Luận văn tốt nghiệp sử dụng các dòng vi khuẩn pseudomonas fluorescens phòng trừ vi khuẩn ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh trên cây cà chua

Luận văn tốt nghiệp Chương GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Cà chua số rau màu quan trọng, phân bố rộng rãi nhiều nước giới Tuy nhiên việc gieo trồng cà chua gặp nhiều khó khăn, trở ngại Một nguyên nhân làm hạn chế phát triển sản xuất làm giảm xuất cà chua sâu bệnh hại Trong đáng ý bệnh héo rũ vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây Đây loại vi khuẩn có khả gây hại 200 loài cỏ, đặc biệt gây hại nặng họ cà cà chua, cà tím, khoai tây, thuốc khác họ đậu phụng, gừng, chuối, chúng có khả sống lâu đất lây lan nhanh, di chuyển từ nơi sang nơi khác Cây chết hàng loạt xanh giống bị cắt ngang gốc Ước tính thiệt hại cho sản xuất trồng hàng năm vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây 15-95%(Emil Q.Javier, 1994) Để khắc phục tình trạng này, biện pháp phòng trừ tác nhân gây bệnh phương pháp sinh học nhiều nhà khoa học quan tâm, nghiên cứu Đây phương pháp phòng chống có hiệu khả phòng trừ vi khuẩn Ralstonia solanacearum, giúp cà chua sinh trưởng phát triển tốt hơn, làm cho tác nhân gây bệnh không kháng thuốc, an toàn với môi trường sinh thái cho kết nhanh xác phù hợp với xu hướng nông nghiệp an toàn nhiều nước giới áp dụng Việc nghiên cứu loại vi khuẩn đối kháng : Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, để chống lại vi khuẩn Ralstonia solanacearum vấn đề cần thiết Vì vậy, nghiên cứu tính đa dạng cá thể quần thể vi khuẩn gây bệnh lưu hành chúng SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luaän văn tốt nghiệp vùng sản xuất cần thiết, làm sở khoa học cho giải pháp phòng chống chọn tạo giống kháng bệnh sau Xuất phát từ thực tiễn để đánh giá khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens Chúng thực đề tài: “Sử dụng dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens phòng trừ vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh cà chua” 1.2 Mục đích – yêu cầu Đánh giá khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh cà chua 1.3 Giới hạn đề tài Đề tài thực tháng có nhiều mưa, đất trồng bị nhiễm nhiều loại bệnh Cây cà chua loại dễ mẫn cảm với nhiều loại bệnh 1.4 Đối tượng nghiên cứu Các dòng vi khuẩn đối kháng thuộc nhóm Pseudomonas fluorescens Dòng vi khuẩn gây bệnh Ralstonia solanacearum Cây trồng: cà chua 1.5 Nội dung nghiên cứu Đánh giá khả đối kháng dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum đóa petri phòng thí nghiệm SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp Đánh giá khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum cà chua điều kiện nhà lưới Đánh giá khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum cà chua đồng ruộng SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh Vi khuẩn Ralstonia solanacearum vi khuẩn gây bệnh mạch dẫn gây hại 200 loài cỏ Halted nghiên cứu bệnh vào năm 1892, năm 1896 E.F.Smith nghiên cứu, mô tả, định tên Pseudomonas solanacearum Những năm sau đó, bệnh héo rũ nhiều nhà khoa học giới sâu, nghiên cứu cách toàn diện Kelman 1953, Hayward 1964, Cook and Baker 1983, Yabuuchi 1992, 1995(Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998) Bệnh héo rũ vi khuẩn Ralstonia solanacearum cà chua có tên là: Southern wilt (theo cách gọi người Hoa Kỳ), Bacterial wilt (theo cách gọi người Anh), Việt Nam gọi bệnh héo xanh, héo rũ 2.2 Mức độ phổ biến gây hại Ralstonia solanacearum Ngày nay, Ralstonia solanacearum ghi nhận vi khuẩn gây hại hầu hết châu lục, phổ biến nước Angola, Trung quốc, Bangladesh, n Độ, Indonesia, Srilanka, Đông n Ethiopia, Lybia, Kenya, Malaysia, Nigieria, Philippin, Nam Phi, Đài Loan, Thái Lan, Uganda, Hoa Kỳ, Việt Nam, Zambia (Subrhmagam, 1994) Ở Việt Nam, bệnh héo xanh cà chua vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh gây hại phổ biến làm chết héo hàng loạt cà chua đồng ruộng, gây tổn thất lớn vùng trồng cà chua nước, vùng đồng sông Hồng Bệnh ghi nhận cà chua, khoai tây, cà tím, thuốc lá, đậu phụng, gừng, ớt Qua số kết nghiên cứu công bố gần cho SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp thấy nước ta vi khuẩn gây bệnh héo xanh thuộc division Châu Á (Lê Lương Tề, 2002), race1, biovar (Nguyễn Thị Yến, 2002) Ở Hoa Kỳ, vi khuẩn Ralstonia solanacearum phát khoai tây, thuốc Florida xác định phương pháp PCR biovar (Prakash, 2002) Ở Indonesia, bệnh phát đậu phụng vào năm 1905, vung Cirebon Về sau bệnh ghi nhận nhiều loại trồng khác cà chua, khoai tây, thuốc lá, ớt, chuối Kết nghiên cứu bệnh héo xanh đậu phụng AARD ACIAR vào năm 1985 cho bệnh đậu phụng Indonesia, thiệt hại bệnh gây từ 15-90% suất (Wright, 1991) Ở Đài Loan bệnh gây hại cà chua, khoai tây, thuốc lá, ớt, cà tím, đậu phụng, dâu tây, tía tô, thầu dầu, mè, củ cải, rau dền số trồng khác Trên nhiều loại trồng thiệt hại bệnh gây từ 5-100% suất Các dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum chủ yếu thuộc race1 (Yung-An Lee, 2001) Ở Ai Cập, bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum ghi nhận gây hại nặng cà chua a ti sô năm gần đây, thiệt hại gây a ti sô từ 5-20% suất (Aly, 2000) 2.3 Sơ lược vi khuẩn Ralstonia solanacearum Vi khuẩn Ralstonia solanacearum có dạng hình gậy, hai đầu tròn, có lông roi đầu, kích thướt 0,5-1,5µ, nhuộm gram âm loài vi sinh vật tồn đất thường xuyên gây bệnh chết héo (héo rũ, héo xanh) nhiều loại trồng lạc, khoai tây, cà chua, ớt, thuốc phổ biến rộng hầu hết khắp vùng, gây tác hại lớn cho sản xuất Chúng lan truyền theo nước tưới, xâm nhập vào SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp qua vết thương di chuyển vào bó mạch Bệnh thường xảy vào lúc tăng trưởng Vi khuẩn phát triển nhiệt độ tương đối cao, đất ẩm, xâm nhập qua vết thương, sinh sản bó mạch, kí chủ di chuyển bó mạch từ thân đến lá, sinh độc tố làm héo, chết Phá bó mạch làm tắt ngẽn vận chuyển nước chất dinh dưỡng, bệnh hại nhiều đất cát pha, đất thịt bệnh nhẹ Trên ruộng trồng luân canh với lúa nước bệnh nhẹ Vi khuẩn thích hợp nhiệt độ 30-370C, nhiệt độ tối thiểu 100C, tối đa 410C, nhiệt độ gây chết 520C, mẫn cảm môi trường khô 2.4 Sự phân chia vi khuẩn Ralstonia solanacearum theo đặc tính gây hại 2.4.1 Race Dựa phạm vi ký chủ chia laøm race (Martin vaø French, 1997) + Race 1: Tấn công nhiều vùng địa lý, loại trồng khác Đặc biệt khoai tây, cà chua, cà tím, ớt, thuốc lá, đậu phụng Vi khuẩn Ralstonia solanacearum thuộc race thường gây hại vùng có nhiệt độ ấm áp gây hại nặng vùng nhiệt đới + Race 2: Chủ yếu công thuộc họ chuối chuối tam bội, chuối lá, chuối sợi + Race 3: Chủ yếu công khoai tây Khác với race 1, race thường gây hại vùng có nhiệt độ thấp vùng có vó độ cao + Race 4: Được ghi nhận công dâu tằm (mulberry) Trung Quốc Sự phân chia race thường phức tạp phụ thuộc vào thầnh phần ký chủ phạm vi phân bố chúng Theo Martin French (1997), race lưu SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp tồn nhiều năm đất, ngược lại race thường có xu hướng giảm sau vài năm khoai tây dại làm ký chủ 2.4.2 Biovar Dựa vào đặc tính sinh lý, sinh hoá khác mẫu phân lập, biovar nhận dạng dựa vào khả sử dụng oxi hoá disaccharides (cellobiose, lactose, maltose) rượu cacbon (dulcitol, mannitol, sorbitol) Biovar thường bao gồm race 3, biovar gồm race biovar 1, 3, gồm race 2.5 Triệu chứng gây hại vi khuẩn Ralstonia solanacearum Triệu chứng thường biểu sau bệnh xâm nhập vào Ở bị bệnh ban ngày màu nhẵn bóng, tái xanh, héo cụp xuống, giai đoạn thường biểu toàn giai đoạn trưởng thành triệu chứng thường biểu trước Ở 1-2 ngày đầu phục hồi lại vào lúc trời mát đêm, sau 2-3 ngày héo hồi phục lại toàn bị héo rũ chết Cắt ngang đoạn thân gần mặt đất ta thấy bó mạch bị hoá nâu, điều kiện ẩm độ cao thân bị bệnh thối mềm, ấn mạnh gần miệng cắt thấy dịch nhờn vi khuẩn tiết màu trắng sữa Rễ có màu nâu đen thối 2.6 Đặc điểm phát sinh phát triển bệnh Thời gian vi khuẩn lưu tồn đất phụ thuộc nhiều yếu tố ẩm độ, nhiệt độ, hoá lý đất Bên cạnh phụ thuộc vào race gây bệnh, race thường lưu tồn lâu đất trái lại race thường giảm sau vài năm khả thích ứng thấp Vi khuẩn lưu tồn đất từ 5-6 năm, thể ký chủ thực vật hạt giống sống tới tháng, bám dính bề mặt hạt tồn 2-7 ngày (Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998) SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp Vi khuẩn xâm nhập vào qua rễ, vết thương giới, thân non, lỗ hở tự nhiên, côn trùng, vào bên chúng sinh sản nhanh làm bít lỗ mạch đồng thời tiết độc tố làm bó mạch bị hoá nâu, đen gây tượng héo bị thiếu nước Dưới điều kiện thuận lợi vi khuẩn di chuyển xuyên qua lớp vỏ bên môi trường đất, tương tác đất rễ, rễ bị nhiễm vi khuẩn từ đất ngược lại vi khuẩn từ môi trường đất (Lê Lương Tề Vũ Triệu Mân, 1999) Vi khuẩn lan truyền chủ yếu nguồn nước, đất bám dính vào giầy dép, dụng cụ canh tác (Martin French, 1997) Bệnh héo xanh vi khuẩn phát sinh phát triển phụ thuộc vào đièu kiện đất đai chân đất cao bệnh thường nặng chân đất thấp, đất luân canh với lúa nước làm giảm tỉ lệ bệnh đáng kể (Đỗ Tấn Dũng, 2001) Thời vụ trồng yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến phát sinh phát triển bệnh, thời vụ trồng có mưa nhiều, ẩm độ cao làm gia tăng phát sinh phát triển bệnh Mật độ trồng cao tỉ lệ bệnh thường cao chúng tạo vùng khí hậu thuận lợi cho phát sinh phát triển bệnh Vì nước nguồn lây lan chủ yếu bệnh, phương pháp tưới yếu tố gia tăng tỉ lệ gây hại bệnh 2.7 Biện pháp phòng trừ 2.7.1 Biện pháp hoá học Hiện nay, chưa có loại thuốc đặc hiệu để phòng trừ bệnh héo xanh cà chua, nhiên biện pháp hoá học xem cần thiết nay, xét lâu dài biện pháp hoá học ngày thể mặt trái làm cho tác nhân gây bệnh trở nên kháng thuốc, đặc biệt gây ô nhiễm môi SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp trường sức khỏe người cách nghiêm trọng Dùng formol, Mocap 10G, Furadan 3H, vôi, CuSO4 xử lý đất Dùng thuốc: Kasuran, Rovral, Dithan 2.7.2 Biện pháp sinh học Khi sử dụng thuốc hoá học để bảo vệ thực vật thuốc tạo thành lớp mỏng bề mặt lá, quả, thân cây, mặt đất, mặt nước lớp chất lắng gọi dư lượng ban đầu thuốc biện pháp sinh học công tác bảo vệ thực vật ngày ý khai thác vị trí biện pháp ngày nâng cao Việc bảo vệ môi trường sống, môi trường sản xuất tiến hành nông nghiệp biện pháp có ý nghóa Sử dụng số vi khuẩn đối kháng Bacillus sudtilis, Pseudomonas fluorescens để xử lí hạt trước gieo, nhúng rể trước trồng đưa vi sinh vật đối kháng vào vùng rễ sau trồng nhằm ức chế, cạnh tranh tiêu diệt vi khuẩn Ralstonia solanacearum (Đỗ Tấn Dũng, 2001) Sử dụng chế phẩm V58 có chứa vi sinh vật đối kháng ruộng trồng cà chua Tiền Phong - Mê Linh - Vónh Phúc, kết thu có công thức sử dùng V58 tỉ lệ chết giảm 25% so với đối chứng 80% (Lê Như Kiểu, 2001) Ngoài ra, cần phải làm đất vườn ươm bệnh, cày bừa kỹ, bón đạm vừa phải, phân chuồng phải ủ hoai, luân canh với lúa nước dùng thuốc cách hợp lý 2.8 Phòng trừ sinh học bệnh 2.8.1 Khái niệm phòng trừ sinh học bệnh Theo Cook Baker (1983), phòng trừ sinh học bệnh (PTSHBC) thông qua việc sử dụng nhiều sinh vật (ngoại trừ người) để khống chế mầm bệnh hay làm giảm sinh trưởng phát triển tác nhân gây hại Đến năm 1988, Cook đưa khái niệm rộng phòng trừ sinh SVTH: Hồ Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 10 học Theo ông PTSHBC việc sử dụng sinh vật, gen sản phẩm gen để điều khiển tác nhân gây bệnh Các cách điều khiển tác nhân gây bệnh là: (i) trì mật số nguồn bệnh mức thấp ngưỡng kinh tế, (ii) làm chậm loại trừ tiến trình xâm nhiễm bệnh, (iii) kích hoạt tạo điều kiện phát huy hệ thống tự vệ 2.8.2 Lựa chọn tác nhân phòng trừ sinh học Chiến lược PTSHBC chia thành hai loại (1) chiến lược dựa nguyên tắc sinh thái học hay gọi phòng trừ sinh học cổ điển (Hokkaness Lynch, 1995) hay phòng trừ sinh học xử lý lần (Cook, 1993), (2) chiến lược sử dụng vi sinh vật loại thuốc sinh học việc xử lý có điểm gần giống xử lý thuốc hoá học nhằm mục đích kiểm soát bệnh khoảng thời gian giới hạn Chiến lược gọi phòng trừ sinh học tăng dần (Hokkaness Lynch, 1995) Sự khác chiến lược phòng trừ ảnh hưởng đến lựa chọn phương pháp sàng lọc tác nhân phòng trừ sinh học Đối với chiến lược PTSHBC tăng dần, người ta ý đến nguồn gốc vi sinh vật đối kháng Tuy nhiên hiểu biết khía cạnh điều cần thiết cho việc đánh giá rủi ro yêu cầu cần thiết cho trình đăng ký thương mại hoá sản phẩm (Lumsden Lewis, 1989) Có số phương pháp sàng lọc tác nhân phòng trừ sinh học dựa hoạt tính men thủy phân vi sinh vật đối kháng, tương tác vi sinh vật gây bệnh vi sinh vật đối kháng, phương pháp có liên quan đến kí chủ 2.8.3 Vi khuẩn - tác nhân phòng trừ sinh học: Nhiều công trình nghiên cứu tác nhân phòng trừ sinh học công bố từ dầu kỷ 20 có vi khuẩn Đang nhóm vi khuẩn hoại sinh mà phổ SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 30 Hình 4.9: Tổng thể nghiệm thức cà chua NST Hình 4.10: Từng nghiệm thức cà chua 10 NST 4.3 Đánh giá tính độc VKGB RST01 cà chua điều kiện nhà lưới SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 31 Khi xử lý đất vi khuẩn RST01 với mật số vi khuẩn 1010cfu/gđất Sau đó, tiến hành trồng cà chua vào chậu đất để xác định mức độ gây độc vi khuẩn RST01 Kết trình bày bảng Sau ngày trồng vào chậu đất, nghiệm thức T2, T3, T4 có triệu chứng bắt đầu héo rủ héo rủ hoàn toàn T1 lại sinh trưởng phát triển bình thường điều chứng tỏ nghiệm thức T2, T3, T4 héo rũ vi khuẩn RST01 gây T1: Sinh trưởng phát triển bình thường không xử lý VKĐK VKGB T2: Héo rũ nhanh xử lý VKGB T3: Mặc dù có xử lý VKĐK trước gieo hạt héo rủ nhanh điều chứng tỏ sinh sản VKĐK không kịp so với sinh sản VKGB T4: Sự héo rũ chậm trước trồng có xử lý VKĐK, điều chứng tỏ VKĐK có tác động đến VKGB sinh sản VKĐK không kịp so với vi khuẩn gây bệnh nên bắt đầu héo dần Bảng 4.4 Ảnh hưởng vi khuẩn gây bệnh đến tỷ lệ chết Nghiệm thức T1 T2 T3 T4 Ghi chú: NST 16,7 13,3 Tỷ lệ chết (%) NST NST 0 43,3 86,7 33,3 70 23,33 50 12 NST 100 100 86,67 NST: ngày sau trồng T1: đối chứng T2: xử lý VKGB T3, T4 : xử lý VKGB VKĐK SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 32 Trong nghiệm thức, tỷ lệ chết cà chua khác nhau, tất héo rũ hàng loạt thời gian ngắn Điều chứng tỏ mật số VKGB đất dày đặc làm cho VKĐK không sinh sản dẫn đến tỷ lệ chết 100% Như vậy, mức độ gây độc vi khuẩn RST01 mạnh Khả phát sinh, phát triển chúng nhanh, thời gian ngắn toàn trồng bị héo rũ cách toàn diện Khả đối kháng vi khuẩn 85 có tác dụng thời gian ngắn mật số vi khuẩn RST01 dày kìm hãm sinh sản dòng vi khuẩn 85 Hình 4.11: Tính độc VKGB RST01 nghiệm thức SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 33 Hình 4.12: Tính độc VKGB RST01 tổng thể 4.4 Đánh giá khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum cà chua đồng ruộng Khi cà chua 15 ngày tuổi, tiến hành trồng đồng Sau ngày, tưới VKĐK 85 vào hốc đục lỗ (mỗi hốc 100ml), với mật số 109 VKĐK/ml Kết trình bày bảng Bảng 4.5 Tỷ lệ chết Nghiệm thức T1 ’ T2 ’ Ghi chú: NST 8,3 6,33 Tỷ lệ chết (%) 10 NST 15 NST 41,67 78.33 17,5 52,45 20 NST 100 95 NST: ngày sau trồng T1’: đối chứng T2’ : xử lý VKĐK SVTH: Hồ Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 34 Chỉ thời gian ngắn, tỷ lệ chết lớn, nhổ thấy rễ phát triển Cây chết quần thể sinh vật gây bệnh đất nhiều, thời tiết có mưa dầm bệnh mốc sương gây Nhổ 10 cà chua, cắt đoạn thân nhúng phần cắt gần sát gốc vào nước cất vô trùng, quan sát thấy chỗ vết cắt có dòng trắng đục sữa tiết ra, chứng tỏ cà chua có vi khuẩn, 10 cây, có vi khuẩn tiết ra, chiếm tỷ lệ 80% Như vậy, khả phòng trừ vi khuẩn Pseudomonas fluorescens không có, cộng với thời tiết có mưa to vào buổi chiều, tỷ lệ bệnh cà chua phát triển mạnh Cây chết hàng loạt thời gian ngắn Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Khả đối kháng dòng Pseudomonas fluorescens với dòng Ralstonia solanacearum đóa petri, có dòng kháng mạnh, dòng có mức độ kháng từ trung bình đến yếu Khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum yếu xử lý vi khuẩn RST01 vào chậu đất với mật số vi khuẩn: 1010 cfu/g đất Tỷ lệ chết 12 NST 100% SVTH: Hồ Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 35 Khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum mạnh xử lý vi khuẩn RST01 vào chậu đất với mật số vi khuẩn: 103cfu/g đất Tỷ lệ sống 20 NST 100% Tỷ lệ chết đồng ruộng 100% 5.2 Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với số lượng mẫu nhiều hơn, đại diện cho nhiều vùng thử nghiệm đối kháng loại vi khuẩn khác Khảo sát thêm yếu tố ảnh hưởng đến mật số vi khuẩn điều kiện ứng dụng thực tế để làm tăng tính hiệu Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến việc sản xuất chế phẩm sinh học đối kháng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Tấn Dũng, 2001 Bệnh héo rũ hại trồng cạn, biện pháp phòng chống Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Văn Hết, 1997 Khảo sát bệnh chết héo đậu phộng vi khuẩn Ralstonia solanacearum (Smith) huyện Củ Chi – Tp.Hồ Chí Minh Luận án thạc só Nông Nghiệp Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 36 Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998 Giáo trình bệnh nông nghiệp Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội Lê Lương Tề Vũ Triệu Mân, 1999 Bệnh vi khuẩn virus hại trồng Nhà xuất Giáo Dục Lê Lương Tề, 2002 Nhận dạng Ralstonia solanacearum PCR đánh giá tính kháng bệnh héo xanhcủa số giống cà chua kháng với dòng vi khuẩn Hà Nội – Việt Nam Hội thảo bệnh sinh học phân tử Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh lần thứ 21/6/2002 Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Yến ctv, 2002 Thành phần nòi, biovar vi khuẩn gây bệnh héo xanh trồng cạn Hội thảo bệnh sinh học phân tử, Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh lần thứ Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Lê Lương Tề, 2002 Phòng chống bệnh héo xanh vi khuẩn cà chua có hiệu kinh tế cao biện pháp sử dụng rộng rãi giống cà chua kháng bệnh, có suất cao CLN-1462A P.T 4719A vùng đồng sông Hồng Lê Như Kiểu, Nguyễn Ngọc Cường, Đào Thu Hằng, 2003 Phát biovar quần thể vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh cà chua Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc, Hà Nội 2003 Phạm Đăng Minh, 2003 Cấu trúc quần thể vi khuẩn Ralstonia solanaccearum gây hại trồng số tỉnh phía nam Việt Nam Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông nghiệp Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh SVTH: Hồ Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 37 Nguyễn Trung Thành, 2004 Bước đầu chọn lọc đánh giá dòng vi khuẩn đối kháng phân lập từ đất để khống chế nấm Rhizôctnia solani, Sclerotium rolfsii vi khuẩn Ralstonia solanaccearum gây bệnh cà chua Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông nghiệp Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Phạm Minh Sang, 2003 Hiệu lực chế phẩm vi khuẩn đối kháng kích thích sinh trưởng phòng trừ bệnh khô vằn (Rhizoctonia solani Kuln) lúa Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông nghiệp Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Tiếng nước Hayward A.C.1964, Characterics of Pseudomonas solanacearum J Appl Bacteriol 27: 205 – 277 Kelman A.1954 The raltionships of pathogencity in Pseudomonas solanacearum to colony appearance on a tetrazolium medium Phytopathology 44: 693 – 695 Yung-An L., Shu-Chung F., Ling-Ya C and Kuo-Chiang H., 2001 Isolate of an insertion sequence from of Ralstonia solanacearum race and its potential use for strain characterization and detection Applied and Environmental Microbiology 67: 3943 – 3950 SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luaän văn tốt nghiệp 38 PHỤ LỤC I Bảng Ảnh hưởng VKĐK đến số cà chua NT T1 T2 LLL Số NST 10 NST 15 NST 20 NST 19 33 36 45 24 28 39 39 16 25 36 47 18 25 27 30 SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghieäp T3 T4 39 15 24 25 29 15 23 25 36 21 31 47 60 26 38 53 57 18 27 37 63 27 44 52 62 29 51 57 78 25 33 49 64 Ghi chú: NT: nghiệm thức LLL: lần lặp lại NST: ngày sau trồng Số ngày sau trồng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -nt 189.58 63.194 13.00 0.0049 lll 50.17 25.083 5.16 0.0497 Error 29.17 4.861 Non-additivity 2.03 2.029 0.37 Residual 27.14 5.428 -Total 11 268.92 -Grand Mean= 21.083 Grand Sum= Coefficient of Variation= 253.000 Total Count= 12 10.46% * Trắc nghiệm phân hạng số cà chua ngày sau trồng SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 40 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = Ranked Order 19.70 16.00 21.70 27.00 B B AB A Mean Mean Mean Mean = = = = 27.00 21.70 19.70 16.00 A AB B B Số 10 ngày sau trồng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -nt 566.33 188.778 10.01 0.0095 lll 148.17 74.083 3.93 0.0812 Error 113.17 18.861 Non-additivity 75.16 75.163 9.89 Residual 38.00 7.601 -Total 11 827.67 -Grand Mean= 31.833 Grand Sum= Coefficient of Variation= 382.000 Total Count= 12 13.64% * Trắc nghiệm phân hạng số cà chua 10 ngày sau trồng Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = Ranked Order 28.70 24.00 32.00 42.70 B B AB A Mean Mean Mean Mean = = = = 42.70 32.00 28.70 24.00 A AB B B Soá 15 ngày sau trồng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -nt 1203.00 401.000 21.20 0.0014 lll 58.50 29.250 1.55 0.2873 Error 113.50 18.917 Non-additivity 36.99 36.988 2.42 Residual 76.51 15.302 -Total 11 1375.00 -Grand Mean= 40.500 Grand Sum= Coefficient of Variation= 486.000 Total Count= 12 10.74% * Trắc nghiệm phân hạng số cà chua 15 ngày sau trồng SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 41 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = Ranked Order 38.00 25.70 45.70 52.70 BC C AB A Mean Mean Mean Mean = = = = 52.70 45.70 38.00 25.70 A AB BC C Số 20 ngày sau troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -nt 2392.33 797.444 22.55 0.0011 lll 21.17 10.583 0.30 0.7518 Error 212.17 35.361 Non-additivity 4.53 4.531 0.11 Residual 207.64 41.527 -Total 11 2625.67 -Grand Mean= 50.833 Grand Sum= Coefficient of Variation= 610.000 Total Count= 12 11.70% * Trắc nghiệm phân hạng số cà chua 20 ngày sau trồng Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 43.70 31.70 60.00 68.00 Ranked Order BC C AB A Mean Mean Mean Mean = = = = 68.00 60.00 43.70 31.70 A AB BC C II Bảng Ảnh hưởng VKĐK đến chiều cao cà chua NT T1 T2 LLL Chiều cao (cm) NST 10 NST 15 NST 20 NST 19,5 31,5 37,5 40,5 24 33 37 39 17 26,5 31,5 34,5 16,5 19,5 23,5 24 19,5 23,5 25 26 25 27,5 29 30,5 SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp T3 T4 42 24,5 40 48,5 57,5 27,5 42,5 48,5 61 24 38,5 46 57 27 41 47,5 56 28,5 47,5 55 61,5 31,5 49,5 57 65 Ghi chú: NT: nghiệm thức LLL: lần lặp lại NST: ngày sau trồng Chiều cao ngày sau trồng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -NT 163.73 54.576 5.52 0.0368 LLL 20.67 10.333 1.04 0.4080 Error 59.33 9.889 Non-additivity 0.63 0.632 0.05 Residual 58.70 11.740 -Total 11 243.73 -Grand Mean= 23.708 Grand Sum= Coefficient of Variation= 284.500 Total Count= 12 13.26% SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 43 * Trắc nghiệm phân hạng chiều cao cà chua ngày sau troàng Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = Ranked Order 20.20 20.30 25.30 29.00 B B AB A Mean Mean Mean Mean = = = = 29.00 25.30 20.30 20.20 A AB B B Chieàu cao 10 ngày sau trồng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -NT 801.23 267.076 22.27 0.0012 LLL 47.54 23.771 1.98 0.2183 Error 71.96 11.993 Non-additivity 0.68 0.676 0.05 Residual 71.28 14.257 -Total 11 920.73 -Grand Mean= 35.458 Grand Sum= Coefficient of Variation= 425.500 Total Count= 12 9.77% * Trắc nghiệm phân hạng chiều cao cà chua 10 ngày sau trồng Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = Ranked Order 30.30 25.20 40.30 46.00 BC C AB A Mean Mean Mean Mean = = = = 46.00 40.30 30.30 25.20 A AB BC C Chiều cao 15 ngày sau trồng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -NT 1346.75 448.917 34.04 0.0004 LLL 12.54 6.271 0.48 0.6431 Error 79.12 13.187 Non-additivity 8.24 8.244 0.58 Residual 70.88 14.176 -Total 11 1438.42 -Grand Mean= 40.417 Grand Sum= 485.000 Total Count= 12 SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn tốt nghiệp 44 Coefficient of Variation= 8.99% * Trắc nghiệm phân hạng chiều cao cà chua 15 ngày sau troàng Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = Ranked Order 35.30 25.80 47.30 53.20 B B A A Mean Mean Mean Mean = = = = 53.20 47.30 35.30 25.80 A A B B Chiều cao 20 ngày sau troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -NT 2422.90 807.632 62.09 0.0001 LLL 14.29 7.146 0.55 0.6038 Error 78.04 13.007 Non-additivity 4.81 4.808 0.33 Residual 73.23 14.647 -Total 11 2515.23 -Grand Mean= 46.042 Grand Sum= Coefficient of Variation= 552.500 Total Count= 12 7.83% * Trắc nghiệm phân hạng chiều cao cà chua 20 ngày sau trồng Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 38.00 26.80 58.50 60.80 Ranked Order B C A A Mean Mean Mean Mean = = = = 60.80 58.50 38.00 26.80 A A B C SVTH: Hồ Thanh Hoàng Download» Agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... Pseudomonas fluorescens Chúng thực đề tài: ? ?Sử dụng dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens phòng trừ vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh cà chua? ?? 1.2 Mục đích – yêu cầu Đánh giá khả phòng trừ. .. yếu DVKGB: dòng vi khuẩn gây bệnh DVKĐK: dòng vi khuẩn đối kháng Các dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum: RST004, RST005, RST006, RST01, RSBog3, RSBog4 Các dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens: ... dõi: Khả đối kháng dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 3.2.3 Phương pháp đánh giá khả phòng trừ dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens với dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum cà chua nhà lưới Thí