TT HÓA SINH ĐẠI CƯƠNG

Trong mt kiềm, các chất chứa từ hai liên kết peptide trở lên sẽ tạo phức chất màu tím hồng với Cu ++ (muối.. đồng).[r]

1 Phản ứng biure

Trong mt kiềm, chất chứa từ hai liên kết peptide

trở lên tạo phức chất màu tím hồng với Cu

++

(muối

đồng)

Cơ chế phản ứng:

b Ứng dụng



Phát protein



Định lượng protein: Dự vào cường độ

c Cách làm

+ ố 1: cho kho ng 0,1g ure un lửa đèn

ả

Đ

cồn

đế

n ure nóng ch y; để nguội s đ ợc

ả

ẽ

biure.

+ ố 2: ml lòng trắng trứng

+ è 3: ml dung dÞch gelatin 1%

+ è 4: kho ng ml s a t ơI

Thêm vào ống ml NaOH 10%, 1-2 giät

CuSO4 1%.

2 Phản ứng xantoprotein

a Nguyên lý

:

C¸c protein có chứa aa mạch vòng nh : Phe, Tyr, Trp, vv… d

ới td HNO3 đặc, b nit ị húa thành màu vàng,nếu gặp

m«i tr ờng kiềm mạnh thỡ dẫn xuất tạo thµnh muèi cã

màu da cam C ch ph n ng:ơ ế ả ứ

b Tiến hành

Lấy

3 èng nghiÖm

- èng 1: cho1 ml dd

lòng

tr

ắ

ng tr ng

ứ

- èng 2: cho kho ng ml s

ả

ữ ươ

a t

i

- èng 3: cho ml dd gelatin 1%

Cho ti p vào ống ml HNO

ế

3

đặc , đun

đèn cồn, đến xuất màu vàng Sau ể

đ

nguội, cho từ từ giọt NaOH 20% (kho ng 1-2

ả

ml) xuất màu vàng da cam.

c Ứng dụng

II

CÁC PHẢN ỨNG SA LẮNG PROTEIN

Trong dd, protein trạng thái keo bền, nhờ yếu tố:

-

Sức đẩy tĩnh điện

-

Lớp vỏ thủy hóa

Làm điện tích protein cách:

+ Đưa pH dd protein pH đẳng điện (pHi), ỳ a

số protein dạng l ỡng cực, không mang điện tích

+ Thêm NaCl, (NH4)2SO4: ion trung hòa điện tích

cđa protein

Lµm mÊt líp vë thđy hãa b»ng c¸ch :

Hai loại biến tính:

+ Thuận nghịch: dd dịch keo trở lại trạng thái ban đầu sau khử tác nhân Thuộc loại biến đổi gồm có ph/ứng: ph/ứng diêm tích, tác dụng nhẹ cồn, axeton nhiệt độ thấp

+ Không thuận nghịch: protein bị biến đổi hồn tồn, bị hủy hoại, tính hòa tan n ớc Thuộc loại biến đổi gồm: ph/ứng gây sa lắng muối kim loại nặng,

1 Phản ứng diêm tích

a Nguyên lý

- Diêm tích ph ơng ph¸p dïng c¸c muèi nh : NaCl,

(NH4)2SO4 kt ta protein

Nguyên nhân kết tủa tiểu phần protein bị trung hòa

điện tÝch ion C¸c protein kh¸c sÏ tđa ë nh ng ữ

nồng độ muối khác Vỡ tách riêng protein

ra khỏi hỗn hợp

- VD globulin cú KLPT ln albumin, n ớc globulin tích điện (-) albumin, globulin bị kết tủa nồng độ amoni

b TiÕn hµnh

L y ng nghi m:ấ ố ệ

- ống 1: lấy ml LTT, ml dd (NH4)2SO4 bão hòa, lắc

đ ợc dd bán bão hòa, globulin bị sa lắng, để phút, lọc sang ố.2

- ống 2: Cho vào bột (NHố 4)2SO4, v a cho v a l c, ắ đến

khi bÃo hòa, albumin s sa lắng phút L c sang è.3.ọ

c ứng dụng

Kết tủa cách protein không bị biến tính

2 Sa lắng cồn

a Nguyên lý

- Protein bị kết tủa vẩn dung môi h/cơ nh : cồn, aceton, eter, Do protein bị mÊt líp vá thđy hãa

- Tđa cµng dƠ nÕu cã thªm NaCl

- KÕt tđa b»ng cån kết tủa thuận nghịch tiến

hành nhiệt độ thấp (00 đến 15– 0C) tủa đ ợc tách khỏi

b TiÕn hµnh

- èng 1 : cho ml cån 96o

- èng 2: cho ml cån 96o, thêm 1-2 giọt NaCl bÃo hòa

Cho vào ống ml dd lòng trắng trứng

- èng 3: 1ml cån 96o, 1ml dd gelatin 1%.

NhËn xÐt vµ gi/thÝch kÕt qu ả

c øng dơng

- Dïng cån s¸t trïng

3 Sa lắng nhiệt độ cao

a Nguyên lý

- Protein b đun nóng bị xáo trộn mặt c u truc

phân tử, lớp vỏ thủy hóa nên tính hòa tan bị

ụng vún Hin t ợng x y mạnh điểm đẳng điện ả

- NÕu sù biÕn tÝnh nµy x y pH khác (trong môi tr

b TiÕn hµnh

LÊy èng, cho vào ống ml dd lòng trắng trứng + ống 1: đun sôi, theo dõi kết tủa

+ ống 2: thêm giọt a acid 1% để tạo điểm đẳng điện, đun sôi + ống 3: thêm 0,5 ml a acid 10%, đun sôi

+ ống 4: thêm 0,5 ml NaOH 10%, đun sôi

+ èng 5: thªm 0,5 ml a.acid 10%, 3-4 giät NaCl bÃo hòa, đun sôi

Nhận xét gi i thÝch kÕt qu ả ả

c øng dông

Bài 2: THỰC NGHIỆM VỀ ENZYME

1 Thuỷ phân tinh bột

amylase

a Nguyên lý

Tinh bét lµ polysaccharide, gåm nhiỊu đơn vị glucose n i víi ố

bëi lk  - 1,4 glycoside -1,6 glycoside TB nhóm

aldehyde tù , nên không cho phản ứng tromer dương tính

b TiÕn hµnh

- Sóc miƯng b»ng n íc cÊt NgËm mét Ýt n íc cÊt kho ng 1-3 ả

phút, khẽ cử động l ỡi để trộn n ớc bọt với n ớc cất, cho

qua phƠu läc vµo èng  dd ch a amylase.ứ

- Nhá lªn phiÕn sø d·y dd lugol 1% : 1TN, C.Đ

- LÊy èng nghiÖm

+ èng A: cho ml TB 1%, ml dd amylase (èng TN)

+ èng B: cho ml TB 1%, ml n íc cÊt (èng C)Đ

Lắc hai ng, nhỏ ố vài gi t t ng TN ọ ố vào l ỗ dóy TN,

vài gi t t ng C ọ ố Đ vào l ỗ dãy C Sau kho ng Đ ả phút l i

nh ỏ vào l ti p theo Quan sát đổi màu nhận xột.

- Phần lại ống thö b»ng p.ø Tromer Nh n ậ xét kÕt

2 nh h ởng nhiệt độẢ

a Nguyên lý

Phần lớn enzyme có hoạt lực mạnh thân nhiệt Nếu

nhit độ thấp thỡ enzym hoạt động yếu, ngựơc lại

nếu nhiệt độ cao thỡ enzyme bị tê liệt bị huỷ hoại

b TiÕn hµnh

LÊy èng nghiƯm

+ ống 1: cho ml ddamylase, ngâm vào chậu n ớc đá 15 ’

+ ống 2: cho ml dd amylase, đun sôi , để nguội + ống 3: cho ml ddamylase

Sau cho ống ml dd tinh bột 1% lắc đều, để yên

trong 5-10 råi thö b»ng ph n øng Tromer ho c dd lugol 1% ’ ả ặ

3 Tác dụng đặc hiệu

a Nguyªn lý

Amylase sucrase enzyme th/phân lk glycoside, nh ng

amylase chØ th/ph©n lk , 1-4 glycoside tinh bột,

sucrase th/phân lk , 1-2 glycoside cđa sucrose

b TiÕn hµnh

LÊy èng nghiÖm

+ èng 1: cho ml dd tinh bét 1%, ml dd amylase + èng 2: cho ml dd sucrose 1%, ml dd amylase

+ èng 3: cho ml dd sucrose 1%, ml dd sucrase (men bia) + èng 4: cho ml dd tinh bét 1%, ml dd sucrase

Lắc thử ph n ứng Tromer, quan sát màu ả

4 nh h ëng cđa pHẢ

a Nguyªn lý

Vì cã b n ch t protein, nªn enzyme rÊt mÉn c m víi pH cđa mt ả ấ ả

Mỗi loại enzyme có pH tối u hđộng, VD pepsin có hoạt

lực mạnh pH 1,5-2,5 pH mt gần pH tối u, tốc độ p

cao, nghÜa lµ enzyme h mạnh

S thay i pH dự nh /h đến hoạt độ enzyme, /h ả

b Cách tiến hành

Lấy thật xác vào ống nghiệm đánh số từ 1- theo dẫn d ới đây:

Sè èng

pH (ml)

5,4 5,8 6,2 6,6 6,8 7,2 7,6

Tinh bét 1% ml 1ml ml ml ml ml ml ml

Amylase 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml

-

Đun sôi, quan sát thấy màu sắc biến đổi