Tuyển chọn thực khuẩn thể có tiềm năng kiểm soát bệnh héo xanh do vi khuẩn Ralstonia Solanacearum trên cây hoa cúc (Chrysanthemum Sp.) trong điều kiện phòng thí nghiệm

TIỂU BAN TÀI NGUYÊN SINH VẬT TUYỂN CHỌN THỰC KHUẨN THỂ CĨ TIỀM NĂNG KIỂM SỐT BỆNH HÉO XANH DO VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM TRÊN CÂY HOA CÚC (CHRYSANTHEMUM SP.) TRONG ĐIỀU KIỆN PHỊNG THÍ NGHIỆM Huỳnh Ngọc Tâm1, Lê Uyển Thanh2, Trần Thanh Tùng3, Lƣu Thái Danh3, Nguyễn Thị Thu Nga3 NCS Viện Công nghệ sinh học, Trường Đại học Cần Thơ Trường Đại học Đồng Tháp Trường Đại học Cần Thơ Hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) loại trồng có giá trị kinh tế cao, mang lại lợi ích kinh tế lớn cho người dân tỉnh Đồng Bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) Tuy nhiên, chúng thường bị bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây mức độ cao Hiện tại, tập quán canh tác nông dân chủ yếu dựa vào biện pháp hóa học hiệu vi khuẩn gây bệnh kháng thuốc chứa hoạt chất kháng sinh thuốc gốc đồng (Frampton et al., 2012) Vì vậy, xu hướng tiến đến nông nghiệp hữu cơ, việc đẩy mạnh ứng dụng chế phẩm sinh học nhằm cải tạo đất, cân hệ vi sinh vật đất vấn đề cấp thiết Việt Nam nói riêng giới nói chung Trong hệ sinh thái tự nhiên hệ sinh thái nơng nghiệp ln có diện phong phú quần thể vi sinh vật có lợi đất xạ khuẩn, vi khuẩn, nấm thực khuẩn thể (bacteriophages) Bên cạnh đó, thực khuẩn thể (TKT) virus kí sinh tế bào vi khuẩn giới nghiên cứu nhiều ứng dụng phòng trừ sinh học bệnh trồng Hình 1: Cúc Tiger TP.Sa Đéc, chúng có số ưu điểm sau: kí sinh chuyên tính tỉnh Đồng Tháp tế bào vi khuẩn (Duckworth Gulig, 2002), thực khuẩn thể có mặt nơi đâu có diện tế bào vi khuẩn kí chủ như: đất, nước, trồng, thể động vật người (Adams, 1959), thực khuẩn thể không độc với tế bào nhân thật (Greer, 2005) khả thực khuẩn thể tự chép chu kì vịng 15 phút mật số gia tăng nhanh (Duckworth Gulig, 2002) Hiện nay, giới có nhiều ghi nhận việc TKT có hiệu việc quản lí bệnh vi khuẩn Riêng Việt Nam, nhóm nghiên cứu Nguyễn Thị Trúc Giang cs (2014), Nguyễn Thị Thu Nga cs (2016), Phan Quốc Huy cs (2016) bước đầu nghiên ứng dụng thực khuẩn thể phòng trị bệnh hại vi khuẩn trồng, nhiên chưa có nghiên cứu đánh giá hiệu phòng trị thực khuẩn thể bệnh héo xanh vi khuẩn R solanacearum gây hoa cúc (Chrysanthemum sp.) Trong nghiên cứu nhằm tuyển chọn dòng thực khuẩn thể hiệu cho việc quản lý bệnh héo xanh hoa cúc, góp phần phát triển nguồn vật liệu phòng trừ sinh học hoa ĐBSCL nói riêng Việt Nam nói chung 1434 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC VỀ SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LẦN THỨ I PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Địa điểm mẫu vật Giống hoa cúc Tiger, nguồn vi khuẩn gây bệnh nguồn thực khuẩn thể phân lập từ tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) Lâm Đồng Phƣơng pháp nghiên cứu Phƣơng pháp điều tra, thu thập mẫu bệnh đồng ruộng: theo Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia phương pháp điều tra phát dịch hại trồng QCVN 01-38: 2010/BNNPTNT (Bộ Nông nghiệp PTNT, 2010) Mỗi tỉnh chọn huyện xã có diện tích trồng cúc trọng điểm Chọn ruộng có đặc trưng canh tác khác nhau, ghi chép số liệu liên quan đến giống, chế độ luân canh, thời vụ, phân bón, thuốc bảo vệ thực vật Xác định ruộng điều tra đại diện cho vùng bị bệnh Điều tra theo điểm chéo góc Đối với mẫu bệnh có triệu chứng bệnh héo xanh vi khuẩn đồng ruộng, tiến hành thu đoạn thân gần gốc toàn đất cho vào túi sạch, ghi nhãn với thông tin: nơi thu thập, giống, ngày thu mẫu, Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn Ralstonia solanacearum: Phân lập vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh áp dụng theo (Mehan V K McDonald D., 1995) (Burgess et al., 2009) Phƣơng pháp phân lập dòng thực khuẩn thể: Thu thập mẫu đất, bệnh héo xanh hoa cúc tỉnh ĐBSCL, sau thực phân lập dịng TKT theo (Makari et al., 2013) (Biền Văn Minh, 2006) Phƣơng pháp đánh giá khả ký sinh thực khuẩn thể chủng vi khuẩn R solanacearum điều kiện phịng thí nghiệm Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên Gồm 55 chủng vi khuẩn R solanacearum 124 dòng thực khuẩn thể với lần lặp lại Cách tiến hành: Cho 100 µl huyền phù vi khuẩn R solanacearum với OD = 0,3 vào đĩa petri có vạch 16 chứa 10 ml môi trường King‟B 0,8% agar nấu tan để nguội 50oC, sau dùng micropipette hút µl huyền phù TKT nhỏ vào ô tương ứng đĩa petri chứa sẵn vi khuẩn R solanacearum Sau đặt đĩa điều kiện phịng Chỉ tiêu ghi nhận: Xác định khả kí sinh TKT thơng qua việc hình thành vịng vơ khuẩn (plaques) chủng vi khuẩn khác sau 24 Từ xác định phổ kí chủ dịng TKT chủng vi khuẩn mẫn cảm cách đếm tổng số vi khuẩn bị kí sinh dịng TKT tổng số TKT kí sinh dịng vi khuẩn Xử lí số liệu: Số liệu xử lý Excel phân tích thống kê phần mềm Mstat-C với phép thử Duncan Phƣơng pháp đánh giá khả phân giải vi khuẩn R.solanacearum 10 dịng TKT có phổ ký chủ rộng Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với lần lặp lại, gồm 10 dịng TKT có phổ ký chủ rộng chủng vi khuẩn bị kí sinh nhiều Cách tiến hành: Rút 100µl huyền phù TKT 103 pfu/ml + 100 µl huyền phù vi khuẩn R solanacearum OD = 0,3 cho vào đĩa petri chứa 10ml mơi trường King‟B 0,8% agar, hịa với đặt điều kiện phòng 1435 TIỂU BAN TÀI NGUYÊN SINH VẬT Chỉ tiêu ghi nhận: Ghi nhận đường kính phân giải dịng thực khuẩn thể với chủng vi khuẩn kí chủ tương ứng, cách đo đường kính 10 vịng plaques lần lặp lại thời điểm 24 giờ, 48 giờ, 72 sau tiến hành thí nghiệm Xử lí số liệu: Số liệu phân tích thống kê phần mềm Mstat-C qua phép thử Duncan từ chọn dịng TKT có đường kính phân giải vi khuẩn cao để đánh giá hiệu phòng trị điều kiện nhà lưới II KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết phân lập chủng vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh Cúc (Chrysanthemum sp.) dòng TKT số tỉnh ĐBSCL Lâm Đồng Trong thời gian từ tháng 9/2015 đến tháng 3/2017, tiến hành thu mẫu bệnh héo xanh tỉnh ĐBSCL Lâm Đồng Kết phân lập 55 chủng vi khuẩn R.solanacearum (Bảng 1) 124 dòng TKT (Bảng 2) gồm tỉnh: Bến Tre, Cần Thơ, Hậu Giang, Tiền Giang, An Giang, Đồng Tháp, Bạc Liêu Lâm Đồng Trong vi khuẩn R.solanacearum phân lập nhiều tỉnh Bến Tre với 13 dòng số 55 dòng chiếm 23,6% TKT phân lập 38 dòng số 124 dòng chiếm 30,6%, nơi có diện tích trồng hoa chuyên canh lớn lâu đời ĐBSCL, dịch bệnh nhiều so với tỉnh khác khu vực Bảng Bảng Danh sách 55 chủng vi khuẩn R solanacearum Danh sách 124 dòng thực khuẩn thể phân lập số tỉnh ĐBSCL Lâm Đồng phân lập số tỉnh ĐBSCL Lâm Đồng STT Địa điểm thu mẫu Số STT Địa điểm thu mẫu Số dòng chủng TKT VK TP Sa Đéc - Đồng Tháp TP Sa Đéc - Đồng Tháp 33 H Châu Phú- An Giang H Châu Phú - An Giang TP Đà Lạt - Lâm Đồng 3 TP Đà Lạt - Lâm Đồng Q Thốt Nốt - Cần Thơ Q Thốt Nốt - Cần Thơ Q Bình Thủy - Cần Thơ Q Bình Thủy - Cần Thơ H Chợ Lách - Bến Tre 13 H Chợ Lách - Bến Tre 38 Mỹ Tho - Tiền Giang 12 Mỹ Tho - Tiền Giang 12 Long Mỹ - Hậu Giang Long Mỹ - Hậu Giang 9 Ngan Dừa - Bạc Liêu Ngan Dừa - Bạc Liêu 10 Vĩnh Lợi - Bạc Liêu 10 Vĩnh Lợi - Bạc Liêu Tổng 55 Tổng 124 Các chủng vi khuẩn phân lập có khuẩn lạc trịn, có màu trắng sữa, nhẵn bóng, nhờn mơi trường King‟B Khuẩn lạc vi khuẩn R.solanacearum môi trường TZCA (Tetrazolium Chloride Agar) có màu hồng rìa có màu trắng phù hợp với miêu tả Vũ Triệu Mân (2007) 1436 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC VỀ SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LẦN THỨ Khi cho thực khuẩn thể (phage) lên lớp vi khuẩn phân chia đĩa thạch dinh dưỡng tạo nên vùng phân giải suốt Vùng phân giải gọi “plaque” (đốm thực khuẩn) (Hình 2) Hình 2: Hình minh họa phƣơng pháp pha lỗng đổ đĩa để tách rịng TKT qua hình thành đốm thực khuẩn đơn lẻ (plaque) Dòng TKT CT46 (trái), dòng TKT BT109 (phải) Đánh giá khả ký sinh thực khuẩn thể chủng vi khuẩn R solanacearum điều kiện phịng thí nghiệm Bảng Khả kí sinh 124 dịng TKT 55 dòng vi khuẩn phân lập số tỉnh ĐBSCL Lâm Đồng Dòng Số VK Số VK ST Dịng Số VK STT STT Dịng TKT TKT kí sinh kí sinh T TKT kí sinh 43 85 ĐT1 CT43 BT85 51 42 46 44 86 51 ĐT2 CT44 BT86 51 51 45 87 ĐT3 CT45 BT87 50 51 44 46 88 ĐT4 CT46 BT88 50 52 42 47 89 ĐT5 CT47 BT89 49 51 41 48 90 ĐT6 CT48 BT90 42 37 40 49 91 ĐT7 CT49 BT91 41 52 43 50 92 ĐT8 CT50 BT92 52 47 40 51 93 ĐT9 BT51 BT93 52 37 32 10 52 94 ĐT10 BT52 ĐT94 42 41 45 11 53 95 ĐT11 BT53 ĐT95 40 53 46 12 54 96 ĐT12 BT54 ĐT96 49 51 48 13 55 97 ĐT13 BT55 TG97 52 38 50 14 56 98 ĐT14 BT56 TG98 52 51 50 1437 TIỂU BAN TÀI NGUYÊN SINH VẬT 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 ĐT15 ĐT16 ĐT17 ĐT18 ĐT19 ĐT20 ĐT21 ĐT22 ĐT23 ĐT24 ĐT25 AG26 AG27 AG28 AG29 AG30 LĐ31 LĐ32 LĐ33 LĐ34 LĐ35 LĐ36 LĐ37 LĐ38 LĐ39 CT40 CT41 CT42 57 99 BT57 40 51 58 100 BT58 42 49 58 101 BT59 48 51 60 102 BT60 51 50 61 103 BT61 46 38 62 104 BT62 48 51 63 105 BT63 44 43 63 106 BT64 48 49 65 107 BT65 46 50 66 108 BT66 51 52 67 109 BT67 47 53 68 110 BT68 31 32 69 111 BT69 47 38 70 112 BT70 40 42 71 113 BT71 50 53 72 114 BT72 49 52 73 115 BT73 48 52 74 116 BT74 49 44 75 117 BT75 49 53 76 118 BT76 41 45 77 119 BT77 43 53 78 120 BT78 47 52 79 121 BT79 50 51 80 122 BT80 51 47 81 123 BT81 38 52 82 124 BT82 39 48 83 BT83 50 48 84 BT84 52 43 Trung bình số vi khuẩn kí chủ TKT 45,7/55 TG99 TG100 TG101 TG102 TG103 TG104 TG105 TG106 TG107 TG108 HG109 HG110 HG111 HG112 HG113 HG114 HG115 HG116 HG117 BL118 BL119 BL120 BL121 BL122 BL123 BL124 - 47 46 50 48 48 45 49 49 49 49 51 51 46 41 51 51 52 50 46 37 38 40 23 42 40 34 - Bảng Số lƣợng TKT kí sinh dịng vi khuẩn R solanacearum tổng số 124 dòng TKT đƣợc khảo sát Số Dòng Số TKT Số TKT Dòng STT STT Dịng VK STT TKT VK kí sinh kí sinh VK kí sinh 20 CT71 102 39 BT160 ĐT4 119 ĐT5 119 21 CT78 95 40 ĐT171 119 ĐT6 122 22 CT79 117 41 ĐT172 116 ĐT7 117 23 CT80 97 42 TG187 121 ĐT9 124 24 CT81 105 43 TG189 122 ĐT12 121 25 CT87 115 44 TG190 121 ĐT25 119 26 CT88 119 45 TG191 118 AG27 118 27 BT101 96 46 TG192 122 AG28 94 28 BT104 72 47 TG194 120 1438 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC VỀ SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LẦN THỨ 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 AG30 114 29 BT112 102 48 TG196 119 AG32 93 30 BT118 70 49 TG197 LĐ34 122 31 BT133 46 50 TG198 LĐ37 88 32 BT134 120 51 TG199 LĐ39 118 33 BT135 117 52 TG202 CT57 120 34 BT145 74 53 TG204 CT59 114 35 BT152 73 54 HG206 CT65 101 36 BT156 45 55 BL223 CT68 96 37 BT157 50 CT69 116 38 BT158 105 Trung bình số lƣợng TKT kí sinh vi khuẩn R solanacearum 100/124 115 120 122 118 117 109 111 - Kết khả kí sinh 124 dòng TKT 55 chủng vi khuẩn phân lập số tỉnh ĐBSCL Lâm Đồng cho thấy có 10 dịng TKT có khả kí sinh vi khuẩn R.solanacearum rộng ĐT13, AG29, LĐ38, CT44, CT46, BT56, BT67, BT75, TG97, HG109 50 tổng số 55 dòng vi khuẩn khảo sát chiếm 90,9% chủng vi khuẩn ĐT9, LĐ34, BT134 bị thực khuẩn thể kí sinh nhiều 120 tổng số 124 dòng TKT khảo sát chiếm 96,77% Đánh giá khả tiêu diệt vi khuẩn 10 dòng TKT có phổ ký chủ rộng Thời điểm 48 GSKNN kết trình bày Bảng 5, nghiệm thức TKT cho kết phân giải từ 2,13 đến 8,79 mm dòng TKT CT46, CT44, BT67, ĐT13, BT56, BT75 có trung bình đường kính phân giải cao đạt từ 8,32 đến 8,79 mm khác biệt ý nghĩa thống kê so với dòng lại Các nghiệm thức vi khuẩn cho thấy kết bị phân giải từ 4,47 đến 9,74 mm Đối với vi khuẩn trung bình đường kính bị phân giải cao chủng BT134 9,74 mm khác biệt ý nghĩa thống kê với chủng lại Bảng Đƣờng kính phân giải 10 dịng thực khuẩn thể với chủng vi khuẩn thời điểm 48 Đƣờng kính đốm thực khuẩn (plaque) (mm) VK (A) TKT(B) BT56 ĐT9 LĐ34 BT134 TB(B) 3,80 lm 7,27 efgh 14,1 a 8,40 A AG29 LĐ38 7,14 fgh 3,33 lmn 6,73 ghi 5,73 C 3,61 lm 7,42 efgh 9,59 d 6,87 B CT44 CT46 5,73 ij 6,32 hij 8,07 ef 7,47 efgh 12,2 bc 12,6 b 8,65 A 8,79 A ĐT13 3,77 lm 7,98 efg 13,3 ab 8,34 A BT67 4,47 kl 8,17 ef 12,9 b 8,51 A TG97 2,62 mno 2,09 no 1,68 o 2,13 D BT75 5,17 jk 8,52 de 11,3 c 8,32 A HG109 2,04 no 2,05 no 3,05 mn 2,38 D 1439 TIỂU BAN TÀI NGUYÊN SINH VẬT TB(A) CV Mức ý nghĩa 4,47 C 6,24 B 9,74 A 10,4 F(A)*,F(B)*,F(B)* Chú thích: số trung bình cột theo sau nhiều chữ giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% theo phép th Duncan, * Khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% Thời điểm 72 GSKNN kết trình bày Bảng cho thấy nghiệm thức TKT cho kết phân giải từ 2,67 đến 11,4 mm Trong đó, dịng TKT CT46, BT67, có trung bình đường kính phân giải cao 11,2 mm 11,4 mm cao khác biệt ý nghĩa với dòng TKT lại Kế dịng TKT CT44, BT56, BT75 có trung bình đường kính phân giải củng cao từ 10,0 mm đến 10,4 mm Các nghiệm thức vi khuẩn cho thấy độ mẫn cảm chủng vi khuẩn, chủng vi khuẩn BT134 mẫn cảm có trung bình đường kính phân giải cao 12,1 mm khác biệt ý nghĩa so với chủng vi khuẩn cịn lại Bảng Đƣờng kính phân giải 10 dòng thực khuẩn thể với chủng vi khuẩn thời điểm 72 Đƣờng kính đốm thực khuẩn (plaque) (mm) VK(A) TKT(B) BT56 AG29 LĐ38 CT44 CT46 ĐT13 BT67 TG97 BT75 HG109 TB(A) CV(%) Mức ý nghĩa ĐT9 4,08 l 7,52 ghij 3,72 lm 6,27 jk 7,13 hijk 4,02 l 6,47 ijk 3,20 lm 6,08 k 3,10 lm 5,16 C LĐ34 8,95 g 3,42 lm 7,78 ghi 8,45 gh 8,82 g 8,10 gh 8,64 g 2,42 m 10,7 f 2,30 m 6,95 B BT134 17,95ab 7,77 ghi 12,1 e 16,6 c 8,82 g 17,1 bc 19,2 a 2,40 m 13,3 d 3,19 lm 12,7 A TB(B) 10,3 B 6,24 D 7,85 C 10,4 B 11,2 A 9,73 B 11,4 A 2,67 E 10,0 B 2,86 E 9,35 F(A)*,F(B)*,F(B)* Chú thích: số trung bình cột theo sau nhiều chữ giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% theo phép th Duncan, * Khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% Kết phù hợp với nghiên cứu Nguyễn Thị Trúc Giang cs.,(2014) phân lập 10 dòng thực khuẩn thể từ 26 dòng vi khuẩn, có dịng TKT có khả phịng trị hiệu bệnh cháy bìa lúa vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae Ở thời điểm 24 GSKNC bốn dịng TKT cho hiệu tiêu diệt vi khuẩn với đường kính phân giải từ 3,8 – 5,1 mm Trong đó, dịng thực khuẩn 10, 12 13 có hiệu tiêu diệt vi khuẩn cao khác biệt ý nghĩa thống kê với dịng TKT 17 với đường kính phân giải 4,9 mm; 5,1 mm; 5,1 mm 3,8 mm Ở thời điểm 48 GSKNC đường kính phân giải bốn dòng TKT đạt từ 8,1 – 11,7 mm, dịng TKT 12 (11,7 mm) có đường kính phân giải khác biệt ý nghĩa thống kê so với dòng cịn lại 1440 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TỒN QUỐC VỀ SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LẦN THỨ Kết phù hợp với nghiên cứu Tan et al (2009), việc phân lập 132 dòng thực khuẩn từ nước cống, với 30 dòng thực khuẩn thể cho kết đối kháng với R solanacearum dòng TKT ức chế Erwinia chrysanthemi thể qua đường kính phân giải từ khoảng – 17 mm 24 – 48 III KẾT LUẬN Kết phân lập 124 dòng thực khuẩn thể 55 chủng vi khuẩn R.solanacearum từ ruộng trồng Cúc tỉnh: Bến Tre, Cần Thơ, Hậu Giang, Tiền Giang, An Giang, Đồng Tháp, Bạc Liêu Lâm Đồng Kết đánh giá khả kí sinh 124 dịng TKT 55 chủng vi khuẩn R.solanacearum có 10 dịng TKT có khả kí sinh rộng ĐT13, AG29, LĐ38, CT44, CT46, BT56, BT67, BT75, TG97, HG109, chúng kí sinh 50 tổng số 55 dịng vi khuẩn khảo sát chiếm 90,9% Có chủng vi khuẩn ĐT9, LĐ34, BT134 bị thực khuẩn thể kí sinh nhiều nhất: 120 tổng số 124 dòng TKT khảo sát chiếm 96,77% Kết đánh giá khả tiêu diệt vi khuẩn 10 dòng thực khuẩn thể lên chủng vi khuẩn ĐT9, LĐ34, BT134 có dịng TKT CT44, CT46, BT56, BT67, BT75 có khả tiêu diệt vi khuẩn R.solanacearum cao dòng thực khuẩn thể cịn lại Lời cảm ơn: Cơng trình hồn thành với hỗ trợ nhiệt tình cộng tác viên đội ngũ nghiên cứu viên môn Bảo vệ thực vật trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO Adams M H., 1959 Bacteriophages Interscience puplishers 592 pp Biền Văn Minh, 2006 Phương pháp khảo sát phage Tạp chí khoa học Trường ĐH Sư phạm Huế 65:24-26 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 2010 Quy chuẩn kỹ thuật Quốc gia phương pháp điều tra phát dịch hại trồng, QCVN 01-38: 2010/BNNPTNT, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn ban hành Thông tư số 71/2010/TT-BNNPTNT, ngày 10 tháng 12 năm 2010 Duckworth D H & Gulig P A., 2002 Bacteriophages BioDrugs 16 (1): 57-62 Greer G G., 2005 Bacteriophage control of foodborne bacteria Journal of Food Protection, 68 (5): 1102-1111 Makari Hanumanthappa K., Palaniswamy M., Angayarkanni J., 2013 Isolation of lytic bacteriophage against Ralstonia solanacearum causing wilting symptoms in ginger (Zingiber officinale) and potato (Solanum tuberosum) plants International Research Journal of Biological Sciences, (11): 78-84 Mehan V K & McDonald D., 1995 “Techniques for diagnosis of Pseudomonas solanacearum, and for resistance screening against groundnut bacterial wilt”, Technical Report, International Crops Research Institute for the Semi-Arid Tropics Nguyễn Thị Thu Nga Nguyễn Thị Trúc Giang, 2016 Thực khuẩn thể ứng dụng phòng trị bệnh hại vi khuẩn trồng Tạp chí khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 301:181-202 Nguyễn Thị Trúc Giang, Đoàn Thị Kiều Tiên Nguyễn Thị Thu Nga, 2014 Phân lập TKT đánh giá hiệu phòng trị bệnh cháy bìa lúa vi khuẩn Xanthomonas oryzae 1441 TIỂU BAN TÀI NGUYÊN SINH VẬT pv oryzae Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 4: 194-203 10 Phan Quốc Huy, Nguyễn Minh Trung, Hồ Cãnh Thịnh Nguyễn Thị Thu Nga, 2016 Đánh giá hiệu thực khuẩn thể phòng trừ bệnh thối hạt lúa vi khuẩn Burkholderia glumae Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 45: 70-78 11 Frampton R A., Pitman A R & Fineran P C., 2012 Advances in bacteriophagemediated control of plant pathogens International journal of microbiology: 1-11 12 Tan, G.H., M.S Nordin, A.R Napsiah and H Rosnah, 2009 Lysis activity of bacteriophages isolated from sewage against Ralstonia solanacearum and Erwinia chrysanthemi (Aktiviti lisis bakteriofaj daripada air kumbahan terhadap Ralstonia solanacearum dan Erwinia chrysanthemi), J Trop Agric and Fd Sc 37(2): 203– 209 SCREENING POTENTIAL BACTERIOPHAGES IN VITRO FOR CONTROLLING RALSTONIA SOLANACEARUM CAUSING BACTERIAL WILT ON CHRYSANTHEMUN SP Huynh Ngoc Tam, Le Uyen Thanh, Tran Thanh Tung, Luu Thai Danh, Nguyen Thi Thu Nga SUMMARY There were total 124 bacteriophages and 55 R solanacearum strains isolated from Ben Tre, Can Tho, Hau Giang, Tien Giang, An Giang, Dong Thap, Bac Lieu and Lam Dong provinces Assessing parasitic abilities of 124 bacteriophages on 55 R.solanacearum strains, there were 10 bacteriophages i.e ĐT13, AG29, LĐ38, CT44, CT46, BT56, BT67, BT75, TG97, HG109 expressing wide parasitizing range (on 50 strains of R solanacearum in total 55 tested strains, occupying 90.9%) Three R solanacearum strains ĐT9, LĐ34, BT134 showed most sesitivity to 120 phages in total 124 tested phages, occupying 96.77% Assessing lytic abilities of 10 bacteriophages on R.solanacearum strains i.e ĐT9, LĐ34, BT134 indicated bacteriophages i.e CT44, CT46, BT56, BT67, BT75 expressing stronger lytic abilities compared to the remaining bacteriophage strains 1442 ... điều kiện phịng thí nghiệm Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên Gồm 55 chủng vi khuẩn R solanacearum 124 dòng thực khuẩn thể với lần lặp lại Cách tiến hành: Cho 100 µl huyền phù vi khuẩn. .. từ chọn dịng TKT có đường kính phân giải vi khuẩn cao để đánh giá hiệu phòng trị điều kiện nhà lưới II KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết phân lập chủng vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh Cúc (Chrysanthemum. .. lập vi khuẩn Ralstonia solanacearum: Phân lập vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh áp dụng theo (Mehan V K McDonald D., 1995) (Burgess et al., 2009) Phƣơng pháp phân lập dòng thực khuẩn thể: