kiểm tra nhiều lần

con nên bỏ qua số lần r0 trình kiểm tra tiến hành nhanh sức kháng tinh trùng xác

2.3 Tỉ lệ sống tinh trùng (Sg %)

Phương pháp đánh giá tỉ lệ sống tinh trùng dựa sở: tinh

trùng cịn sống, có hoạt động tiến thẳng khơng bị bắt màu gặp thuốc nhuộm Cịn tinh trùng chết tinh trùng hoạt động yếu ớt, dao động dễ dàng bị bắt màu

Phương pháp tiến hành: dùng phiến kính rửa sạch, sấy khô, lấy giọt tinh nhỏ lên phiến kính Sau lấy giọt thuốc nhuộm cozin (hoặc fuccin.xanh metylen) dung dịch 5% nhỏ bên cạnh giọt tinh dịch Dùng đũa thủy tinh nhẹ nhành, nhanh chóng trộn vài giây Dùng phiến kính khác phiết thành tiêu

* Chú ý: Thao tác cần nhẹ nhàng, nhanh chóng để khơng làm tổn thương chết

tinh trùng có khả tiến thẳng gây chết nhân tạo Tiêu mỏng tốt Đặt tiêu lên kính hiển vi độ phóng đại 400 - 600 lần Đếm 500 300 tinh trùng để phân loại tinh trùng sống, chết (tinh trùng sống khơng bắt màu thuốc nhuộm, tinh trùng chết bắt màu thuốc nhuộm) tính theo cơng thức:

Sg % = D 100/500 (300)

Trong đó: Sg % : Tỷ lệ tinh trùng sống

D : Tổng số tinh trùng sống đếm

500 (300) : Tổng số tinh trùng đếm

Thường tỷ lệ tinh trùng sống loài gia súc phải đạt sau người ta sử dụng tinh dịch thụ tinh nhân tạo: lợn ≥70%, trâu bò ≥80%, cừu ≥90%

96

2.4 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K) hệ số bệnh lý tinh trùng (B)

a Khái niệm

Tinh trùng kỳ hình tinh trùng có hình dạng khác thường so với tinh trùng bình thường

Villiam (1921) cho thấy tinh trùng kỳ hình có ảnh hưởng xấu đến tỷ lệ thụ thai V.K Milovanov cho thấy có hai thời kỳ gây tình trạng kỳ hình tinh trùng :

- Ngay trình sinh tinh Điều xảy thường bắt nguồn từ nguyên nhân liên quan đến bệnh

tật, đặc biệt loại bệnh đường sinh dục

- Chế độ chăm sóc ni dưỡng như: thức ăn không đảm bảo đầy đủ cân đối chất, chế độ tắm chải không thường xuyên, chế độ sử dụng không hợp lý

97 - Sau tinh trùng xuất Điều thường liên quan đến yếu tố ngoại cảnh như: kỹ thuật lấy tinh, trình xử lý tinh dịch

- Người ta chia tinh trùng kỳ hình làm bốn loại:

+ Tinh trùng kỳ hình đầu + Tinh trùng kỳ hình cổ + Tinh trùng kỳ hình thân + Tinh trùng kỳ hình

Để đánh giá tinh trùng kỳ hình, thường dùng phương pháp nhuộm màu tinh trùng số loại thuốc nhuộm Xanh mêthlen, tím Violet, Giêm xa, đỏ Methyl

Hình 41 Tinh trùng kỳ hình đầu cổ

b Cách tiến hành

Đặt giọt tinh lên đầu phiến kính rửa sạch, sấy khơ tẩy mỡ Nếu tinh dịch đặc pha loãng vài giọt dung dịch Natricitrat 2,9% (hoặc nước sinh lý (0,85%) Dùng đầu đũa thủy tinh trộn hỗn hợp Dùng cạnh phiến kính khác phiết nhẹ thành tiêu (phiết lần, mỏng tốt, không chà xát lại gây kỳ hình nhân tạo dẫn đến khơng xác) Để cho tiêu tự khơ khơng khí (khơng hơ nóng hình thức nào) Sau tiêu khô, cố định tiêu lửa đèn cồn Dùng thuốc nhuộm (được lọc kỹ, khơng có cặn), nhỏ tiêu Đợi cho tiêu khô (mùa hè 5-10 phút, mùa đông khoảng 10-15 phút) Dùng nước cất rửa tiêu

* Chú ý: không dội mạnh nước cất mà để nghiêng tiêu góc 450, dùng pipet buret nhỏ từ từ phần phiến kính khơng có tiêu cho nước tràn qua phần có tiêu để rửa trơi thuốc nhuộm

Rửa đến tiêu màu xanh nhạt dừng lại (khơng rửa trắng tiêu bản) Đợi cho tiêu tự khơ, đặt lên kính hiển vi có độ phóng đại 400-600 lần để kiểm tra

Đếm tổng số 300 500 tinh trùng xem có tinh trùng kỳ hình tính tỷ lệ tinh trùng kỳ hình theo cơng thức sau:

K = M.100/300 (500)

Trong đó: K : tỷ lệ phần trăm tinh trùng kỳ hình

M : tổng số tinh trùng kỳ hình đếm

300 500 tổng số tinh trùng đếm

Thông thường tinh dịch lồi gia súc có tỷ lệ kỳ hình nhỏ 20% đạt yêu cầu

2.5 Chỉ tiêu tổng hợp VAC

Chỉ tiêu giúp ta đánh giá cách toàn diện chất lượng tinh dịch đực giống cho ta biết tổng số tinh trùng có khả thụ thai lần xuất tinh Đây tích tiêu: thể tích tinh dịch, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng

Bảng 14 VAC số loài gia súc [4]

Loài g súc Ngựa Bị Cừu Lợn Thỏ Chó Mèo Gà Trâu

VAC 9,0 6,0 3,0 4,5 0,03 1,5 0,1 1,8 4,0

Chỉ tiêu loài gia súc khác khác nhau, tn theo quy tắc tiêu cao chất lượng tinh dịch tốt

Chỉ tiêu tỷ lệ thuận với thời gian bảo tồn tinh dịch

VI KỸ THUẬT PHA LOÃNG, BẢO TỒN, VẬN CHUYỂN VÀ PHÂN PHỐI TINH DỊCH 1 Môi trường pha lỗng tinh dịch

1.1 Mục đích, u cầu

1.1.1 Mục đích

- Tăng thêm khối lượng tinh dịch từ nâng cao hiệu sinh sản đực giống - Kéo dài thời gian sống tinh trùng thể gia súc

Thí dụ: tinh trùng sống tinh nguyên thời gian ngắn, đem pha lỗng bảo tồn thời gian tinh trùng kéo dài hàng ngày, hàng tháng, hàng năm, chí hàng vài chục năm

- Tiện lợi cho trình vận chuyển

1.1.2 Yêu cầu mơi trường pha lỗng

Về mặt hóa học sinh học coi mơi trường pha loãng, bảo tồn tinh dịch dung dịch hóa học có điều kiện lý, hóa, sinh thỏa mãn tối đa điều kiện sống tinh trùng Để đạt điều dễ dàng áp dụng sản xuất, viện sĩ Milovanov yêu cầu pha lõang bảo tồn tinh dịch là:

- Áp lực thẩm thầu môi trường

Áp lực thẩm thấu môi trường phải tương đương với áp lực thẩm thầu tinh dịch Nghĩa môi trường phải đẳng trương với tinh dịch Đây nguyên tắc quan trọng nhất, tinh trùng giữ hình thái bình thường tiến hành trao đổi chất được, môi trường ưu trương nhược trương làm biến dạng, kìm hãm trình trao đổi chất tinh trùng, dẫn đến tinh trùng chết nhanh

- pH môi trường

Mơi trường phải có pH tương đương với pH tinh dịch toan so với tinh dịch, giới hạn tinh trùng tiến hành trao đổi chất, song khơng mạnh Do thời gian sống tinh trùng kéo dài

- Mơi trường phải có chất điện giải

Ta biết trình bảo tồn tinh dịch nhằm kéo dài thời gian sống tinh trùng Mà trình sống tinh trùng lại gắn liền với trình trao đổi chất, trình gluozic trình ln thải mơi trường acide lactic Do đó, nồng độ ion H+ ln ln có xu hướng tăng làm cho tinh dịch có xu hướng toan tính Nồng độ ion H+ có tinh dịch ví dao hai lưỡi, nồng độ mức phù hợp kéo dài sống tinh trùng, mức cao hay thấp làm tinh trùng chết nhanh

Chính vậy, ta cần phải bổ sung vào môi trường chất điện giải để tạo nên hệ đệm Vì chủ yếu đệm chiều nên người ta thường sử dụng muối kim lọai kiềm acide hữu : natri citrat kali latrat Bằng thí nghiệm mình, Milovanov chứng minh :

+ Đối với tinh trùng bò, cừu, dê với phẩm chất tinh dịch đặc tính trao đổi chất cần cho vào mơi trường chất có lực đệm cao Mặc dù anion ảnh hưởng xấu đến màng bọc tinh trùng

+ Đối với tinh trùng lợn, ngựa bổ sung chất có lực đệm yếu, nên anion ảnh hưởng đến màng bọc tinh trùng

- Mơi trường cần có chất khơng điện gỉai thích hợp

Vì mơi trường phải có lực đệm, chất đệm chất điện giải, ion đặc biệt cation nhiều ảnh hưởng tới màng bọc tinh trùng Do đó, cần bổ sung vào mơi trường chất không điện giải để pha lõang nồng độ ion để ngăn ngừa ion tới màng bọc tinh trùng Nguyên liệu chủ yếu lọai đường - Môi trường phải đạt yêu cầu mặt kinh tế thực tiễn

+ Môi trường phải đạt hiệu bảo tồn cao, nguyên liệu phải dễ tìm + Giá thành cần phải hạ

- Tỷ trọng môi trường

Tỷ trọng môi trường phải tương đương với tỷ trọng tinh dịch Nếu không tương đương, tinh trùng bị sức đẩy lực Acsimet áp lực thủy tĩnh làm cho tinh trùng biến dạng

- Độ nhớt môi trường

Độ nhớt môi trường phải tương đương độ nhớt tinh dịch Điều cần thiết tránh sức căng bề mặt tác động lên tinh trùng lực ma sát nội phân tử tinh trùng vận động

1.2 Các chất liệu tạo môi trường

- Chất không điện giải

Chất không điện giải thường dùng đường chủ yếu chọn glucoza hay fructoza theo tinh dịch lòai Tinh dịch trâu, bò, dê, cừu thường dùng fructoza Tinh dịch lợn, ngựa thường dùng glucoza Khi bổ sung đường vào môi trường có tác dụng sau :

+ Các loại đường cho vào mơi trường có tác dụng bảo vệ tránh tượng điện tích bề mặt tinh trùng nhiều nguyên nhân khác (ví dụ mơi trường dư thừa chất điện giải NaCl chẳng hạn, tồn ion tự cation) Kết trung hịa điện tích làm cho tinh trùng sống lâu

+ Đường đơn thấm qua màng bọc tiến hành trình hô hấp để cung cấp lượng cho tinh trùng

+ Theo Milovanov (1967), đường hạn chế phát triển số vi khuẩn môi trường làm giảm lọai vi khuẩn gây mủ đưòng sinh dục

+ Cùng theo Milovanov, đường cịn tăng độ nhớt cho mơi trường

+ Đường giữ vai trò chất khử, đường khử gánh chịu tác động oxy, có oxy hóa, giữ vai trị chất chống oxy hóa chất bảo vệ chất chống ngưng kết tinh trùng khỏi bị oxy hóa

- Các chất điện giải (chất đệm)

Các chất điện giải môi trường thường lọai muối kim loại kiềm yếu Hiện nay, sử dụng chủ yếu đệm citrat, đệm có lực yếu hơn, thường kết hưọp với hệ thống đệm tự nhiên, phức tạp, lịng đỏ trứng gà (chủ

yếu hệ thống photphat protid) Natri citrat tribasic (Na3C6H5O7) dùng

môi trường tổng hợp, dung dịch nguyên chất có pH = 7,7 - 8, tức kiềm so với mức cần thiết tinh trùng Cịn lịng đỏ trứng gà có pH = - 6,3 mức cần thiết Khi pha trộn lại với nhau, ta tạo mơi trường có độ pH khác để pha lõang tinh dịch (tùy lọai mơi trường mà có tỉ lệ thích hợp) Ngịai người ta sử dụng số chất natri bicácbonat, kali clorua để làm chất đệm Cơ chế chất đệm sau :

Natri citrat phân ly hòan tòan dung dịch : Na3C6H5O7 = 3Na+ + C6H5O7 -

Do trình trao đổi chất tinh trùng, ion H+ thải làm cho mơi trường có xu hướng toan tính dẫn đến đầu độc tinh trùng Khi có C6H5O7- xảy phản ứng :

C6H5O7- + 3H+ = C6H8O7 (acid citric)

Acid citric acid hữu yếu, phân ly thành phần tinh khơng độc hại cho tinh trùng Nhờ có q trình mà trình trao đổi chất tinh trùng pH tinh dịch ổn định (Rodin cộng tác viên 1976)

Yêu cầu chất điện giải :

Phải dùng muối không độc hại, muối có anion hóa trị cao tốt Khi thí nghiệm dùng muối đẳng trương mơi trường tăng nồng độ cation tinh trùng giảm sức sống Thí dụ muối Ca+ Mg+ gây tượng tự dính cho tinh trùng, muối Al3+, muối Fe3+ làm cho tinh trùng đơng kết vón thành cục

Một số muối thường dùng :

Lọai muối Hóa trị Hóa trị Hóa trị

Từ acid vô Clorua, nitrat, iodua Sunphat, photphat dibasic

Từ acid hữu Acetat Tacterat Citrat

Tuy thầnh phần hóa học chất khác nhau, tác dụng với tinh trùng giống Ảnh hưởng ion nhiều hóa trị làm chậm trễ trương phồng keo choloid nguyên sinh chất, đó, chậm trễ trương phồng màng bọc tinh trùng Trái lại, muối nhiều cation làm tăng mức độ trương phồng làm cho tinh trùng chóng chết Muối khơng có tác dụng ni dưỡng, tạo nên mơi trường thích hợp để ting trùng sống lâu

- Các chất chống lạnh cho tinh trùng

Thường dùng lơcitin lòng đỏ trứng gà glycerin Lơcitin thuộc nhóm photpho lipid, có từ - 12% vật chất khơ lịng đỏ trứng gà Khả chống lạnh lơcitin có lẽ gốc glycerin định, glycerin rượu nguyên tử, có điểm đơng đặc điểm bốc chênh lệch xa Có lẽ, mà làm giảm tác động nhiệt độ qua dung dịch có glycerin Mặt khác, lòng đỏ trứng gà làm tăng độ nhớt môi trường nhờ đạm cao phân tử có dịch lịng đỏ

- Các chất chống khuẩn

Có thể dùng lọai kháng sinh hóa học sulfamit, kháng sinh nấm penicilin, streptomicin, tetracilin Liều lượng tùy theo loại môi trường, ý bổ sung vào mơi trường phải xác, liều cao lại tiêu diệt tinh trùng

Hiện nay, người ta thường bổ sung tetracilin vào môi trường, lọai kháng sinh có tác dụng với vi khuẩn Gram (-) Gram (+) Nếu không ta phải bổ sung hai lọai penicilin streptomicin

- Các chất rửa môi trường

Trong tinh dịch môi trường tồn ion đa hóa trị Các ion độc hại với tinh trùng trình bảo tồn, vậy, năm gần đây, người ta dùng trilon B để làm chất rửa ion

Trilon B muối natrium diamino ethane tetra acetat, cịn có tên gọi khác : EDTA, xêlecton B2, slaplex, complexion III Công thức tổng quát :

[ CH2N (CH2COOH) CH2COONa ]2 2H2O C10H14O8Na2N2

Công thức triển khai :

NaOOC - CH2 CH2COONa

N - CH2 - CH2 - N

HOOC - CH2 CH2COOH

Công thức rút gọn: Na2H2Y

Khối lượng phân tử : 372,24

TriplonB lần Kok (Hà lan, 1954) dùng mơi trường pha lỗng tinh dịch bị, sau dùng mơi trường pha loãng tinh dịch cừu (Milovanov V.K Xocolopxcaia I.I, 1956), mơi trường pha lỗng tinh dịch thỏ (Benkiovic, 1960)

Theo Milovanov (1962) Xetơdine (1971), trilon B có số cơng dụng sau : Nhờ có cấu trúc đặc biệt nên trilon B khử ion kim loại để tạo thành muối phức khả gây độc cho tinh trùng Cụ thể tinh dịch có cation Ca 2+ Mg2+ tạo thành muối phức sau : [10]

Na2H2Y Ỉ 2Na+ + H2Y2-

Ca2+ + H2Y2- Ỉ CaH2Y

Ngịai trilon B cịn có tác dụng khác (theo N.P Plitxoco, 1965 Xetơdine, 1971)

+ Kìm hãm phát triển hoạt động vi khuẩn số enzim có hại cho tinh trùng

+ Hạn chế trình trao đổi chất tinh trùng tinh dịch trình phân hủy, giúp cho tinh trùng trì ATP ADP mức độ cao

+ Duy trì trạng thái tiềm sinh tinh trùng Do bảo vệ Acroxơm tinh trùng không bị phá hủy

Với tất tác dụng trilon B có vi trí quan trọng thành phần môi trường Qua nghiên cứu, người ta nhận thấy mơi trường có trilon B kết bảo tồn hẳn mơi trường khơng có trilon B

- Các chất sinh học môi trường

Trong năm gần đây, để tăng cường tính bảo vệ sức sống tinh trùng, tác giả nghiên cứu bổ sung số chất có hoạt chất sinh học vào mơi trường pha lỗng tinh dịch thu kết tốt

+ Men phân giải H2O2 để tránh đầu độc tinh trùng

+ Men Muxinaza làm giảm chất muxin có âm đạo cái, men Hyaluronidaza để tạo nên hệ cân động men acroxơm tinh trùng mơi trường

+ Kích tố sinh dục oxytoxin prostaglading nhằm tăng cường co bóp tử cung tạo điều kiện cho tinh dịch vận chuyển nhanh vào đường sinh dục

1.3 Các loại môi trường

1.3.1 Môi trường pha lỗng tinh dịch lợn a Mơi trường đơn giản

+ Mơi trường sữa bị tươi

Lấy sữa bò khỏe mạnh, vắt, hấp cách thủy 20-30 phút sau để nguội

xuống 50 - 600C Dùng vải gấp 5-6 lần lọc cho hết phần bơ lên sau

để nguội xuống 35-400C, cho tetracilin vào (0,05g/1 lít sữa lọc), khuấy cho lọc

lại lần bảo quản để dùng + Môi trường sữa bột 10%

Dùng sữa bột tốt (khơng vón cục, hơi, mốc, có màu khác thường) Thành phần gồm: sữa bột 100g, nước cất 1000ml, tetracilin 0,05g

Cách pha : Dùng 250 ml nước cất có nhiệt độ 35-40oC pha 100g sữa khuấy cho tan

Sau cho thêm 750 ml nước cất để đủ 1000ml, dùng đũa thủy tinh khuấy cho

đều Hấp cách thủy vịng 20- 30 phút, sau để nguội xuống 350C, cho 0,05g

tetracilin vào khuấy đều, lọc qua nhiều lớp vải Bảo quản nhiệt độ 4-5oC để

sử dụng

* Chú ý: Cả hai môi trường sử dụng ngày

b Môi trường tổng hợp

Cách pha chế môi trường: Pha glucoza vào nước cất, đun cách thủy sôi 15-20 phút,

để nguội xuống nhiệt độ 60oC Cho thêm Nacitrat, natribicacbonat, kaliclorua, trilon B

vào, dùng đũa thủy tinh khuấy cho Để nguội xuống 35oC, cho thêm

amoniumsulfat, lòng đỏ trứng gà, kháng sinh vào khuấy cho tan đều, lọc qua vải (hoặc giấy lọc) Bảo quản nhiệt độ lạnh để sử dụng

* Chú ý:

104 + Trứng gà pha vào môi trường phải đánh thật kỹ (giống đánh kem) phải trứng đẻ vòng tuần

+ Natricitrat sử dụng pha chế mơi trường phải trung tính Cách trung tính sau: trộn 100g natricitrat 3,5 g acid citric, cho hỗn hợp vào cối sứ nghiền nhỏ, trộn

+ Môi trường sau pha phải có pH tương đương pH tinh dịch

Tên hóa chất Cơng thức hóa học Đơn

vị M.t BTS M.t LXII M.t TH4

Nước cất

Đường Gluco (Y học) Natricitrat (trung tính) Natribicacbonat trilon B

Amonium sulfat Kaliclorua

lòng đỏ trứng gà Tetracilin

H2O

C6H12O6 3H2O

Na3C6H5O7 5H2O

NaHCO3

C10H14O8Na2

2H2O

KCl ml g g g g g g ml g 1000 40,69 1,25 1,25 0,75 0,05 1000 60 1,78 0,6 1,85 20-30 0,05 1000 40 3,8 0,5 2,6 1,8 0,05

1.3.2 Môi trường pha lõang tinh dịch bị

Tên hóa chất Đơn vị M.t I M.t II

Fructoza Natricitrat

Lòng đỏ trứng gà Tetracilin Nước cất g g ml g ml 3,4 1,5 20 0,005 100 3,4 2,9 25 0,005 100

1.3.3 Môi trường pha lõang tinh dịch trâu ( theo tài liệu FAO)

Tên hóa chất Đơn vị M.t I M.t II M.t III

Fructoza Glucoza Glycin

Lòng đỏ trứng gà Natribicacbinat Tetracilin Nước cất Natricitrat

g g g ml g g ml g

1,0

4,0 20 0,03

1,25 2,00

25,00 1,130,03

2,2

40

0,03

0,5

1.3.4 Môi trường pha lõang tinh dịch ngựa

Nước cất : 1000 ml

Glucoza : 35g

Lòng đỏ trứng gà : ml

Tetracilin : 0,05 g

Phương pháp pha : pha mơi trưịng tinh dịch lợn

1.4 Bội số pha loãng

1.3.1 Nguyên tắc : vào phẩm chất tinh dịch để có bội số pha lõang thích hợp

1.3.2 Cơng thức pha : A C D

Q = -

a F = Q V

Trong : Q - bội số pha loãng

A - sức họat động tinh trùng

C - nồng độ tinh trùng (109) D - dung tích liều dẫn

a - tổng số tinh trùng tiến thẳng liều tinh (109)

F - lượng môi trường cần pha (ml) V - thể tích tinh dịch (ml)

Thí dụ : khai thác kiểm tra phẩm chất tinh dịch lợn ta thu :

V = 250ml A = 0,7 C = 0,25 109

Yêu cầu liều tinh sau : D = 30ml a = 0,6 109

Bội số pha loãng : 1925 ml

1.5 Kỹ thuật pha lõang tinh dịch

1.5.1 Nguyên tắc

+ Tinh dịch lấy khỏi thể gia súc vòng từ - 10 phút cần pha lõang

+ Khi pha lõang tinh dịch cần ý nhiệt độ môi trường phải tương đương nhiệt độ tinh dịch

+ Đổ môi trường từ từ vào tinh dịch (không làm ngược lại)

1.5.2 Kỹ thuật pha

Tinh dịch sau lấy khỏi thể gia súc, cần tiến hành kiểm tra tiêu phẩm chất Tính tóan bội số pha lõang, lượng mơi trường cần pha, dung tích liều dẫn, tổng số tinh trùng có khả thụ thai liều dẫn Sau đo nhiệt độ tinh dịch nhiệt độ mơi trường, có chênh lệch ta nâng nhiệt độ môi trường lên cho nhiệt độ tinh dịch (không làm ngược lại) Đổ từ từ môi trường vào tinh dịch, đổ theo thành bình để mơi trường từ từ pha lõang vào tinh dịch, đổ hết dùng đũa thủy tinh khuấy nhẹ cho

Kiểm tra lại sức họat động tinh trùng sau pha, nều tương đương với trước pha đạt yêu cầu, yếu cần xem lại kỹ thuật pha

1.5.3 Kỹ thuật đóng liều

Tùy theo yêu cầu mà dung tích liều dẫnvà tổng số tinh trùng có khả thụ thai liều dẫn khác Lọ đóng tinh phải rửa sạch, sấy khô (tốt lọ màu xanh họăc da cam) Sau rót từ từ tinh dịch vào lọ, rót cho đầy, cho đóng nút lại khơng cịn khơng khí bên liều tinh Dùng nút bấc nút lại, gắn parafin bên ngòai, bảo quản để sử dụng

2 Bảo tồn tinh dịch

2.1 Nguyên tắc bảo tồn

Chúng ta dựa nguyên tắc sống tiềm sinh động vật (động vật ngủ đơng) để bảo tồn tinh dịch Có thể sử dụng số biện pháp sau :

+ Tạo pH toan tính phù hợp với điều kiện sống tinh trùng

+ Cản trở cung cấp O2 để hạn chế trình trao đổi chất tinh trùng

+ Dồn tinh trùng lại trạng thái dày đặc hạ nhiệt độ xuống thấp

2.2 Phương pháp bảo tồn

2.2.1 Bảo tồn nhiệt độ khơng khí : dùng vải đen nhúng nước, vắt cho bớt nước bọc lọ tinh, để vào nơi kín tối Phương pháp bảo quản sử dụng ngày 2.2.2 Bảo quản nhiệt độ lạnh : tùy theo tinh dịch loài loại môi trường mà ta chọn nhiệt độ bảo quản khác

+ Đối với tinh dịch lợn, tùy theo môi trường mà ta chọn nhiệt độ bảo quản phù hợp,

thường khoảng 10 - 20 0C

+ Đối với tinh dịch trâu, bò bảo quản lạnh thường nhiệt độ - 50C

Phương tiện bảo quản : tốt sử dụng tủ bảo quản tinh dịch, tủ lạnh phích lạnh Nhưng dù bảo quản phương tiện phải khống chế nhiệt độ theo yêu cầu phù hợp với môi trường tinh dịch

Phương pháp bảo quản tinh dịch lâu phụ thuộc vào tinh dịch lòai, giống, cá thể loại mơi trường Thí dụ : tinh dịch lợn bảo quản từ - ngày

2.2.3 Bảo tồn đông lạnh

- Bảo tồn đông lạnh tinh lợn

+ Làm đậm đặc tinh dịch cách ly tâm

+ Chắt bỏ tinh pha loãng tinh trùng loại dung dịch có lực gion thấp để hạn chế bớt tổn hại cho tinh trùng

+ Khi ướp lạnh bổ sung glycerin

+ Tinh dịch ướp lạnh dạng viên dạng cộng rạ lớn nitơ lỏng - Ướp lạnh tinh dịch bị

+ Mơi trường : - nước cất 100ml

- đường lactoza sacaroza 11,5g

- Lòng đỏ trứng gà 20ml

- Glycerin 5,0ml

+ Cách ướp lạnh :

- Ướp lạnh dạng tinh cộng rạ : tinh dịch pha loãng với mơi trường, sau

phân vào ống (cọng rạ), dung tích tùy theo Làm lạnh tinh dịch từ - 40C

vòng - giây, xếp vào mạng lưới nhận chìm nitơ lỏng để bảo quản

- Ưóp lạng tinh đơng viên : pha môi trường với tinh dịch, để lạnh - 40C thòi

gai - giây Tạo khuôn tuyết CO2 khay, dùng bàn có chổi úp xuống mặt mặt

khay tạo lỗ nhỏ, Rót tinh dịch vào lỗ nhỏ, tinh dịch đơng lại viên thuốc sau lấy viên tinh cho vào gáo đựng tinh aầ nhấn chìm trongnitơ lỏng bảo quản

3 Vận chuyển tinh dịch

3.1 Nguyên tắc

+ Tinh dịch sau pha loãng lấy khỏi nơi bảo quản cần nhanh chóng vận chuyển sở sản xuất

+ Khắc phục tất yếu tố ảnh hườngđên sức sống tinh trùng

3.2 Phương tiện vận chuyển

Có thể vận chuyển xe đạp, xe gắn máy, ôtô, tàu hỏa, máy bay Nhìn chung phương tiện vận chuyển tinh dịch đa dạng phong phú Vì vậy, tùy chọn phương pháp vận chuyển phù hợp

4 Phân phối tinh dịch

- Trước phân phối tinh dịch phải kiểm trại chất lượng (kiểm tra A) Đối với tinh bảo quản lạnh A > 0,5, với tinh bảo quản đơng lạnh A > 0,3 sử dụng - Điều kiện vận chuyển : người vận chuyển phải có đầy đủ phương tiện vận chuyển, tùy loại tinh dịch mà có phương tiện dụng cụ phù hợp

- Tinh dịch phân phối phải phù hợp với công tác giống, công thức lai qui địnnh

- Cần có phiên phân phối tinh dịch theo mẫu sau : PHIẾU PHÂN PHỐI TINH DỊCH

Cơ sở sản xuất tinh :

Ngày sản xuất :

Giống số hiệu đực giống :

Sức họat động tinh trùng (tinh nguyên): Nồng độ tinh trùng :

Sức họat động tinh trùng (khi pha) : Số liều tinh phân phối :

Ngày tháng năm

Người phân phối

(ký tên đóng dấu)

VII KỸ THUẬT DẪN TINH CHO GIA SÚC 1 Những biểu gia súc động dục

1.1 Biểu toàn thân

Khi vật động dục thường bỏ ăn, kêu la, phá chuồng, tìm đến khác, thích nhảy lên khác (kể giới) Tính tình khác thường, mẫn cảm với âm thanh, đứng nằm khơng n, hay ngối lại nhìn phía sau, thân nhiệt tăng so với bình thường

1.2 Biểu cục đường sinh dục

Âm hộ phù nề, có màu đỏ, cửa âm hộ mở Tùy loài gia súc mà mức độ biểu có khác Thí dụ: lợn lúc đầu đỏ tươi, sau có màu mận chín, đặc biệt nái nội nái lai Trâu, bị biểu màu sắc âm hộ khơng rõ ràng lợn Dịch nhờn âm đạo chảy nhiều, đặc biệt bò, lợn Dịch lúc đầu lõang, có màu suốt, cuối giai đoạn động dục dịch keo lại có màu vàng Niêm mạc âm đáo màu hồng đậm Nếu kiểm tra bên đường sinh dục (bằng mỏ vịt qua trực tràng), ta thấy :

+ Thân tử cung cứng

+ Vào thời điểm đỉnh cao giai đoạn động dục cổ tử cung mở

+ Buồng trứng to bình thường, buồng trứng có nang trứng chín (ở động vật đơn thai thường có đến hai cái, cịn động vật đa thai nhiều hơn) hẳn lên bề mặt Sờ vào nang trứng thấy chí dịch sánh động

2 Kỹ thuật dẫn tinh cho gia súc

Để nâng cao khả sinh sản cho gia súc, kỹ thuật thụ tinh nhân tạo cần ý đến điều kiện cần đủ sau:

- Con phải có khả sinh sản tốt

- Phát kịp thời gia súc động dục thời điểm dẫn tinh thích hợp - Chất lượng tinh dịch phải tốt

- Kỹ thuật thụ tinh nhân tạo phải tốt

2.1 Kỹ thuật dẫn tinh cho lợn [6]

2.1.1 Theo dõi phát lợn động dục thời điểm dẫn tinh thích hợp a Đối với giống lợn nội

Lợn nội thường động dục vòng ngày biểu qua ngày sau : - Ngày thứ : Lúc bắt đầu động hớn lợn tỏ khơng bình thường, kêu rít, ăn uống thất thường , có bỏ ăn Âm hộ có tượng ứ máu, màu hồng tươi mở Nếu có lợn đực thí tình đến bỏ chạy không cho tiếp xúc

- Ngày thứ hai : Lợn nái cuồng lên, bỏ ăn, phá chuồng, muốn nhảy ngồi tìm đực, thích nhảy lên khác (kể giới) Âm hộ đỏ, có máy động, mép âm hộ mở to hơn, dịch nhờn chảy nhiều, lúc đầu loãng suốt, sau đặc keo dính Âm hộ bắt đầu se lại có nếp nhăn ngả màu mận chín, lợn bắt đầu yên tĩnh Nếu cho lợn đực thí tình vào đầu ngày thứ hai lợn không chịu, tỏ ý muốn giao phối

- Ngày thứ ba : Lợn nái yên tĩnh hẳn, khơng cần đực thí tình, gia chủ, người chăn ni người dẫn tinh kích thích ấn nhẹ lên lưng hạ thấp hai chân sau xuống dạng chân tỏ ý muốn giao phối Giai đoạn giai đoạn mê ỳ (thích đực) Kích thích vào âm hộ đứng n Chân người run lên, bụng co thóp đợt Lợn thường băn khoăn, nằm sấp, âm hộ tiếp tục

giảm xung huyết thâm se Dịch nhờn, keo có màu trắng đục chảy từ âm hộ Sơ đồ Biểu đồ thời gian dẫn tinh cholợn

* Chú ý : Giữa nái hậu bị có sai khác chút Nái tơ động dục linh hoạt hơn, yên tĩnh, sợ người “e thẹn”, nên có người lợn thường sợ, không phá chuồng không nhảy lên khác Thường ta đụng vào người nằm bẹp xuống chuồng quay mơng vào thành chuồng Cịn biểu cục đường sinh dục khơng có sai khác với nái hậu bị

b Đối với giống lợn ngoại nái F1, F2

Thời gian động dục lợn kéo dài 5-6 ngày biểu không mãnh liệt lợn nội Cuối ngày thứ 3, đầu ngày thứ có triệu chứng điển hình đường sinh dục cuối ngày thứ đầu ngày thứ lợn nội

Tóm lại : Đối với lợn nái lai chu kỳ động dục chưa thật ổn định Vì vậy, phát lợn động đục chọn thời điểm dãn tinh thích hợp ta cần ý

* Cách phân biệt lợn động dục thật với động dục giả

Động dục giả trường hợp lợn có chửa động dục Động dục giả khơng cố định theo thời gian nào, xuất lợn mang thai tháng thứ nhất, tháng thứ

hai, chí tháng thứ ba Có trường hợp gần đến ngày đẻ động dục

Để phân biệt trước tiên ta cần hỏi gia chủ tiền sử nái, sau ta vào số đặc điểm sau để phân biệt :

- Âm hộ xung huyết khơng có dịch nhờn chảy

- Có tượng nhảy lên khác không cho khác nhảy lên - Thời gian động dục ngắn, khơng q hai ngày

- Khi vật có chửa bầu vú có tượng căng, núm vú cương hai bên khơng chìa thẳng xuống đất khơng có chửa

- Nếu có đực thí tình bỏ chạy

Hình 42 Dẫn tinh cho lợn Chúng ta cần phải vào

đặc điểm để phân biệt cho xác trước định dẫn tinh cho lợn Bởi khơng xác lợn có chửa mà ta dẫn tinh vào dễ dàng dẫn đến tượng sẩy thai

c Thời điểm dẫn tinh thích hợp

114 Đối với lợn nội khoảng từ 29 - 48 kể từ lúc - động dục Để phát xác thời điểm ta cần hỏi gia chủ thời gian động dục lợn Nếu không ta phải vào triệu chứng biểu cụ thể vật biến đổi đường sinh dục phản xạ toàn thân (phản xạ mê ì) vật để định thời gian dẫn tinh thích hợp

Trường hợp nái hậu bị thường khơng có phản xạ mê ì, ta phối cưỡng thấy thời điểm phối tinh thích hợp

Đối với lợn nái F1 ta phơ

vào thời điểm cuối ngày thứ ba đầu ngày thứ tư

Đối với nái F2 nái ngoại, ta có

thể phối vào cuối ngày thứ tư đầu ngày thứ năm

Chú ý : Đây thời điểm đưa với tính chất tương đối cịn thực tế cần vào điều kiện cụ thể mà có định thời điểm dẫn tinh thích hợp tránh áp dụng máy móc

Hình 43 Một số dụng cụ dẫn tinh cho lợn

e Kỹ thuật dẫn tinh (thực tập)

- Điều kiện cần đủ để lợn có tỷ lệ thụ thai cao số đẻ ổ nhiều: + Con nái phải giống tốt, có điều kiện sinh lý, sinh sản bình thường

+ Tinh dịch phải đảm bảo chất lượng tốt (đủ số lượng, tốt chất lượng) + Thời điểm dẫn tinh phải thích hợp

+ Kỹ thuật dẫn tinh tốt + Kỹ thuật nuôi dưỡng tốt

- Chuẩn bị trước dẫn: + Vô trùng dụng cụ dẫn tinh

+ Kiểm tra phẩm chất tinh dịch trước dẫn

+ Nâng nhiệt độ tinh dịch (nếu tinh dịch bảo quản lạnh thời tiết qúa lạnh + Vơ trùng phía sau phận sinh dục

- Thao tác dẫn :

+ Tư gia súc, tư người dẫn + Kỹ thuật đưa dẫn tinh quản

+ Kỹ thuật bơm tinh

+ Kỹ thuật lấy dẫn tinh quản

- Một số điều cần ý sau dẫn :

+ Không nên cho lợn nằm ngay, ăn no sau dẫn + Rửa dụng cụ

+

Sơ đồ Thời điểm dẫn tinh cho trâu bò

Ghi chép sổ sách + Kiểm tra kết

3.1.2 Kỹ thuật dẫn tinh cho trâu, bò

* Phương pháp phát trâu bị động dục lâm sàng:

- Tồn thân : bò thường bỏ ăn, kêu la, phá chuồng, sản lượng sữa giảm, thích gần gia súc đực

- Cục đường sinh dục : âm hộ sưng to, dịch nhờn chảy nhiều Nếu có điều kiện kiểm tra tử cung qua trực tràng ta thấy thân tử cung cứng, sừng tử cung cong, buồng trứng có nang trứng chín Nếu giai đoạn hưng phấn sinh dục cao ta thấy cổ tủ cung mở

* Các phương pháp khác

* Kỹ thuật dẫn tinh Yêu cầu :

- Chất lượng tinh dịch phải tốt - Thời điểm dẫn tinh thích hợp - Kỹ thuật dãn tinh tốt

- Sau dẫn xong phải ghi chép sổ sách để theo dõi kiểm tra tỉ lệ thụ thai, khám thai dự kiến ngày đẻ

PHỤ LỤC CÔNG NGHỆ TTNT CHO BÒ [7, 11] 1 Sản xuất bảo quản tinh

Hiện thụ tinh nhân tạo cho bị thường sử dụng tinh đơng lạnh mà không dùng tinh tươi Tinh đông lạnh cọng chất dẻo (thường gọi tinh cọng rạ) dạng viên tinh Việc sản xuất tinh đơng viên khơng địi hỏi thiết bị tinh vi sản xuất tinh cọng rạ, có khó khăn việc phân biệt tinh bò đực Chính vậy, nay, thụ tinh nhân tạo sử dụng phổ biến tinh cọng rạ với loại cọng tinh có dung tích 0,25 0,50 ml Các cọng tinh bảo quản dễ dàng giỏ tinh, ngâm nitơ lỏng Việc sử dụng cọng tinh có mầu sắc khác cho phân phân biệt chúng dễ dàng cọng tinh có ghi dẫn cần thiết để phân biệt bị đực lơ sản xuất

Một cọng tinh 0,25 ml chứa trung bình 30.000.000 tinh trùng Trong thực thao tác đông lạnh giải đơng khoảng từ 10 đến 40 % số tinh trùng bị chết Sau giải đông cần có 33% số tinh trùng cịn sống phải có chuyển động tiến thẳng Nhưng cần lưu ý trường hợp này, chuyển động tiến thẳng không mạnh trường hợp tinh dịch tươi

2 Giải đông tinh

Các nghiên cứu tỷ lệ sống tối đa tinh trùng đạt mà quy trình giải đơng q trình đảo ngược quy trình sản xuất đông lạnh tinh Các

bước quy trình sản xuất đơng lạnh giảm từ từ nhiệt độ xuống -1960C

Để đạt đảo ngược này, có nghĩa phải nâng nhanh nhiệt độ từ -1960C lên

50C, dung dịch giải đông phải sử dụng Tỷ lệ thụ thai bị giảm thấp n'u

tinh dịch không giải đông cách đắn Các phương pháp giải đông tinh sau:

- Với tinh viên: Bẻ ống nước muối sinh lý cho rộng miệng tách mảnh vỡ rơi vào nước sinh lý Mở nắp bình tinh, nâng cóng đựng tinh lên ngang miệng bình Gắp viên tinh, thả vào ống nước muối sinh lý, hạ ống tinh, đậy bình tinh trộn viên tinh tan cách dùng ống bơm tinh đảo nhẹ Nắm ống tinh lòng bàn tay Hút tinh vào ống bơm

- Với tinh cọng rạ: Dùng cốc giải đơng, pha nước có nhiệt độ 37-38OC, gắp cọng tinh

cần phối thả chìm ngang vào cốc giải đơng tối thiểu 30 giây Đừng để ngập cọng rạ hồn tồn, để phía đầu cọng rạ nạp tinh lộ 1cm nhằm tránh nước vào trường hợp bị lỗi lúc sản xuất Lau khô, nạp vào súng bắn tinh, để đầu hàn bịt thị ngồi 0,3 - 0,4cm Cắt phần hàn bẹt cọng rạ Lắp vỏ súng bắn tinh vào súng bắn tinh Khi lắp phải khéo léo đơm miệng cọng rạ cắt vào núm hạt vỏ súng bắn tinh thật khít, đẩy hạt vỏ cọng rạ tới Cố định vỏ súng bắn tinh vào súng bắn tinh vịng cố định, xốy theo chiều kim đồng hồ 1-2 vịng vỏ súng bắn tinh vào gờ xốy súng bắn tinh

Yêu cầu phải lắp kín để tinh dịch khơng bị chảy vỏ súng bắn tinh

- Với tinh ampul: Dùng cốc đựng nước lạnh 5-10OC để giải đông tinh Lau khô, nâng

nhiệt độ tinh lên lòng bàn tay nước 35-37OC Nạp tinh vào dụng cụ dẫn

tinh

3 Sử dụng súng bắn tinh

Hình 44 Súng bắn tinh Loại súng nhỏ có vỏ nhựa bọc súng

chỉ phù hợp cho cọng rạ nhỏ Súng loại trung bình có vỏ nhựa bọc phù hợp cho cọng rạ loại trung bình Loại vỏ đa dùng chung cho với cọng rạ nhỏ trung bình sử dụng với súng đa năng, súng nhỏ súng trung bình

a Nạp tinh vào súng:

1 Xác định giỏ chứa cọng rạ cần tìm bình đựng tinh cách xem bảng danh mục tinh

Các cọng rạ giải đông lần cái, tinh dịch phải phối cho bò sớm càng tốt sau lấy khỏi nitơ lỏng

2 Đặt chuẩn bị hộp dụng cụ Kiểm tra nhiệt độ dung dịch giải đông: phải vào

khoảng 350C (tham khảo phương pháp giải đông trên)

3 Nâng móc (quai) giỏ đựng tinh từ rãnh khía để ngang nách cổ bình

4 Lấy cọng rạ từ cóng đựng tinh panh kẹp (Hình 55) Dùng panh kẹp vào phần đầu phía nạp tinh cách chắn, lắc mạnh 2-3 lần đặt vào dung dịch giải đông

Vẩy cọng tinh để loại bỏ nitơ lỏng từ nút phía đầu làm giảm đến mức tối thiểu hư hỏng bị nổ cọng rạ bị nứt

gãy

119

Phần đầu cọng rạ phía nạp tinh ln để phía của cóng giải đơng

Để tránh nguy hiểm khơng đáng có tinh trùng cần lưu ý cọng rạ khơng an tồn để lộ lấy khỏi nitơ lỏng phải sử dụng Khi chọn di chuyển tinh nên làm thấp bên cổ bình dựng tinh yên tâm hơn, tốt phía đường ngang

Khi xếp chuyển tinh từ bình bảo quản nitơ

phải sử dụng panh kẹp Nếu cầm tay nguy hiểm tay bị bỏng lạnh gây nguy hại cho tinh trùng nhiệt từ tay truyền sang

Hình 45 Dùng panh kẹp để lấy

cọng rạ

5 Đặt trả lại giỏ đựng tinh vị trí chúng đậy nắp bình lại Chỉ nên cầm cọng rạ vào đầu để tránh

nhiệt độ thay đổi gây sốc cho tinh trùng Lấy cọng rạ từ dung dịch giải đông lau khô khăn giấy mềm (Hình 56)

Cầm đầu cọng rạ phía có lần nút xoay trịn ngón tay ngón tay trỏ nhằm làm lỏng nút, tạo điều kiện dễ dàng bơm tinh Kiểm tra lại tên số hiệu bò đực cọng rạ

7 Lắp cọng rạ vào súng dẫn tinh (để phía đầu nạp tinh hướng lên trên) Nịng súng dẫn tinh

(pit tông) đẩy lên chút Cắm cọng rạ theo phương thẳng đứng dùng kéo gõ nhẹ nhàng vào đầu cọng rạ phía nạp tinh Như làm bọt khí chạy lên phía nút kẹp

Hình 46 Cách lau khô cọng rạ

8 Lau kéo để tránh nhiễm bẩn lần cắt cọng rạ trước Giữ súng lắp

cọng rạ theo phương thẳng đứng, ngang tầm mắt dùng kéo cắt ngang với góc 900

so với trục cọng rạ qua bọt khí, phía đầu kẹp Cọng rạ nhơ từ đầu súng dẫn tinh 1cm Việc cắt cọng rạ xác đảm bảo bịt kín hồn tồn cọng rạ vỏ súng, nơi mà nịng súng đẩy qua Lau lưỡi kéo sau cắt cọng rạ nhằm tránh nhiễm bẩn cho lần cắt cọng rạ sau

9 Rút vỏ ống dẫn tinh từ túi bảo vệ đặt vào nòng súng (tay cầm vào đầu vỏ chẻ chút để giữ cho vỏ súng sạch), di chuyển vòng khố lên phía đoạn hình búp măng sau đẩy vỏ ống dẫn tinh vào sâu đoạn hình búp măng ấn vịng khố đầu cuối cọng rạ, bên đỉnh vỏ súng cho ngang (khơng bị lệch) Xoay vịng khố đẩy vào đoạn hình búp măng cố định vỏ súng vị trí

10 Đẩy pit tơng vào tinh dịch nhìn thấy đầu cuối vỏ súng Như rút hẹp khoảng cách ngón tay ngón ấn pít tơng dẫn tinh

Không lắp súng dẫn tinh lúc 11 Phối tinh cho bò (xem chi tiết phần dưới)

b Tháo súng sau dẫn tinh:

1 Nới lỏng vịng khố Đừng để trượt vào phần bị bẩn vỏ súng Rút vỏ súng khỏi nòng súng, cọng rạ lẩy với vỏ súng

3 Kiểm tra lại tên, số ghi đợt sản xuất bò đực ghi chép vào hồ sơ quản lý phối giống

4 Vứt bỏ vỏ súng, cọng rạ xử lý theo quy định hợp vệ sinh

4 Dẫn tinh cho bò

Những thử nghiệm thụ tinh nhân tạo cho bò bơm tinh vào âm đạo, song tỷ lệ thụ thai thấp Một vài cải tiến sau thành công với việc TTNT theo phương pháp panh mỏ vịt tinh dịch bơm vào cổ tử cung Tuy nhiên, áp dụng kỹ thuật trực tràng-âm đạo tỷ lệ thụ thai nhìn chung tăng lên rõ rệt Trong kỹ thuật trực tràng-âm đạo, dụng cụ thụ tinh đưa vào phía âm đạo dẫn qua cổ tử cung nhờ điều khiển bàn tay đeo găng đưa vào trực tràng

Quy trình dẫn tinh cọng rạ theo phương pháp trực tràng-âm đạo áp dụng sau:

1 Cố định cần phối vào giá cố định Lắp dụng cụ dẫn tinh (xem phần trên)

2 Đeo găng tay bôi trơn găng tay chất bơi trơn, nước xà phịng Cố gắng giữ tay cầm dụng cụ dẫn tinh khô tốt (đừng lắp súng dẫn tinh với tay đeo găng)

3 Giữ súng (hay dẫn tinh quản) nạp tinh mồm Như hai tay tự Tránh để tiếp xúc súng dẫn tinh với vật gần vùng dẫn tinh Sự nhiễm bẩn gây nên nhiễm trùng làm giảm hội thụ thai

4 Nâng bị lên, chụm đầu ngón tay thành hình nón với chuyển động xốy nhẹ nhàng đưa bàn tay đeo găng vào trực tràng Moi phân trực tràng ra, xem xét thêm niêm dịch, niêm mạc âm đạo, cổ tử cung Xác định vị trí cổ tử cung

Lưu ý: Không dùng sức cho tay vào trực tràng có thể làm thủng rách, kết dẫn đến chết bị

5 Kiểm tra để chắn bị khơng có chửa

6 Nhẹ nhàng thả cổ tử cung tử cung Loại bỏ tất vết phân nước từ âm hộ với khăn giấy vải mềm Mở ngón tay đeo găng kéo tay phía sau Đồng thời đẩy cổ tay xuống sang

phía bên trái để mở mép âm hộ Súng dẫn tinh lúc đưa vào nguy nhiễm khuẩn mức thấp

121 Đầu súng dẫn tinh phải đưa

vào với góc nghiêng xuống 300 để

đưa vào dọc theo mép âm hộ nhằm tránh đưa nhầm vào lỗ niệu đạo bóng đái lỗ nằm phía đáy âm đạo

8 Nhẹ nhàng đưa súng dẫn tinh

phía trước đến chạm vào vật cứng, dấu hiệu tới cổ tử cung Nếu súng dẫn tinh bị giữ nếp gấp âm đạo, lúc đẩy cổ tử cung xa vào phía để duỗi thẳng nếp gấp

Hình 47 Phương pháp dẫn tinh trực tràng-âm

đạo

9 Bằng cách điều chỉnh cổ tử cung nhẹ nhàng ấn lên súng, dẫn đầu súng qua cổ tử cung vào tử cung Đầu súng sờ thấy qua thành mỏng tử cung Súng dẫn tinh khơng đưa q xa phía trước mà để vừa qua cổ tử cung (tối đa 1cm)

Với bị phối giống lại, vị trí súng cổ tử cung số bị có chửa động dục lại sau tuần Nếu phối tinh sâu vào tử cung nguy hiểm trường hợp Dẫn tinh cổ tử cung an toàn

10 Bơm từ từ nửa tới 2/3 lượng tinh vào thân tử cung, phần tinh lại cổ tử cung (Hình 27) (Đối với bị phối lại lại, bơm tồn tinh vào cổ tử cung)

Hình 48 Vị trí bơm tinh

11 Rút súng khỏi đường sinh dục mátxa tử cung, cổ tử cung vài giây nhằm kích thích tiết oxytoxin Thao tác thơ bạo làm cho bị khó chịu, gây tiết adrenalin làm tác dụng oxytocin

12 Nới lỏng vòng khố súng, đừng để trượt vào phần bị bẩn vỏ súng Rút vỏ súng khỏi nòng súng Cọng rạ lấy với vỏ súng Không vứt bỏ vỏ súng cọng rạ ghi chép xong sổ sách Đốt vỏ súng cọng rạ để phòng tránh lây nhiễm bệnh

13 Thả bò khỏi giá đường rào ngăn

14 Tiến hành biện pháp vệ sinh cá nhân rửa nước sát trùng, làm ủng Bảo dưỡng dụng cụ cách Tháo súng để lau chùi vệ sinh cồn methylen

5 Vệ sinh

a Đề phòng lây lan trại với

•Áo quần bảo hộ Luôn ủng cao su mặc quần áo bảo hộ áo choàng lại trại N'u trang phục bị bẩn, cần giặt Tại trang trại có bệnh, cần dùng túi nilon (sử dụng lần) để bọc ủng

•Cọ rửa Cọ rửa xơ, thùng ủng, đặc biệt ý đến phần đế

•Chất hố học Dùng xà phịng (hoặc) thuốc sát trùng để làm tăng hiệu biện pháp tẩy uế

•Khăn lau Dùng giấy lau sử dụng lần

• Giảm thiểu trang thiết bị Giảm đến mức thấp việc đưa trang bị vào nơi vắt sữa chuồng ni bị Càng đưa nhiều thứ vào trại, tăng khả lan truyền tác nhân gây bệnh Nên dùng thùng đựng đồ nghề để mang tất dụng cụ cần thiết, từ xơ thùng đến bàn chải

b Đề phịng lây lan vật

•Cọ rửa Khi dẫn tinh nhiều bò cái, người dẫn tinh viên nên giặt găng dùng găng cho lần dẫn tinh

•Chỉ dùng lần dụng cụ sử dụng lần Không nên chia cọng rạ dùng lại bao súng ống dẫn tinh

c Đề phòng lây lan từ vật sang người

•Găng tay Nên sử dụng găng tay dài dùng cho khám sản khoa Nếu khơng mang găng tay, có nhiều khả xảy lây lan nghiêm trọng, rửa tay cẩn thận xà phòng (hoặc) chất sát trùng sau dẫn tinh Qua vết thương sầy da tay, dễ dàng bị lây nhiễm bệnh sẩy thai truyền nhiễm (Brucellosis) hay bệnh xoắn khuẩn gây vàng da (Leptospirosis)

•Khơng hút thuốc Hút thuốc cầm nắm dụng cụ bị nhiễm trùng dễ gây nhiễm trùng cho người

d Đề phòng lây lan vào cổ tử cung tử cung

•Rửa âm mơn Cần ý rửa âm mơn cẩn thận trước đưa súng dẫn tinh vào đường sinh dục bị Khi âm mơn bị nhiễm bẩn nhiều, sau rửa, dùng cục xơ, giấy, lau âm hộ lần cuối Khi rửa, phải đảm bảo cho âm mơn khép kín để đề phịng phân lọt vào âm đạo

•Mở âm mơn Dù âm môn rửa chu đáo đến đâu vùng khơng vơ trùng Vì mà mép âm môn phải tách rộng đầu súng dẫn tinh qua tự

Nói chung mở âm mơn, dùng cổ tay ép trực tiếp xuống sang trái Với số bò cái, cần phải kéo cổ tử cung phía sau (hoặc) vuốt nhẹ thành trực tràng trước ấn cổ tay

Nếu cách không mở âm hộ khơng có giúp đỡ, đặt mảnh giấy mảnh xơ vào âm hộ cho mở để có lối vào cho đầu súng dẫn tinh

e Những ý khác

•Khơng cho chó mèo chạm vào dụng cụ dẫn tinh

•Khơng súng dẫn tinh chạm vào tường chuồng bị, cột, chấn song, lơng đi, v.v

•Thường xuyên làm súng dẫn tinh Tháo rửa cồn methylic đun sôi 10 phút Đợi cho khô lắp trở lại Không rửa nước lã thuốc tẩy uế, không, súng dễ bị dính chặt bị ăn mịn

6 Những sai sót thường gặp TTNT

Nhiều dẫn tinh viên (cả lẫn lâu năm) thường mắc phải sai sót nghiêm trọng sau đây:

a Để lộ tinh lâu

Tinh đông lạnh cần bảo tồn nghiêm ngặt nhiệt độ -800C Nếu nhiệt độ liều tinh

được nâng lên cao nhiệt độ đông lạnh trở lại, tinh trùng bị hỏng

Tuy nhiên, với ampun, để 30 giây chấp nhận có đủ thời gian để làm đông lạnh lại Với cọng rạ, lấy khỏi nitơ lỏng phải chuyển từ bình chứa sang dung dịch giải đơng Khơng có khoảng thời gian an toàn cho cọng rạ lấy khỏi nitơ lỏng

• Tránh nâng giỏ đựng cọng rạ lên khỏi vạch tuy't nitơ cổ bình chứa • Dùng kẹp để gắp cọng rạ thao tác sâu bên bình tốt

•Đừng lấy cọng rạ ngồi để xem tên hay số hiệu bị đực giống Xác định tinh dịch cách đánh dấu cóng đựng cọng rạ ghi số bình chứa Nếu cần kiểm tra lẻ cọng rạ nào, dùng kẹp gắp đặt mực nitơ lỏng Đặt cóng đựng cọng rạ chậu nitơ đảm bảo nitơ ngập toàn cọng rạ Kéo cọng rạ khỏi cóng giữ mặt nitơ Nhấc cọng rạ lên gần mặt nitơ để kiểm tra Không nhấc cọng rạ lên khỏi mặt nitơ

• Ln ln đặt cóng trở vị trí cũ sau lấy cọng rạ Lập tức thay nắp đậy • Các thao tác cần phải nhanh, xác lấy tinh đơng lạnh

• Khơng mức nitơ thấp xuống bên miệng cóng đựng cọng rạ Điều tạo khoảng an toàn tránh cho cóng đựng tinh khơng lên trơi dạt khỏi giỏ đựng rót bổ sung nitơ vào bình chứa

• Khơng lấy tinh khỏi bình chứa trước cố định bị

b Bơm tinh khơng vị trí

Dẫn tinh viên khó khơng thể lách súng dẫn tinh qua cổ tử cung, chủ yếu thiếu kinh nghiệm Một sai lầm phổ biến đưa súng dẫn tinh vào sâu tử cung không để ý

Kết thụ thai tốt đạt bơm 1/2 đến 2/3 lượng tinh vào thân tử cung, bơm lượng tinh lại vào cổ tử cung

Vì thân tử cung dài đến 5cm nên phải bơm súng dẫn tinh vừa qua khỏi cổ tử cung Bơm tinh thân tử cung tạo điều kiện dễ dàng cho tinh trùng nhanh chóng di chuyển đến ống dẫn trứng

Tinh trùng bơm vào cổ tử cung sống lâu tinh trùng bơm thân tử cung Do đó, bơm phần tinh trùng cổ tử cung có lợi bị động dục rụng trứng muộn

Cho súng dẫn tinh vào sâu tử cung làm giảm tỉ lệ thụ thai vì:

• Hầu toàn tinh trùng vào sừng tử cung, tinh trùng khơng có hội vào hai ống dẫn trứng

• Có thể làm rách nội mạc mỏng mảnh, cho dù việc cố định tử cung tiến hành cẩn thận Máu chất diệt tinh trùng

Dùng lực để khắc phục khó khăn đưa súng dẫn tinh qua cổ tử cung thường nguyên nhân làm rách nội mạc Điều gây nên vơ sinh kết dính Có thể dùng cách ép ngón trỏ ngón lên súng dẫn tinh cách tốt

Cách tốt để kiểm tra vị trí súng dẫn tinh dùng ngón trỏ ngón sờ qua thành thân tử cung từ hai phía dùng ngón trỏ sờ từ phía

Khi sờ súng dẫn tinh khơng nên đặt đầu ngón trỏ lên phần vách mềm tử

cung vị trí đầu súng ngón tay ấn đầu súng lún vào vách tử cung gây chảy máu

Thao tác thơ bạo thi'u kỹ thuật làm cho trực tràng phồng lên, khó sờ cổ tử cung cách tốt Để loại bỏ tình trạng này, dùng ngón tay cho vào vịng thắt phía sau chỗ phồng nhẹ nhàng matxa Làm kích thích trực tràng nhu động để đẩy khối khí bóng ngồi với phân, làm cho thành trực tràng dãn ra, tạo hội thuận lợi để người dẫn tinh nắm cổ tử cung dễ dàng Cũng dùng cách để loại bỏ phân khỏi trực tràng

c Lắp cọng rạ vào vỏ súng khơng khít

Nếu miệng cọng rạ khơng lắp khít vào vỏ súng, lượng tinh chảy vào vỏ vào nòng súng dẫn tinh Như giảm số tinh trùng có khả thụ tinh Hãy kiểm tra dụng cụ sau dẫn tinh để đảm bảo cách lắp cọng rạ vào súng dẫn tinh kỹ thuật

Sau lắp, cần kiểm tra cẩn thận miệng vỏ bọc có bị vỡ khơng Có trường hợp vỏ bọc bị vỡ nên bơm tinh, cọng rạ đẩy vào đường sinh dục bò

Vỏ bọc để ánh nắng giòn, nứt co lại Những vỏ bọc k m cần loại bỏ

Cũng tinh bị chảy ngược trở lại âm đạo tinh phân bố không pittông đẩy nhanh không cẩn thận Nếu không nới lỏng nút cách vê ngón tay trước lắp làm cho pittơng khó đẩy

d Quên mở âm môn

Mở âm môn trước đưa súng vào điều quan trọng để giữ gìn vệ sinh Cho dù có rửa đến đâu, âm môn không vô trùng Do vi khuẩn thẳng vào tử cung khơng mở âm mơn cách

Hình 49 Dẫn tinh nhầm vào bóng

đái

Đa số trường hợp dùng cổ tay ép phía sau, xuống sang trái (nếu người thao tác dùng tay trái để khám trực tràng), làm mở âm môn cách

Đối với bị khó thao tác dùng phương pháp sau:

•Kéo cổ tử cung phía sau ép cổ tay

•Xoa bàn tay nhẹ nhàng tới lui trực tràng số lần trước ép cổ tay

•Nắm giữ cổ tử cung thân tử cung trước định mở âm môn

Chú ý: Kéo lùi cổ tử cung phía sau p cổ tay làm tăng khả đưa súng

dẫn tinh vào lỗ niệu (Hình 59) Cần đặc biệt ý giữ cho súng dẫn tinh đưa

vào ch o góc 300 đường nằm ngang Khi kéo cổ tử cung phía sau

tạo nên nếp gấp âm đạo Do cần phải đẩy cổ tử cung phía trước súng dẫn tinh đưa vào tiền đình âm đạo

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Hafez, E.S.E., Reproduction in Farm Animal 6th ed 1993, Philadelphia:

Lea&Febiger 525

2 Knobil, E and J.D Neill, The Physiology of Reproduction Second ed 1994,

New York: Raven Press

3 Martin, H.J and J.E Barry, Essential Reproduction Fifth ed 2000: Blackwell

Science 1-274

4 Thiện, N and Đ.Đ Thà, Cẩm nang Kỹ thuật Thụ tinh nhân tạo Gia súc - Gia

cầm 1999, Hà Nội: Nhà xuất Nông nghiệp 186

5 Dũng, T.T., D.Đ Long, and N.V Thanh, Sinh sản Gia súc 2002, Hà Nội: NXB Nông nghiệp

6 Hoàng, N.H., Thụ tinh nhân tạo chăm sóc cho heo 1999: NXB Tp Hồ Chí

Minh

7 Anh, N.T., Thụ tinh nhân tạo cho Gia súc, Gia cầm 2002, Hà Nội: NXB Lao

động

8 Joe, B and W.F John, Applied Animal Reproduction 1996?

9 Thưởng, N.V., Cẩm nang Chăn nuôi Gia súc - Gia cầm Những vấn đề chung cẩm nang chăn nuôi lợn, ed H.C.n.V Nam Vol Tập I 2000, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 642

10 Thiện, N and N.T Anh, Thụ tinh nhân tạo cho lợn 1993, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 179

11 Trạch, N.X., Chăn ni bị sinh sản 2004, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 274

CÂU HỎI ƠN TẬP

1 Lợi ích bất lợi TTNT cho gia súc? Điều kiện để huấn luyện tốt đực giống?

3 Các yêu cầu kỹ thuật khai thác tinh dịch gia súc? Kỹ thuật lấy tinh lợn tay?

5 Phương pháp lấy tinh bò Âm đạo giả (cấu tạo cách lắp ráp ÂĐG, kỹ thuật lấy tinh)?

6 Quan niệm đặc điểm chung tinh dịch theo Ivanốp? Các đặc tính tinh dịch?

8 Trình bày hình thái tinh trùng cấu tạo phần đầu tinh trùng? Vẽ hình cấu tạo tinh trùng?

10 Đặc điểm trao đổi chất tinh trùng? 11 Đặc điểm vận động tinh trùng?

12 Các đặc tính tinh trùng?

13 Các yếu tố ảnh hưởng đến sức sống tinh trùng? 14 Thể tích tinh dịch (khái niệm yếu tố ảnh hưởng)? 15 Màu sắc tinh dịch?

16 Độ vẩn tinh dịch?

17 Sức hoạt động tinh trùng (khái niệm; phương pháp đánh giá kính hiển vi)?

18 Nồng độ tinh trùng (khái niệm; phương pháp kiểm tra ống Karras)? 19 Nồng độ tinh trùng (khái niệm; phương pháp kiểm tra nồng độ tinh trùng

lợn buồn đếm)?

20 Sức kháng tinh trùng (Định nghĩa; phương pháp kiểm tra sức kháng tinh trùng lợn ngoại)?

21 Sức kháng tinh trùng (Định nghĩa; phương pháp kiểm tra sức kháng tinh trùng lợn nội)?

22 Phương pháp đánh giá tỉ lệ sống tinh trùng?

23 Tỉ lệ tinh trùng kì hình (khái niệm; phương pháp đánh giá)? 24 Chỉ tiêu VAC?

25 Yêu cầu mơi trường pha lỗng tinh dịch?

26 Các chất liệu tạo môi trường pha lỗng tinh dịch? 27 Mơi trường đơn giản pha loãng tinh dịch lợn?

28 Cách pha chế môi trường tổng hợp?

29 Cho ví dụ tính tốn mơi trường pha loãng cho tinh dịch lợn? 30 Kỹ thuật pha loãng tinh dịch?

31 Các phương pháp bảo tồn tinh dịch? 32 Thời điểm kĩ thuật dẫn tinh cho lợn? 33 Trình bày tóm tắt kỹ thuật dẫn tinh cho bị?

34 Trình bày sai sót TTNT cho bị để tinh ngồi q lâu? 35 Trình bày sai sót TTNT cho bị bơm tinh khơng vị trí? 36 Khái niệm mục đích phương pháp cấy truyền phôi cho gia súc?

CHƯƠNG V. KỸ THUẬT GÂY RỤNG TRỨNG VÀ CẤY TRUYỀN PHÔI CHO

GIA SÚC

Mục đích: Giới thiệu bước cấy truyền phôi kỹ thuật

như siêu noãn gây động dục nhân tạo cho gia súc Ngoài chương trình bày tóm tắt kỹ thuật khác ứng dụng sinh sản: xác định giới tính tinh trùng phôi, thụ tinh ống nghiệm

Thời lượng giảng dạy: tiết

I Khái niệm

Cấy truyền phơi q trình đưa phôi từ gia súc sang gia súc khác (gia súc cho phôi sang gia súc nhận phơi) Phơi sống, phát triển bình thường sở trạng thái sinh lí sinh dục gia súc nhận phôi phù hợp với trạng thái sinh lí sinh dục gia súc cho phơi phù hợp với tuổi phôi (sự phù hợp gọi đồng pha)

Cấy truyền phơi q trình điều khiển sinh sản phát triển vật cách trực tiếp giai đoạn tiền phôi phơi Đây biện pháp tạo giống hồn chỉnh tổng hợp lúc thành tựu sinh học sinh sản di truyền đại

Hình 50 Đàn bị tạo từ kỹ thuật CTP

II MỤC ĐÍCH, Ý NGHĨA VÀ LỢI ÍCH CỦA CẤY TRUYỀN PHÔI

- Khai thác triệt để tiềm di truyền cá thể cao sản thông qua việc lấy phôi chúng Trên sở phổ biến nhanh gene tốt, quí thực tế

- Nâng cao cường độ chọn lọc, làm tăng tiến di truyền hàng năm, thúc đẩy cơng tác giống nhanh, đạt mục đích

- Nâng cao hiệu chọn lọc, đẩy mạnh công tác giống

- Bảo quản phôi gọn nhẹ, vận chuyển dễ dàng, đồng thời kho bảo tồn quĩ gen

- Hạn chế bệnh tật thú y, thông qua việc chọn lọc ni dưỡng gia súc, vơ trùng q trình xử lí cấy truyền phơi

- Mang lại hiệu qủa kinh tế cao

III CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA CẤY TRUYỀN PHÔI 1 Cơ sở lí luận

1.1 Cơ chế điều hịa chu kì sinh dục (Xem sơ đồTK-TD điều khiển chu kì động dục

gia súc cái)

1.2 Đặc điểm phát triển phôi giai đoạn đầu

Sau thụ tinh, phân chia phơi bắt đầu nhanh, phân chia theo cấp số nhân Qua giai đoạn phôi bào, phôi dâu, phôi nang, phôi vị phơi

Trong q trình phân chia phơi, tế bào phơi khơng lớn lên kích thước, phơi bào nhỏ Ở bị qúa trình vừa phân chia vừa vận động tử cung Thời gian ống dẫn trứng khoảng 3-5 ngày Khi phôi vận động tử cung thời gian đầu (khoảng 6-10 ngày), trơi tự tử cung Dinh dưỡng thời gian cho q trình phát triển phơi từ trứng sữa tử cung Lợi dụng giai đoạn để

người ta thu hoạch phôi Qua ngày thứ 10 trở bắt đầu định cư vào sừng tử cung để phát triển Dinh dưỡng từ trở phụ thuộc vào thể mẹ Giai đoạn không lấy phôi

Tóm lại: Từ vấn đề nêu rút nhận xét quan trọng đạo thực tiễn:

- Có thể tiến hành gây siêu noãn để nâng cao sức sinh sản bị cao sản, thơng qua xử lí hợp lý kích tố sinh sản

- Có thể thu gom hợp tử chúng chưa làm tổ

- Có thể đưa hợp tử vào tử cung khác đồng pha sinh lý với trứng phù hợp yêu cầu phát triển trứng - phôi thai, thông qua làm tổ cầu nối thai

2 Cơ sở thực tiễn

2.1 Hiện người chế tạo thành công loạt hormon sinh dục như: FSH, LH, Ostrogen, Progesteron, Prostaglanding Với hormon đó, người sử dụng để điều hịa chu kì sinh dục nhân tạo, qúa trình sinh lí sinh sản gia súc

2.2 Các nhà khoa học nghiên cứu phương pháp sản xuất dụng cụ thu lượm phôi xây dựng qui trình thu lượm, đánh giá phân loại phơi

2.3 Tạo môi trường nuôi cấy trứng hợp tử thể gia súc Phương pháp bảo tồn phơi đơng lạnh

2.4 Đã có nhiều thể sinh vật đời từ phương pháp cấy truyền hợp tử thụ tinh ống nghiệm:

Phương pháp cấy truyền hợp tử thụ tinh ống nghiệm không thành công gia súc mà thành cơng tương đối phổ biến người, đặc biệt số nước tư Mĩ [1, 2]

IV KĨ THUẬT CƠNG NGHỆ CẤY TRUYỀN PHƠI TRÊN BỊ

Tổng quát kĩ thuật công nghệ cấy truyền phôi sau :

1 Chọn cho phôi

Cái cho phôi phải đạt yêu cầu sau:

+ Phải đặc cấp cấp kỉ lục (tùy theo mục đích sản xuất mà chọn cho phù hợp) + Chú ý chọn cần quan tâm đến tính trạng có hệ số di truyền cao

+ Các biểu mặt sinh lí sinh sản phải bình thường (chu kì sinh dục phải bình thường, biểu động dục phải điển hình, khả sinh đẻ phải tốt)

+ Lí lịch phải rõ ràng

+ Trước siêu b ài noãn phải theo dõi hai chu kì

2 Chọn nhận phôi

+ Không cần nái cao sản

+ Các biểu sinh lí, sinh sản phải bình thường + Khả sinh đẻ tốt

+ Có thể giống khác giống

3 Kỹ thuật tạo chu kì động dục, gây siêu nỗn gia súc cho phôi, gây động dục pha nhận nhân tố ảnh hưởng

3.1 Kỹ thuật tạo chu kì động dục

Nếu chương trình cấy phơi có nhiều bị cho phơi, cần phải gây động dục đồng pha bị Những bị cho phơi ngày 8-14 chu kỳ động dục nhóm lại với bắt đầu tiến hành gây rụng nhiều trứng Các phương pháp sau thường sử dụng:

Chu kỳ tự nhiên:

Phải nhận biết động dục tất bò cho phôi lựa chọn ngày 8-14 chu kỳ để đưa vào chương trình cấy phôi

Tiêm liều prostaglandin:

Phải nhận biết động dục tất bò cho phôi, loại bỏ ngày 3-4 của kỳ tiêm cho

tất lại liều prostaglandin (PG) để gây động dục đồng pha

Tiêm liều prostaglandin:

Tiêm tất bò cho liều PG ngày Sau 11 ngày tiêm PG lần Quan sát động dục 4-5 ngày Bắt đầu gây rụng nhiều trứng 10 ngày sau động dục đa số bị cho phơi

Synchromate-B:

Đặt SMB ngày 1, prostaglandin vào sáng ngày rút SMB vào chiều ngày Quan sát động dục ngày Đưa tất bị động dục vào chương trình cấy phơi

3.2 Kĩ thuật gây siêu noãn (rụng trứng nhiều)

Nguyên tắc siêu noãn đơn giản, làm cho nhiều nỗn xuất bình thường cách dùng kích dục tố thời điểm quan trọng nang noãn phát triển Sau đó, kiểm sốt thối hóa thể vàng, gây xuất noãn đồng loạt, thụ tinh nhiều noãn phát triển phơi giai đoạn sớm phần lớn bị đáp ứng tốt xử lý ngày 8-14 chu kỳ sinh dục

Điều quan trọng phải sờ khám buồng trứng bị cho phơi ngày trước bắt đầu tiến hành gây rụng nhiều trứng để đảm bảo chắn có mặt thể vàng

một số gia súc, có biểu tất triệu chứng động dục, không rụng trứng Hiện tượng phổ biến bò Bos indicus so với bò Bos taurus Gây rụng nhiều trứng gia súc dẫn đến không rụng trứng, tỷ lệ thu phôi chất lượng phôi

Những sản phẩm để gây siêu noãn bao gồm: - Huyết ngựa chửa (PMSG)

Thông thường người ta dùng liều PMSG 1.500 – 3.000 UI vào thời kỳ thể vàng

của chu kỳ (ngày thứ 10 – 12) Một liều PGF2α gây thối hóa thể vàng tiêm

vào 2-3 ngày sau Bị động dục sau tiêm PGF2α ngày Như thế, bò động dục

tử lúc tiêm PMSG khoảng ngày - FSH

Có chứng cho thấy tiêm FSH làm tăng đáp ứng thú so với PMSG Qui trình thơng dụng tiêm FSH ngày mũi (cách 12 giờ) thời gian ngày (thường giảm liều dần) Thời gian bán rã FSH ước tính khoảng Trong

nhiều năm qua, liều FSH 5, 5, 4, 4, 3, 3, mg sau mg PGF2α (có thể tiêm

vào lân tiêm FSH thứ 6) để làm thối hóa thể vàng

- hMG, human menopausal gonadotropin (kích tố từ phụ nữ mãn kinh)

hMG có tác dụng FSH lẫn LH Gần người ta khẳng định liều tiêm 450-600 UI hMG polyvinylpyrrolidone đủ để gây siêu noãn [3]

4 Phối giống cho cho phôi

Sau tiêm FSH

PGF2α bình

thường bò động dục vào ngày thứ 5, (kể từ lúc bắt đầu tiêm) Ta phối giống phương pháp thụ tinh nhân tạo bào thời điểm 9-24 kể từ lúc bắt đầu có biểu động dục

5 Thu hoạch phôi

5.1 Thời gian thu hoạch phôi khoảng 5-9 ngày sau phối (tốt vào ngày thứ - 8)

5.2 Kỹ thuật thu hoạch phôi

A Phương pháp thu hoạch phôi phẫu thuật (Rowson Newcomb, 1975)

B Phương pháp thu hoạch phôi không phẫu thuật

- Nguyên tắc: đưa dụng cụ dung dịch gội rửavào tử cung Đưa dụng cụ bào vị trí lấy phơi sau bơm dung dịch gội rửa vào hút dung dịch gội rửa Phơi ngồi theo dung dịch gội rửa ta thu lượm

- Phương pháp:

a Cho gia súc nhịn ăn 24 trước gội rửa

b Chuẩn bị dụng cụ: thuốc vô trùng, dung dịch gội rửa, catheter, dụng cụ xử lí bảo quản phơi sau lấy khỏi thể gia súc

c Cố đinh gia súc gây tê lõm khum đuôi dung dịch Novacain 3% d Đưa Catheter qua âm hộ vào bị trí lấy phơi (gội rửa sừng một)

đ Dùng dung dịch gội rửa đưa vào với dung lượng cho sừng tử cung từ 200-500 ml (có thể dùng box xanh bơm vào lấy ra)

e Bơm khơng khí vào Catheter (lượng khơng khí tùy theo to nhỏ tử cung) + Ưu điểm: tiện lợi, dễ làm, đảm bảo an tồn cho gia súc

+ Nhược điểm: khơng biết số lượng xác phơi, lượng phơi lấy

6 Kỹ thuật cấy truyền phôi

+ Cố đinh gia súc

+ Vệ sinh phía sau phận sinh dục gia súc + Chuẩn bị dụng cụ cấy truyền phôi phôi

1.6.1 Kỹ thuật cấy truyền phôi phương pháp phẫu thuật

Kỹ thuật giống thụ tinh nhân tạo (tiện lợi, dễ làm, an toàn)

* Chú ý: cấy phơi nên cấy sừng tử cung bên phải, cịn cấy hai phơi cấy hai sừng

2.6.2 Kỹ thuật cấy truyền phôi phương pháp phẫu thuật

+ Vị trí phẫu tthuật (tại vị trí phẫu thuật để thu hoạch phơi)

+ Tiến hành phẫu thuật, đưa tử cung ngồi

+ Tiến hành cấy phơi

* Chú ý: cấy truyền không phẫu thuật cấy sừng tử cung bên phải, cấy hai phơi cấy hai sừng

+ Đưa tử cung lại vị trí ban đầu

+ Khâu vết mổ lại (khâu giống sau phẫu thuật thu hoạch phôi)

+ Công tác hậu phẫu chăm sóc ni dưỡng

* Chú ý: dù cấy truyền phương pháp trước cấy phải xác định trạng thái sinh lí nhận phơi tuổi phơi (trạng thái sinh lí sinh sản nhận phải tương đương với trạng thái sinh sí phơi) + Kiểm tra chất lượng phơi trước cấy

7 Khám thai sau cấy truyền phôi

Sau cấy truyền phơi ta theo dõi chu kì động dục gia súc - Nếu gia súc động dục trở lại khơng có kết

- Nếu gia súc khơng động dục trở lại ta tiến hành khám thai a Dùng phương pháp siêu âm

b Dùng phương pháp khám thai qua trực tràng c Chẩn đoán phương pháp hóa nghiệm

V Cấy truyền phơi cho dê cừu Tóm tắt

Những lợi ích đáng quan tâm đạt 25 năm qua việc tạo phôi cừu-dê kỹ thuật cấy truyền phôi Bài đề cập đến kỹ thuật sử dụng để vượt qua dao động phản ứng buồng trứng sau sử lý gonadotrophin ngoại lai, không đồng pha rụng trứng, không thụ tinh có phản ứng rụng trứng cao, ảnh hưởng phụ sử lý lặp lại (vết thương phẫu thuật, gonadotrophin kháng thể) cừu, sử lý trước kháng gonadotrophin cho tỷ lệ rụng trứng cao loại bỏ không phản ứng tăng sản lượng phơi gấp đơi Có thể hiểu rõ mối quan hệ chất lượng tế bào trứng đặc tính nang trứng sau gây rụng trứng nhiều kỹ thuật in-vitro Những hiểu biết sử dụng để đạt tối ưu sản lượng phôi cần thiết cho cải tiến di truyền gia súc phát triển kỹ thuật sinh học

1 Giới thiệu

Khả cấy truyền phôi báo cáo lần vào năm 1950 Rowson đồng nghiệp ông trường đại học tổng hợp Cambridge Kỹ thuật cung cấp phương tiện để kiểm tra cừu, điều kiện có kiểm sốt, tầm quan trọng yếu tố di truyền môi trường lên phát triển phơi Các thí nghiệm cấy truyền phơi chứng minh điều quan trọng tình trạng mơi trường tử cung sống phôi nơi mà phơi phải có mặt tử cung ngày thứ 12,5 sau động dục cừu để ngăn cản thoái hoá thể vàng Nghiên cứu cừu cắt buồng trứng thời điểm cấy phôi 3-4 ngày sau phối với cừu đực vô sinh chứng minh rõ ràng cần thiết phân tiết progestrerone sau rụng trứng, vai trò estradiol di chuyển phơi hay sống sót chúng chứng minh Cấy phôi giống có thời gian mang thai khác chứng minh kiểu gen xác định thời gian mang thai Nghiên cứu liên quan đến sử lý phôi hai tế bào chứng minh phơi bào phát triển độc lập Khía cạnh quan trọng khác cấy phôi khả ngăn cản lây truyền bệnh tật từ cho phôi bị truyền nhiễm cho đời chúng từ phôi chúng tạo cừu-dê thông qua tiêm tế bào

ICM vào xoang bào Các kỹ thuật áp dụng thời gian chứng minh có giá trị sử dụng nhiều năm làm cơng cụ nghiên cứu phịng thí nghiệm, áp dụng chúng chăn ni tiểu gia súc nhai lại địi hỏi phải cải tiến Cấy phơi có lợi việc nhập gia súc dạng phôi đông lạnh số lượng tương đối lớn phôi cừu dê cấy báo cáo úc Nam Phi Smith (1986) gợi ý MOET (gây rụng trứng nhiều cấy phơi có lợi cho việc thúc đâỷ tiến di truyền cao cho tính trạng có liên quan Tuy nhiên, chấp nhận kỹ thuật chăn nuôi cừu dê chậm, chủ yếu dao động phản ứng buồng trứng xử lý gây rụng trứng nhiều

2 Tăng hiệu kỹ thuật gây rụng trứng nhiều

Do thực tế cừu dê gia súc sinh sản theo mùa nên chúng lúc biểu động dục Vì lý nên sử lý trước progestagen sau gonadotrophin cho phơi Khơng có khác biệt cừu gây rụng trứng nhiều hai CIDR cưù sử lý xốp có tẩm progestagen, sản lượng phôi thấp sau gây động dục đồng pha CIDR hay xốp có tẩm progestagen liều thấp

Các chế phẩm gonadotrophin dùng cho gây rụng trứng nhiều

Gonadotrophin dùng rộng rãi cho gây rụng trứng nhiều PMSG (bây gọi gonadotrophin thai ngựa, eCG) Gonadotrophin thai ngựa tiêm (liều 1000 2000 IU) hay ngày trước rút progestagen liều tiêm thời gian bán sinh thể chúng dài Tác động kéo dài hocmơn làm cho nguy nang trứng không rụng cao với làm tăng mức estradiol nang trứng Estrogen coi làm thay đổi di chuyển giao tử đường sinh dục làm giảm tỷ lệ phôi thu ảnh hưởng phụ giảm trung hoà eCG kháng thể monoclon sau bắt đầu kích thích nang trứng Tiêm GnRH lúc động dục cách thay cho việc tiêm kháng eCG Thay đổi kiện nội tiết làm chín tế bào trước lúc trưởng thành giải thích cho hiệu eCG

Từ chế phẩm FSH có sãn, nhiều nghiên cứu so sánh hiệu với eCG thực nghiên cứu nghiên cứu tiến hành loài khác, FSH coi gonadotrophin ưu việt so với eCG rụng trứng tỷ lệ thụ thai lượng phơi có chất lượng tốt Mối quan hệ phương pháp gây rụng trứng nhiều liều hocmôn chế phẩm thương mại khác FSH tuyến yên cừu lợn sãn có dến lần tiêm với khoảng cách 12 bắt đầu hay ngày trước rút progestagen yêu cầu thời gian bán sinh chúng ngắn (5 pFSH) Nhiều cố gắng thực để làm đơn giản hóa kỹ thuật lần tiêm gonadotrophin để tiết kiệm thời gian sức lực, pFSH hồ tan hay khơng hồ tan PVP (polyvinylpyrrolidone), dẫn suất tác động lâu Không may số liệu không khẳng định tác giả khác Tiêm liều FSH kết hợp với liều eCG vừa phải (400-800IU) vượt qua bất lợi gonadotrophin sử dụng rộng rãi cách thương mại Australia

Trong năm 1980, người ta chứng minh chế phẩm pFSH biểu mức giao động lớn tỷ lệ hoạt lực FSH LH lượng LH cao ảnh hưởng ngược lên phản ứng buồng trứng, tỷ lệ thụ thai chất lượng phôi cừu bị Ngày nay, oFSH pFSH tinh khiết có sãn Tuy nhiên, lượng LH tối thiểu cần thiết sau rút progestagen (FSH/LH :0,3-0,4 hai lần tiêm cuối cùng, tương ứng, đặc biệt mùa không sinh sản cừu dê, để tăng phản ứng rụng trứng nhiều số phơi có khả cấy thu

Gây rụng trứng nhiều lặp lại thu phôi

Các kỹ thuật thu phôi phẫu thuật cừu dê sử dụng ngày tương tự với kỹ thuật xuất trước Lôi đường sinh dục ngồi thường dẫn đến viêm dính sau phẫu thuật, làm giảm sản lượng phôi lần phẫu thuật lặp lại sau Với phát triển phương pháp không phẫu thuật liên quan đến việc sử dụng nội soi, thu phơi nhiều lần từ mà khơng bị viêm dính sau phẫu thuật Tuy nhiên, gây rụng trứng nhiều lặp lại pFSH dê thường với việc xuất kháng thể kháng FSH giảm tỷ lệ rụng trứng sau lần điều trị thứ ba Tuy nhiên, phản ứng gây rụng trứng nhiều trì dê điều trị nhiểu lần với chế phẩm FSH cừu

Sự dao động phản ứng gây rụng trứng nhiều

Phổ biến bò mức độ dao động cao tỷ lệ rụng trứng số phôi thu sau gây rụng trứng nhiều chứng minh, dao động phản ứng yếu tố hạn chế chương trình cấy phơi tiểu gia súc nhai lại Những cho phơi khơng có phản ứng (<5 trứng rụng) (cừu :20%; dê :10%) khơng có giá trị thu phôi dường yếu tố mùa vụ, di truyền dinh dưỡng làm cho dao động kết gây rụng trứng nhiều không kể đến kỹ thuật gây rụng trứng nhiều sử dụng ảnh hưởng dinh dưỡng khơng đủ lên thối hố thể vàng trước lúc trưởng thành báo cáo chế gây điều cần phải nghiên cứu thêm Tuy nhiên, đóng góp dao động sinh lý tình trạng quần thể nang trứng thời điểm bắt đầu điều trị gonadotrophin loại bỏ Gần rBST (recombinant bovine somatotrophin) sãn có với hocmơn sinh trưởng (GH) việc điều hoà sinh trưởng nang trứng bò báo cáo Điều trị bò hậu bị với GH trước hocmôn gonadotrophin dẫn đến phản ứng gây rụng trứng nhiều tốt tăng số lượng phơi cấy cừu, số lượng cho thấy tăng số lượng nang trứng 2-3mm sau điều trị GH, tỷ lệ gây rụng trứng nhiều gonadotrophin không bị thay đổi so với không điều trị GH dê, điều trị bốn tuần rBST ảnh hưởng đến chức buồng trứng khơng ảnh hưởng đến eCG gây tỷ lệ rụng trứng Mức độ phản ứng buồng trứng với pFSH cừu có liên quan dương với số lượng nang trứng nhỏ 1-2mm có liên quan âm đến số lượng nang trứng lớn hơn, quan sát nội soi trước tiêm gonadotrophin Vì thế, điều trị trước hai tuần GnRH agonist (Buserelin) tăng số trứng rụng giảm dao động phản ứng với pFSH gia súc việc ức chế nang trứng lớn (Bảng 1)

Bảng 15 ảnh hưởng hai tuần tiêm 50μg/ngày Buserelin lên số trứng nhỏ(1-2mm) nang trứng lớn (3-5mm) có mặt trước điều trị pFSH lên phản ứng gây rụng trứng

nhiều pFSH

Điều trị

Số lượng

cừu

Số lượng nang trứng nhỏ ?SD/cừu

Số lượng nang trứng lớn ?SD/cừu

Trung bình tỷ lệ rụng trứng ?SD pFSH aGnRH + pFSH 9 9.5?3.6 21.8?5.2 P<0.01 7.3?1.3 13.2?5.5 19.2?4.1 P<0.05

Tiêm GnRH antagonist (0,5mg/ngày 10 ngày) sử dụng để thay Buserelin với hiệu sử dụng thường xuyên chương trình cấy phơi Lacaune Pháp (bảng 2)

Bảng 16 Tỷ lệ rụng trứng, sản lượng phôi khả sống phôi sau cấy phôi

tươi cho nhận cừu Lacaune

Tỷ lệ

rụng

trứng ?Sệ

DễNG

Số trứng thu

Tỷ lệ trứng thụ tinh

Tỷ lệ

phơi thối hố

Tỷ lệ phơi có khả cấy

Số phơi có khả cấy/con cho

Tỷ lệ cừu sinh ra/số phôi cấy

22.3?7.5 356 87.4 11.5 75.8 10.4 67.4

Số cừu cho phôi :26

Các kết khẳng định kết đạt nhiều năm trước Brebion cs (1992), người đạt sản lượng phôi cao số cừu sinh cho cao sử dụng GnRH antagonist trước điều trị (12,5 8,2) so với kết kỹ thuật cấy truyền phôi (6,8 4,5 tương ứng)

Không thụ tinh sau gây rụng trứng nhiều

Thụ tinh thành công cho phôi phụ thuộc vào đồng pha thời gian phối giống rụng trứng Giảm dao động thời gian rụng trứng tăng tỷ lệ trứng rụng đạt tiêm GnRH thời gian cố định sau rút progestagen Tuy nhiên, sau gây rụng trứng GnRH đợt bùng nổ rụng trứng quan sát 12-14 sau đợt bùng nổ thứ 60% cừu điều trị Một phương pháp thay khác sử dụng GnRH antagonist sau 12 rút mút tẩm progesterone, lần tiêm pLH 24 sau Điều giống đợt dâng lên trước rụng trứng cho phép phối giống theo chương trình dê gây rụng trứng nhiều

Một yếu tố ảnh hưởng đến số lượng phôi tốt đạt sau phối giống cho cừu gây rụng trứng nhiều tỷ lệ trứng thụ tinh cho có nhiều 10-12 trứng rụng Sau phối giống qua tử cung hay âm đạo, tỷ lệ thụ tinh cho phản ứng cao thấp, chí sau hay lần phối giống, di chuyển tinh trùng bị giảm qua cổ tử cung Vì vậy, tỷ lệ thụ tinh cao đạt phẫu thuật cách đưa

trực tiếp đưa tinh trùng vào sừng tử cung Gần đây, thụ tinh tử cung vi phẫu thuật sau 48 rút xốp có tẩm progesterone cho kết thụ tinh cao tần xuất thấp phôi bị thối hốkhơng kể đến tỷ lệ rụng trứng, cho thấy khả bẩm sinh tế bào trứng để thụ thai không bị tổn thương gây rụng trứng nhiều với FSH

3 Tạo phôi ống nghiêm

Mới thập kỷ trôi qua kể từ sinh cừu dê sau thụ tinh ống nghiệm (IVF) Các kỹ thuật ni chín ống nghiệm (IVM) tế bào trứng, thụ thai chúng tinh trùng hoạt hố ống nghiệm ni cấy ống nghiệm (IVC) phôi tạo thành công cừu dê Mặc dầu kỹ thuật sử dụng cho tạo phôi ống nghiệm gia súc nhỏ nhai lại dao động phòng thí nghiệm, phần quan trọng kỹ thuật coi hoạt hoá tinh trùng nhiệt độ pH môi truờng nuôi cấy thực Hepảin quan trọng hoạt hố tinh trùng bị ống nghiệm, sử dụng thành công dê cừu Tuy nhiên, chất lượng phôi tạo có mặt heparin câu hỏi, có 25% (5/20)phơi nang cấy sinh dê sống so với 61% (11/18; P<0.05) nhóm đối chứng, mà tinh trùng hoạt hoá huyết sử lý nhiệt Những khác biệt đực nguy đa tinh trùng thí nghiệm (10-20%) chứng minh Tuy nhiên, sau loại bỏ tế bào trứng có nhiều tinh trùng, trung bình 60-70% tế bào trứng cừu dê thụ thai bình thường đạt ống nghiệm Gần đây, đạt tỷ lệ phân chia ống nghiệm tương đương với tỷ lệ phân chia thể, mà mặt tế bào soma hệ thống mơi trường ni cấy khơng có huyết Các nghiêm cứu trước rào cản phát triển giai đoạn 8-16 tế bào vượt qua việc nuôi cấy với tế bào ống dẫn trứng Tỷ lệ có chửa cao đạt sau cấy (2 phôi nang nhận) phơi có nguồn gốc ni cấy mơi trường ống dẫn trứng tổng hợp (SOF) có BSA axit amin hay SOF có bổ xung FCS (bảng 3)

Bảng 17 Ảnh hưởng bổ xung môi trường SOF với 10% huyết thai bê (FCS)

ngày sau thụ tinh (dpi) lên tỷ lệ phát triển khả sống sau cấy phôi cừu tạo trong ống nghiệm

Môi trường

nuôi cấy*

% trứng phân chia 2dpi % phôi dâu 8dpi % phôi nang 8dpi Số phôi nang cấy Có chửa lúc 50 ngày Có chửa lúc sinh %bê sinh phôi nang cấy SOF SOF+FC S 83 81 16 29 27 16 15 6/8 8/8 5/8 8/8 44(7/16) 80(11/15)

*Số tế bào trứng IVM/IVF/IVC nhóm =230

Người ta báo cáo cấy phôi cừu tạo SOF bổ xung 20% huyết người làm cho thời gian có chửa dài trọng lượng so sinh cao so với mong đợi bình thường Những khuyết tật rõ ràng không quan sát thấy sau nuôi cấy mơi trường khơng có huyết

Với tiến gần phương pháp trứng rụng thụ tinh nuôi cấy ống nghiệm tạo 60-70% phơi nang, tỷ lệ gần với tỷ lệ phát triển quan sát thể Khi sử dụng tế bào ni chín ống nghiệm tỷ lệ phát triển giảm xuống xấp xỉ nửa Nguyên nhân việc lựa chọn tế bào trứng có khả chín ống nghiệm, thụ tinh phát triển Kích thươcs nang trứng mà ỏ có tế bào trứng cần phải quan tâm thu tế bào trứng cho IVM.Đạt khả phân bào khả phát triển tế bào trứngxuất giai đoạn sinh trưởng nang trứng Tế bào trứng từ nang trứng nhỏ trung bình cho tỷ lệ phôi nang thấp so với phôi nang từ nang trứng lớn cừu có gen gây chết Booroola, phát triển tế bào trứng từ kích thước nang trứng cho tốt so với quan sát tế bào trứng thu từ kích thước tượng tự có kiểu gen hoang dại Điều cho thấy gen điều khiển động thái chín ngun sinh chất tế bào trứng bên nang trứng phát triển Trong thể, khả tế bào trứng kiểm sốt mơi trường nang trứng dẫm chứng thí nghiệm Moor cs (1993) cho thấy xảy bên nang trứng cừu kích thích LH quan trọng khả phát triển tế bào trứng Khả phát triển tế bào trứng ước lượng sau IVF/IVC có liên quan với tần suất nhịp LH cuối pha nang trứng chu kỳ động dục cừu Bản chất xác yếu tố nang trứng điều khiển đạt tiềm phát triển tế bào trứng chín chưa biết số yếu tố sinh trưởng, hocmôn peptides buồng trứng coi ứng cử viên

Phương pháp đề cử cho ni chín tế bào trứng bên ngồi nang trứng nuôi cấy 24 hỗn hợp cumulus- tế bào trứng (COC) với tế bào hạt môi trường có bổ xung FSH, LH, estradiol huyết thai bê điều kiện không ổn định Hệ thống mở rộng đến tế bào trứng dê Tuy nhiên, đơn giản hố mơi trường ni chín tế bào trứng cừu dê có thể, bổ xung dịch nang trứng cừu dê (10%) FSH (100ng/ml) vào M199 Sự thành công q trình ni chín (24 cừu, 27 dê) bị ảnh hưởng lựa chọn tế bào trứng

và nhiệt độ tối ưu (38,5 -390) thu tế bào trứng từ buồng trứng lò mổ cách hút hay

cắt cho 1,5-2 COC dùng buồng trứng cừu hay dê Cắt nhỏ buồng trứng phương pháp hiệu thu số lượng lớn COC (6COC/ buồng trứng), tế bào trứng thu thêm từ nang trứng nhỏ có khả phát triển sau IVF Trung bình 9COC trứng cắt (bao gồm 4COC từ nang trứng lớn 5mm) đạt với dê sử lý trước FSH Khi thu tế bào trứng lặp lại thực phương pháp ovum pick-up hút nội soi sau sử lý trước FSH, hay COC đạt buồng trứng cừu dê tương ứng tới Báo cáo Ruacura thu phôi thu phẫu thuật tế bào trứng cừu cho thấy đến 57% tế bào trứng phát triển thành phơi nang, sinh 1,5 cừu cừu hút Cũng bò, thu tế bào trứng lặp lại từ cừu sống dê sống quan trọng phát triển chương trình cải tiến giống có hiệu Bây có khả nuoi chín thụ tinh tế bào trứng trước tuổi trưởng thành cừu dê, cho phép giảm khoảng cách hệ

4 Kỹ thuật phôi

Cấy truyền phôi

Cấy truyền phôi tạo cở thể hay ống nghiệm vào sừng tử cung nhận đạt cách tin tưởng phương pháp nội soi Kỹ thuật giảm thời gian cho lần cấy phơi tỷ lệ có thai tương tự (70-75%) với phương pháp mổ ổ bụng đường bụng Trong ngữ cảnh áp dụng phương pháp không phẫu thuật đơí với lý bảo vệ sức khoẻ gia súc, cấy phôi qua cổ tử cung cố gắng thực cừu dê Tuy nhiên, tỷ lệ có chửa cịn q thấp để áp dụng kỹ thuật

Đông lạnh phôi

Thành công sau cấy phôi đông lạnh-giải đông đạt 23 năm trước Phơi giữ mơi trường có dimethylsulphoxide (DMSO) chất bảo vệ lạnh, ethylel-glycol lên chất bảo vệ lạnh siêu trội với tỷ lệ sống sót cao đạt cấy phơi tươi có khả cấy trực tiếp phôi sau giải đông Phôi cừu dê có khả sống sót với kỹ thuật tạo pha lê nghiên cứu thêm phương pháp naỳ cung cấp phương pháp thay có kinh tế cho phương pháp đơng lạnh đòi hỏi làm nước tế bào phơi cách từ từ Những kết khuyến khích đạt tỷ lệ sống sót phơi cừu tạo pha lê-giải đông tạo thể phôi dê tạo ống nghiệm (Bảng 18)

Bảng 18 Tỷ lệ có chửa sống sót phơi tạo thể (in vivo) ống

nghiệm (In vitro) phôi cừu phơi dê tạo pha lê

Lồi Loại phôi Số phôi cấy

Số

nhận Tỷ lệ có chửa (%)

ngày 40

Tỷ lệ có chửa lúc sinh

Tỷ lệ

phơi sống (%) Cừu Dê In vivo In vitro In vivo In vitro 67 76 59 43 33 34 27 20 70c 32d 56 50 70e 15f 52 45 49c 9f 37 30 cột có chữ khác khác nhau; c d; p<0,01, e f: p<0,001

Cắt phôi cloning

Cắt phôi dùng để tăng số lượng phôi từ cho lựa chọn để tạo gia súc giống hệt để sử dụng mơ hình thí nghiệm Các phương pháp thay đổi đáng kể năm gân đặc biệt từ nghiên cứu Willadsen với mục đích tạo sinh đơi đồng hợp tử từ phôi giai đoạn tế bào sau tách phôi bào, đưa vào agar cấy vào chủ trung gian Giảm số lượng tế bào phôi nửa từ giai đoạn phôi dâu chặt phôi nang màng khơng ảnh huưởng đến sống phơi Thực tế, phân chia tế bào giai đoạn muộn không ảnh hưởng nghiêm trọng lên phát triển nửa phôi thu được,

phôi chia đôi cân sứng Chỉ có phơi có chất lượng tốt mà phơi đạt đến giai đoạn phơi dâu chặt tuổi tương ứng với phát triển bình thường lựa chọn để cắt phôi Các cặp phôi nửa cấy nhanh tốt băng kỹ thuật nội soi cho nhận gây đồng pha điều kiện này, tỷ lệ có chửa tương đương với tỷ lệ có chửa đạt cấy phơi ngun vẹn, nửa số có chửa sinh đôi, hiệu chung trường hợp sinh phôi cắt gần 100% (bảng 5)

Bảng 19 Cắt phôi cấy phôi cừu

Số %

Phôi cắt sau thu ngày 8-ngày 10 Cừu nhận (2 x nửa phôi/con nhận) Con nhận có chửa ngày 18 Cừu đẻ

Cừu sinh đôi hợp tử Cừu sinh

Hiệu (số cừu sinh/100 phôi cắt cấy) 101 101 72 62 37 25 99/101 71 61 60 40 98

Chuyển nhân từ phôi bào giai đoạn phôi cừu 8-16 tế bào, phôi dê giai đoạn 32 tế bào hay tế bào-ICM vào trứng loại bỏ nhân phương pháp thay cloning Gần đây, nhiều tiến đạt cừu, sử dụng mầm tế bào phôi trì mơi trường ni cấy cuối sử dụng tế bào thai phân hoá thai trưởng thành Sau sinh cừu dolly, nghiên cứu tăng lên cố gắng cloning chuyển nhân nên mong đợi hội sinh sản gia súc

5 Kết luận

Nhiều tiến gần công nghệ cấy truyền phôi áp dụng gia súc nhỏ nhai lại thiết lập phương pháp hiệu gây rụng trứng nhiều cho sử dụng kỹ thuật nội soi để rửa cấy phôi tăngkhả ứng dụng kỹ thuật cừu, Sự dao động phản ứng rụng trứng giảm tơi thiểu kiểm sốt sinh trưởng nang trứng điều trị trước kháng gonadotrophin trước gây rụng trứng nhiều Tăng lần số cừu trung bình sinh cho đạt với điều trị trước thúc đâỷ sử dụng hiệu cấy truyền phơi chương trình sinh sản cừu Các kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm, mà kỹ thuật tạo phơi giai đoạn đặc biệt với giá tối thiểu, cần thiết cho phát triển kỹ thuật cloning chuyển nhân Có chứng cho thấy ni chín tế bào trứng ống nghiệm tế bào trứng chưa chín hạn chế việc sử dụng phôi tạo ống nghiệm động vật nuôi Hiểu biết chế tương tác tế bào soma-tế bào trứng cần thiết để giải vấn đề

VI Cấy truyền phôi cho lợn

Trong chương chúng tơi mơ tả q trình chuẩn bị lợn cho phôi (con cho), bao gồm lập kế hoạch thu phôi, chọn lợn nái, chăm sóc trước thu phơi, nuôi dưỡng lợn nái sau thu phôi phẫu thuật Để đảm bảo chắn phôi thu giai đoạn phát triển đáp ứng mục đích dự định, để đảm bảo tất tính trạng di truyền cần thiết đạt điều kiện kiểm sốt bệnh tật, chúng tơi ý đến thời điểm thu phôi, giống cho, biện pháp kiểm soát dịch bệnh, phương pháp gây động dục, đàn đực giống di truyền sử dụng để phối giống hay thụ tinh nhân tạo, tình trạng kiểm sốt bệnh tật đực giống

Trang bị hố chất

Sản phẩm Mục đích phương pháp sử dụng

eCG: Gonadotropin thai ngựa (trước gọi gonadotropin huyết ngựa chửa - PMSG)

Gây động dục cho phôi

hCG: Gonadotropin thai người Gây động dục cho phôi

1 Các bước tiến hành trước thu phơi (hình 1)

Chuẩn bị kế hoạch thu phôi

Khi chuẩn bị thu phôi, cần quan tâm đến nhiều yếu tố, bao gồm giai đoạn phát triển phôi, phương pháp thu phôi, giống chất lượng cho phơi, tình trạng kiểm sốt bệnh tật cho phôi, phương pháp gây động dục, giá trị di truyền đực giống sử dụng để phối giống hay dẫn tinh, biện pháp kiểm soát bệnh tật đực giống v.v Bảng liệt kê thời gian thích hợp để thu phơi, phụ thuộc vào việc sử dụng phôi

Bảng 19 Thời gian tối ưu giai đoạn phát triển để thu phôi lợn Thời điểm thu phôi

Phôi sử dụng

Sau tiêm hCG

Sau động dục tự nhiên

Giai đoạn phát triển phôi thu

được

Vị trí dội rửa

Tạo lợn chuyển gen thông qua vi tiêm ADN vào tiền nhân

48-56 Ngày - Giai đoạn tiền

nhân

Giai đoạn tế bào

Ống dẫn trứng

Kiểm soát dịch bệnh chương trình khơng có mầm bệnh đặc biệt (SPF)

Ngày 5-6 4-5 ngày Phôi dâu - phôi

nang

Toàn sừng tử cung

Đưa gen vào đàn lợn

Thời điểm thu phôi Phôi sử dụng

như

Sau

tiêm hCG dục tự nhiênSau động

Giai đoạn phát triển phôi thu

được

Vị trí dội rửa

Vận chuyển phôi quốc gia

Sử dụng cấy

truyền phôi để loại bỏ bệnh khỏi đàn lợn

Bảo quản lạnh phôi

Ngày 7-8 Ngày 6-7 Phôi nang giãn nở,

phơi nang màng

Tồn sừng tử cung

Ngày Ngày Giai đoạn 1-2 tế

bào

Ống dẫn trứng

Ngày Ngày Giai đoạn 2-4 tế

bào Ống dẫn trứng phía

trên sừng tử cung

Ngày Ngày Giai đoạn tế bào

đến phơi dâu chặt

Ống dẫn trứng phía sừng tử cung

Ngày Ngày Giai đoạn tế bào

đến phơi dâu chặt

Phía sừng tử cung

Ngày Ngày Phôi dâu chặt đến

phơi nang

Tồn sừng tử cung

Ngày Ngày Phôi nang giãn nở

đến phơi nang màng

Tồn sừng tử cung Sử dụng

thí nghiệm

Ngày Ngày Phơi nang

màng

Toàn sừng tử cung

3 Các điểm cần quan tâm việc lựa chọn cho phôi

Khi lựa chọn cho, điểm sau cần quan tâm Việc sử dụng phôi yếu tố quan trọng

(1) Con cho cần phải thoả mãn tất yêu cầu kiểm soát bệnh tật di truyền cho việc sử dụng phôi chúng

(2) Con cho phải có sinh lý phù hợp để chịu phối giống Đặc biệt

chân sau phải khoẻ mạnh

(3) Con cho cần phải thoả mãn tất yêu cầu để gây động dục (4) Con cho phải đủ khoẻ để thực phẫu thuật

4 Phương pháp gây động dục

Nếu có ý định phối giống cho động dục tự nhiên để thu phơi, cần nuôi nhiều lợn nái, theo dõi động dục cách cẩn thận, lựa chọn động dục xác định xác Vì phương pháp khơng có tính thực tế Để chuẩn bị cho phơi, phương pháp hiệu gây động dục phương pháp Phương pháp phù hợp phụ thuộc vào thực tế quan nơi tiến hành thu phôi Một số nhà nghiên cứu báo cáo sử dụng ngẫu nhiên loại hormon để gây rụng trứng; để thu nhiều phôi tốt, eCG tiêm để tăng số trứng rụng, hCG dùng để gây rụng trứng thời điểm định phơi thu giai đoạn phát triển định Không thiết phải dùng loại hormon này, nhiên, việc sử dụng chúng cách ngăn ngừa tốt nhất, sử dụng cho lặp lại

Có phương pháp gây động dục chính, liệt kê từ a đến e trang sau Liều eCG tiêu chuẩn 1000iu/con cho phương pháp, phản ứng buồng trứng với eCG dao động phụ thuộc vào yếu tố loại eCG, số lô sản xuất, khác biệt cá thể lợn nái, khác biệt giống v.v Các yếu tố cần phải tính tốn mua eCG Đặc biệt nơi thu phôi với số lượng lớn, tốt nên kiểm tra loại sản phẩm lô sản xuất trước sử dụng Ngoài ra, nguy gây viêm nội mạc tử cung tăng lên liều eCG tăng lên Khi lợn nái không phản ứng với eCG, liều tăng lên 1250iu hay 1500iu Mặt khác, tiêm eCG làm tăng viêm nội mạc tử cung hay tăng việc tạo phôi khơng bình thường, liều phải giảm xuống 750 hay chí 500iu Là phương pháp thay thế, hCG sử dụng khơng có eCG hay eCG (400-600iu) hCG (200iu) sử dụng để gây động dục Khi tiêm hormon hay loại thuốc khác, thuốc phải tiêm vào vị trí phù hợp thể khơng để chảy ngồi Nếu lợn giữ chuồng rộng, người tiêm phải lùa lợn vào góc để cắm kim Cần phải cẩn thận đặc biệt để bảo đảm lợn không di chuyển đột ngột tiêm Nếu lợn có hành vi lo lắng, tốt lùa vào cũi để cố định trước tiêm Ngồi ra, chí gây động dục, rụng trứng bị giảm hay khơng rụng trứng lợn bị stress nặng động dục Đối với lý

do này, cẩn thận không cho lợn tiếp xúc với lợn bị bệnh, nhiệt độ cao hay loại stress khác

Phương pháp gây động dục lợn

(a) Tiêm eCG hCG cho lợn hậu bị trước thành thục tính dục

(b) Tiêm PGF2 a (hoặc dẫn xuất) cho lợn có chửa (có chửa từ ngày

12-40) để gây sẩy thai sử dụng lần động dục sau

(c) Sử dụng động dục sau cai sữa (d) Cho ăn progesterone tổng hợp (e) Sử dụng chu kỳ động dục tự nhiên

a Tiêm eCG hCG cho lợn hậu bị trước thành thục giới tính

Đây phương pháp sử dụng phổ biến Động dục bắt đầu 4-5 ngày sau tiêm eCG Khi lựa chọn cho số lợn hậu bị trước thành thục tính dục (90-120kg, 5-7 tháng tuổi), cần phải nhớ điểm đề cập trước Kết tốt thường thu cẩn thận lựa chọn lợn hậu bị gần thời điểm thành thục tính dục (phụ thuộc vào tuổi, không phụ thuộc vào khối lượng)

Lựa chọn lợn hậu bị trước tuổi thành thục tính dục Tiêm tiêm da eCG (1000iu)

Tiêm tiêm da hCG (500iu) 72 sau tiêm eCG Theo dõi động dục

Phối giống tự nhiên hay dẫn tinh

b Tiêm PGF2 a hay dẫn xuất (PGF2a-A) cho lợn nái chửa (giữa ngày mang thai 12 - 40) để gây sẩy thai dùng lần động dục sau

Phương pháp sử dụng với lợn nái chửa đến tận kỳ mang thai PGF2 a hay PGF2a-A gây thoái hoá thể vàng, sử dụng để kết thúc có chửa, sau lần động dục sử dụng Lần chất sử dụng, động dục thường bắt đầu 5-6 ngày sau Động dục thường gây thành công với tỷ lệ gia súc cao, nhiều yếu tố khác cần phải ghi nhớ Cần phải có lợn nái có chửa sẵn sàng để nhận phơi, nhiều thời gian để gây động dục giá chuồng trại, cho ăn công trại nuôi lợn cần quan tâm Liều

PGF2 a hay PGF2a-A dao động phụ thuộc vào nơi tiêm Tiêm vào phận sinh dục nửa liều cần cho tiêm bắp Ngoài ra, ECG hay HCG sử dụng kết hợp để gây động dục

Mua lợn nái chửa (giữa ngày chửa 12 - 40)

Tiêm bắp lần đầu PGF2 a (15 mg/con) hay PGF2a-A (1 mg/con)

Tiêm bắp lần hai PGF2 a (10mg/con) PGF2 a-A (0,5mg/con), 12 24 sau tiêm lần đầu PGF2 a hay PGF2a-A

Tiêm bắp hay da eCG (1000 IU), 24 sau tiêm lần đầu PGF2 a hay PGF2a-A

Tiêm bắp hCG (500 IU) 72 sau tiêm eCG Theo dõi động dục

Phối giống tự nhiên hay dẫn tinh

c Sử dụng động dục sau cai sữa

Năm đến sáu ngày sau kết thúc ni dưỡng bình thường (3-5 tuần) lợn cai sữa, lợn nái thường động dục trở lại Lần động dục sử dụng Ngồi ra, eCG hCG sử dụng kết hợp để gây động dục cho lợn nái Tuy nhiên, khoảng cách từ lúc cai sữa đến lần động dục thường dao động, phụ thuộc vào yếu tố thể trạng lợn nái, độ dài thời gian nuôi lứa đẻ Tốt nên tránh sử dụng loại lợn nái sau khơng thu kết tốt: lợn nái béo q gầy; lợn nái có thời gian ni tuần lợn nái đẻ lứa Động dục lợn nái thường kéo dài so với lợn hậu bị, rụng trứng có khuynh hướng xảy chậm Vì lý cần phải theo dõi cẩn thận dấu hiệu động dục, cho nhảy trực tiếp hay dẫn tinh thực thời điểm phù hợp Bởi rụng trứng xảy chậm cho phơi có thời gian động dục dài nên thời điểm thu phôi cần phải điều chỉnh cho phù hợp

Chọn lợn nái nuôi Cai sữa

Sau cai sữa, tiêm bắp hay tiêm da eCG (1000 IU) 72 sau tiêm eCG, tiêm bắp hCG (500 IU)

Theo dõi động dục

Cho nhảy trực tiếp hay dẫn tinh d Cho ăn progestin tổng hợp

Altrenogest (17-a-allyl-estratiene-4-9-11, 17-b-ol-3-one, hay allyl-trenbolone, RU-2267, REGU-MATE; Roussel-Uclaf, Hoechst UK Ltd.) cho ăn lần / ngày thời gian định Chất progestin tổng hợp (tương tự progesterone), kéo dài pha thể vàng chu kỳ động dục cho ăn Sau ngừng ăn, động dục xảy sử dụng Liều 20mg (10-40mg)/ lợn nái/ngày, động dục xuất 5-6 ngày sau cho ăn hoarmon cuối Phương pháp sử dụng với: lợn nái động dục thầm lặng, lợn nái thu phôi lợn nái vừa kết thúc nuôi Tuy nhiên, Nhật không cho phép bán loại hormon này, sử dụng để nghiên cứu Ngoài loại hormon cần cho lợn nái ăn đường miệng, lợn nái phải nuôi chuồng cá thể Cũng sử dụng phương pháp để tiêm eCG hay hCG ngày ăn progestin tổng hợp (hoặc ngày cuối cùng) để gây động dục

Lựa chọn lợn nái thành thục tính dục Chuyển chuồng nuôi

Cho ăn hủcmon thời điểm ngày (phun hucrmon vào thức ăn)

Cho ăn hormon thời gian phù hợp (18 ngày trường hợp lợn nái có động dục thầm lặng, 14 ngày lợn nái có dấu hiệu động dục trước rõ ràng)

Tiêm bắp hay tiêm da eCG (1000 IU) ngày sau cho ăn progestin tổng hợp lần cuối

Tiêm bắp hCG (500 IU) 72 sau tiêm eCG Theo dõi động dục

Nhảy trực tiếp hay dẫn tinh

e Sử dụng chu kỳ động dục tự nhiên

Chu kỳ động dục lợn nái kéo dài trung bình 21 ngày Tiêm eCG vào ngày 15 hay 16 chu kỳ động dục (bắt đầu chịu đực ngày 0), 72 sau tiêm hCG Động dục xẩy 4-5 ngày sau tiêm eCG Cũng sử dụng động dục tự nhiên mà tiêm loại hormon

Lựa chọn lợn nái có chu kỳ rõ ràng

Tiêm bắp hay tiêm eCG (1000 IU) vào ngày 15 hay 16 chu kỳ động dục Tiêm bắp hCG (500 IU) 72 sau tiêm eCG

Theo dõi động dục

Nhảy trực tiếp hay dẫn tinh

5 Theo dõi dấu hiệu động dục

Lợn nái gây động dục phải kiểm tra dấu hiệu động dục thời điểm định lần vào buổi sáng lần vào cuối buổi chiều, kết phải ghi lại Đánh giá chịu đực bắt đầu dựa nhiều yếu tố bao gồm số ngày từ tiêm eCG, hành vi lợn nái, biểu phận sinh dục ngoài, phản ứng lợn nái ấn tay lên lưng Chịu đực kiểm tra dễ dàng xác cách cho phép lợn nái tiếp súc với lợn đực (chịu đực quan sát rõ chí chúng ngăn cách hàng rào) Người ta khuyến cáo phiếu kiểm tra động dc c ỏnh du nh sau: Ô = chu c; O = có biểu động dục; D = có biểu động dục; C = khơng có biểu động dục Khi theo dõi dấu hiệu động dục chịu đực lợn nái gây động dục, nhiều điểm cần phải ghi nhớ Các điểm liệt kê bảng sau

Bảng 20: Các dấu diệu động dục chịu đực lợn nái gây động dục Dấu hiệu

động dục

2 ngày sau tiêm

eCG

Ngày tiêm hCG ngày sau tiêm hCG

Bộ phận sinh dục

Bắt đầu đỏ sưng to

Đỏ, sưng to, dịch nhầy chảy

Đỏ, sưng to, dịch nhầy chảy

Hành vi Mất cảm giác

thèm ăn Nhảy lên lợn khác, đứng yên, vểnh tai lên (chịu đực)

Phản ứng ấn vào lưng

Đứng im (chịu đực)

Nhảy trực tiếp hay dẫn tinh

Một lợn nái gây động dục thường có dấu hiệu động dục khoảng 24-28 sau tiêm hCG Khi phát chịu đực vào buổi sáng, nên cho nhảy trực tiếp (hoặc dẫn tinh) lần đầu buổi sáng, lần thứ hai vào cuối buổi chiều ngày Khi phát

chịu đực vào cuối buổi chiều, cho nhảy trực tiếp (hoặ dẫn tinh) lần đầu lần thứ hai vào sáng hôm sau Nếu lợn nái tiếp tục chịu đực lần kiểm tra động dục lần sau, nên cho nhảy trực tiếp (hoặc dẫn tinh) lần thứ ba Điều cần thiết tất tế bào trứng thụ tinh thu nhiều phơi Vì vậy, điều quan trọng cho nhảy trực tiếp (hoặc dẫn tinh) nhiều lần, sớm tốt sau lợn nái bắt đầu chịu đực Lợn đực dùng cho nhảy trực tiếp nên có đặc điểm di truyền mong muốn để sử dụng phôi đạt yêu cầu, phải thoả mãn tình trạng kiểm sốt bệnh tật Ngồi khả sinh sản phải chứng minh Về nguyên tắc, lợn đực dùng để nhảy trực tiếp - lần / tuần, phải chuẩn bị sẵn số lợn đực định Phụ thuộc vào việc phôi sử dụng, dùng nhiều đực giống khác cho lần nhảy trực tiếp lần nhiều cho phối giống đồng thời, hay kết hợp với dẫn tinh Làm nhằm giảm yếu tố liên quan đến đực giống dẫn đến không đạt kết thụ tinh Nừu dẫn tinh, ngăn ngừa sử dụng sức đực giống giảm số lượng đực giống phải trì đàn

7 Chuẩn bị tinh dịch

Khi sử dụng cấy phôi để cải tiến đàn lợn thông qua việc truyền đạt đặc tính ưu việt đực giống lợn nái, điều khơng thể loại chương trình nhảy trực tiếp mô tả phải cho lợn đực giống nhảy trực tiếp lần đầu sang lần Để tránh sử dụng sức đực giống trường hợp thế, cần phải bảo quản tinh dịch nhiệt độ thấp, sử dụng tinh đông lạnh cho lần phối giống cho phơi Đã có nhiều tài liệu viết bảo quản lạnh tinh dịch Loại mơi trường pha lỗng sử dụng rộng rãi với mục đích Modena, thành phần nêu bảng

Bảng 21: Thành phần phôi trường Modena (đơn vị: g)

Thành phần Khối lượng Thành phần Khối lượng

Glucose 27,5 Citrate 2,9

Na citrate 6,9 Trisaminomethane 5,65

Na

bicarbonate

1,0 Polymixin B Sulfate 0,0167

EDTA-Na2 2,35 Gentamicin sulfate 0,150

Ở không mô tả chi tiết kỹ thuật bảo quản lạnh, mà giới thiệu tổng quan ngắn Trước hết phải lấy tinh điều kiện vệ sinh giữ tinh dịch (phần đậm đặc) nhiệt độ ấm Sau kiểm tra kính hiển vi để xem xét khả sống tinh trùng, hoạt lực khơng có kỳ hình Tất quan sát cần phải ghi lại đầy đủ Trong thực tế không kiểm tra cẩn thận mật độ tinh trùng (mặc dầu tiêu tốt

nếu tính được), mật độ tinh trùng q thấp, để an tồn không nên sử dụng Môi trường Modena, chưng ấm nhiệt độ tương đương nhiệt độ tinh dịch, rót (theo thành bình) vào lọ đựng tinh dịch Đồng thời mẫu tinh trùng bình khuấy nhẹ q trình rót mơi trường pha lỗng Lượng mơi trường rót vào phụ thuộc lượng tinh pha cần sử dụng, thường thường - lần

lượng tinh dịch Bảo quản máy lạnh 150C Mặc dầu có khác biệt cá thể

các đực giống, tinh trùng thường sử dụng tuần chúng giữ khả sống hoạt lực chúng làm ấm Tinh trùng sử dụng mà chất lượng làm giảm số phôi thụ tinh Nếu bảo tồn máy lạnh mà không sử dụng, sức sống tinh trùng giảm dần Để tránh điều này, khuấy mẫu ngày lần

Các hoá chất cân trộn lẫn với nước lọc để đạt tới 1000ml dung dịch Modena Dung dịch bảo quản 40C làm ấm lên sử dụng Khơng cần thiết phải lọc vô trùng

8- Vận chuyển để đói cho phơi

Con cho phơi phải để đói ngày trước phẫu thuật, có thể, khơng cho lợn nái uống nước trước phẫu thuật

9- Di chuyển cho phôi sau phẫu thuật

Sau phẫu thuật, cho phôi phải giữ chuồng Chỉ cho ăn nửa lượng thức ăn bình thường ngày sau phẫu thuật, điều chỉnh sau phụ thuộc vào hồi phục lợn nái Ngoài ra, loại kháng sinh phù hợp nên sử dụng để ngăn ngừa nhiễm khuẩn sau phẫu thuật Nếu lợn nái điều trị thuốc đưa tới lị mổ, phải đủ thời gian pháp luật cho phép Nếu cho phôi sử dụng lại để thu phôi, cần phải ý đến thể trạng điều chỉnh lượng thức ăn cho phù hợp Cần phải đặc biệt ý để lợn không bị béo Một phẫu thuật kết thúc, cần phải theo dõi dấu hiệu động dục Sau cho phôi trải qua phẫu thuật, hồi phục động dục bình thường, hay hồi phục sau thời gian dài Trong trường hợp đó, gây động dục trở lại cách đưa lợn nái đến tiếp xúc với lợn đực, hay cách tiêm eCG Khi tất phôi thu từ lợn nái, phơi nằm lại tử cung làm cho có chửa Chúng ta cần cảnh giác khả

10- Chuẩn bị nhận phôi

Lợn nái mà phôi cấy vào gọi lợn nái nhận phôi hay nhận phôi Để thực cấy truyền phôi, chu kỳ động dục cho phơi nhận phơi phải Nói cách khác, chu kỳ động dục chúng phải đồng pha Trong chương này, mô tả chuẩn bị nhận phôi trước cấy phôi, chăm sóc nhận sau cấy phơi Khi sử dụng lợn hậu bị trước thành thục giới tính, nên sử dụng

những gần tuổi thành thục giới tính tốt (6-7 tháng tuổi) Nừu lợn thành thục giới tính sử dụng, điều quan trọng để cấy phôi thành công chu kỳ động dục phải rõ ràng, chu kỳ động dục phải diễn đặn

Các thiết bị hoá chất yêu cầu

Sản phẩm Mục đích phương pháp sử dụng eCG: Gonadotropin thai ngựa

(eCG: trước coi gonadotropin huyết ngựa chửa - PMSG)

Gây động dục cho phôi

eCG: Gonadotropin thai người Gây động dục cho phôi

10.1- Quy trình chuẩn bị lợn nhận phơi

Quy trình chuẩn bị lợn nhận phơi tóm tắt phần

Đầu tiên, hình thành nên kế hoạch cấy phơi đồng thời với mục đích sử dụng phơi Sau lựa chọn nhận, xây dựng lịch gây động dục đồng pha, theo dõi dấu hiệu động dục nhận phơi, vận chuyển để đói nhận phôi

10.2- Kế hoạch cấy phôi

Để hình thành kế hoạch cấy phơi, cần thiết phải tính tốn yếu tố thời gian phương pháp cấy phôi, số nhận phôi, mối quan tâm đến kiểm soát bệnh tật cần thiết phương pháp gây động dục

10.3- Các điểm quan tâm lựa chọn nhận phôi

Khi lựa chọn nhận phôi, cần ý điểm sau Số lượng phôi việc sử dụng phôi

Con nhận phôi cần phải thoả mãn tất yêu cầu kiểm soát bệnh tật cho việc cấy phôi

Con nhận phôi phải có sinh lý phù hợp để đẻ ni tuyến vú khơng có khuyết tật

Con nhận phôi cần phải thoả mãn tất yêu cầu để gây động dục Con nhận phôi phải đủ khoẻ để thực phẫu thuật

Con nhận phơi phải tiêm phịng số bệnh định (bệnh Aujeszky, bệnh viêm phổi Nhật Bản, bệnh nhiễm trùng parvovirus), bệnh gây sẩy thai hay thai gỗ lúc có chửa

10.4- Gây động dục đồng pha

Để cấy truyền phôi thành công (nghĩa sau cấy phôi, phôi phát triển thành lợn con) Điều cần thiết phải gây động dục đồng pha cho phôi nhận phơi Tỷ lệ có chửa có khuynh hướng cao chu kỳ động dục nhận phôi sai lệch - ngày sau cho phôi (bảng 4) Tốt nên gây động dục nhận cho sai lệch ngày so với cho Trong mức độ động dục đồng pha thường tính dựa sở bắt đầu động dục (chịu đực), thời điểm rụng trứng liên quan đến cuối động dục, thời gian động dục giao động theo kỹ thuật gây động dục cá thể lợn Thời điểm rụng trứng khác chí chu kỳ động dục bắt đầu thời điểm, cho phơi nhận phơi phải theo dõi đến kết thúc động dục Khi cấy phôi giai đoạn đầu phát triển (giai đoạn hay tế bào), thường phải chọn đồng pha động dục hồn tồn cho phơi nhận phôi

Bảng 22 Gây động dục đồng pha chu kỳ động dục tỷ lệ có chửa tương ứng Mức độ động dục đồng pha *

+2 +1 ± -1 -2

Đợt nghiên

cứu

Tỷ lệ có chửa

5% 47% 71% 78% 86%

Có chửa /cấy 1/22 14/30 22/31 28/36 18/21

Tỷ lệ có chửa 40% 55% 74% 72%

Có chửa /cấy 2/5 22/40 46/62 36/50

*: +2: Con nhận bắt đầu động dục trước cho ngày +1: Con nhận bắt đầu động dục trước cho ngày ± 0: Con nhận bắt đầu động dục ngày với cho - 1: Con nhận bắt đầu động dục sau cho ngày - 2: Con nhận bắt đầu động dục trước cho ngày 10.5- Phương pháp gây động dục

Nếu có ý định sử dụng nhận phơi động dục tự nhiên, cần phải nuôi số lượng lớn lợn nái theo dõi dộng dục cẩn thận Vì phương pháp khơng hiệu Có phương pháp gây động dục chủ yếu, liệt kê từ a đên e bảng Liều eCG tiêu chuẩn 1000iu/con cho phương pháp này, phản ứng buồng trứng với eCG dao động phụ thuộc vào yếu tố mùa vụ, loại eCG, số lơ sản xuất nó, khác biệt cá thể lợn nái, khác biệt giống v.v Khi lợn nái không phản ứng với eCG, liều tăng lên 1200iu hay 1500iu Mặt khác, xảy gây rụng trứng mức hay thể vàng u nang, phải giảm liều tiêm xuống 750, chí 500iu Mặc dù thực tế khơng địi hỏi phối giống trực tiếp hay dẫn tinh, phương pháp để gây động dục theo dõi động dục nhận phôi giống cho phôi Vấn đề mơ tả trên, chúng tơi khơng mơ tả lặp lại

Phương pháp gây động dục lợn a Tiêm eCG hCG cho lợn hậu bị trước thành thục giới tính

b Tiêm PGF2 a hay dẫn xuất tương tự cho lợn có chửa (có chửa từ ngày

12-40) để gây xẩy thai sử dụng lần động dục sau c Sử dụng động dục sau cai sữa

d Cho ăn progesterone tổng hợp

e Sử dụng chu kỳ động dục tự nhiên

10.6- Chăm sóc nhận phơi sau phẫu thuật cấy phôi

Sau phẫu thuật cấy phôi, nhận phải nuôi chuồng sạch, tách khỏi lợn khác Lợn nái có chửa thường nhốt chuồng Nuôi nhốt riêng rẽ cho lứa đẻ nhiều so với nuôi thả nhà nhiều lợn khác Việc theo dõi có chửa thể trạng lợn nái dễ Khi khơng có điều kiện ni nhốt riêng rẽ lợn chuồng, lợn phải nhốt chung với lợn nhóm suốt q trình có chửa Ngày sau phẫu thuật cho ăn thức ăn nửa bình thường Ngồi ra, nên tiêm loại kháng sinh thích hợp để tránh nhiễm trùng sau mổ Một phẫu thuật cấy phôi kết thúc, tiếp tục theo dõi dấu hiệu động dục Ở tuần thứ sau phẫu thuật, hay thời điểm thích hợp sau đó, nên kiểm tra có chưa

PHỤ LỤC

I Thụ tinh ống nghiệm (IVF)

1 Sự hứa hẹn phôi tạo ống nghiệm

Phôi tạo ống nghiệm (ON) đóng vai trị quan trọng hệ thống sản xuất sữa thịt Chọn lọc di truyền nhân giống đạt tối ưu thông qua chiến lược liên quan đến việc sử dụng phơi tạo ON Ngồi ra, phơi tạo ON có triển vọng tốt nâng cao tỷ lệ có chửa cho đàn có khả sinh sản thấp Tỷ lệ chọn lọc tính trạng số lượng tăng lên cách khai thác công nghệ phôi tạo ON để nâng cao xác cường độ chọn lọc để giảm khoảng cách hệ Các báo cáo cho thấy tế bào (TB) gốc phơi biệt hố thành TB trứng TB trứng có nguồn gốc từ TB tuỷ xương máu, có nghĩa tiến cơng nghệ tương lai kết hợp TB trứng từ số có tiềm di truyền cao Phơi tạo ON đóng vai trò quan trọng sơ đồ chọn lọc di truyền dựa nhận biết allen gen đặc hiệu Phơi theo dõi di truyền allen đặc hiệu chọn lọc di truyền thực trước có chửa Tinh trùng xác định giới tính cơng cụ khác người ta sử dụng thông qua hệ thống tạo phôi ON tinh trùng phân loại giới tính dùng để thụ tinh với nhiều TB trứng ON so với dẫn tinh Chuyển nhân chuyển gen đối mặt với hạn chế kỹ thuật, luật pháp xã hội, công nghệ di truyền bổ sung phụ thuộc vào cơng nghệ tạo phơi ON để có thành cơng

Lai tạo giống có quan tâm hệ thống sản xuất sữa Rutledge (2004) đưa số dẫn chứng tranh luận sơ đồ nhân giống cải thiện thông qua dùng phôi lai F1 (được tạo ON) cấy vào F1 Một chiến

lược loại bỏ việc ưu lai tăng kiểu hình F1 phối với đực đực lai Tạo phơi ON có hứa hẹn phương pháp vượt qua khả không sinh sản sai sót rụng trứng thụ tinh, chết phơi sớm nguyên nhân khác Giảm tỷ lệ có chửa bị sữa đưa đến việc tìm giải pháp giải khả không thụ tinh Cấy truyền phôi phôi tạo ON chứng minh làm tăng tỷ lệ có chửa bị sữa vắt sữa bị stres nhiệt, cải tiến hệ thống tạo phôi cấy phơi làm cho có lợi việc tăng khả thụ thai đàn nơi mà khả thụ thai thường nguyên nhân khác Tuy nhiên, với mức độ công nghệ cấy truyền phơi dường chưa tăng tỷ lệ có chửa bị vắt sữa khơng bị stress nhiệt Phôi tạo ON nguồn vật liệu phôi tiết kiệm, vượt qua tượng chết phôi sớm so với phơi tạo từ gây rụng trứng nhiều giá thành hạ tạo phơi TB trứng lị mổ [4]

2 Thực trạng tạo phôi ống nghiệm chăn ni bị

Sự hứa hẹn phôi tạo ON ngành chăn ni bị sữa bị thịt chưa tương xứng với việc sử dụng thực tế hệ thống chăn ni bị

Trong năm 2003, theo Hiệp hội cấy truyền phơi giới, có 106.220 ca cấy phơi tạo ON tồn giới Đây số ấn tượng cho thấy có tăng năm trước Tuy nhiên, cho thấy tỷ lệ nhỏ hàng trăm triệu bò tồn giới nhận phơi tạo ON Có nhiều lý cho việc xâm nhập công nghệ tạo phôi ON vào ngành chăn ni bị, bao gồm nhiều lý khơng liên quan trực tiếp đến hiệu cơng nghệ Tuy nhiên, có giới hạn kỹ thuật quan trọng giá tăng, tỷ lệ phôi thai sống thấp thường sinh bị khuyết tật, điều làm giảm mong muốn sử dụng phơi tạo ON Cloning chủ đề hội nghị này, cịn có hậu không mong muốn nhiều sảy thai, khuyết tật bẩm sinh chết sau sinh Ngồi ra, cịn có quan tâm luật pháp xã hội với việc tạo gia súc cloning gia súc chuyển gen

3 Những tiến khoa học việc nhận biết hứa hẹn IVF

Hầu hết vấn đề kỹ thuật đôi với tạo phơi ON vượt qua nhờ hoạt động nghiên cứu Có nhiều điểm q trình tạo phơi cấy phơi sửa đổi để thành công Những vấn đề hạn chế tạo phơi ON chiến lược vượt qua hạn chế bổ sung tác giả báo hội nghị này; không cố gắng để thảo luận suy nghĩ họ Tuy nhiên, theo cách giới thiệu có trình bày số vấn đề hạn chế kỹ thuật tạo phôi cấy phôi tạo ON Những tiến khoa học lĩnh vực dường làm cho phôi tạo ON trở thành phần quan trọng hệ thống chăn ni bị Một khía cạnh quan trọng thành công hệ thống tạo phôi ON nguyên liệu khởi đầu: trứng tinh trùng Trứng xem vật xác định khả phát triển phôi Nghiên cứu tập trung lên tác động môi trường trứng trứng

buồng trứng sau chúng đưa vào ni cấy Ngồi ra, có vấn đề bình thường phải nhấn mạnh: nguồn cung cấp Trong kỹ thuật thu TB trứng siêu âm qua âm đạo cho phép thu TB trứng khơng gây tổn thương từ gia súc có giá trị di truyền cao, chi phí cịn cao TB trứng lị mổ rẻ nhiều với trình độ cơng nghệ thường xun thu tỷ lệ phơi nang cao Có người cho TB trứng lấy từ có tiềm di truyền thấp chí Ruledge (1997) cho giá trị di truyền gia súc đưa đến lị mổ thấp so với bị trung bình đàn Trong tương lai, việc phát minh thẻ điện tử vĩnh cửu cho gia súc giúp nhận biết lò mổ liên hệ với số liệu sản xuất chúng để lựa chọn buồng trứng từ có khả di truyền cao với tính trạng sản xuất

Nguồn tinh trùng sử dụng IVF quan trọng Chức tinh trùng nuôi cấy đặc biệt quan trọng với tinh trùng xác định giới tính khả di truyền bị giảm với kỹ thuật Nhìn chung lựa chọn đực để sản xuất phôi với khả phát triển cao đến giai đoạn phôi nang hay khả sống sau cấy Palma Sinowatz (2004) cho thấy khác biệt đực tỷ lệ tế bào trứng trở thành phôi nang tinh trùng chúng sử dụng IVF Một số khác biệt đực liên quan đến tế bào tinh trùng phản ứng với yếu tố hoạt hố mơi trường ni cấy Tuy nhiên có gen di truyền qua đực (và cái) mà gen xác định thành công phát triển phôi Một tương đồng gen phát triển phôi trước làm tổ (ped) biết kiểm sốt tỷ lệ phát triển phơi chuột nhận biết bò Dường có nhiều gen đa hình kiểm sốt sinh trưởng, gen gây chết đột ngột (apoptosis), biểu gen trình kích hoạt làm bất hoạt gen (epigenetic) lúc phát triển, gen ảnh hưởng đến chức nuôi cấy, xác định kháng stress phôi, ảnh hưởng đến khả sống phôi sau cấy cho nhận

Phôi tạo ON biểu khuyết tật nhiễm sắc thể, hình thái, biểu gen, trao đổi chất tăng apoptosis Những khuyết tật phơi có nguồn gốc từ tế bào trứng rối loạn chức rối loạn sử dụng hệ thống nuôi cấy Cả hai nguyên nhân xuất khác biệt lớn phát triển phơi nang phơi có nguồn gốc tế bào trứng khác chứng cho thấy đưa phôi tạo ON vào ống dẫn trứng làm tăng tỷ lệ phát triển khả chịu đựng đông lạnh phôi Loại bỏ rối loạn thông qua thao tác tế bào trứng, tiêu lựa chọn tế bào trứng tăng lên, cải thiện kỹ thuật nuôi cấy quy trình lựa chọn phơi để cấy làm tăng nhu cầu thương mại phôi tạo ON

Theo Gabor Vajta (tài liệu chưa công bố), phát triển công cụ cho phôi học không theo kịp với tăng nhu cầu sử dụng phôi cho nông nghiệp, y học công nghệ sinh học Một lĩnh vực mà cơng nghệ áp dụng hệ thống sản xuất phôi lĩnh vực bảo quản lạnh Có chiến lược cải thiện khả sống phôi tạo ON sau bảo quản lạnh: thay đổi trao đổi chất phôi để ngăn cản thay đổi sinh lý tế bào làm tăng khả mẫn cảm với tổn thương lạnh, sử dụng

các nguyên tắc vật lý để phát triển kỹ thuật phương pháp thuỷ tinh hoá kéo dài cọng rạ để tránh tổn thương lạnh

Một lĩnh vực nghiên cứu cần thiết khơng có hội nghị này, lây truyền bệnh tật phơi tạo ON Một tổng kết gần khả lây truyền vi rút sử dụng phôi tạo ON cho thấy nguy thấp, chưa hiểu hồn tồn được, chưa có phương pháp loại bỏ nguy

Chính thân nhận yếu tố hạn chế quy trình cấy phơi McMilan (1998) thu thập trường hợp dựa phân tích thống kê số liệu nơi cấy truyền phôi sử dụng để tạo song thai, có khác biệt lớn số nhận khả chúng hỗ trợ cho phát triển phôi cấy Như vậy, cải thiện khả thụ thai nhận lĩnh vực nghiên cứu quan trọng Đạt mục đích địi hỏi nghiên cứu tượng sinh lý có chửa trì chửa Có nhiều việc phải làm lĩnh vực chưa rõ xảy khả chết phơi bị sữa cao sản Hầu hết nghiên cứu thời điểm chết phôi thực trước tăng nhiều sản lượng sữa giảm khả thụ tinh mà tượng gần nhận biết quần thể bò sữa

Vấn đề quan trọng khác cần quan tâm nhận cần có chu kỳ kỹ thuật viên cấy phôi cần biết thời điểm chu kỳ rụng trứng Kỹ thuật xác định thời điểm cấy phôi sở xác định thời điểm dẫn tinh, áp dụng cho bò sữa bò thịt để vượt qua vấn đề phát động dục gây động dục cho khơng có chu kỳ

4 Những tiến công nghệ phôi nhanh đánh giá khả năng phát triển phôi xác

Người kỹ thuật viên cấy phơi cần có thời gian thực tế dài để nhận biết phôi phù hợp để cấy, nghĩa phơi có khả có chửa phát triển bình thường đến lúc sinh Những tiến công nghệ tạo phơi ON địi hỏi biện pháp xác để đánh giá khả phát triển phôi sau cấy thay đổi quy trình tạo phơi ON cải thiện hay giảm khả phơi khơng thể biết làm thay đổi Hầu hết đánh giá khả phơi thường dựa tiêu hình thái chưa đủ chúng khơng cho phép phân biệt phơi có hình thái tốt tốt có khả phát triển sau cấy so với phơi tốt tốt khơng có khả phát triển sau cấy Các phương pháp khác đánh giá phôi tạo ON tỷ lệ phân chia, tỷ lệ phôi nang, số tế bào phôi nang, nuôi phôi so với tỷ lệ khối tế bào bên tỷ lệ apoptosis giá trị không chắn việc đánh giá khả sống phôi sau cấy Tất nhiên sản lượng phôi nang số đo quan trọng cố gắng cải thiện sản lượng phơi cấy tạo ra, chưa cung cấp nhiều thơng tin khả phơi nang có chửa Tương tự, khơng có chứng trực tiếp cho thấy số tế bào phôi nang, tỷ lệ nuôi phôi so với tỷ

lệ khối tế bào bên tỷ lệ apoptosis có liên quan với khả sống phôi sau cấy

Cần phải có nhiều thí nghiệm để xác định khả phôi cách cấy phôi cho nhận Hiện nay, phơi tạo ON cấy phần thiết kế thí nghiệm Một nghiên cứu PubMed 18 tháng (1-1-2004 đến 30-6-2005) có liên quan đến 13 báo phơi tạo ON hay cloning tế bào soma cấy cho nhận Tiến hành thí nghiệm cấy phơi khơng phải cơng việc bình thường nhiều ca cấy phơi địi hỏi cần phải có kết luận đầy đủ ảnh hưởng việc điều trị / tiêm đến tỷ lệ có chửa Nnhững nước bị cái, tiến hành thí nghiệm cấy phơi để thay đổi quy trình sản xuất phơi khơng thực tế Khó khăn việc thực thí nghiệm cấy phơi làm tăng tầm quan trọng việc phát triển phôi ON

5 Nghiên cứu để đạt tối ưu công nghệ tạo phôi ống nghiệm làm đa dạng nguồn tài trợ

Hiện nay, công nghệ dựa vào tạo phôi ON dường ảnh hưởng đến chiến lược nhân giống gia súc với mức tương tự thụ tinh nhân tạo Đưa triển vọng này, có nhu cầu cấp bách đầu tư bền vững có phối hợp nghiên cứu để cải tiến công nghệ tạo phôi ON để loại bỏ không hiệu vấn đề hạn chế tác động đến công nghệ Cho dến nay, khơng có mức đầu tư tài lớn tổ chức cho nghiên cứu công nghệ phơi Cũng khơng có cố gắng nhà khoa học liên quan đến lĩnh vực nghiên cứu công ty tài trợ giá trị nghiên cứu phôi Cần phải nhận thức nghiên cứu công nghệ phôi lĩnh vực quan trọng nghiên cứu nông nghiệp cần phải ưu tiên tổ chức khoa học nhà khoa học nghiên cứu gắn với công nghệ phôi /

II Các test chẩn đoán Progesterone sữa bò ứng dụng chúng lĩnh vực sinh sản bò sữa

Hàm lượng Progesterone sữa huyết có mối liên hệ chặt chẽ với động thái chu kỳ sinh sản thể trạng bị Vì thế, thân hormone phương pháp phát nghiên cứu nhiều năm lĩnh vực sinh sản bò Gần đây, kỹ thuật miễn dịch phóng xạ (RIA) có nhiều ưu việt dùng phịng thí nghiệm để định lượng progesterone Phương pháp xác có nhiều trở ngại ứng dụng rộng rãi thị trường Đó là: giá thành, người thực cần đào tạo kỹ việc xử lý chất thải độc hại phản ứng Tuy nhiên, kỹ thuật giải vướng mắc trên, ví dụ test Open/Alert/Bovi-Pro 21 việc kiểm tra nồng độ progesterone thực nhanh chóng dễ dàng trang trại với chi phí thấp

1- Tóm tắt chu kỳ hoạt động progesterone

Progesterone hormone thể vàng buồng trứng tiết Hàm lượng tăng / giảm phụ thuộc vào phát triển / thối hóa thể vàng Tóm tắt q trình phát triển thể vàng: có vài nang trứng phát triển buồng trứng; gần đến lúc

bị động dục, có nang phát triển trội chín Việc tăng tiết Luteinizing hormone từ tuyến yên làm cho nang trứng vỡ giải phóng tế bào trứng (rụng trứng) Sau trứng rụng, nang rỗng máu lấp đầy Sau 4-8 ngày, tế bào thể vàng có máu phát triển lấp đầy tạo nên thể vàng Thể vàng tiết progesterone để từ vào máu sữa Nếu bị có chửa, thể vàng trì buồng trứng, tiếp tục tiết progesterone có tác dụng an thai Nếu bị khơng chửa, thể vàng thối hóa ngừng sản xuất progesterone Điều giúp cho bị tiếp tục có chu kỳ động dục mới, cách chu kỳ trước khoảng 21 ngày

Điều quan trọng cần lưu ý lượng progesterone máu sữa tăng chậm sau rụng trứng Trong phần lớn trường hợp, lượng progesterone thấp tăng chậm vòng 4-6 ngày sau trứng rụng Hàm lượng progesterone đạt cao khoảng ngày thứ 10 đến 17 chu kỳ động dục Ở bị khơng chửa, lượng progesterone giảm đáng kể từ ngày thứ 18 19 Vào thời điểm này, estrogen bắt đầu tăng bò bắt đầu chu kỳ

2- Các định ứng dụng progesterone sữa

Vài ứng dụng hàm lượng progesterone sữa:

2.1 Chẩn đoán khơng có chửa

Đã có nhiều nghiên cứu cho thấy việc chẩn đốn có thai sớm progesterone xác khoảng 80% Nguyên nhân: khác độ dài chu kỳ động dục bò, nhầm lẫn phát động dục, bệnh tử cung (bọc mủ tử cung), hoạt động khác thường buồng trứng (u nang thể vàng nang trứng) phơi chết sớm Tóm lại, việc sử dụng progesterone để chẩn đốn có thai chưa đủ mà cần phải kết hợp với việc khám thai 40 ngày (hoặc muộn hơn) sau phối giống Tuy nhiên, với loạt mẫu lấy vào ngày (ngày phối tinh) ngày thứ 21 24, việc chẩn đốn sớm khơng có chửa đạt đến độ xác 95-100% Do vậy, progesterone vốn coi cơng cụ để chẩn đốn có thai sớm nên sử dụng cho mục đích chẩn đốn khơng có thai từ xác định tình trạng có thai hay khơng gia súc Việc sớm xác định khơng có chửa tránh bỏ lỡ hội phối giống

2.2 Xác nhận động dục

Trong nhiều trường hợp, bị biểu dấu hiệu động dục không rõ ràng dẫn đến việc định phối giống sai Trên thực tế, có khoảng 5% bị có biểu động dục mang thai Progesterone sữa dùng để xác định biểu bị mà ta quan sát có phù hợp hay khơng với bị gần động dục Nếu mẫu sữa kiểm tra cho thấy hàm lượng progesterone cao bị khơng động dục cần theo dõi cẩn thận kiểm tra lại mẫu lấy vào thời điểm muộn

Rất nhiều báo cáo chứng minh vào thời điểm phối tinh có tới 15-20% bị sữa không động dục số trang trại, tỷ lệ phát động dục sai cao tới 50% Do vậy, đàn bị khơng sinh sản, biểu tỷ lệ có chửa thấp có bị phối giống lặp lại q nhiều cần phải xem xét lại độ xác cơng tác phát động dục Việc tiến hành đơn giản cách giữ lại mẫu sữa vào thời điểm bò đưa để phối tinh khoảng tuần tháng sau

Nếu nhiều 10% số bò phối tinh vào thời điểm có hàm lượng progesterone cao chứng minh việc phát động dục khơng xác

2.3 Bị có vấn đề sinh sản

Đó khơng có biểu chu kỳ mang thai thời gian dài sau đẻ số đàn, bị bị xếp vào loại có vấn đề sinh sản 100 ngày sau đẻ mà khơng phối giống Ngun nhân có nhiều số đàn nguyên nhân đơn giản bò bị bỏ lỡ động dục chúng bị xếp vào nhóm có vấn đề sinh sản Tuy nhiên, bò bị mắc bệnh tử cung buồng trứng chẩn đốn điều trị nhanh chóng giảm thời gian chi phí phối giống sau đẻ

Progesterone sữa dùng để chẩn đốn rối loạn tử cung (viêm tử cung) cho bị ứng dụng để phân biệt trường hợp thể vàng hình thành u nang Nhiều nghiên cứu trước cho thấy việc khám qua trực tràng phát 65-75% trường hợp bò bị u nang buồng trứng Do vậy, qua xác nhận kết chẩn đốn, định liệu pháp điều trị Sau điều trị, kiểm tra xem bị có phản ứng theo chiều hướng mong muốn hay khơng

2.4 Các chương trình cấy truyền phơi

Các chương trình cấy truyền phơi địi hỏi phải kiểm tra cho nhận cách thường xuyên Việc gây động dục đồng pha thành công rõ ràng bước sống cịn để đạt thành cơng quy trình cấy truyền phơi Đã có nhiều nghiên cứu độ xác việc xác định thể vàng phát triển qua khám trực tràng đạt 75-80% Như vậy, việc sử dụng test chẩn đoán progesterone cách có chọn lọc bị cho kết khám thể vàng không rõ ràng cải thiện hiệu cấy truyền phôi nhiều tình trạng sinh sản bị chuẩn bị cho cấy truyền phơi xác định

2.5 Tinh có giá thành cao

Do việc phát động dục nhầm lẫn, ngồi việc quan sát biểu động dục bị, người ta đưa việc định lượng progesterone sữa vào quy trình xác định động dục Việc kiểm tra tiến hành trước phối tinh không tránh lãng phí tinh có giá thành cao mà cịn ngăn chặn sẩy thai

2.6 Bò sữa cao sản

Chúng ta biết stress gây suất sữa cao chậm trễ có liên quan đến lượng thức ăn khơ ăn vào ảnh hưởng đến chu kỳ động dục bò sữa Hơn nữa, cân lượng âm hoạt động hormone giai đoạn đầu sau đẻ làm giảm mật độ biểu động dục Như vậy, để có bị động dục phối giống thành cơng thách thức chăn ni bị sữa Do biểu bên động dục bị sữa cao sản khơng rõ dễ gây nhầm lẫn, định lượng progesterone sữa giúp phân biệt hoạt động động dục chúng so với bị khơng có hoạt động động dục

2.7 Trợ giúp chương trình phối giống thời điểm bị stress khí hậu

Các stress với môi trường có tác động lớn đến hiệu sinh sản Đặc biệt, stress nhiệt nguyên nhân dẫn đến việc giảm nghiêm trọng tỷ lệ có chửa, tăng tỷ lệ chết phôi sớm, giảm độ dài cường độ biểu động dục làm giảm thể trọng bê sinh Ngày người ta sử dụng progesterone sữa để trợ giúp cho chương trình phối giống điều kiện gia súc bị stress mơi trường

3- Tóm tắt

Nhờ vào ưu điểm công nghệ sinh học chẩn đoán miễn dịch, hệ thống định lượng progesterone sữa huyết sản xuất bán rộng rãi thị trường Giá trị hệ thống phụ thuộc vào hiểu biết người sử dụng hoạt động progesterone chu kỳ động dục bình thường bị sữa Các hệ thống khơng thể dùng để xác định xác thời điểm cần tiến hành phối giống, chúng dùng để chẩn đoán thai cách đáng tin cậy Tuy nhiên, sử dụng cách hợp lý xem xét đến hạn chế quy trình hệ thống định lượng hormone thực có giá trị quản lý sinh sản

III Xác đinh giới tính thú có vú 1 Giới thiệu

Năm 1936, viện sĩ Axtaurop (ở Liên Xơ cũ) tạo dịng tồn tồn đực Việc điều chỉnh tỷ lệ đực có ý nghĩa lớn thực tiễn Như ni bị thịt cần nhiều bê đực, ni bị sữa cần nhiều bê cái, nuôi gà đẻ cần nhiều gà mái, nuôi gà thịt lại cần nhiều gà trống

Hai chế chung đinh giới tính lồi có xương sống: mơi trường lồi bò sát, gen lúc thụ tinh chim thú có vú Qua năm trung tâm Beltsville Sperm Sexing Technology cho thấy sản xuất đời sau chọn lọc trước giới tính thỏ, heo bị

Trong thời gian dài, chọn lọc trước giới tính mục tiêu chăn ni bị sữa thú cho thịt để tăng đáp ứng chọn lọc, giảm chi phí kiểm tra đời sau đực tạo nên đời với đặc tính di truyền mong muốn Kỹ thuật áp dụng để phân biệt giới tính phơi PCR với đoạn mồi chuyên biệt cho nhiễm sắc thể Y Gần thành công việc tách biệt tinh trùng X Y máy đểm tế bào tốc độ cao mở hướng kiểm soát sinh sản thú cosvus Mặc dù kỹ thuật cịn vấn đề cần giải (hồn thiện khả thụ tinh phản ứng acrosome), hướng tiền chọn lọc giới đời sau

2 Yếu tố ảnh hưởng đến tỉ lệ đực

Những câu chuyện phương cách ảnh hưởng đến giới tính phơi đề cập đến thay đổi thức ăn Thí dụ, thức ăn làm tăng khả sinh thức ăn chua sinh đực Ở heo, Toriumi ctv (1993) báo cáo ảnh hưởng phần nhiều Ca/P (2.15% Ca 1.28% P) lên tỉ lệ đực/cái, nái ăn phần bình thường phần nhiều Ca/P có tỉ lệ đực/cái ổ đẻ 0.89 1.32 Trên lý thuyết dịch

hoàn sản xuất số lượng tinh trùng X tinh trùng Y khơng thể có số thú đực nhiều yếu tố sinh lý môi trường, chẳng hạn số ổ, tuổi mẹ, dinh dưỡng, thời điểm phối giống, stress lứa mẹ

Từ năm 1985, giáo sư người Pháp Josept Stowkowski ý đến mối quan hệ biến dưỡng khoáng chất phân phối giới tính Theo ơng, muốn có gia súc thức ăn phải nhạt, thiếu muối, hoạt động tuyến thượng thận gia tăng Chúng tiết nhiều kích tố thượng thận, làm cho chất kali (K) bị loại khỏi mô tế bào, tức tạo môi trường axit mạnh Với 20 năm thử nghiệm lồi bị sát, ông nhận thấy ăn nhiều chất Na, Ca, K hầu hết sinh đực

Stowkowski nhận thấy rằng, biến thái nòng nọc tùy thuộc vào môi trường nuôi chúng Môi trường giàu K cho nhiều đực, giàu Ca Mg nịng nọc nhiều Ở mơi trường ni trung tính, tỷ lệ đực Thử nghiệm chuột cống, ông nhận thấy ăn nhiều K khơng có Ca, chuột mẹ đẻ nhiều chuột đực; ngược lại, chúng đẻ nhiều chuột

Giáo sư Lefèvre Argentina nghiên cứu phần thức ăn gần 2.600 bị 130 trại Ơng nhận thấy, tùy theo hàm lượng khoáng chất đất phân bón, loại cỏ mà bị mẹ ăn định việc sinh bê đực hay bê nhiều Nếu thức ăn giàu K, có nhiều bê đực Từ đó, người ta đề phần thức ăn chăn ni bị mẹ sau: Muốn có nhiều bê đực để lấy thịt, cần thêm K, NaCl (muối ăn), loại bớt thực vật giàu kim loại kiềm thổ (C, Mg) cỏ Lurerne Để có nhiều bị sữa thêm vào thức ăn sinh tố D, Ca, Mg

Steroid sinh dục ảnh hưởng đến định giới tính vài lồi cá tác động mức lồi gia cầm Riêng lồi có vú, khơng có chứng cớ cho thấy ảnh hưởng steroid sinh dục làm trung gian cho biệt hóa đặc điểm sinh dục thứ cấp

Hoàn cảnh thụ tinh, điều kiện sống thể làm thay đổi tỷ lệ đực Nhiều tác giả cho thời gian, thời điểm phối giống có ảnh hưởng đến tỷ lệ số đực/cái cua phơi Cơ chế tạo thuận lợi ức chế vận chuyển tinh trùng X Y, chọn lọc tinh trùng lúc thụ tinh, chết phôi liên qua đến giới tính Thí dụ: Tinh trùng thỏ để 12 cho thụ tinh tỷ lệ đực tăng lên lần Lợn nái động đực 12 cho thụ tinh tỷ lệ đực tăng gấp rưỡi Lợn nái ăn uống đầy đủ số lợn lứa đẻ 1,5 lần số lợn đực

Một số phương pháp tách tinh trùng:

Qua nghiên cứu tính chất hai loại tinh trùng, nhà khoa học đề phương pháp để tách chúng sau:

- Phương pháp điện ly điện phân: Khi cho tinh dịch vào điện trường tinh trùng Y bị hút cực âm, tinh trùng X cực dương Người ta hứng lấy hai loại bơm vào tử cung người phụ nữ vào thời điểm thích hợp, đạt tỷ lệ thành cơng 80-90% Phương pháp phức tạp, khó áp dụng, dẫn đến dị dạng bẩm sinh thai nhi

- Phương pháp ly tâm: Dựa vào tính chất hai loại tinh trùng (tinh trùng Y bé, đầu tròn, trọng lượng riêng 1,07 (linh trưởng); tinh trùng X to, đầu bầu dục, trọng lượng

riêng 1,17), người ta tách chúng phương pháp ly tâm Gần đây, nhóm bác sĩ Nhật làm theo phương pháp Tỷ lệ thành cơng cao

- Tách tính trùng dựa tốc độ thời gian tồn lệch loại tinh trùng Bác sĩ sản khoa Laudrum B Shetles Đại học Colombia (Mỹ) nghiên cứu tinh trùng người tìm tính chất sau: Tinh trùng Y di chuyển nhanh chết sớm; tinh trùng X di chuyển chậm sống dai Bác sĩ Ericson (Mỹ) làm thí nghiệm: cho tinh trùng người chạy qua chất anbumin bò Tinh trùng Y chạy nhanh hơn, hứng lấy, bơm vào tử cung phụ nữ Kết gần 100% trường hợp có thai trai theo ý muốn Còn muốn sinh gái hứng tinh trùng X tỷ lệ thành cơng cao Phương pháp phức tạp lại không tự nhiên nên dùng

Các phương pháp phức tạp, phải sử dụng kỹ thuật cao, không tự nhiên, khó phổ cập, nước ta nước phát triển Hơn nữa, chúng dễ gây tình trạng thai khơng bình thường

Xác định giới tính phơi trước định vị

Phương pháp thường dùng thương mại để xác định giới tính phơi lấy mẫu sinh thiết (một số nhỏ tế bào lấy từ phôi ngày tuổi) xét nghiệm nhiễm sắc thể Y cách nhân AND với đoạn mồi phù hợp cho đoạn gen SRY nhiễm sắc thể Y đoạn đánh dấu đa hình ngẫu nhiên UcdO43

Tiến trình áp dụng thành cơng nhiều lồi, bao gồm bị (Cotinot ctv, 1991), trâu (Rao Totey, 1999), cừu dê (Rao Totey, 1992) lợn (Kawarasaki ctv, 2000) Độ xác lên đến 98% Tỷ lê đậu thai (50-70%) phôi tươi xác định giới tính thấp bình thưởng khoảng 5%, tỷ lệ đậu thai 50% phơi đơng lạnh xác định giới tính

Tuy nhiên, tiến trình địi hỏi phải mở màng bảo vệ phôi lấy vài tế bào để xác đinh AND Phơi khơng phát triển tốt sau bị lây vài tế bào vỡ màng đưa đến nhiễm trùng Hơn nữa, phương pháp PCR địi hỏi phải điện di, lây nhiễm AND lần xét nghiệm nên chẩn đoán lầm [5-7]

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Giao, H.K., Công nghệ Cấy truyền phôi Gia súc 2003, Hà Nội: NXB Khoa

học Kỹ thuật

2 Giao, H.K., et al., Công nghệ Cấy truyền phơi Bị 1997, Hà Nội: NXBNơng

nghiệp

3 Joe, B and W.F John, Applied Animal Reproduction 1996?

4 Hansen, P.J., The prospects of invitro fertiliazation technique in cattle

Theriogenology, 2006 65: p 119-125

5 Ian, G., Controlled reproduction in Pigs Vol Cab International 1997

6 Thưởng, N.V., Cẩm nang Chăn nuôi Gia súc - Gia cầm Những vấn đề chung cẩm nang chăn nuôi lợn, ed H.C.n.V Nam Vol Tập I 2000, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 642

7 Dân, T.T., Công nghệ sinh học chăn nuôi gia súc 2005: NXB Nông

nghiệp 127

CÂU HỎI ÔN TẬP

1 Khái niệm mục đích phương pháp cấy truyền phôi cho gia súc?

2 Đặc điểm phát triển phôi giai đoạn đầu ứng dụng kỹ thuật cấy truyền phôi cho gia súc?

3 Trình bày sơ đồ bước công nghệ cấy truyền phôi? Kỹ thuật tạo chu kỳ động dục? (Gợi ý: Đọc thêm phần tài liệu tham khảo)