Tôm bệnh do YHV được đặc trưng bởi tế bào máu có nhân bị co rút hay phân tán và có thể phát hiện các thể vùi (Inclusion bodies) ở nguyên sinh chất của tế bào máu... Tế bào mang tôm nh[r]
(1)GVHD: NGUYỄN THỊ KIM CÚC NHÓM: 2/ 49SH
HOÀNG THỊ GIANG
NGUYỄN THỊ THÚY HÀ TRẦN THÚY HỒNG
MAI THỊ LY NA
(2)I Giới thiệu chung bệnh virus đầu vàng (YHV) II Phân loại
III Đặc điểm sinh học
IV Cơ chế chép xâm nhiễm virus V Dấu hiệu bệnh lý
VI Đặc điểm dịch tễ học
VII Phương pháp chẩn đoán bệnh VIII Phòng chữa trị
IX Mở rộng
(3) Bệnh virus đầu vàng ( Yellow Head Virus Disease –
YHVD) bệnh ảnh hưởng lớn đến suất tôm nuôi
Bệnh Yellow head virus (YHV) gây ra.
YHVD có phân bố rộng, liên quan tới quốc
gia có ni tơm sú (P monodon), như: Đài Loan (1987 – 1989)
(4) Nhóm: IV ((+)ssRNA)
Bộ : Nidovirales Họ: Roniviridae Chi : Okavirus
Loài: Yellowhead virus
(5) Theo số nghiên cứu gần người ta cho
YHV virus thuộc họ Coronaviridae (theo V Alday de Graindorge & T.W Flegel, 1999)
Những nghiên cứu Úc cho YHV có liên quan
(6)Cấu trúc virus:
Hình que, kích thước khoảng
44 ± nm x 173 ± 13nm
Nucleocapsid có dạng đối
xứng xoắn ốc bao vỏ ngồi (envelope).Nó cấu tạo từ loại protein (p20) liên kết với genome RNA sợi đơn dương virus
Bề mặt vỏ ngồi có hai
(7)(8)Virus RNA(+) polyprotein
Protein cleavage
Progeny virus RNA(-)
(9)Qúa trình chép RNA sợi (+) xảy nguyên sinh chất tế bào:
Sự tạo thành genome xảy trên khuôn RNA
dạng chép (RF) hay đối genome Dạng tạo thành cách tổng hợp RNA (-) bổ sung khuôn RNA (+) mẹ
Genome RNA (+) tổng hợp khuôn RNA (-)
của dạng chép RF
RNA polymerase phụ thuộc RNA tham gia tổng hợp
cả RF genome RNA (+) RNA (+) RNA genome virus Ngoài ra, RNA (+) cịn có chức làm khn để tổng hợp
(10)Cơ chế xâm nhiễm
Quá trình xâm nhiễm gồm bước xảy tế bào vật chủ.
(11) Sau virus YHV xâm nhập vào tôm khu trú
các quan đích tôm như: mang, gan tụy, máu, cơ quan tạo máu… Nó khơng có q trình phiên
mã RNA genome có trình tự nucleotid giống với trình tự mRNA nên làm ln chức
mRNA
Sau virus sử dụng chất dinh dưỡng có
(12) Bước tiến hành tự nhân dựa
trên sở vật chất nguyên liệu tế bào ( trình chép trên) Qúa trình làm cho số lượng virus tăng lên nhanh, đồng thời thay đổi hoạt động bình thường tế bào
Virus tiếp tục phát triển đến giai đoạn làm vỡ
(13)Các thể vùi YHV hệ bạch huyết mang tôm bị bệnh
đầu vàng
Tôm sú bị bệnh đầu vàng, hệ bạch huyết, thấy rõ thể virus dạng sợi tế bào chất
(14)(15) Tôm ăn nhiều khác thường
trong vài ngày, bỏ ăn đột ngột
Sau 1-2 ngày bơi lờ đờ
mặt nước ven bờ
Bơi không định hướng
Lác đác tôm chết vó
Chết với mức độ tăng dần
(16)• Phần đầu ngực, gan tụy chuyển màu vàng, gan có màu trắng nhạt, vàng nhạt nâu
• Thân có màu nhạt • Tơm chết nhanh
trong vịng 2-3 ngày (có thể gần 100%)
(17)Mang tơm sú bị bệnh đầu vàng do virus (ảnh TW Flegel)
(18)1.Ký chủ mẫn cảm
Nhiễm tự nhiên:
Tôm sú (Penaeus monodon)
Nhiễm điều kiện nhân tạo:
P.vannamei. P stylirostris. P setiferus. P duorarum
Lồi tơm he có khả đề kháng cao với YHV:
(19)2.Bệnh đầu vàng tuổi tôm
Báo cáo năm 2000
Tơm bị bệnh vàng đầu có độ tuổi từ 25 ngày
đến 70 ngày tuổi
Nếu tôm nhỏ từ 25-35 ngày bị nhiễm bệnh
(20)3 Các đường lan truyền
Virus lây nhiễm theo trục: Trục ngang: + Nguồn nước
+ Hiện tượng ăn +Sinh vật trung gian
Trục dọc: Tôm bố mẹ bị bệnh di truyền cho hệ
sau
Thực tế cho thấy, bệnh thường xuất
(21) 4 Điều kiện bùng phát dịch.
Tôm bị nhiễm virus YHV
Thường xảy tháng nuôi 1-2
Xảy ao ni có mật độ cao (thâm
canh)
(22)1.Phịng bệnh:
Tơm mẹ (-) với YHV (= kỹ thuật PCR) Chọn giống không nhiễm virusYHV Duy trì tảo thích hợp ổn định
Không nuôi mật độ cao (< 30 con/m2)
Quản lý thức ăn, hạn chế dư thừa
(23) Áp dụng theo phương pháp phòng bệnh tổng hợp
Tránh vận chuyển tôm từ nơi có bệnh đến nơi chưa phát
bệnh
Những tôm chết vớt khỏi ao, tốt chôn sống
trong vôi nung đốt
Nước từ ao tôm bệnh xử lý vôi nung
clorua vôi (theo phương pháp tẩy ao)
Xem xét tôm thường xuyên, phát có dấu hiệu
(24)2 Chữa trị
Cũng giống bệnh thân đỏ - đốm trắng (SEMBV -
WSSV), bệnh đầu vàng (YHV) chưa có phương
(25) Ví dụ :
Tơm chết hàng loạt bệnh đầu vàng tôm tỉnh Thừa Thiên Huế
Tồn tỉnh có 189 tơm bị chết Theo kết xét nghiệm Viện Nghiên cứu nuôi trồng thủy sản (Bộ Thủy sản), từ mẫu gửi xét nghiệm có mẫu
phát bệnh đầu vàng Ông Phan Văn Phú (đội nón lá), thơn Diên Đại, xã Phú Xuân, H.Phú
(26)Tại tỉnh Quảng Trị:
80 tổng số 1.100 mặt nước nuôi tôm
(27)Dựa vào dấu hiệu trạng thái bệnh lý Phương pháp mô bệnh học
Phương pháp huyết học
(28) Phương pháp mô bệnh học:
Lấy mơ bệnh từ quan đích (Mang, máu, gan tụy,
cơ quan tạo máu…)
Tiến hành làm tiêu quan sát kính hiển vi
(29)Phương pháp huyết học:
Cách 1: Kiểm tra mẫu máu (không nhuộm):
(30)Cách 2: Kiểm tra mẫu máu với thuốc nhuộm Giemsa Wight
Dùng xi lanh (1ml) chứa 0,5 ml nước biển có
formol 10% Xilanh hút 0,5 ml máu từ tim hay động mạch tôm bệnh cho đầy xilanh
Sau trộn lẫn máu với nước biển 10% formol (đã
có sẵn xilanh) Nhỏ giọt hỗn hợp lên slide sạch, phết mẫu làm khơ khơng khí.
Cố định slide có vết bơi Metanol 100%
(31) Nhuộm mẫu máu thuốc nhuộm Wight
khoảng 3-5 phút Ngâm nước cất (pH = 6,2 – 6,5) 5-6 phút
Nhuộm slide thuốc nhuộm Giemsa 20 –
30 phút Rửa nước cất chảy nhẹ để làm nhạt màu thuốc nhuộm Ngâm nước cất (pH = 6,2 – 6,5) 20 – 30 phút.
Kiểm tra kính hiển vi quang học độ phóng
(32)Kết sau làm thí nghiệm với phương pháp huyết học:
(33)Tế bào mang tơm nhân tế bào thối hóa kết đặc bắt màu đậm
(34)Mẫu tôm
Chuẩn bị mẫu
Tách chiết RNA
RT-PCR
Điện di
Đọc kết
(35)* Chuẩn bị mẫu:
Mẫu tôm: Các mẫu tôm nghi nhiễm YHV ARN YHV
Các mẫu bảo quản cồn tuyệt đối giữ -200 C
* Tách chiết RNA (TriZol):
Mẫu tôm nghiền dung dịch TriZol (guanidinium thiocyanate, phenol pH8, glycerol, sodium acetate)
200 ml dịch nghiền ly giải loại protein tiếp tục dung dịch TriZol
Sau ARN tủa isopropanol Sau ly tâm, cặn làm khơ hịa lại 50 ml H2O xử lý DEPC (Diethyl
(36)Đoạn mồi cho phản ứng RT-PCR: Các đoạn mồi gồm đoạn mồi xuôi YHVf đoạn mồi ngược YHVr YHVi với trình tự sau :
YHVf: 5'-GTGACC
ATYTYAACTGCAAGATCTCACGRCAACTCA-3',
YHVr: 5'-CTGCYACTGAATTTCC
GACGAGAGTGTTAGGAGG-3',
(37)94oC Biến tính
55oC-65oC Bắt cặp
72oC Kéo dài
Chu kỳ
Chu kỳ
Chu kỳ
Chu kỳ
(38) : Kết điện di gel agarose 2% sản
phẩm PCRI II từ RNA YHV.
1,2 : Sản phẩm PCRI (303 bp); 3 : Thang X 174 Hae-III; 4,5 : Sản phẩm PCRII (186 bp)
: Kết điện di gel agarose 2% sản phẩm PCRII từ RNA YHV trộn với dịch chiết tôm
1 : Thang 186 bp
(39) Đọc kết quả:
(40) Sử dụng chế phẩm ASV :
+ Chế phẩm từ nguyên liệu lòng đỏ trứng gà siêu miễn dịch
+ Giúp phòng chống xâm nhiễm virus thơng qua đường tiêu hóa
Sử dụng kỹ thuật di truyền để tạo loại tôm có
(41) Theo kết nghiên cứu Sataporn
Direkbusarakom, 1995, dịch chiết rút từ chó đẻ cưa (Phyllanthus spp.) có khả
chống lại nhiễm virus đầu vàng (YHV) tơm sú điều kiện thí nghiệm, đặc biệt dịch chiết rút Phyllanthus urinaria Phyllanthus
amarus có khả giúp tơm bị cảm nhiễm
(42) Giáo trình “Bệnh học thủy sản” – Đỗ Thị Hịa,
Bùi Quang Tề NXB Nông Nghiệp.
Giáo trình “Virus học”- PGS.TS.Phạm Văn Ty. Trang web điện tử:
http://longdinh.com
http://www.shrimpnews.com
(43) http://longdinh.com http://www.shrimpnews.com