Bước đầu nghiên cứu sự ảnh hưởng của dịch chiết từ cây chó đẻ răng cưa (phyllanthus urinaria l ) đến sự thay đổi một số chỉ số sinh lý máu của chuột nhắt trắng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - - NGUYỄN THỊ KIM TIẾN BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (Phyllanthus urinaria L.) ĐẾN SỰ THAY ĐỔI MỘT SỐ CHỈ SỐ SINH LÝ MÁU CỦA CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var.Albino)” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẶT VẤN ĐỀ Trong thể người, máu thành phần khơng thể thiếu đóng vai trị quan trọng việc trì sống Máu không tham gia vào việc vận chuyển chất dinh dưỡng trao đổi khí quan thể mà mang chất thải trình trao đổi chất đến quan tiết, đồng thời bảo vệ thể chống lại xâm nhập yếu tố độc hại Máu cịn có ý nghĩa đặc biệt trì ổn đinh thân nhiệt góp phần chống lại bệnh tật Trong thành phần cấu trúc máu bên cạnh huyết tương cịn có yếu tố hữu hình TB hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu Hàm lượng yếu tố xem tiêu sinh lý quan trọng, có ảnh hưởng lớn đến tình trạng sức khỏe thể Vì ý nghĩa đặc biệt mà ngày có nghiên cứu máu, hướng nghiên cứu việc tìm loại thảo dược thiên nhiên có tác dụng tốt đến máu Cây chó đẻ cưa thuốc sử dụng từ lâu giới Việt Nam Trong Y học dân tộc sử dụng làm thuốc để chữa nhiều loại bệnh đau viêm họng, mụn nhọt, viêm da, lở ngứa, sản huyết đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má, bệnh viêm gan… có hiệu Tuy nhiên, chứng minh cụ thể liều lượng dịch chiết từ chó đẻ cưa ảnh hưởng số máu chưa ý nghiên cứu Trong nghiên cứu y sinh động vật thực nghiệm như: chuột, thỏ, chó, khỉ sử dụng phổ biến, năm có khoảng 17 đến 23 triệu vật sử dụng để nghiên cứu Trong số đó, chuột chiếm đến 95% nghiên cứu mơ hình động vật Sở dĩ số lượng chuột sử dụng nhiều nghiên cứu y sinh kích thước nhỏ, dễ nuôi, sinh sản nhanh, đặc biệt đời sống ngắn (2-3 năm) nên theo dõi hết đời sống theo dõi vài hệ Nhưng điểm quan trọng quý giá đặc điểm sinh lý di truyền học chuột gần với người, gen chuột có 98% giống gen người Xuất phát sở lý luận thực tiễn trên, tiến hành chọn đề tài “BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (Phyllanthus urinaria L.) ĐẾN SỰ THAY ĐỔI MỘT SỐ CHỈ SỐ SINH LÝ MÁU CỦA CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var.Albino)” Mục tiêu đặt cho đề tài: - Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết từ chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L.) đến thay đổi số số sinh lý máu thể chuột nhắt trắng - Góp phần làm sở để nghiên cứu tác dụng chó đẻ cưa đến hiệu điều trị phòng bệnh người - Giúp thân làm quen với công tác nghiên cứu khoa học Nhiệm vụ cụ thể đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết từ chó đẻ cưa đến: - Số lượng yếu tố hữu hình: hồng cầu, bạch cầu máu chuột nhắt trắng - Hàm lượng Hemoglobin máu chuột nhắt trắng - Thời gian máu đông, thời gian máu chảy chuột nhắt trắng Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (Phyllanthus urinaria L.) 1.1.1 Tên gọi Cây chó đẻ cưa: Tên khoa học : Phyllanthus urinaria L Thuộc Chi Phyllanthus, Họ Euphorbiaceae, Bộ Malpighiales, Lớp Magnoliopsida, Ngành Magnoliophyta [5], [7],[14] Tên gọi khác: Diệp hạ châu (Cây có hạt trịn xếp thành hàng lá), Trân châu thảo, Diệp hạ châu đắng, Diệp hòe thái, Lão nha châu [1], [5], [7] Hình thái phân bố chó đẻ cưa:  Mơ tả hình thái Cây thảo sống hàng năm (đôi lâu năm) Thân cứng màu hồng, thn hay hình bầu dục ngược, cuống ngắn Lá kèm hình tam giác nhọn Cụm hoa đực mọc nách gần phía ngọn, hoa có cuống ngắn khơng có, đài hình bầu dục ngược, nhị nhị ngắn, dính gốc Hoa mọc đơn độc phía cành, dài hình bầu dục mũi mác, vịi nhụy ngắn xẻ đơi thành nhánh uốn cong, bầu hình trứng Quả nang khơng có cuống, hạt hình cạnh Bộ phận dùng: Lá thân Hình 1.1 Cây chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L., Euphorbiaceae)  Phân bố: Việt Nam, chó đẻ cưa thường thấy mọc hầu hết tỉnh nước, điển hình như: Thái Nguyên, Bắc Ninh, Nghệ An, Hà Giang… Trên giới loại mọc nhiều nước Châu Á như: Trung Quốc, Ấn Độ, Malaysia, Philippin, Indonexia, Myanma, Thái Lan…Chây Mỹ như: Brazil, Argentin… [1], [5] 1.1.2 Tác dụng dược lý:  Điều trị bệnh gan: Tại Việt Nam, nhiều công trình nghiên cứu tác dụng điều trị viêm gan Diệp hạ châu tiến hành, chẳng hạn: nhóm nghiên cứu Lê Võ Định Tường (Học Viện Quân Y - 1990 - 1996) thành công với chế phẩm Hepamarin từ Phyllanthus amarus; Nhóm nghiên cứu Trần Danh Việt, Nguyễn Thượng Dong (Viện Dược Liệu) với bột Phyllanthin (2001)  Tác dụng hệ thống miễn dịch: Vào năm 1992, nhà khoa học Nhật Bản khám phá tác dụng ức chế phát triển HIV-1 cao lỏng Phyllanthus niruri thông qua kìm hãm trình nhân lên virus HIV Năm 1996, Viện nghiên cứu Dược học Bristol Myezs Squibb chiết xuất từ Diệp hạ châu hoạt chất có tác dụng đặt tên “Nuruside”  Tác dụng giải độc: Người Việt Nam, Ấn Độ, Trung Quốc dùng Diệp hạ châu để trị chứng mụn nhọt, lở loét, rắn cắn, giun Nhân dân Java, Ấn Độ dùng để chữa bệnh lậu Theo kinh nghiệm dân gian Malaysia, Diệp hạ châu dùng để trị chứng viêm da, viêm đường tiết niệu, giang mai, viêm âm đạo  Điều trị bệnh đường tiêu hóa: Cây thuốc có khả kích thích ăn ngon Người Ấn Độ dùng để chữa bệnh viêm gan, vàng da, kiết lỵ, táo bón, thương hàn, viêm đại tràng Nhân dân vùng Haiti, Java dùng thuốc trị chứng đau dày, rối loạn tiêu hóa  Bệnh đường hô hấp: Người Ấn Độ sử dụng Diệp hạ châu để trị ho, viêm phế quản, hen phế quản, lao  Tác dụng giảm đau: Kenneth Jones nhà nghiên cứu Brazil khám phá tác dụng giảm đau mạnh bền vững vài loại Phyllanthus, có Diệp hạ châu - Phyllanthus niruri Tác dụng giảm đau Diệp hạ châu mạnh indomethacin gấp lần mạnh lần so với morphin Tác dụng chứng minh diện acid gallic, ester ethyl hỗn hợp steroid (beta sitosterol stigmasterol) có Diệp hạ châu  Tác dụng lợi tiểu: Y học cổ truyền số nước sử dụng Diệp hạ châu làm thuốc lợi tiểu Ở Việt Nam, Diệp hạ châu dùng sớm Viện Đông y Hà Nội (1967) điều trị xơ gan cổ trướng Một nghiên cứu trường Đại học Dược Santa Catarina (Brazil-1984) phát alkaloid Diệp hạ châu có tác dụng chống co thắt vân trơn, nhà khoa học nhờ vào điều để giải thích hiệu điều trị sỏi thận, sỏi mật thuốc  Điều trị tiểu đường: Tác dụng giảm đường huyết Diệp hạ châu kết luận vào năm 1995, đường huyết giảm cách đáng kể bệnh nhân tiểu đường cho uống thuốc 10 ngày [1], [5], [7] 1.1.3 Thành phần hóa học: [2], [5], [11], [14] Bảng 1.1 Thành phần hóa học chất chó đẻ cưa Hợp chất hóa học Flavonoid Lignan Tinh dầu Chất béo Tỉ lệ (%) Kaempferol 0.9 Hypophyllanthin 0.05 – 0.17 Phyltetralin 0.14 Phyllanthin 0.18 Cymene 11 Limonine 4.5 Axít béo Axit Linolenic 51.4 Axit Linoleic 21 Axit Ricinoleic 1.2 Vitamin Vitamin C 0.41 Tanin Geranin 0.23  Chất béo: Chất béo hay gọi Lipid nhóm chất hữu khơng đồng (hỗn hợp nhiều este glyxerol axit béo), có độ nhớt cao, không tan nước, tan dung môi hữu ether, chlorphorm, benzene, rượu nóng Chất béo nhóm chất dinh dưỡng phần thức ăn hàng ngày, nguồn cung cấp nhiều chất cần thiết thể lecitin, axit béo chưa no: linoleic, ricinoleic linolenic Đặc biệt, chất béo có tác dụng sinh học cao hệ mạch máu như: - Ngăn ngừa xơ vữa động mạch - Điều hịa tính bền vững thành mạch: nâng cao tính đàn hồi hạ thấp tính thấm thành mạch - Cung cấp acid béo thiết yếu không no đa nối đôi, chuỗi dài Các acid béo tiền chất loạt chất có hoạt tính sinh học cao omega 3, omega có tác dục làm giảm chất béo khơng có lợi triglycerides cholesterol; có tác dụng chống đơng tụ giúp ngăn ngừa tượng máu vón cục giảm huyết áp người bị huyết áp cao  Flavonoid: Hiện người ta biết có gần 4.000 chất flavonoid có phổ biến thực vật có phần lớn phận lồi thực vật bậc cao Các chất có tác dụng củng cố, nâng cao sức chống đỡ hạ thấp tính thẩm thấu hồng cầu qua thành mạch thông qua tác dụng lên cấu trúc màng TB Flavonoid cịn giúp tích lũy vitamin C mô tổ chức * Các dẫn xuất flavonoid: Vitamin P, Kaempferol - Vitamin P có tính khử mạnh vơ hiệu hóa gốc tự do, "khóa" giữ chúng lại phản ứng ơxy hóa - khử, không cho gốc tự hoạt động phá hoại tổ chức Với người bệnh xuất huyết thành mạch, vitamin P giúp bảo vệ màng TB khỏi phá hoại gốc tự do, nhờ tăng tính bền thành mao mạch chống xuất huyết Vitamin P thường định dùng chứng giãn mao mạch, hội chứng xuất huyết nhiều nguyên nhân khác như: thấp khớp, viêm cầu thận, tăng huyết áp, liều thuốc chống đơng máu q liều salicylat cịn dùng điều trị dự phòng bệnh scorbut - Kaempferol Kaempferol chất rắn kết tinh màu vàng với điểm nóng chảy 276-278° C, khó hịa tan nước hịa tan ethanol nóng diethyl ether Đối với hệ tim mạch, Kaempferol giúp củng cố mao mạch, có tác dụng tăng tuần hồn máu động mạch, tĩnh mạch mao mạch, giảm nguy bệnh tim  Vitamin: Vitamin chất hữu có phân tử thấp cần thiết cho q trình đồng hóa sử dụng chất dinh dưỡng tham gia xây dựng TB tổ chức thể Vitamin phần lớn không tổng hợp thể mà phải vào theo thức ăn nguồn gốc động vật thực vật Nhu cầu vitamin bắt buộc phải có - Vitamin C: Vitamin C (Acid ascorbic) loại có lượng cung cấp lớn loại vitamin Acid ascorbic tồn thiên nhiên hai dạng dạng L dạng D Dạng L oxy hoá tạo thành dehydro-ascorbic acid (acid ascorbic khử hydro), loại chưa oxy hoá gọi acid ascorbic hoàn nguyên Cả hai loại hoàn nguyên loại khử hydro có hoạt tính sinh học Acid ascorbic tham gia vào hydro hoá prolin thành hydroxyprolin, giai đoạn quan trọng tổng hợp collagen, hợp phần mơ liên kết Vì acid ascorbic không đủ ảnh hưởng đến tổng hợp collagen làm cho vết thương lâu lành, thành mao mạch yếu mà dẫn đến xuất huyết mức độ khác Vitamin C có ảnh hưởng đến tạo thành hemoglobin, hấp thu sắt từ ruột sử dụng sắt mô gan  Lignan: Một số nghiên cứu gần cho thấy lignan gián tiếp có nhiều hoạt tính sinh học ngăn ngừa vi khuẩn, trị nấm, kháng virus, chống ung thư, chống viêm khớp hoạt tính chống oxy hóa mạnh Đối với hệ mạch, Lignan giúp cản trở hình thành mạch máu có tác dụng giúp TB ung thư hấp thu chất dinh dưỡng tạo nên TB ung thư khác Lignans cịn đóng vai trị chất chống oxy hố có máu, hạn chế mỡ máu hạn chế bệnh tim mạch Các ligans phyllanthin hypophyllanthin điều chỉnh sức căng mạch máu thông qua chế độc lập với nội mạc 1.1.4 Một vài cách sử dụng Diệp hạ châu  Chữa khô cổ trướng xơ gan: Diệp hạ châu dùng sớm Bệnh viện Ðông y Hà Nội năm 1967 Cơng thức: Cây chó đẻ 80g, cỏ mần trầu 10g, tinh tre 20g, chanh 20g, phèn chua 16g, nhân trần 60g, chi tử 40g, hà thủ ô 60g Dùng lít nước sắc đặc lấy 1/2 lít, chia uống ngày Gần năm 2002, Bệnh viện Thanh Nhàn - Hà Nội có dùng Liv 94 (gồm chó đẻ cưa trịn, chua ngút cỏ nhọ nồi) để điều trị cho 75 bệnh nhân viêm gan B đạt kết tốt, có bệnh nhân HBSAg (chiếm tỷ lệ 8%)  Chữa viêm gan siêu vi Diệp hạ châu đắng 16g, Nhân trần nam 16g, Vỏ bưởi (phơi khô, sao) 4g, Hậu phác 8g, Thổ phục linh 12g Nếu thể suy nhược gia thêm rễ Đinh lăng 12g, nhiệt nhiều gia thêm Rau má 12g, Hạt dành dành 12g, báng tích nhiều gia Vỏ đại 8g Sự phối hợp Diệp hạ châu, Nhân trần Thổ phục linh tăng tác dụng giải độc, chống siêu vi  Chữa suy gan rượu, sốt rét, nhiễm độc môi trường trường hợp hay mẩn, mụn huyết nhiệt Diệp hạ châu đắng 12g, Cam thảo đất 12g Sắc nước uống hàng ngày thay trà  Chữa sạn mật, sạn thận Diệp hạ châu đắng 24g Sắc uống, sắc làm nước để vừa tận dụng hoạt chất vừa uống thêm nhiều nước Nếu đầy bụng, ăn kèm thêm Gừng sống Hậu phác Để ngăn chận sỏi tái phát, nên dùng Diệp hạ châu hình thức hãm uống thay trà, liều khoảng đến 10g ngày  Chữa sốt rét Diệp hạ châu đắng 16g, Thảo 12g, Thường sơn 16g, Hạ khô thảo 12g, Binh lang 8g, Đinh lăng 12g Sắc uống Lưu ý: - Diệp hạ châu khơng có độc tính, độ an tồn cao ngoại trừ số trường hợp đau cơ, co giật điều trị sỏi thận sỏi mật trình tống xuất sỏi Tuy nhiên, Diệp hạ châu có tính mát gây trệ tỳ, đầy bụng người có tỳ Do đó, trường hợp nên phối hợp với vị thuốc có tính cay ấm để dung hồ bớt tính mát Diệp hạ châu - Gần có số thơng tin cho uống Diệp hạ châu gây vơ sinh Điều có lẻ bắt nguồn từ nghiên cứu tác dụng ngừa thai Diệp hạ châu trên loài chuột nhà khoa học trường Đại học Gujaret Ấn độ Kết nghiên cứu cho thấy cho chuột uống cao toàn thân Diệp hạ châu liều 100mg/kg thể trọng chuột 500mg/kg thể trọng chuột đực tạm thời ức chế khả sinh sản thời gian thí nghiệm 30 ngày (chuột cái) 45 ngày (chuột đực) Sau ngưng uống Diệp hạ châu, khả phục hồi bình thường Điều khác với vô sinh Hơn thử nghiệm ban đầu loài vật Tuy nhiên, người muốn có khơng nên dùng Diệp hạ châu [1],[5] 1.2 Đại cương máu 1.2.1 Ý nghĩa sinh học máu: Máu mơ lỏng có màu đỏ, vị mặn, hình thành với mơ mạch Cũng loại mô khác, mô máu bao gồm TB máu hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu dịch ngoại bào huyết tương Máu với dịch thể môi trường sống TB thể gọi nội môi Sự ổn định cân tiêu nội môi đảm bảo cho trình sống thực bình thường thể tồn tại, sinh trưởng phát triển.[4] 1.2.2 Chức sinh học máu: Vận chuyển: Máu vận chuyển chất dinh dưỡng, O2, CO2, hormon tuyến nội tiết tiết ra, sản phẩm thừa trình trao đổi chất Cân nước muối khoáng: máu tham gia điều hịa pH nội mơi thơng qua hệ thống đệm, điều hịa lượng nước TB thơng qua áp suất thẩm thấu máu Bảo vệ: chức chủ yếu TB bạch cầu đảm nhiệm Thống thể: máu lưu thông hệ mạch đồng thời chạy đến tất đơn vị cấu tạo thể để cung cấp dạng vật chất cần thiết đồng thời thu nhận sản phẩm thừa, cặn bã trình trao đổi chất 10 Thời gian máu đơng Giây 200 173.4 180 160 138.4 140 124.6 123.4 120 100 88.75 80 60 40 20 Lô chuột Lô ĐC (-) Lơ Lơ Lơ Lơ Hình 3.11 Thời gian máu đông chuột nhắt trắng sau 30 ngày sử dụng dịch chiết từ chó đẻ cưa Thời gian máu đông Giây 200 180 173.4 160 174.25 138.4 140 138 120 130.2 119.4 124.6 123.4 105.75 100 88.75 80 15 ngày 30 ngày 60 40 20 Lô chuột Lô ĐC (-) Lô Lô Lơ Lơ Hình 3.12 Biểu đồ so sánh thời gian máu đông chuột nhắt trắng sau 15 ngày 30 ngày sử dụng dịch chiết từ chó đẻ cưa 35 Qua bảng 3.4, biểu đồ 3.10 biểu đồ 3.11 cho thấy: - Nhóm chuột uống dịch chiết 15 ngày liên tục + Khi cho chuột uống dịch chiết, thời gian máu đông giảm từ 138 giây (ở lô 1) xuống 105.75 giây (ở lô 4) Như thời gian máu đông giảm 32.25 giây Thời gian máu đông lô uống dịch chiết cao so với lô đối chứng âm - Nhóm chuột uống dịch chiết 30 ngày liên tục + Khi cho chuột uống dịch chiết, thời gian máu đông giảm từ 138.4 giây (ở lô 1) xuống 88.75 giây (ở lô 3) Như từ lô đến lô thời gian máu đông giảm 49.65 giây Từ lô đến lô 4, thời gian máu đông tăng từ 88.75 giây lên 123.4 giây tức tăng 34.65 giây + Thời gian máu đông lô uống dịch chiết cao so với lô đối chứng âm Như vậy, hai nhóm chuột thời gian máu đông giảm thấp so với lô đối chứng âm (p 0.05 P 0.05 P 0.05 P 0.05 P