LUẬN án TIẾN sĩ dược học FULL (CND và BC) nghiên cứu quy trình tạo sinh khối tế bào thông đỏ (taxus wallichiana zucc ) để chiết xuất hoạt chất điều trị ung thư

“Nghiên cứu quy trình tạo sinh khối tế bào thơng đỏ (Taxus wallichiana Zucc.) để chiết xuất hoạt chất điều trị ung thư” Chuyên ngành: Công nghệ dược phẩm Mã số: 62 73 01 01 Họ tên nghiên cứu sinh: Họ tên Người hướng dẫn: GS.TSKH Phan Đình Châu TS Triệu Duy Điệt Cơ sở đào tạo: Học viện Quân y MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt luận án Danh mục bảng Trang Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ …………………………………………………………… ….1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY THÔNG ĐỎ 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.3 Thành phần hóa học .5 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.1.5 Các thuốc điều trị ung thư nguồn gốc từ thông đỏ 1.2 CÔNG NGHỆ SINH KHỐI TẾ BÀO THỰC VẬT 11 1.2.1 Khái niệm, ưu điểm khó khăn triển khai 11 1.2.2 Quy trình tạo sinh khối tế bào thực vật 13 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng tới phát triển tế bào hàm lượng hoạt chất nuôi cấy tế bào thực vật 15 1.3.1 Nhu cầu nguồn nguyên liệu paclitaxel điều trị ung thư 21 1.3.2 Sản xuất paclitaxel công nghệ sinh khối tế bào thực vật .22 1.3.3 Phương pháp định lượng paclitaxel dẫn chất sử dụng đánh giá chất lượng sinh khối tế bào thông đỏ .28 1.3.4 Các phương pháp chiết xuất phân lập paclitaxel từ sinh khối tế bào thông đỏ 29 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.31 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 31 2.1.1 Nguyên liệu hoá chất 31 2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 31 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.2.1 Xây dựng qui trình tạo sinh khối thơng đỏ 32 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hoá học chiết xuất phân lập số chất chính, xây dựng TCCS nguyên liệu sinh khối tế bào thơng đỏ 36 2.2.3 Phương pháp phân tích xử lý kết nghiên cứu 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 42 3.1 XÂY DỰNG QUY TRÌNH TẠO SINH KHỐI TẾ BÀO THƠNG ĐỎ .42 3.1.1 Tạo callus thơng đỏ 42 3.1.2 Duy trì ni cấy callus thơng đỏ mơi trường thạch .48 3.1.3 Kết nuôi cấy môi trường lỏng 52 3.1.4 Kết ni cấy hệ thống bioreactor lít 64 3.1.5 Kết nghiên cứu thu hoạch sinh khối tế bào thông đỏ .65 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP, XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CỦA SINH KHỐI TẾ BÀO THÔNG ĐỎ 70 3.2.1 Xác định thành phần hóa học sinh khối tế bào thông đỏ .70 3.2.2 Chiết xuất phân lập nhận dạng số chất sinh khối tế bào thông đỏ .81 3.2.3 Chiết xuất, tinh chế paclitaxel sinh khối tế bào thông đỏ 89 3.2.4 Kết nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở nguyên liệu sinh khối tế bào thông đỏ hoạt chất 97 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 104 4.1 QUY TRÌNH TẠO SINH KHỐI TẾ BÀO THƠNG ĐỎ 104 4.1.1 Về ni cấy tạo callus thông đỏ 104 4.1.2 Về trì ni cấy callus thơng đỏ môi trường thạch 108 4.1.3 Về nuôi cấy tế bào thông đỏ môi trường lỏng 111 4.1.4 Về nuôi cấy tế bào thông đỏ hệ thống bioreactor lít 124 4.1.5 Về quy trình thu hoạch sinh khối tế bào thông đỏ 126 4.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP, XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CỦA SINH KHỐI TẾ BÀO THÔNG ĐỎ 126 4.2.1 Về nghiên cứu thành phần hóa học .126 4.2.2 Về chiết xuất, phân lập nhận dạng chất có sinh khối tế bào thông đỏ 129 4.2.3 Về chiết xuất, tinh chế paclitaxel sinh khối tế bào thông đỏ130 4.2.4 Về kết xây dựng TCCS sinh khối tế bào thông đỏ 133 KẾT LUẬN 135 KIẾN NGHỊ 137 CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 138 TÀI LIỆU THAM KHẢO 139 PHẦN PHỤ LỤC 155 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Chú thích 10-DAB 10-deacetylbaccatin III 2,4,5-T 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid 2,4-D 2,4-dichlorophenoxyacetic acid ACN Acetonitril B5 Môi trường Gamborg BAP 6-Benzyl amino purin Bu (i) Isobutyl Bz Benzoyl CA Caffeic acid cs Cộng DCM Dichloromethan DĐVN Dược điển Việt Nam FA Ferulic acid FE Fungal elicitor (elicitor từ nấm) GA Gibberelic acid HPOL Hydroperoxid lyase HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HQC Mẫu kiểm tra nồng độ cao IAA Indole – acetic acid IBA Indole – butyric acid JA Jasmonic acid KL Khối lượng KLK khối lượng tế bào khô Kn Kinetin LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp MeOH Methanol MJ Methyl jasmonic MS Môi trường Murashige - Skoog NAA 1-Naphtalen acetic acid PhL Phenylalanin PL Phụ lục PVP Polivinyl pyrrolidon SA Salicylic acid SD Độ lệch chuẩn SH Môi trường Hildebrandt SKLM Sắc ký lớp mỏng SKTB Sinh khối tế bào Tc Taxuyunnanine C TCCS Tiêu chuẩn sở USP United States Pharmacopeia (Dược điển Mỹ) Xyl Xylosyl DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Kết khảo sát lựa chọn chất sát khuẩn 42 3.2 Kết khảo sát thời gian tiệt khuẩn 43 3.3 Thành phần loại môi trường nuôi cấy 44 3.4 Kết khảo sát lựa chọn môi trường nuôi cấy 45 3.5 Ảnh hưởng môi trường tới phát triển callus 45 3.6 Ảnh hưởng loại chất kích thích sinh trưởng tới phát triển 47 3.1 callus 3.7 Ảnh hưởng nồng độ NAA tới phát triển callus 47 3.8 Ảnh hưởng nồng độ kinetin tới phát triển callus 48 3.9 Đặc tính tế bào sau lần cấy chuyển môi trường SH 50 3.10 Ảnh hưởng nồng độ đường đến phát triển callus 51 3.11 Ảnh hưởng nhiệt độ đến tốc độ phát triển tế bào 51 3.12 Ảnh hưởng pH môi trường tới phát triển callus 52 3.13 Ảnh hưởng số lần cấy chuyển tới tốc độ phát triển tế bào 53 3.14 Ảnh hưởng tỷ lệ mẫu cấy ban đầu tới tốc độ phát triển tế 55 bào 3.15 Ảnh hưởng pH môi trường tới tốc độ phát triển tế bào 55 thông đỏ 3.16 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy tới tốc độ phát triển tế bào 56 thông đỏ 3.17 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến tốc độ phát 57 triển tế bào 3.18 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến đến tốc độ phát triển tế bào 57 3.19 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến tốc độ phát triển tế bào 58 3.20 Ảnh hưởng nồng độ saccharose tới tốc độ phát triển tế bào 59 Bảng 3.21 Tên bảng Ảnh hưởng elicitor tới tốc độ phát triển tế bào hàm Trang 60 lượng paclitaxel tế bào 3.22 Ảnh hưởng nồng độ MJ tới tốc độ phát triển tế bào hàm 60 lượng paclitaxel tế bào 3.23 Ảnh hưởng thời gian tiếp xúc tế bào MJ tới tốc độ 61 phát triển tế bào hàm lượng paclitaxel tế bào 3.24 3.25 Ảnh hưởng thời điểm tiếp xúc tế bào MJ tới tốc độ phát triển tế bào hàm lượng paclitaxel khối tế bào 62 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung saccharose 63 3.26 Ảnh hưởng nồng độ saccharose bổ sung vào môi trường 64 3.27 Kết nuôi cấy hệ thống bình ni cấy lít 65 3.28 Kết phân tích dư lượng NAA, BAP hàm lượng paclitaxel 67 mẻ nuôi cấy sinh khối thông đỏ 3.29 Khảo sát điều kiện pha động 71 3.30 Chương trình chạy sắc ký 73 3.31 Độ lặp lại hệ thống 74 3.32 Sự phụ diện tích píc vào nồng độ paclitaxel baccatin III 75 3.33 Kết xác định giới hạn định lượng paclitaxel 76 3.34 Kết xác định giới hạn định lượng baccatin III 76 3.35 Kết xác định độ xác 77 3.36 Tỷ lệ (%) tìm thấy paclitaxel baccatin III 78 3.37 Kết khảo sát độ ổn định mẫu thử 78 3.38 Kết định tính sơ thành phần hóa học SKTB thông đỏ 79 3.39 Kết định lượng paclitaxel sinh khối thông đỏ mẫu thông đỏ tự nhiên HPLC 13 Số liệu phổ C-NMR các chất – 81 3.40 85 Bảng 3.41 3.42 3.43 3.44 Tên bảng Trang Số liệu phổ H-NMR chất - 86 Kết chiết xuất paclitaxel dung môi khác 89 Kết chiết xuất paclitaxel với DCM 90 Kết khảo sát nồng độ than hoạt tính sử dụng tinh chế 91 paclitaxel 3.45 Kết khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ n-hexan sử dụng để tinh 91 chế paclitaxel 3.46 Kết khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ dung môi tới hàm lượng 92 hiệu suất tinh chế paclitaxel 3.47 Kết tinh chế paclitaxel sắc ký cột lần 93 3.48 Kết tinh chế paclitaxel sắc ký cột lần 94 3.49 Kết tổng hợp hiệu suất hàm lượng paclitaxel qua 95 giai đoạn chiết xuất, tinh chế 3.50 3.51 3.52 Kết xác định độ ẩm sinh khối thông đỏ 97 Kết xác định tro tồn phần sinh khối thơng đỏ 98 Kết xác định tro không tan acid sinh khối thông 98 đỏ 3.53 Kết định lượng paclitaxel baccatin III sinh khối tế bào thông đỏ 99 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc.) 1.2 Cấu trúc khung taxan thông đỏ 1.3 Quy trình tạo sinh khối tế bào thực vật 14 1.4 Sự phát triển tế bào thực vật theo thời gian 19 1.5 Con đường sinh tổng hợp Paclitaxel 23 2.1 Sơ đồ quy trình chiết xuất SKTB thơng đỏ làm phản ứng định 37 tính 3.1 Một số hình ảnh mẫu thí nghiệm ni cấy callus 43 3.2 Callus môi trường khác 45 3.3 Đồ thị biểu diễn khối lượng callus theo thời gian 46 3.4 Hình ảnh callus thơng đỏ môi trường khác 49 3.5 Callus thông đỏ sau lần cấy chuyển môi trường thạch 49 SH 3.6 Hình ảnh tế bào thơng đỏ qua lần cấy chuyển 53 3.7 Đồ thị biểu diễn khối lượng tế bào theo thời gian nuôi cấy 54 3.8 Sơ đồ quy trình thu hoạch sinh khối tế bào thông đỏ 66 Bioreactor 3.9 Sơ đồ quy trình tạo sinh khối tế bào thơng đỏ 3.10 Sắc ký đồ mẫu sinh khối thông đỏ xử lý theo phương pháp chiết 69 70 lỏng -lỏng (a) lỏng - rắn (b) 3.11 Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn paclitaxel baccatin III hệ pha 72 động III sử dụng cột Luna L43 3.12 Phổ hấp thụ paclitaxel (a) baccatin III (b) 72 3.13 Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn (a) mẫu thử (b) 74 3.14 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích píc nồng độ 75 paclitaxel baccatin III 17 Agency United State Enviroment Protection (2011), Revised Nontarget Organism and Endangered Species Screening Risk Assessment for the N-6-Benzyladenine, Registration Review Preliminary Work Plan WASHINGTON D.C., 20460 18 Alan H.S (1992), “Large-scale plant cell culture: methods, applications and products” Current opinion in biotechnology, 3, pp.105-109 19 Angela S (1991), “The manufacture of food ingredients using plant cell and tissue cultures”, Trends in Food Science Technology, 2:116122 20 Appendino G., Ozen H C., Enriu R., Barboni L., Gabetta B., Zini G F (1993), “Apocarotenoids from the Needles of Taxus wallichiana”, Fitoterapia, 64, pp 396-398 21 Bala S., Chattopadhyay S.K., Tripathi V., Sashidhara K.V., Kulshrestha M., Sharma R.P., Jain S.P., Kukreja A.K., Kumar S (1999), “Analysis of taxol and major taxoids in Himalayan yew, Taxus wallichiana”, Journal of Chromatography, 858, pp 239-244 22 Benhamou N (1996), “Elicitor induce plant defense pathways”, Trends in Plant Science, 1, pp 233-240 23 Bentebibel S., Palazon J., Cusido R M., Bonfill M., Eibl R., Pinol M T (2005), “Effect of immobilization by entrapment in alginate and scale-up in paclitaxel and baccatin III production in cell suspension cultures of Taxus baccata”, Biotechnol Bioeng, 89, pp 647-655 24 Birgitta M., Peter J., Hylands, Adelbert B., Nmeinhart H Z (1998) “Taxoids from cell cultures of Taxus chinensis”, Phytochemistry 49(1) pp 113-125 25 Bonfill M., Cusido R M., Joly S., Morales C., Pinol M T (2003), “Influence of elicitors on taxane production and 3-hydroxy-3methylglutaril coenzyme A reductase activity in Taxus media cells”, Plant Physiology Biochemistry, 41, pp 91-96 26 Bonfill M., Bentebibel S., Moyano E., Palazon J., Cusidó R M., Eibl R (2007), “Paclitaxel and baccatin III production induced by methyl jasmonate in free and immobilized cells of Taxus baccata”, BiolPlantarum, 51, pp 647-652 27 Bonfill M., Exposito O., Moyano E., Cusido R M., Palazon J., Pinol M T (2006), “Manipulation by culture mixing and elicitation of paclitaxel and baccatin III production in Taxus baccata suspension cultures”, In Vitro Cell Dev-Pl, 42, pp 422-426 28 British Pharmacopoiea (2010) Monographs: paclitaxel, pp 1324- 1327 29 Brodelius P (1982), “Immobilized plant cells”, Appl Biochem Biotechnol, 7, pp 31-44 30 Brunakova K., Babincova Z., Takác M., Cellárová E (2004), “Selection of callus cultures of Taxus baccata L as a potential source of paclitaxel production”, Eng Life Sci, 4, pp.465-469 31 Brunakova K., Cellarova E (2005), “Production of taxanes in callus and suspension cultures of Taxus baccata L.”, Springer, 5, pp.567-574 32 Buitelaar R M., Tramper J (1992), “Strategies to improve the production of secondary metabolites with plant cell cultures: a literature review”’ Journal of Biotechnology, 2, pp.111-141 33 Butenko R G., Lipsky A K., Chernyak N D., Arya H C (1984), “Changes in culture medium pH by cell suspension cultures of Dioscorea deltoidea”, Plant Science Letters, 35(3), pp.207-212 34 Cai Y E., Roberts F J., M F., Phillipson J D., Zenk M H., Gleba Y Y (1991), “Biological and chemical investigation of dragon's blood from Croton species of South America Part Polyphenolic compounds from Croton lechleri”, Phytochemistry, 30(6), pp 20332040 35 Chawla H S (2003), Introduction Plant Biotechnology, Amazon Press 36 Chen W., Wu B., Zheng Q (1991), “Studies on the chemical constituents of Taxus yunnanensis”, Acta pharmaceutica Sinica, 26, pp 747 37 Cheol S J., Kee Y P (2006), “Effects of oxygen, carbon dioxide and ethylene on growth and bioactive compound production in bioreactor culture of ginseng adventitious roots” Biochemical Engineering Journal, 27(3), pp.252-263 38 Choi H K., Kim S I., Son J S., Hong S S., Lee H S., Lee H J (2000), “Enhancement of paclitaxel production by temperature shift in suspension culture of Taxus chinensis”, Enzyme and Microbial Technology, 27, pp 593-598 39 Chuang C L., Chen K J., Lin Y S., Chen F C (1990), “Constituents of the heartwood of Taiwan yew Part IV Isolation of 1, 4-p-methanediol and 1-dehydroxy baccatin IV”, Huaxue, 48, pp.275280 40 Ciddi V., Srinivasan V., Shuler M L (1995), “Elicitation of Taxus sp cell cultures for production of paclitaxel”, Biotechnol Lett, 17, pp.1343-1346 41 Cusido R M., Palazon J., Bonfill M., Exposito O., Moyano E., Pinol M T (2007), “Source of isopentenyl diphosphate for taxol and baccatin III biosynthesis in cell cultures of Taxus baccata”, Biochemical Engineering Journal, 33, pp.159-167 42 Cusido R M., Palazon J., Navia-Osorio A., Mallol A., Bonfill M., Morales C., Pinol M T (1999), “Production of taxol and baccatin III by a selected Taxus baccata callus line and its derived cell suspension culture”, Plant Science Letters, 146, pp.101-107 43 Da H L., Seul G K., Sungyong M., Jin H K (2010), “Evaluation of feeding and mixing conditions for fractional precipitation of paclitaxel from plant cell cultures” Process Biochemistry, 45, pp.1134-1140 44 Daniela B (1978), “Conditioning factor affecting growth in plant cells in culture” Plant Science Letters, 51(1), pp.83-91 45 David N W., Benson N (1992), “Carbon-13 NMR studies on sitosterol biosynthesized from [13C] mevalonates”, Phytochemistry, 31(3), pp.805-811 46 DiCosmo F., Misawa M (1995), “Plant cell and tissue culture: alternatives for metabolite production”, Biotechnology Advance, 13, pp.425-453 47 Dirk H S (1996), “The design of culture media based on the elemental composition of biological material” Journal of Biotechnology, 45(2), pp.97-102 48 Enaksha R M., Wickremesinhe, Arteca R N (1993), “Taxus callus cultures: Initiation, growth optimization, characterization and taxol production”, Plant cell, Tissue and Organ Culture, 35, pp.181-193 49 Erdtman H., Tsuno K (1969), “Taxus heartwood constituents”, Phytochemistry, 8, pp.931-932 50 Exposito O., Bonfill M., Onrubia M., Jane A., Moyano E., Cusido R M., Palazon J., Pinol M T (2009), “Effect of taxol feeding on taxol and related taxane production in Taxus baccata suspension culture” New Biotechnology, 25, pp.252-259 51 Farmer E E., Almeras E., Krishnamurthy V (2003), “Jasmonates and related oxylipins in plant responses to pathogensis and herbivory”, Current Opinion in Plant Biology, 6, pp.372 - 378 52 Fornale S., Esposti D D., Navia-Osorio A., Cusido R M., Palazon J., Piñol M T., Bagni N (2002), “Taxol transport in Taxus baccata cell suspension cultures”, Plant Physiol Biochem, 40, pp 81-88 53 Frank D (1995), “Plant cell and tissue culture: alternatives for metabolite production”, Biotechnology Advance, 13(3), pp.425-453 54 Furmanova M., Sykłowska-Baranek K., Josefowicz & J GS (2000), “Increased taxane accumulation in callus cultures of Taxus cuspidata and Taxus x media by some elicitors and precursors”, Biotechnology Letters, 22, pp.1449-1452 55 Gabriella P., Fausto M., Silvia A (2002), “Effects of the culture medium pH and ion uptake in invitro vegetative organogenesis in thin cell layers of tobacco” Plant Science, 162, pp.947-955 56 Gulik W M., Hoopen H J G (2004), “Kinetics and stoichiometry of growth of plant cell cultures of Catharanthus roseus and Nicotiana tabacum in batch and continuous fermentors”, Biotechnol Bioengineering, 40(8), pp.863-874 57 Gulik W M., Hoopen H J G., Heijnen J J (2001), “The application of continuous culture for plant cell suspensions” Enzyme and Microbial Technology, 28(9-10), pp.796-805 58 Gundlach H., Muller M J., Kutchan T M., Zenk M H (1992), “Jasmonic acid is a signal transducer in elicitor-induced plant cell cultures” Proc Natl Acad Sci USA, 89, pp.2389-2393 59 Heike D., Dietrich K (1995), “Strategies for the improvement of secondary metabolite production in plant cell cultures”, Enzyme and Microbial Technology, 17(8), pp.674-684 60 Hirasuna T J., Srinivasan V., Shuler M L, (1996) “Paclitaxel production in suspension cultures of Taxus baccata”, Plant Cell, llssue and Organ Culture, 44, pp.95-102 61 Holton R., Kim H B., Liang F., Biediger R J., Boatman P D, (1994), “First total synthesis of paclitaxel Functionalization of the B ring”, J Am Chem Soc, 116, pp.1597-1598 62 Jeon K Y., Kim J H (2009), “Improvement of fractional precipitation process for pre-purification of paclitaxel”, Process Biochemistry,44, pp.736-741 63 Jeon S I., Kim J.H (2006), “Optimal temperature control in fractional precipitation for Biochemistry, 41, pp.276-280 paclitaxel pre-purification”, Process 64 Jian J Z (2006), “Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium”, Journal of Biotechnology, 45, pp.227 - 234 65 Jian Zhaoa T., Lawrence C., Davis B., Robert V (2005), “Elicitor signal transduction leading to production of plant secondary metabolites”, Biotechnology Advances, 23, pp.283-333 66 Jin H K., Seul G K., Sun I J (2008), “Effect of temperature and pH on fractional precipitation for paclitaxel pre-purification” Journal of Biotechnology, 136, pp.22-71 67 John H., Dodd S., Lorin W., Robert S (1995), Experiments in Plant Tissue Culture, Cambridge University Press, England, pp.55-60 68 Kawamura F., Ohira T., Yatagai M (1999), “Accelerated solvent extraction of paclitaxel and related compounds from the bark of Taxus cuspidate”, Journal of Natural Products, 62(2), pp.244-247 69 Kee W Y., Hosakatte N M., Eun J H., Kee Y P (2005), “Ginsenoside production by hairy root cultures of Panax ginseng: influence of temperature and light quality” Biochemical Engineering Journal, 23(1), pp 53 - 56 70 Ketchum R E., Gibson D M., Croteau R B., Shuler M L (1999), “The kinetics of taxoid accumulation in cell suspension cultures of Taxus following elicitation with methyl jasmonat” Biotechnology and Bioengineering, 62, pp.97-105 71 Keum Y J., Jin H K (2009), “Improvement of fractional precipitation process for pre-purification of paclitaxel”, Process Biochemistry, 44, pp.736-741 72 Khosroushahi A Y., Valizadeh M., Ghasempour A., Khosrowshahli M., Naghdibadi H., Dadpour M.R., Omidi Y (2006), “Improved Taxol production by combination of inducing factors in suspension cell culture of Taxus baccata”, Cell Biology International, 30, pp.262-269 73 Kieran P M (1997), “Plant cell suspension cultures: some engineering considerations”, Journal of Biotechnology, 59(1-2), pp.39 - 52 74 Kim J H (2004), “Prepurification of paclitaxel by mixen and precipication”, Process Biochemistry, 39, pp.1567-1571 75 Kim J H., Kang I S., Choi H K., Hong S S., Lee H S (2002), “A novel prepurification for paclitaxel from plant cell cultures”, Process Biochemistry, 37, pp.679-682 76 Kim S G (2009), “Effect of pH on fractional precipitation for prepurification of paclitaxel from plant cell culture”, Korean Journal Chemistry Engineering, 26(2), pp.449-452 77 Kim S I., Choi H K., Kim J H., Lee H S., Hong S S (2001) “Effect of osmotic pressure on paclitaxel production in suspension cell cultures of Taxus chinensis”, Enzyme and Microbial Technology, 28, pp.202-209 78 Kolewe M E., Roberts S C (2008), “Pharmaceuticals active natural products synthesis and supply via plant cell culture technology” Molecular Pharmaceutics, 5, pp.243-256 79 Kovacs P., Csaba G., Pallinger E., Czaker R (2007), “Effects of taxol treatment on the microtubular system and mitochondria of Tetrahymena”, Cell Biology International, 31, pp.724-732 80 Kwon I C., Lee J H., Hyun J O, (1998) “Enhancement of paclitaxel production by in situ recovery of product”, Process Biochemistry, 33, pp.701-708 81 Lauren D.R., Douglas J A (1995) “Analysis of taxol, 10deacetylbaccatin III and related compound in Taxus baccata”, J Chromatography 712, pp.303-309 82 Li C., Huo C., Zhang M., Shi Q (2008) “Chemistry of chinensis yew, Taxus chinensis var mairei”, Biochemical Systematics Ecology, 36, pp.266-282 and 83 Li S., Zu Y., Sun R., Wang Y., Zang L., Luo H., Gu C., Efferth T (2009) “Determination of paclitaxel and other six taxoids in Taxus species by high-performance liquid chromatography- tandem mass spectrometry”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 49, pp.81-89 84 Li Y.; Liqun Z (2009) “Process utilized oligo-[1]-cyclodextrin substituted agarose gel medium for efficient purification of paclitaxel from Taxus cuspidata”, Separation and Purification Technology, 68, pp.119-124 85 Lipsky A K (1992), “Problems of optimization of plant cell culture processes”, Journal of Biotechnology, 26, pp.83-97 86 Liu S (1998), “Phosphate effect on production of ginseng saponin and polysaccharide by cell suspension cultures of Panax ginseng and Panax quinquefolium”, Process Biochemistry, 33(1), pp.69-74 87 Lorraine M (1999), Plant tissue culture techniques Tested studies for laboratory teaching, 11, pp.151-174 88 Luca M., Luciano S (1994), “HPLC Determination of Benzyladenine Residues in Micropropagated Apple Explants”, J Agric Food Chem., 42, pp.744-746 89 Luo J (2004), “Optimization of elicitors and precursors for paclitaxel production in cell suspension culture of Taxus sp in the presence of nutrient feeding”, Process Biochemistry, 39, pp.1073-1079 90 Luo J., He G Y (2004), “Optimization of elicitors for paclitaxel production in cell suspension culture of Taxus chinensis in the presence of nutrient feeding”, Process Biochemistry, 39, pp.1073-1079 91 Luo J., Liu L., Wu C D (2001), “Enhancement of paclitaxel production by abscisic acid in cell suspension cultures of Taxus chinensis”, Biotechnology Letters, 23, pp.1345-1348 92 Ma W W., Adams T L., Park G L., Evans W A., Blumenthal S G., Gomez G A., Nieder M H., Hylands P J (1994), “Yunnanxane and its homologous esters from cell cultures of Taxus chinensis var mairei”, Journal of Natural Products 57 (9) , pp.1320−1324 93 Ma W., Evans W A., Blumenthal S G., Gomez G A (1994), “Taxol and its homologous esters from cell cultures of Taxus chinensis var mairei”, Journal of Natural Products, 58(5) , pp.1212-1215 94 Margaret D (1981), “Technologies and strategies in plant cell culture - new approaches to old problems”, Enviromental and Experimetal Botany, 21, pp.269 - 275 95 Mclaughlin J.J., Powell R.G., Smith C.R (1981), “19- hydroxybaccatin III, 10-deacetylcephalomanine and 10 -deacetyltaxol: New antitumor taxanes from Taxus wallichiana”, Journal of Natural Products, 44(3) , pp.312-319 96 Michael W F (1986), Process strategies for plant cell cultures, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, 0166- 9430/86 97 Moon W J., Yoo B S., Kim D I., Byun S Y (1998), “Elicitation kinetics of taxane production in suspension cultures of Taxus baccata”, BiotechnolTech, 12, pp.79 98 Moyano E., Gene A., Bonfill M., Cusido R M., Palazon J., Pinol M T (2004), “Improvement of paclitaxel and baccatin III production in Taxus sp cell cultures”, Biotechnol Prog., 5, pp.239-253 99 Mueller M J., Brodschelm W., Spannagl E., Zenk M H (1993), “Signaling in the elicitation process is mediatd through the octadecanoid pathway leading to jasmonic acid”, Proc Natl Acad Sci USA, 90, pp.7490-7494 100 Mun S Y (2008), “Optimization of productivity in solvent gradient simulated moving bed for paclitaxel purification”, Process Biochemistry, 43, pp.1407-1418 101 Namdeo A G (2004), Investigation on pilot scale bioreactor with reference to the synthesis of bioactive compounds from cell suspension 150 cultures of Catharanthus roseus, PhD Thesis: Devi Ahilya Vishwavidyalya, Indore, M.P India 102 Namdeo A G (2007), “Plant cell elicitation for Production of secondary metabolites”, Pharmacognosy Reviews 1, pp.69-79 103 Namdeo A G., Patil S., Fulzele D P (2002), “Influence of fungal elicitors on production of ajmalicin by plantcell cultures of Catharanthus roseus”, Biotechnol Prog., 18, pp.159-162 104 Nhan Trung Nguyen, Arjun H et al (2003), “Diterpenes and sesquiterpenes from the bark of Taxus yunnnanensis”, Phytochemistry 64, pp.1141- 1147 105 Nims E., Dubois C P., Roberts S C., Walker E L (2006), “Expression profiling of genes involved in paclitaxel biosynthesis for targeted metabolic engineering”, Metabolic Engineering, 8, pp.385394 106 Onrubiab M., Moyanob E., Bonfilla M., Expositoa O., Palazóna J., Cusido R M (2010), “An approach to the molecular mechanism of methyl jasmonate and vanadyl sulphate elicitation in Taxus baccata cell cultures: The role of txs and bapt gene expression”, Biochemical Engineering Journal, 53, pp.104-111 107 Osorio A.N GH, Cusidó R M., Palazón J., Alfermann A.W., Pinol M T (2002), “Taxol and baccatin III production in suspension cultures of Taxus baccata and Taxus wallichiana in an airlift bioreactor”, Journal of Plant Physiology, 159, pp.97-102 108 Palazon J., Cusido RM., Bonfill M., Morales C., Pinol M T (2003), “Inhibition of paclitaxel and baccatin III accumulation by mevinolin and fosmidomycin in suspension cultures of Taxus baccata”, Journal of Biotechnology, 101, pp.57-163 109 Pan Z W., Zhong J J (2000), “Scale-up study on suspension cultures of Taxus chinensis cells for production of taxane diterpene”, Enzyme and Microbial Technology, 27, pp.714-723 110 Parc G., Canaguier A., Landre P., Hocquemiller R., Chriqui D., Meyer M (2002), “Production of taxoids with biological activity by plants and callus culture from selected Taxus genotypes”, Phytochemistry 59, pp.725-730 111 Parr A J (1989), “The production of secondary metabolites by plant cell cultures”, Journal of Biotechnology, 2(5) , pp.101-126 112 Peter D S (1985), “Biotechnological applications of plant cells in culture”, Biotechnology Advance, 3(1) , pp.29-38 113 Pyo S H., Song B K., Ju C H., Han B H., Choi H J (2005), “Effects of adsorbent treatment on the purification of paclitaxel from cell cultures of Taxus chinensis and yew tree”, Process Biochemistry, 40, pp.1113-1117 114 Pyo S H., Song B K., Han B H., Kim J H (2004), “A large-scale purification of paclitaxel from cell cultures of Taxus chinensis”, Process Biochemistry, 39, pp.1985-1991 115 Qiu L., Lian M., Ma Z., He G (1989), “Biflavones of Taxus wallichiana Zucc.”, Zhiwu Xuebao, 31, pp.54-56 116 Rao S R., Ravishankar G A (2002), “Plant cell cultures: chemical factories of secondary metabolites”, Biotechnology Advance, 20, pp.101-153 117 Rehman H U., Rahman A U (2004), “Chemical constituents of Taxus wallichiana”, J.Chem Soc., 26, pp.302-306 118 Rheman H U., Choudhary M L (2004), “Chemical constituents of Taxus wallichiana”, J.chem Soc Pakistan 26, pp.302 119 Sabater-Jara A B., Lopez-Perez A J (2010), “In vitro culture of Taxus sp.: strategies to increase cell growth and taxoid production”, Phytochem Rev, 9, pp.343-356 120 Sang H P., Heung B P., Bong K S., Byung H H., Jin H K (2004), “A large-scale purification of paclitaxel from cell cultures of Taxus chinensis”, Process Biochemistry, 39, pp.1985-1991 121 Sharon M H S., Pauline M D (2009), “Foreign protein production using plant cell and organ cultures: Advantages and limitations” Biotechnology Advance, 27(6) , pp.1036-1042 122 Shen Y C., Chen C Y., Huang M C (2000), “Taxan diterpenoids from seeds of Taxus mairei”, Chem Pharm Bull., 48, pp.1344-1346 123 Shen Y C., Lo K L., Chen C Y., Kuo Y H., Huang M C (2000), “New taxans with an opened oxetane ring from the roots of Taxus mairei”, Journal of Natural Products, 63, pp.720-722 124 Siegfried B., Daniel G (1990), The taxus alkaloids, Academic Press, Inc Vol 39 125 Sonia M., Rosa M., Cusido et al (2011), “Production of the anticancer drug paclitaxel in Taxus baccata suspention culture”, Process Biochemistry, 46(1), pp.23-34 126 Susan C R., Michael L S (1997), “Large-scale plant cell culture”, Curr Opin Biotechnol, 8(2), pp.154-159 127 Tabata H (2004), “Paclitaxel Production by Plant-Cell-Culture Technology”, Adv Biochem Engin/Biotechnol, 7, pp.1-23 128 Tamogami S., Rakwal R., Kodama O (1997), “Phytoalexin production elicited by exogenously applied jasmonic acid in rice leaves (Oryza sativa L.) is under the control of cytokinins and ascorbic acid”, FEBS Lett 412, pp.61-64 129 Thomas E A (1983), “A Method for the Quantitative Determination of 1-Naphthaleneacetic Acid, 1-Naphthalenylacetylaspartic Acid, and P-D-Glucose 1-( 1-Naphtha1ene)acetate in Grapes”, J Agric Food Chem, 31, pp.286-288 th 130 United Stage Pharmacopoiea 30 (2007), NF 25:3461-3462 131 Verpoorte R., Memelink J (2002), “Engineering secondary metabolite production in plants” Curr Opin Biotechnol, 13, pp.181187 132 Virendra B A P (1991), “Large-scale plant cell culture: methods, applications and products”, Curr Opin Biotechnol, 2, pp.370-374 133 Wang C., Mei X (2001), “Enhancement of taxol production and excretion in Taxus chinensis cell cultures by fungal elicitation and medium renewal”, Appl Microbiol Biotechnol, 55, pp.404-410 134 Wang H Q., Zhong J J (1999), “Significant improvement of taxane production in suspension cultures of Taxus chinensis by sucrose feeding strategy”, Process Biochemistry 35, pp.479-483 135 Wang Y D., Ying J Y., Jin C W (2004), “Induction studies of methyl jasmonat and salicylic acid on taxan production in suspension culture of Taxus chinensis var mairei” Biochemical Enginering Journal, 19, pp.259-265 136 Wani M C., Taylor H L., Wall M E., Coggon P., Mcphail A T (1971), “The Isolation and Structure of Taxol, A Novel Antileukemic and Antitumor Agent from Taxus brevifolia”, Journal of the American Chemical Society, 93, pp.2325-2327 137 Wu J., Mei X (2001), “Stimulation of taxol production and excretion in Taxus cell cultures by rare earth chemical lanthanum”, Journal of Biotechnology, 85, pp.67-73 138 Yan D W., Yuan J Y., Jin C W (2004), “Induction studies of methyl jasmonate and salicylic acid on taxane production in suspention culture of Taxus chinensis var mairei”, Biochemical Engineering Journal, 19, pp.259-265 139 Yeung T K., Germond C., Chen X., Wang Z (1999), “The mode of action of taxol: Apoptosis At low concentration and necrosis at high concentration”, Biochemical and Biophysical Research Communications, 263, pp.398 - 404 140 Ying J Y., Zuo J W., Zhi Q M., Jin C W (2002), “Acting paths of elicitors on Taxol biosynthesis pathway and their synergistic effect” Biochemical Engineering Journal, 10, pp.77-83 141 Yong C L., Wen Y T., Cheng L (2009), “Paclitaxel production using co-culture of Taxus suspension cells and paclitaxel-producing endophytic fungi in a co-bioreactor”, Applied Microbiol Biotechnol, 83, pp.233-239 142 Yoshizaki F., Fufuda M., Hisamichi S (1998), “Constituents of the arils of Japanese yew, Taxus cuspidata”, Annu Rep Tohoku Coll Pharm, 34, pp.111-114 143 Yu L J., Qin W M., Xu H B (2001), “Effects of salicylic acid on fungal elicitor-induced membrane-lipid peroxidation and taxol production in cell suspension cultures of Taxus chinensis”, Process Biochemistry, 37, pp.477-482 144 Yukimune Y., Tabata H., Higashi Y., Hara Y (1996), “Methyl jasmonate induced over production of paclitaxel and baccatin III in Taxus cell suspension cultures”, Nattural Biotechnology, 14, pp.11291132 145 Zhang J Z., Fang Q C., Liang X T., He C H., Kong M., He W Y., Jin X L (1995), “Taxoids from the barks of Taxus wallichiana”, Phytochemistry, 40, pp.881-884 146 Zhen Y W., Jian J Z (2002), “Combination of conditioned medium and elicitation enhances taxoid production in bioreactor cultures of Taxus chinensis cells” Biochemical Engineering Journal, 12, pp.93-97 147 Zhong J.J., Fujiyama K., Seki T., Yoshida T (1993), “Enhancement of anthocyanin production by Perilla frutescens cells in a stirred bioreactor with internal light irradiation” Journal of Fermentation Bioengineering, 15, pp.299-303 148 Zhong T X (1998), “Kinetin induced caffeic acid-O- methyltransferases in cell suspension cultures of Vanilla planifolia Andr and isolation of caffeic acid O-methyltransferase cDNAs”, Plant Physiology Biochemistry, 36(11), pp 132-137 PHẦN PHỤ LỤC ... phần hóa học sinh khối tế bào thông đỏ .70 3.2.2 Chiết xuất phân lập nhận dạng số chất sinh khối tế bào thông đỏ .81 3.2.3 Chiết xuất, tinh chế paclitaxel sinh khối tế bào thông đỏ 89 3.2.4... baccatin III sinh khối tế bào thông đỏ 99 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc. ) 1.2 Cấu trúc khung taxan thông đỏ 1.3 Quy trình tạo sinh khối tế bào thực vật... sản xuất paclitaxel từ nguồn dược liệu thông đỏ Việt Nam theo hướng ứng dụng công nghệ sinh khối tế bào thực vật, đề tài: ? ?Nghiên cứu quy trình tạo sinh khối tế bào thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc. )