Đang tải... (xem toàn văn)
• Tạo phôi vô tính cũng cần thực hiện quá trình phản phân hóa và tái phân hóa tế bào để bắt các tế bào soma hình thành phôi trực tiếp hoặc gián tiếp thông qua giai đoạn phát triển mô s[r]
(1)Các bước nhân giống vơ tính in vitro
Chọn lọc
chuẩn bị Nuôi cấy
khởi động Nhân nhanh
Tạo hoàn chỉnh
(2)Bước 0: Chọn lọc chuẩn bị mẹ
• Chọn: bệnh giai đoạn sinh trưởng mạnh • Chuẩn bị: Trồng mẹ điều kiện thích hợp,
kết hợp với chăm sóc phịng trừ sâu bệnh • Mục đích:
1 Giảm tỉ lệ mẫu nhiễm
(3)(4)Bước 2: Nhân nhanh
• Là giai đoạn kích thích mơ
ni cấy phát sinh hình thái tăng nhanh số lượng
• Thơng qua đường: Hoạt hóa chồi nách, tạo chồi bất định nhân phơi vơ tính
• mơi trường có nhiều cytokinin kích thích tạo chồi
• Chế độ ni cấy thường 25- 270C, 16 chiếu sáng/
(5)Bước 3: Tạo in vitro hoàn chỉnh
• Là giai đoạn tạo rễ cho chồi • Chuyển sang môi trường tạo
rễ giàu auxin
• Một số chồi tạo rễ chuyển sang mơi trường không chứa chất điều tiết sinh trưởng
(6)Bước 4: Thích ứng invitro ngồi điều kiện tự nhiên.
• Để đưa từ ống nghiệm vườn ươm với tỷ lệ sống cao, sinh trưởng tốt cần đảm bảo số yêu cầu sau:
– Cây ống nghiệm đạt tiêu chuẩn hình thái định: số lá, số rễ, chiều cao cây,
– Có giá thể tiếp nhận in vitro thích hợp: giá thể
sach, tơi xốp, thoát nước – Phải chủ động điều chỉnh
được ẩm độ, chiếu
(7)(8)Làm ẩm tưới cây
• Làm ẩm việc phải làm hàng ngày suốt năm
• Vào mùa hạ đến trưa độ ẩm bốc phải xịt cho ẩm trở lại Suốt lúc mưa nhiều vào mùa đơng khơng phải làm ẩm hồn tồn
• Tốt nên có hệ thống xịt nước tự động mái phía bên giàn Vừa giữ độ ảm mà thực phần tưới cho người chăm sóc
(9)(10)1 Hoạt hóa chồi nách
• Theo phương thức phát triển chồi diễn theo hai cách:
1. Cây phát triển trực tiếp từ chồi đỉnh hay chồi nách: xảy nuôi cấy hai mầm thuốc lá, khoai tây, hoa cúc 2.Tạo cụm chồi từ chồi đỉnh chồi nách:
(11)2.Tạo chồi bất định
• Thường sử dụng phận thân , mảnh lá, cuống hoa, dẻ hành…
• Cần thực q trình phản phân hoá tái phân hoá tế bào
• Mục đích: để tế bào soma hình thành chồi trực tiếp gián tiếp thông qua giai đoạn mô sẹo
(12)3 Tạo phôi vô tính
Tạo phơi vơ tính A Phơi ni cấy; B, C Mơ sẹo mơ sẹo phơi hố tạo thành từ phôi non; D Cây tái sinh; E, F, G Mô sẹo tạo thành từ phôi nuôi cấy có kích thước
(13)Tạo phơi vơ tính
• Là phơi hình thành từ tế bào sinh dưỡng
• Tạo phơi vơ tính cần thực q trình phản phân hóa tái phân hóa tế bào để bắt tế bào soma hình thành phơi trực tiếp gián tiếp thơng qua giai đoạn phát triển mơ sẹo
• Sự hình thành phơi có hai bước:
– Sự phân hóa tế bào có khả phát sinh phơi: cần mơi trường giàu auxin Các tế bào có khả phát sinh phôi tế bào nhỏ, nhân lớn, nhiều hạch nhân, khơng có khơng bào, tế bào chất đậm đặc, giàu protein mARN