nghiên cứu về cây bồ ngót nhật

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC BÁO CÁO PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU  XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU BỒ NGÓT NHẬT Asystasia gangetica (L.) T Anderson Giảng viên hướng dẫn: THÁI THỊ CẨM Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THUÝ VI MSSV: 166410 LỚP DH16DUO03 CẦN THƠ - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC BÁO CÁO PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU  XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU BỒ NGÓT NHẬT Asystasia gangetica (L.) T Anderson Giảng viên hướng dẫn: ThS Thái Thị Cầm Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thuý Vi Lớp: DH16DUO03 MSSV: 166410 Nhóm: Tiểu nhóm: Số điện thoại: 0772851234 Email: ngthvi98@gmail.com CẦN THƠ – 2020 LỜI CẢM ƠN ο Trước tiên, cho phép em bày tỏ lòng biết ơn đến tất giảng viên tạo điều kiện, hỗ trợ, giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu đề tài Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc đến Thái Thị Cẩm – người tận tình truyền đạt kiến thức, trực tiếp giúp đỡ, quan tâm, hướng dẫn em hoàn thành tốt báo cáo thời gian qua Em xin gửi lời cảm ơn đến bạn nhóm phịng thí nghiệm Dược liệu, trường Đại học Nam Cần Thơ nhiệt tình hỗ trợ, giúp đỡ, đóng góp ý kiến để em hồn thành tốt báo cáo Trong q trình thực tập làm báo cáo, kiến thức kinh nghiệm nhiều hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy, cô để em học hỏi nhiều kĩ năng, kinh nghiệm hoàn thành tốt báo cáo tốt nghiệp tới Em xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 20 tháng 11 năm 2020 Người thực Nguyễn Thuý Vi i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AcOH: Acid acetic CHCl3: Chloroform COX – 2: Cyclooxygenase – DĐVN: Dược điển Việt Nam DMC: Dichloromethane Et2O: Diethylether EtOAc: Ethyl acetate EtOH: Ethanol FeCl3: Sắt (III) clorua H2SO4: Axid sulfuric HCl: Acid clohydric HCl: Axid clohydric IGF – I: Insulin – like growth factors – yếu tố sinh trưởng tương tự insulin KOH: Kali hydroxid MeOH: Methanol MMP-1: Matrix metalloproteinase-1 n – BuOH: N - Butanol NaOH: Natri hydroxid NO: Nitric oxid SKC: Sắc ký cột SKLM: Sắc ký lớp mỏng TT: Thuốc thử UVB: Ultraviolet B VKDT: Viêm khớp dạng thấp VLC: Sắc ký cột chân không VS: Thuốc thử vanillin - sulfuric ii DANH MỤC BIỂU BẢNG BẢNG TĨM TẮT KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA THỰC VẬT 51 iii DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 vị trí Bồ ngót Nhật hệ thống phân loại thực vật Sơ đồ 2.1 chuẩn bị dịch chiết .16 Sơ đồ 2.2 dùng dãy dung môi chiết xuất flavonoid 22 Sơ đồ 2.3 dùng cồn kiềm chiết xuất flavonoid 23 iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Mơ tả chung Bồ ngót Nhật Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo Apigenin Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo Luteolin Hình 1.4 Chế phẩm từ Bồ ngót Nhật 11 Hình 2.1 Vị trí Bồ Ngót Nhật 12 Hình 3.1 Rễ Bồ Ngót Nhật 25 Hình 3.2 Thân Bồ ngót Nhật 25 Hình 3.3 Thân Bồ ngót Nhật 25 Hình 3.4 Lá Bồ ngót Nhật 26 Hình 3.5 Lá non Bồ ngót Nhật 26 Hình 3.6 Kích thước mặt Bồ ngót Nhật 26 Hình 3.7 Kích thước mặt Bồ ngót Nhật 26 Hình 3.8 Cụm hoa mọc thành xim Bồ ngót Nhật 27 Hình 3.9 Cụm hoa mọc thành xim Bồ ngót Nhật 27 Hình 3.10 Hoa đồ Bồ ngót Nhật 27 Hình 3.11 Vi phẫu rễ Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 10x 28 Hình 3.12 Vi phẫu rễ Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 40x 29 Hình 3.13 Hình vẽ vi phẫu rễ Bồ ngót Nhật 30 Hình 3.14 Vi phẫu thân Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 4x 30 Hình 3.15 Vi phẫu thân Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 10x 32 Hình 3.16 Vi phẫu thân Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 40x 32 Hình 3.17 Lơng che chở đa bào dãy thân Bồ ngót Nhật 33 Hình 3.18 Tinh thể calci oxalat hình kim mơ mềm tuỷ thân Bồ ngót Nhật 33 Hình 3.19 Hình vẽ vi phẫu thân Bồ ngót Nhật 33 Hình 3.20 Vi phẫu cuống Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 10x 34 Hình 3.21 Vi phẫu cuống Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 40x 35 Hình 3.22 Hình vẽ vi phẫu cuống Bồ ngót Nhật 35 Hình 3.23 Vi phẫu gân phiến Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 10x 36 Hình 3.24 Vi phẫu phiến Bồ ngót Nhật soi kính hiển vi 40x 37 Hình 3.25 Hình vẽ vi phẫu Bồ ngót Nhật 37 Hình 3.26 Hạt phấn soi kính hiển vi 10x 38 Hình 3.27 Vi phẫu nhuỵ soi kính hiển vi 10x 38 Hình 3.28 Lông che chở đa bào lông tiết đa bào nhuỵ soi kính hiển vi 40x 38 Hình 3.29 Biểu bì mặt mang lỗ khí kiểu trực bào Bồ ngót Nhật soi kín hiển vi 40x 39 Hình 3.30 Hình vẽ biểu bì mặt mang lỗ khí kiểu trực bào Bồ ngót Nhật 39 Hình 3.31 Bột Bồ ngót Nhật 40 Hình 3.32 Mảnh biểu bì soi kính hiển vi 40x 40 Hình 3.33 Lơng che chở đa bào dãy soi kính hiển vi 40x 40 Hình 3.34 Lơng tiết đa bào soi kính hiển vi 40x 40 Hình 3.35 Mảnh bần soi kính hiển vi 40x 40 Hình 3.36 Hạt phấn soi kính hiển vi 40x 40 Hình 3.37 Tinh thể calci carbonat soi kính hiển vi 40x 41 Hình 3.38 Tinh thể calci oxalat hình kim soi kính hiển vi 40x 41 Hình 3.39 Mảnh tế bào chứa lục lạp soi kính hiển vi 40x 41 Hình 3.40 Mảnh tế bào chứa lỗ khí soi kính hiển vi 40x 41 Hình 3.41 Hạt tinh bột soi kính hiển vi 100x 41 Hình 3.42 Hạt tinh bột soi kính hiển vi 40x 41 Hình 3.43 Sợi mơ cứng soi kính hiển vi 40x 42 Hình 3.44 Sợi mơ cứng soi kính hiển vi 40x 42 Hình 3.45 Tế bào mơ cứng soi kính hiển vi 40x 42 Hình 3.46 Tế bào mơ cứng soi kính hiển vi 40x 42 Hình 3.47 Mạch đồng tiền soi kính hiển vi 40x 42 Hình 3.48 Mạch điểm soi kính hiển vi 40x 42 Hình 3.49 Mạch vịng soi kính hiển vi 40x 43 Hình 3.50 Mạch vịng soi kính hiển vi 40x 43 Hình 3.51 Mạch vạch soi kính hiển vi 40x 43 Hình 3.52 Mạch mạng soi kính hiển vi 40x 43 Hình 3.53 Mạch xoắn soi kính hiển vi 40x 43 Hình 3.54 Mạch xoắn soi kính hiển vi 40x 43 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật Hình 3.51 Mạch vạch soi kính hiển vi 40x Hình 3.52 Mạch mạng soi kính hiển vi 40x Hình 3.53 Mạch xoắn soi kính hiển vi 40x Hình 3.54 Mạch xoắn soi kính hiển vi 40x Mảnh biểu bì Lơng che chở đa bào dãy Tinh thể calci carbonat Mảnh biểu bì mang lỗ khí trực bào Lông tiết đa bào Tinh thể calci oxalat hình kim Sợi mơ cứng Tế bào mơ cứng Hạt phấn Hình 3.55 Hình vẽ cấu tử soi bột Bồ ngót Nhật 42 Mảnh mạch đồng tiền Mạch vòng Mảnh mạch mạng Mạch xoắn Mảnh mạch điểm Mảnh mạch vạch Tinh bột Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật Hình 3.56 Hình vẽ cấu tử soi bột Bồ ngót Nhật 1.17 Thành phần hố học Bồ ngót Nhật Hình 3.57 dịch chiết ether 1.17.1 Hình 3.58 Dịch chiết cồn Hình 3.59 Dịch chiết nước Kết định tính thành phần hố học dịch chiết ether - Định tính tinh dầu: Lấy khoảng ml dịch ether cho vào chén sứ, bốc tới cắn Nếu cắn có mùi thơm nhẹ, thêm vào cắn cồn cao độ lại bốc cắn Cắn có mùi thơm nhẹ đặc trưng : Có tinh dầu Kết luận: Có tinh dầu dịch chiết ether Bồ Ngót Nhật (+) - Định tính chất béo: Lấy vài giọt dịch chiết ether nhỏ lên chỗ miếng giấy mỏng, hơ sấy nhẹ cho bay hết dung môi (và hết mùi thơm dịch chiết có tinh dầu) Nếu nơi nhỏ dịch chiết có vết mờ: có chất béo 43 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật Hình 3.60 Kết định tính chất béo dịch chiết ether Kết luận: Có chất béo dịch chiết ether Bồ Ngót Nhật (+) - Định tính carotenoid: Lấy khoảng ml dịch ether cho vào chén sứ, bốc nhẹ tới cắn (và gần khơng cịn mùi thơm dịch chiết có tinh dầu) Thêm vào cắn vài giọt dung dịch SbCl3 (khan) bão hịa chloroform (Thuốc thử Carr-Price) Dung dịch có màu xanh sau chuyển thành đỏ: có carotenoid Hình 3.61 Kết định tính carotenoid dịch chiết ether Kết luận : có carotenoid dịch chiết ether Bồ Ngót Nhật ( + ) 1.17.2 Kết định tính thành phần hố học dịch chiết cồn - Định tính acid hữu cơ: Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm Pha loãng với 1ml thêm vào dung dịch tinh thể natri carbonat Nếu có bọt khí nhỏ sủi lên từ tinh thể natri carbonat: có acid hữu Hình 3.62 Kết định tính acid hữu dịch chiết cồn Kết luận: có acid hữu dịch chiết cồn Bồ ngót Nhật (+) - Định tính chất khử: Lấy 5ml dịch chiết cho vào chén sứ, bốc dịch cồn đến cắn Hòa cắn với 3ml nước cất bếp cách thủy, để nguội lọc qua giấy 44 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật lọc Thêm vào dịch lọc 0,5ml dung dịch Fehling A 0,5ml dung dịch Fehling B Đun cách thủy phút Nếu có kết tủa đỏ gạch đáy ống nghiệm: có hợp chất khử (chủ yếu đường khử) Hình 3.63 Kết định tính chất khử dịch chiết cồn Kết luận: có chất khử dịch chiết cồn Bồ ngót Nhật ( + ) - Định tính flavonoid: Lấy khoảng ml dịch cồn cho vào chén sứ, bốc khoảng ml gạn dịch cồn vào ống nghiệm nhỏ Thêm vào dung dịch bột magnesi kim loại 0,5 ml HCl đđ Nếu dung dịch có màu từ hồng tới đỏ: có flavonoid Hình 3.64 Kết định tính flavonoid dịch chiết cồn Kết luận: có flavonoid dịch chiết cồn Bồ ngót Nhật ( + ) 1.17.3 Kết định tính thành phần hố học dịch chiết nước - Định tính saponin: Lấy khoảng 5ml dịch chiết nước cho vào chén sứ, đun cách thủy tới cắn khơ Hịa cắn với 5ml cồn 25%, lọc vào ống nghiệm Pha loãng với 5ml nước, lắc mạnh theo chiều dọc ống nghiệm 15 giây Nếu có cột bọt bền 15 phút: Có saponin Hình 3.65 Kết định tính saponin dịch chiết nước 45 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật - Kết luận: Có saponin dịch chiết nước Bồ ngót Nhật (+) Định tính flavonoid: Lấy khoảng ml dịch chiết nước cho vào chén sứ, bốc tới cắn Hòa tan cắn khoảng ml cồn 25%, lọc vào ống nghiệm nhỏ Thêm vào dung dịch bột magnesi kim loại 0.5ml HCl đậm đặc (phản ứng cyanidin) Nếu dung dịch có màu hồng đỏ tới đỏ: có flavonoid (flavanon, flavanonol, flavon, flavonol) Hình 3.66 Kết định tính flavonoid dịch chiết nước Kết luận: Có flavonoid dịch chiết nước Bồ ngót Nhật (+) - Định tính hợp chất khử: Lấy 5ml dịch chiết cô cách thuỷ tới khơ, hồ tan cắn cồn 25%, lọc Cho dịch lọc vào ống nghiệm, thêm 0,5ml dung dịch Fehling A 0,5ml dung dịch Fehling B Đun cách thuỷ phút Nếu có kết tủa đỏ gạch nặng lắng xuống đáy ống nghiệm: có chất khử (chủ yếu đường khử) Hình 3.67 Kết định tính hợp chất khử dịch chiết nước Kết luận: Có hợp chất khử dịch chiết nước Bồ ngót Nhật (+) 46 BẢNG TĨM TẮT KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA THỰC VẬT Nhóm hợp chất Chất béo Carotenoid Tinh dầu Triterpenoid tự Alkaloid Coumarin Anthraglycosid Flavonoid Glycosid tim Anthocyanosid Proanthocyanidin Tannin Triterpenoid thủy phân Saponin Acid hữu Chất khử Hợp chất polyuronic Thuốc thử Cách thực Kết định tính dịch chiết Dịch Dịch chiết cồn Dịch chiết nước Thủy Không Thủy chiết Khơng Phản ứng dương tính Nhỏ dd lên giấy Carr-Price H2SO4 Phương pháp cất kéo Vết mờ -Xanh→ đỏ Xanh dương hay lục→ xanh dương Tinh dầu màu vàng nhạt, có mùi đặc nước Liebermann-Burchard T/thử chung alkaloid Phát quang kiềm KOH 10% Mg/HCl đđ Thuốc thử vòng lacton T/thử đường 2-desoxy HCl KOH HCl/to Dd FeCl3 Dd gelatin muối Liebermann-Burchard trưng Đỏ nâu-tím, lớp có màu xanh lục Kết tủa Phát quang mạnh Dd kiềm có màu hồng tới đỏ Dd có màu hồng tới đỏ Tím Đỏ mận Đỏ Xanh Đỏ Xanh rêu hay xanh đen Tủa bơng trắng Đỏ nâu-tím, lớp có màu xanh lục Tt Liebermann Lắc mạnh dd nước Na2CO3 T/thử Fehling Pha loãng với cồn 90% Có vịng tím nâu Sủi bọt Tủa đỏ gạch Tủa trắng – vàng nâu 47 ete + thủy phân phân thủy phân tính chung phân Có + + - Kết định Có Có Khơng có Khơng có Khơng có Khơng có Có Khơng có Khơng có - - + + - - - - Khơng có + + + + - Nghi ngờ Khơng có Nghi ngờ Có Khơng có Ghi chú: (-) Khơng có; (+) Có phản ứng khơng thực khơng có mặt nhóm hợp chất dịch chiết 48 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật 1.17.4 Sắc ký lớp mỏng - Định tính flavonoid sắc ký lớp mỏng Bồ ngót Nhật Dung mơi khai triển: Chloroform: methanol (9:1) Bản mỏng: silica gel tráng sẵn F254 (Merck), kích thước cm x 10 cm; dày - 0,25mm, hoạt hóa tủ sấy Dung dịch thử: Lấy 2g dược liệu cắt nhỏ vào bình nón, thêm 10ml cồn cao độ, đun cách thuỷ phút, lọc lấy dịch lọc đem cách thủy tới cắn khơ, hịa - tan cắn ml cồn dùng làm dịch thử Cách tiến hành: Chấm dung dịch thử lên mỏng (chấm vạch) Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khơ tự nhiên nhiệt độ phịng Quan sát màu vết, đánh dấu lại viết chì Đem mỏng soi UV 254 365, đánh dấu bút chì Nhúng mỏng với thuốc thử VS, để khô, hơ ấm, đánh dấu lại viết - chì Kết quả: thu vết chất tách hệ dung môi với Rf là: Rf1=0.0353, Rf2=0.0588, Rf3=0.0941, Rf4=0.1647, Rf5=0.2176, Rf6=0.3764, Rf7=0.7294, Rf8=0.8000 Rf8 Rf7 Rf6 Rf5 Rf4 Rf3 Rf2 Rf1 Hình 3.68 Quan sát đèn Hình 3.69 Quan sát đèn UV 365 nm UV 254 nm 49 Hình 3.70 Quan sát sau nhúng thuốc thử VS Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 2.1 Kết luận 2.1.1 Đặc điểm thực vật vi học Về đặc điểm thực vật học, báo cáo mơ tả đặc điểm hình thái: rễ, thân, lá, hoa Bồ ngót Nhật so với số tài liệu tham khảo đặc điểm phù hợp Về đặc điểm vi phẫu rễ, thân, lá, hoa bột chúng mô tả đầy đủ chi tiết theo nghiên cứu, điều góp phần nhận biết Bồ ngót Nhật so với Diễn số lồi khác 2.1.2 Thành phần hố học Dựa vào kết phân tích có thành phần: chất béo, tinh dầu, carotenoid, flavonoid, hợp chất khử, khác phù hợp với tài liệu tham khảo Bên cạnh cịn nghi ngờ có saponin acid hữu 2.2 Kiến nghị Sau hoàn thành nghiên cứu, tơi xin có kiến nghị sau: - Cần nhiều nghiên cứu đặc điểm vi học để phân biệt lồi - chi với Nghiên cứu sâu thành phần hố học Bồ ngót Nhật Asystasia gangetica (L.) T Anderson để phân lập chất tinh khiết nghiên - cứu thêm nhiều tác dụng sinh học Khảo sát thêm kiêng kỵ sử dụng dược liệu Sau tiêu chuẩn xây dựng cho Bồ ngót Nhật Asystasia gangetica (L.) T Anderson dựa thực nghiệm thực phịng thực tập Dược Liệu - Bộ mơn Dược Liệu - Khoa Dược - Trường Đại học Nam Cần Thơ vào số tài liệu khoa học 50 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật CHƯƠNG V XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU BỒ NGĨT NHẬT Bồ ngót Nhật (Tồn cây) Herba Asystasia gangetica Tồn phơi sấy khơ Bồ ngót Nhật Asystasia gangetica (L.) T Anderson Mơ tả Dược liệu phơi hay sấy khô đoạn thân màu xanh nhạt, khơ, dai, có nhiều rãnh dọc, dài cm đến cm Đoạn thân mang hay cuống Lá màu xanh lục, mỏng, khô quăn, dài 1,5 cm đến 3,0 cm Rễ chùm màu nâu nhạt, có nhiều rễ con, số rễ phát triển to Dược liệu khơng vị, có mùi thơm đặc trưng Vi phẫu - Rễ: Mặt cắt ngang có thiết diện trịn, khơng Lớp bần tương đối mỏng, gồm nhiều hàng tế bào dẹt, có chỗ bị rách bong Tầng tẩm suberin có hàng tế bào hình thoi xếp đồng tâm Mơ mềm khuyết (chiếm khoảng nửa bán kính rễ), gồm tế bào thành mỏng hình trịn, hình trứng hay nhăn nheo, kích thước khơng đều, xếp lộn xộn, có khuyết (khe) to nằm rải rác Nội bì rõ, gồm tế bào kéo dài theo hướng tiếp tuyến, hình gần chữ nhật Trụ bì gồm lớp tế bào có thành mỏng Libe gồm tế bào nhỏ, khơng rõ hình dạng Libe có hình đa giác, bị tia tủy rộng cắt ngang thành đám Tượng tầng không rõ Tia tuỷ rộng, tia có đến 10 hàng tế bào hình chữ nhật hướng xuyên tâm Mạch gỗ to, tròn, thành dày, xếp rải rác Gỗ nằm rải rác tuỷ Trong mô mềm tuỷ gồm tế bào hình đa - giác, thành dày, số hố mơ cứng Thân: Mặt cắt ngang có thiết diện vng, bốn góc trịn Lớp biểu bì gồm lớp tế bào hình trịn, thành dày, xếp đặn, mang lông che chở đa bào dãy Dưới biểu bì mơ dày trịn với lớp tế bào hình trịn hay đa giác xếp chồng lên nhau, bao quanh mô mềm đạo không liên tục Mơ mềm đạo gồm tế bào thành mỏng hình trịn, hình trứng, kích thước khơng đều, đơi mang tinh thể calci carbonat Nội bì rõ khơng liên tục, có góc, 51 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật hình gần chữ nhật Trụ bì gồm nhiều lớp tế bào có thành mỏng, số vị trí hố mơ cứng Libe gồm tế bào nhỏ, khơng rõ hình dạng, khơng liên tục Libe gồm tế bào nhỏ xếp chồng lên nhau, hình gần chữ nhật, khơng liên tục Tượng tầng dãy tế bào nhỏ, ngăn cách libe gỗ 2, không liên tục Tia tuỷ xen kẽ với gỗ 2, tia có đến 12 hàng tế bào hình chữ nhật hướng xuyên tâm, khơng liên tục Gỗ to, trịn, thành dày, xếp rải rác, có số vị trí, hướng xuyên tâm Gỗ nằm gỗ 2, rải rác tuỷ không liên tục Mô mềm tuỷ chiếm phần lớn diện tích thân, bên có nhiều tinh thể - calci oxalat hình kim Cuống lá: Vi phẫu cuống có hình dạng giống mặt mèo, lồi rõ mặt dưới, mặt phẳng, lõm Biểu bì lớp tế bào nhỏ xếp đặn (một vài chỗ to bình thường), mang lông che chở đa bào dãy Dưới biểu bì đám mơ dày góc, có số vị trí, khơng liên tục Mơ mềm khuyết tế bào xếp lộn xộn, kích thước khơng nhau, mang nhiều tinh thể calci carbonat (tạp), bao quanh mô mềm đạo không liên tục Mô mềm đạo chiếm phần lớn diện tích, tế bào thành mỏng, kích thước khơng Bó libe - gỗ bó chồng, ngồi vị trí trung tâm cịn bó libe – gỗ nhỏ tiến dần phía - mặt lõm gân Gân lá: lồi rõ mặt dưới, mặt lõm Biểu bì lớp tế bào có kích thước khơng đều, xếp đặn, mang lơng tiết đa bào lỗ khí Dưới biểu bì đám mơ dày góc, có số vị trí, khơng liên tục Mơ mềm khuyết tế bào xếp lộn xộn, kích thước khơng nhau, mang nhiều tinh thể calci carbonat (tạp), có mặt Mơ mềm đạo chiếm phần lớn diện tích, tế bào thành mỏng, kích thước khơng Bó libe - gỗ bó chồng Gồm ba bó libe – gỗ, bó lớn hai bó nhỏ hai bên - Phiến lá: Biểu bì gồm tế bào chữ nhật, thành dày, xếp sít Mơ giậu gồm lớp tế bào dài, xếp khít nhau, thẳng góc với biểu bì giống cọc hàng rào Mô mềm khuyết gồm tế bào xếp lộn xộn, kích thước khơng nhau, mang nhiều tinh thể calci carbonat Biểu bì gồm tế bào chữ nhật, hẹp biểu bì 52 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật - Hạt phấn nhuỵ: Hạt phấn có dạng hạt đậu (hình trụ, hai đầu trịn) Nhuỵ bầu ơ, đính nỗn trung trụ Xung quanh có nhiều lơng che chở đa bào dãy lơng tiết đa bào Bột Bột có màu xanh lục nhạt (hơi nâu), có mùi thơm Gồm thành phần: Lông che chở đa bào dãy; lông tiết đa bào; mảnh bần; hạt phấn; tinh thể calci oxalat hình kim; tinh thể calci carbonat; mảnh tế bào chứa lục lạp; hạt tinh bột trịn, rốn hình rõ; sợi mô cứng; tế bào mô cứng; mảnh biểu bì mang lỗ khí kiểu trực bào; mạch điểm; mạch vòng; mạch đồng tiền; mạch vạch; mạch xoắn; mạch mạng mảnh biểu bì Định tính A Cân khoảng 10g dược liệu Bồ ngót Nhật khơ tán nhỏ cho vào bình nón dung tích 250ml Thêm 25ml cồn, đun cách thuỷ phút, lọc gòn Thu dung dịch A Cho ml dung dịch thu vào ống nghiệm, thêm bột magnesi (TT), nhỏ giọt đến giọt acid hydrocloric (TT), để yên vài phút, dung dịch chuyển sang màu đỏ B Phương pháp sắc ký lớp mỏng Chuẩn bị dịch chấm sắc ký: Dùng dung dịch A bóc cịn khoảng 2ml, dung dịch chấm sắc ký Dung dịch chất đối chiếu: Hoà tan apigenin chuẩn methanol (TT) để thu dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml Dung dịch dược liệu đối chiếu: Nếu khơng có apigenin chuẩn, chiết mô tả phần Dung dịch thử Bản mỏng sắc ký: Bản mỏng tráng sẵn silicagel GF254 (Merck), hoạt hóa 1100C giờ, bảo quản bình hút ẩm để chấm sắc ký Dùng mao quản chấm riêng biệt dịch chấm sắc ký dung dịch Neriolin chuẩn lên mỏng silicagel kích thước x 10cm Hệ dung môi khai triển: Chloroform: methanol (9:1) Bình sắc ký bão hịa dung mơi khai triển Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng để khơ nhiệt độ phịng Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm 365 nm Tiếp tục thử với thuốc thử VS Kết quả: sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu sắc giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch dược liệu đối chiếu, có 53 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật vết màu sắc giá trị Rf với vết apigenin sắc ký đồ dung dịch chất đối chiếu Độ ẩm: Không 11% dược liệu khô Tro tồn phần: Khơng q 24% Định lượng Khơng 17,0 % tính theo dược liệu khơ kiệt Có thể định lượng trực tiếp dịch chiết toàn phần loại tạp Có thể định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Chế biến Có thể thu hoạch quanh năm, Nhổ cây, rửa sạch, cắt thành đoạn dài cm đến cm, phơi hay sấy khơ Bảo quản Để nơi khơ ráo, thống mát, phịng ẩm mốc Tính vị, quy kinh Vị cay, tính bình Quy kinh: Tâm Can Cơng năng, chủ trị Công giải độc, tán ứ, tiêu thũng, tiếp cốt (nối liền xương), huyết (cầm máu) Chủ trị đòn ngã sưng đau, gãy xương, ngoại thương xuất huyết Cách Dùng, liều dùng Thường dùng 15-30g sắc uống Dùng giã đắp, với lượng thích hợp Nấu canh với nấu canh với thịt lợn, với tơm… lượng thích hợp Kiêng kỵ Chưa tìm thấy 54 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu sách 1.Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ (2015), “Bài giảng Dược liệu” 2.Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ (2017), “Bài giảng Thực vật dược” 3.Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ (2017), “Giáo trình Phương pháp nghiên cứu Dược liệu” 4.Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ (2017), “Thực hành Dược liệu 1” 5.Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Nam Cần Thơ (2020), “Bài giảng Phương pháp nghiên cứu dược liệu” 6.Bộ môn Dược liệu, Trường Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh (2014), “Phương Pháp Nghiên Cứu Dược Liệu” 7.Bộ Y tế (2018), “Dược điển Việt Nam V, tập 1” Nhà xuất Y Học 8.Bộ Y tế (2018), “Dược điển Việt Nam V, tập 2” Nhà xuất Y Học 9.Đỗ Tất Lợi, 2014 “Những thuốc vị thuốc Việt Nam” Nhà Xuất Bản Y Học Hà Nội 10 La Tài Trung, Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ đại học (2020), “Khảo sát thành thành phần hoá học cao phân đoạn ethylacetat thân hồng quân” 11 Số 9/2018, “Tạp chí Dược học” Bộ Y tế xuất 12 Số 1/2019, “Tạp chí Dược học” Bộ Y tế xuất 13 Số 4/2019, “Tạp chí Dược học” Bộ Y tế xuất 14 Số 6/2019, “Tạp chí Dược học” Bộ Y tế xuất 15 Số 11/2019, “Tạp chí Dược học” Bộ Y tế xuất 16 Số 12/2019, “Tạp chí Dược học” Bộ Y tế xuất 17 Trương Thị Đẹp (2007), “Thực vật dược”, NXB Giáo dục, Hà Nội 18 Võ Văn Chi (2015) Từ Điển Cây Thuốc Việt Nam Nhà Xuất Bản Y Học Hà Nội Tài liệu tham khảo web 1.https://dinhduong.online/dinh-duong-rau-ngot-nhat-va-tac-dung-cua-no.html 2.https://www.ydhvn.com/lists/cay-duoc-lieu-cay-la-dien-cay-gan-heo-diclipterachinensis-l-ness 3.https://www.alliedacademies.org/articles/flavonoids-from-dicliptera-chinensis-lnees-grown-in-vietnam-and-their-antiinflammatory-activities-10064.html 4.https://patents.google.com/patent/CN106265717A/en 5.https://www.dieutri.vn/caythuocdongy/la-dien-thuoc-thanh-nhiet-tieu-viem 6.https://123doc.net/document/6814058-nghien-cuu-dac-diem-thuc-vat-va-thanhphan-hoa-hoc-cua-la-cay-la-dien-dicliptera-chinensis-l-nees.htm 7.https://www.academia.edu/38824928/%C4%90%E1%BA%A0I_H%E1%BB %8CC_QU%E1%BB%90C_GIA_H%C3%80_N%E1%BB%98I 8.https://issuu.com/daykemquynhonofficial/docs/dlht1sdcdtdsdhtdhtd15_002 55 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu - Bồ ngót nhật 9.http://www.thuocvuonnha.com/c/co-the-an-rau-ngot-nhat-thuong-xuyen/thuocvuon-nha 10 http://www.plantsoftheworldonline.org/taxon/urn:lsid:ipni.org:names:47485-1 11 http://www.johronline.com/issue/20130908-011452.833.pdf 12 http://duocthaothucdung.blogspot.com/2015/01/bien-hoa-pistache-marron.html 13 https://www.baodanang.vn/ytesuckhoe/201704/rau-ngot-nhat-bien-hoa-songhang-2548754/ 14 https://www.yumpu.com/en/document/read/59409804/preview-nghien-cuu-khaosat-ham-luong-apigenin-trong-cuc-hoa-vang-bang-phuong-phap-sac-ky-longhieu-nang-cao 15 http://vn.gmp-factory.com/herbal-medicine/anti-tumor/luteolin.html 16 https://uses.plantnet-project.org/en/Asystasia_gangetica_(PROTA) 17 https://timthuocnhanh.com/duoc-lieu-hoc/tac-dung-sinh-hoc-cua-flavonoid.html 18 https://sites.google.com/site/tacdungcuacay/tac-dung-cua-cay-rau-ngot-nhat-lagi 19 http://dongythoxuanduong.com.vn/tin-tuc/tin-y-te/skcd-co-nen-su-dung-raungot-nhat-thuong-xuyen-hay-khong-.html 20 https://voer.edu.vn/m/hinh-thai-ben-ngoai-cua-la/446dc003 21 https://duocdienvietnam.com/ 56