Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết và mỡ máu của dịch chiết cây sắn thuyền

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HäC - NGÔ THị QUỳNH NGHIÊN CứU TáC DụNG Hạ ĐƯờng huyết mỡ màu dịch chiết sắn thuyền (Syzygium polyamthum (Wight)Walp) Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HäC - NGÔ THị QUỳNH NGHIÊN CứU TáC DụNG Hạ ĐƯờng huyết mỡ màu dịch chiết s¾n thun (Syzygium polyamthum (Wight)Walp) Chun ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Cán hướng dẫn Khoa học: GS TS Đỗ NGọC LIÊN H Ni - 2012 t Chương 1: Tổng quan Các chất thứ cấp từ thực vật 1.1 Phân loại, cấu tạo hố học tính chất chất thứ cấp từ thực vật 1.1.1 Nhóm hợp chất terpen 1.1.2 Nhóm hợp chất phenolic 1.1.3 Nhóm hợp chât alkaloid 10 1.2.Tác dụng sinh học chất thứ cấp 10 1.2.1 Tác dụng chống oxy hoá 10 1.1.2 Tác dụng kháng sinh kháng khuẩn 10 1.2.3 Một số tác dụng khác 11 1.3 Các hợp chất thứ cấp bệnh béo phì, ĐTĐ 11 1.3.1 Bệnh béo phì 20 1.3.2 Bệnh đái tháo đường(ĐTĐ) 23 1.3.3 Mối quan hệ béo phì ĐTĐ type 1.3.4 Tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ 25 30 1.3.5 Tình hình nghiên cứu hợp chất có hoạt tính sinh học chống béo phì đái tháo đường 30 1.4 Vài nét sắn thuyền 1.4.1 Đặc điểm sinh học sắn thuyền 1.4.3 Thành phần hóa học sắn thuyền 30 30 1.4.4 Tính công dụng sắn thuyền Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu 32 2.1.Đối tượng nghiên cứu 32 2.1.1 Mẫu thực vật 2.1.2 Mẫu động vật 32 2.2 Hố chất dụng cụ thí nghiệm 32 2.3 Phương pháp nghiên cứu 32 32 2.3.1 Xử lý mẫu 32 2.3.2 Khảo sát sơ thành phần hoá học lá, vỏ cành sắn thuyền 33 2.3.3 Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết chống béo phì phân 37 đoạn dịch chiết từ lá, vỏ cành sắn thuyền 38 39 2.3.4 Pha thuốc hóa chất thí nghiệm 2.3.5 Tiến hành thí nghiệm 2.3.6 Tiến hành lấy mẫu thử nghiệm 2.3.7 Phương pháp xác định số số hóa sinh máu chuột trước sau điều trị bằng dịch chiết 2.3.8 Xác suất thống kê tốn học xử lí số liệu Chương 3: Kết thảo luận 3.1 Quy trình chiết, tách phân đoạn từ vỏ cành sắn thuyền 3.2 Định tính sơ thành phần phần hóa học dịch chiết 3.3 Định lượng polyphenol tổng số phân đoạn dịch chiết 3.4 Kết phân tích thành phần hợp chất tự nhiên vỏ cành sắn thuyền sắc ký lớp mỏng 3.5 Kết thử độc tính cấp (LD50) theo đường uống 3.6 Kết tạo mơ hình chuột béo phì thực nghiệm 3.6.1 Khối lượng chuột trung bình lơ chuột thí nghiệm 3.6.2 Một số số hóa sinh lơ chuột sau 38 ngày ni 3.7 Tác dụng phân đoạn dịch chiết vỏ cành sắn thuyền lên chuột béo phì thực nghiệm 3.7.1 Tác dụng phân đoạn dịch chiết vỏ cành sắn thuyền lên khối lượng thể chuột 3.7.2 Nồng độ glucose (mmol/l) máu chuột béo phì sau điều trị 3.7.3 Nồng độ cholesterol (mmol/l) máu chuột 3.7.4 Nồng độ triglycerid (mmol/l) máu chuột 3.7 Nồng độ HDLC (mmol/l) máu chuột 3.7.6 Nồng độ LDLC (mmol/l) máu chuột 3.8 Xây dựng mơ hình chuột ĐTĐ thực nghiệm 3.8.1 Nồng độ đường huyết chuột béo phì sau tiêm ST 3.8.2 Kết thử dung nạp glucose đường uống 3.8.3 Tác dụng phân đoạn dịch chiết vỏ cành sắn thuyền lên số số glucose máu chuột ĐTĐ typ 3.8.4 Chỉ số GOT máu chuột… 3.8.5 Chỉ số GPT máu chuột……………………………………………………… Kết luận kiến nghị…………………………………………………… Kết luận…………………………………………………………………………… Kiến nghị …………………………………………………………………………… Tài liệu tham khảo………………………………………………………………… Phụ lục……………………………………………………………………………… ĐẶT VẤN ĐỀ Lý chọn đề tài “ Thế kỷ thứ 21 kỷ Bệnh Nội tiết Rối loạn chuyển hoá” Dự báo chuyên gia y tế từ năm chín mươi kỷ thứ 20 trở thành thực Trong số bệnh Nội tiết Rối loạn chuyển hóa có bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) type mối quan tâm người làm công tác y tế mà trở thành mối quan tâm toàn xã hội Người ta béo phì yếu tố nguy gây nhiều bệnh chuyển hoá đặc biệt bệnh ĐTĐ type 2, tăng huyết áp, bệnh tim mạch, đột quỵ, sỏi mật, ung thư đường tiêu hoá [1], [2] Vậy béo phì gì? Theo tổ chức Y tế giới(WHO) béo phì tình trạng tích luỹ mỡ q mức khơng bình thường vùng thể hay toàn thân đến mức rối loạn trao đổi chất, tim mạch… ảnh hưởng tới sức khoẻ Tổ chức Quốc tế theo dõi bệnh béo phì (International Obesity Tast Force- IOTF) cho biết bệnh béo phì bệnh liên quan tăng lên với tốc độ báo động Hiện giới có khoảng 1,7 tỷ người thừa cân mắc bệnh béo phì [1], [54] Ở Việt Nam theo điều tra Viện Dinh dưõng (2007) [10] cho thấy tình trạng thừa cân, béo phì tăng nhanh, béo phì người trưởng thành, từ 25 – 64 tuổi, lên tới 16,8% Người ta ước tính chi phí cho điều trị chứa béo phì tốn kém, nhiên xét mục đích dự phịng ĐTĐ type cịn rẻ nhiều Ví dụ Hoa Kỳ, năm 1997 chi phí cho điều trị bệnh ĐTĐ 98,2 tỷ la béo phì 47,6 tỷ đo la [1] Vì vậy, việc điều trị béo phì chiến lược tồn cầu nhằm ngăn chặn bệnh ĐTĐ type 2- bệnh kỷ- đại dịch toàn cầu Đến nay, Y học đại cho đời nhiều loại tân dược điều trị béo phì : Sibutramine, Orlistat, Metformin… Bên cạnh thuốc có nguồn gốc tổng hợp, thuốc có nguồn gốc thảo dược quan tâm phát triển Uỷ ban chuyên gia WHO khuyến nghị nên phát triển sản xuất thuốc có nguồn gốc thảo dược, nguồn nguyên liệu sẵn có, giá rẻ, dễ sử dụng, độc tính, tác dụng phụ, đồng thời tác dụng thuốc có hiệu hỗ trợ điều trị ĐTĐ lâu dài [18,42] Việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hoá học tácdụng dược lý loại thuốc có giá trị Việt Nam nhằm đặt sở khoa học cho việc sử dụng chúng cách hợp lý, hiệu có tầm quan trọng đặc biệt Sắn thuyền (Syzygium resinosum Gagnep) thuốc thuốc dân gian với nhiều công dụng dùng đắp vết thương chỗ sưng cho mau lành, dùng vỏ chữa tả lỵ, sắn thuyền tươi giã nát đắp chữa vết thương chảy mủ dai dẳng, bỏng, vết mổ nhiễm trùng, gãy xương hở, hoại tử…Theo Đỗ Tất Lợi [8] sắn thuyền giã nhỏ có tác dụng ức chế vi khuẩn số thuốc kháng sinh thường dùng Staphylacoccus aureus, với Bacillus proteus Cho đến chưa có tài liệu nghiên cứu khả chống béo phì ĐTĐ dịch chiết sắn thuyền.Chính lý đó, chúng tơi định chọn đề tài nghiên cứu ‘Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết mỡ máu dịch chiết Sắn thuyền (Sizygium polyanthum (Wight) Wamp) Đối tượng mục đích nghiên cứu 2.1.Đối tượng nghiên cứu Lá vỏ Sắn thuyền (Sizygium polyanthum (Wight) Wamp) thu hái vào tháng năm 2010 xã Đại Lâm tỉnh Bắc Giang 2.2 Mục đích nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát sơ thành phần hoá học vỏ cành Sắn thuyền (Syzygium resinosum Gagnep) 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng dịch chiết phân đoạn đến trọng lượng số số hố sinh chuột béo phì thực nghiệm (BPTN) 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng hạ Glucose huyết số phân đoạn dịch chiết mơ hình chu ột béo phì ĐTĐ mơ ph ỏng type 2.2.4 Nghiên cứu ảnh hưởng cao phân đoạn dịch chiết vỏ cành sắn thuyền lên số enzym gan GOT GPT mơ hình chuột ĐTĐ type Nhiệm vụ nghiên cứu 3.1 Chiết, tách phân đoạn lá, vỏ cành Sắn thuyền qua dung môi hữu 3.2 Khảo sát thành phần hoá học lá, vỏ cành Cây Sắn thuyền (định tính, phân lập hợp chất tự nhiên, định lượng polyphenol) 3.3 Thiết kế mơ hình chuột BPTN, chuột ĐTĐ type 3.4 Đánh giá tác dụng phân đoạn dịch chiết đến trọng lượng, số số lipid máu chuột BPTN, nồng độ Glucose huyết số enzym gan GOT GPT mơ hình chuột ĐTĐ chuột ĐTĐ type 2, 4.Phương pháp nghiên cứu 41 Phương pháp định tính thành phần hố học lá, vỏ cành Sắn thuyền 4.2 Phương pháp phân lập hợp chất kỹ thuật sắc ký lớp mỏng 4.3 Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin – Ciocalteau 4.4 Xây dựng mơ hình chuột thí nghiệm : chuột BPTN, chuột ĐTĐ type 4.5 Phương pháp định lượng số số hoá sinh 4.6 Phương pháp xử lý thống kê Những đóng ghóp đề tài - Đưa quy trình chiết, tách phân đoạn dịch chiết từ vỏ cành Sắn thuyền - Phân lập số hợp chất sắc ký mỏng, định tính định lượng số hợp chất tự nhiên từ vỏ cành Sắn thuyền - Đánh giá tác dụng số đoạn dịch chiết từ lá, vỏ cành Sắn thuyền đến trọng lượng, số số hố sinh chuột béo phì, ĐTĐ thực nghiệm mô type CHƯƠNG TỔNG QUAN Các chất thứ cấp từ thực vật 1.1 Phân loại, cấu tạo hố học tính chất chất thứ cấp từ thực vật Chất thứ cấp từ thực vật sản phẩm trình trao đổi chất sinh thực vật Chúng chất hoá học tổng hợp chuyển hoá từ chất trao đổi bậc acid amin, protein, acid nucleic, carbonhydrat, lipid từ sản phẩm trung gian chu trình đường phân, chu trình Krebs… Khác với chất trao đổi bậc nhất, giữ vai trò trung tâm tham gia trực tiếp vào trình trao đổi chất thể, chất thứ cấp từ thực vật thứ sinh yếu tố đặc biệt cần thiết cho trình sinh trưởng, phát triển, quang hợp sinh sản, chúng tạo từ tế bào chuyên biệt với vai trị điều hồ mối quan hệ qua lại tế bào thể cá thể với môi trường sống Tuỳ thuộc vào cấu trúc hố học thuộc tính lý học chúng mà chất thứ cấp từ thực vật phân thành nhóm là: nhóm terpene, nhóm hợp chất phenolic nhóm alkaloid [7], [24] 1.1.3 Nhóm hợp chất terpen Terpene nhóm hydrocarbon thực vật lớn đa dạng nhất, hình thành từ q trình polymer hố tiểu đơn vị isoprene carbon (C5H8 ), có cơng thức cấu tạo chung (C5H8 )n thực vật terpen e tổng hợp thông qua đường trao đổi chất acetate/mevanolate đường glyceraldehyde 3phosphat/ pyruvat Hầu hết terpen bị khử bị oxy hố để hình thành nên hợp chất terpenoid khác alcohol, ketone, acid alđehyde số tác giả sử dụng thuật ngữ “terpene” để chung cho nhóm hợp chất bao gồm terpene terpenoid Terpen thành phần loại tinh dầu, dùng cơng nghệ hương mỹ phẩm, thực phẩm dược phẩm Những terpen bậc cao thường chất có hoạt tính sinh học.[20,38] Nếu số LDLc cao có lợi cho sức khoẻ, số HDLC cao có hại báo hiệu rối loạn thể Bảng 3.7.6.1 Chỉ số LDLC (mmol/l) trước sau 21 ngày điều trị Lô chuột Trước ĐT Sau 21 ngày % thay đổi Lô chuột thường không ĐT 2,3 ± 0,015 2,32 ± 0,016 0,87 Lơ béo phì khơng ĐT 4,18 ± 0,037 4,08 ± 0,042  2,39 Lô béo + cao EtOH 4,46 ± 0,18 4,09 ± 0,15 8,89 Lô béo + cao CHCL3 4,22 ± 0,063 3,95± 0,051  6,39 Lô béo + cao EtOAc 4,61 ± 0,054 3,35 ± 0,044  19,09 Lô béo + Met 4,43 ± 0,037 3,68 ± 0,025  16,93 Nồng độ LDLc(mmol/l) 4.5 4.61±0.054 4.18±0.037 4.46±0.18 4.22±0.063 4.0±0.159 3.95±0.051 4.43±0.037 Trước ĐT Sau 21 ngày 4.08±0.042 3.68±0.025 3.35±0.044 3.5 2.5 2.32±0.016 2.3±0.015 ti ti 1.5 0.5 Lô chuột Lơ chuột thường Lơ béo phì khơng khơng ĐT ĐT Lô béo + cao EtOH Lô béo + cao CHCL3 Lô béo + cao EtOAc Lô béo + Met Trong máu chuột lô chuột trước sau điều trị thể rõ bẳng hình.Kết cho thấy số LDLC máu chuột lô đối chứng âm (lô chuột thường không điều trị) không thay đổi, lô đối chứng dương (chuột béo phì khơng điều trị) số LDLC giảm nh ẹ 2,39% thay đổi thức ăn , cịn lơ điều trị Metformin dịch chiết phân đoạn sắn thuyền từ ethanol,chloroform, etylacetat giảm 16,73%; 8,89% ; 6,39% ; 19,09% Như tác dụng giảm nồng độ LDLC cao phân đoạn etylacetat Chỉ số LDLC (mmol/l) trước sau 21 ngày điều trị vỏ Trước ĐT Sau 21 ngày % thay đổi Lô chuột thường không ĐT 2,3 ± 0,015 2,32 ± 0,016 0,87 % Lơ béo phì khơng ĐT 4,18 ± 0,037 4,08 ± 0,042  2,39 % Lô béo + cao EtOH 4,35 ± 0,22 3,86 ± 0,17 11,26 % Lô béo + cao CHCL3 4,42 ± 0,053 4,02± 0,045  9,05% Lô béo + cao EtOAc 4,53 ± 0,016 3,4 ± 0,025  24,94 % Lô béo + Met 4,43 ± 0,037 3,68 ± 0,025 Nồng độ LDLc (mmol/l) Lô chuột 4.5 3.5 2.5 1.5 0.5 4.18±0.037 4.08±0.042 4.42±0.053 4.35±0.22 3.86±0.17 4.53±0.016 4.02±0.045 3.4±0.025 2.3±0.015  16,93 % 4.43±0.037 Trước ĐT Sau 21 ngày 3.68±0.025 2.32±0.016 t Lô chuột Lô chuột thường khơ ng ĐT Lơ béo phì khơng ĐT Lơ béo + cao EtOH Lô béo + cao CHCL3 Lô béo + cao EtOAc Lơ béo + Met Hình3.7.6.2 Chỉ số HDLC lô chuột trước sau 21 ngày điều trị Cũng có tác dụng làm giảm số LDLc cao phân đoạn lá, nhiên chúng có hiệu cao nhiều, Đặc biệt phân đoạn ethylacetat vỏ cành làm giảm số LDLc xuống 24.29% cao nhiều so với metformin Các kết thu nói cách khái quát, tác dụng phân đoạn dịch chiết từ vỏ cành sắn thuyền lên trọng lượng chuột số mỡ máu có nghĩa thực tiễn Trong hiệu phân đoạn dịch chiết ethylacetat từ vỏ cành So sánh với kết nghiên cứu nhà khoa học nước, từ kết nghiên cứu khả điều trị giảm cân mỡ máu dịch chiết vỏ cành sắn thuyềntrên mơ hình chuột béo phì thực nghiêm, chúng tơi thu kết khả quan 3.8 Xây dựng mơ hình chuột ĐTĐ thực nghiệm Hiện nay, có nhiều mơ hình gây ĐTĐ thực nghiệm giới Các mơ hình khác sử dụng phương pháp khác điều phụ thuộc vào loại ĐTĐ (Type 1, type2), dịng chuột khác Đối với mơ hình chuột ĐTĐ type 1, thông thường người ta tiêm STZ alloxan liều cao vào chuột mà qua thời gian ni béo tác dụng phá huỷ hồn tồn tế bào β đảo tuỵ STZ alloxan Đối với mơ hình chuột ĐTĐ type thực nghiệm có nhiều mơ hình khác chuột ĐTĐ type di truyền, chuột béo phì tiêm liều đơn STZ alloxan, chuột béo phì tiêm STZ liều thấp kết hợp với nicotineamide, chuột béo phì tiêm STZ liều thấp lặp lại…[9,19,31] Qua tham khảo, thấy rằng, chuột nhắt chủng swiss, để gây cho chuột ĐTĐ type thành cơng phải gây béo phì cho chuột kết hợp với STZ dao động từ 90 – 120 mg/kg thể trọng để tạo khả kháng insulin[9,19, 41, 43] Xuất phát từ lý chon lựa phương pháp tiến hành xây dựng mơ hình chuột béo phì ĐTĐ mơ type cách tiêm STZ liều đơn (120mg/ kg thể trọng, pha đệm citric, PH 4,3) 3.8.1 Nồng độ đường huyết chuột béo phì sau tiêm STZ Các chuột sau tiêm tiến hành kiểm tra glucose huyết vào thời điểm trước tiêm sau tiêm 24,48,72 Kết trình bày bảng hình đây: Bảng 3.8.1 Nồng độ đường huyết chuột béo phì sau tiêm STZ (110mg/kg thể trọng) Trước Lô chuột tiêm Lô béo tiêm đệm Sau tiêm STZ 24giờ 7,51 ± 0,24 Các lô béo tiêm 7,63 ± 1,1 48 72 ngày 7,52 ± 0,5 7,55 ± 0,3 7,55 ± 0,6 7,56 ± 0,6 8,3 ± 0,6 9,2 ± 1,2 13,9 ± 2,5 17,82 ±1,2 STZ Lô béo tiêm đệm Nồng độ Glucose(mmol/l) Các lô béo tiêm STZ 20 18 16 14 12 10 17.82 13.9 8.3 7.52 7.63 7.51 9.2 7.55 7.55 7.56 Thời gian 24giờ Trước tiêm 48 72 ngày Sau tiêm STZ Hình 3.8.1 Nồng độ đường huyết chuột béo phì sau tiêm STZ (110mg/kg thể trọng) Kết bảng hình 3.8.1 chúng tơi rằng, lơ chuột béo phì tiêm đệm, nồng độ glucose huyết khơng thay đổi ( khác giá trị glucose huyết thời điểm tính ngẫu nhiên, khơng có ý nghĩa thống kê) Trong đó, lơ chuột béo phì tiêm STZ nồng độ thời điểm sau tiêm tăng so với ban đầu tăng có ý nghĩa thống kê (p< 0,05) Tổng số 70 chuột béo phì tiêm màng bụng STZ chúng tơi thu 51 chuột có glucose huyết đạt từ 17.82 mmol/l trở lên, đạt hiệu gây ĐTĐ type 68.92% Thông thường việc tiêm STZ liều thấp đơn hay nuôi béo đơn không gây tượng kháng insulin Theo nhiều nghiên cứu, chuột gây béo phì nồng độ glucose huyết có tăng so với chuột bình thường khơng gây tượng kháng insulin ĐTĐ type Tuy nhiên việc kết hợp yếu tố nuôi béo tiêm STZ liều đơn thấp có hiệu [45,57] Như việc xây dựng mơ hình chuột béo phì ĐTĐ mô theo type thành công 3.8.2 Kết thử dung nạp glucose đường uống Để có sở khẳng định thêm kết xây dựng mơ hình chuột ĐTĐ type2, qua tham khảo tài liệu tiến hành phép thử dung nạp glucose theo đường uốngtheo phương pháp mô tả Nakamura Kết thể bảng 3.8.2 hình 3.8.2 Bảng 3.8.2 Nồng độ glucose huyết chuột sau phép thử dung nạp glucose theo đường uống (mmol/l) Nồng độ glucose huyết (mmol/l) Lô chuột giờ giờ 10 Lô thường 5,32 ± 6,7 ± 7,3 ± 7,2 ± 6,4 ± 5,41 ± +đệm 0,21 0,22 0,25 0,14 0,3 0,16 Lô thường 7,12 ± 13,5 ± 14,52 ± 8,9 ± 7,3 ± 6,23 ± + STZ 0,12 0,19 0,11 0,17 0,15 0,21 7,51 ± 10,98 ± 12,34 ± 11,01 ± 9,87 ± 7,32 ± 0,32 0,25 0,21 0,32 0,21 0,5 17,82 ± 25,67 ± 25,92 ± 25,34 ± 24,52 ± 25,12 ± 0,23 0,16 0,12 0,3 0,26 0,16 Lơ béo + đệm Lơ béo + STZ Hình 3.8.2 Nồng độ glucose huyết chuột sau phép thử dung nạp glucose theo đường uống (mmol/l) Lô thường +đệm Lô thường + STZ Lô béo + đệm Lô béo + STZ Nồng độ Glucose huyết(mmol/l) 30 25 25.67 25.92 13.5 14.52 12.34 25.34 24.52 25.12 20 17.82 15 10.98 10 7.51 7.12 5.32 6.7 11.01 8.9 7.2 7.3 9.87 7.3 6.4 7.32 6.23 5.41 Thời gian(giờ) 0 giờ giờ 10 Nồng độ glucose huyết (mmol/l) Theo bảng hình 3.8.2 cho thấy rằng, lô chuột thường chuột béo phì tiêm đệm, chuột thường tiêm STZ , sau cho uống glucose, nồng độ glucose tăng sau cho uống sau thời gian lại giảm Điều cho thấy q trình điều hồ trao đổi glucose trì bình thường tăng nhẹ nồng độ glucose sau uống trình sinh lý Ở chuột thường tiêm STZ ban đầu có thay đổi tăng đường huyết sau chuột có khả điều chỉnh sau 10 thử nghiệm Trong chuột béo phì tiêm STZ, nồng độ glucose huyết chuột sau phép thử dung nạp tiếp tục tăng Điều cho thấy rằng, lơ chuột có biểu kháng insulin nhiễm độc cộng gộp mỡ máu chất độc STZ làm khả điều hồ lượng đường máu Như vậy, kết giúp chúng tơi có thêm sở khẳng định mơ hình chuột ĐTĐ mơ theo type thành cơng chứng minh trạng thái béo phì mỡ máu yếu tố nguy hiểm chuột bị nhiễm chất độc( STZ từ xạ khuẩn streptomyces chromogens SIGMA) tạo bệnh lý ĐTĐ type vĩnh viễn 3.8.3 Tác dụng phân đoạn dịch chiết vỏ cành sắn thuyền lên số số glucose máu chuột ĐTĐ typ Với mơ hình thí nghiệm phần phương pháp nghiên cứu thu kết thể bảng hình 3.7.2.4.1 Bảng 3.8.3.1 Chỉ số glucose (mmol/l) chuột ĐTĐ trước sau 21 ngày sắn thuyền Lô chuột Trước ĐT Sau 21 ngày % thay đổi ĐTĐ Không ĐT 17,81 ± 0,25 19,02 ± 0,19  6,79 % ĐTĐ+ Met 17,78 ± 0,15 10,98 ± 0,31 38,24 % ĐTĐ+ Ethanol 18,01 ± 0,34 15,35 ± 0,21  14,76 % ĐTĐ+chloroform 17,82 ± 0,19 16,01 ± 0,17 10,15 % ĐTĐ+Ethylacetat 18,25 ± 0,11 14,89 ± 0,15  18,41 % Trước ĐT Sau 21 ngày Nồngđộ Glucose huyết (mmol/l) 25 20 19.02±0.19 17.78±0.15 17.81±0.25 18.01±0.34 17.82±19 18.25±0.11 16.01±0,17 15.35±0.21 14.89±0.15 15 10.98±0.31 10 ĐT Không ĐT ĐTĐ+ Met ĐTĐ+ Ethanol ĐTĐ+ chloroform ĐTĐ + Ethylacetat Lô chuột Hình 3.8.3.1 Biểu đồ trình bày số glucose (mmol/l) chuột ĐTĐ trước sau 21 ngày điều trị sắn thuyền Bảng 3.8.3.2 Chỉ số glucose (mmol/l) chuột ĐTĐ trước sau 21 ngày vỏ cành sắn thuyền Lô chuột Trước ĐT Sau 21 ngày % thay đổi ĐTĐ Không ĐT 17,81 19,02  6,79 % ĐTĐ+ Met 17,78 10,98  38,24 % ĐTĐ+ Ethanol 18,83 15,11  19,76 % ĐTĐ+ chloroform 17,76 16,01 9,85 % ĐTĐ + Ethylacetat 18,13 11,98  33,92 % Trước ĐT Nồng độ Glucose huyết(m.mol/l) 25 Sau 21 ngày 20 19.02±0.19 17.78±0.15 17.81±0.25 18.83±0.45 15.11±0.32 17.76±0.21 18.13±0.18 16.01±0.25 15 11.98±0.33 10.98±0.31 10 Lô chuột ĐTĐ Không ĐT ĐTĐ+ Met ĐTĐ+ Ethanol ĐTĐ+ chloroform ĐTĐ + Ethylacetat Hình 3.8.3.2 Biểu đồ trình bày số glucose (mmol/l) chuột ĐTĐ trước sau 21 ngày vỏ cành sắn thuyền Nhìn vào bảng hình cho thấy: Ở lơ chuột thường KĐT nồng độ glucose huyết sau 21 ngày không thay đổi Trong lơ chuột đái tháo đường KĐT nồng độ glucose khơng khơng giảm mà cịn có xu hướng tăng lên Điều cho thấy glucose máu tăng cao biểu bệnh ĐTĐ thực ngày nghiêm trọng Về tác dụng phân đoạn dịch chiết từ vỏ cành sắn thuyền đến khả hạ đường huyết cho thấy rằng: với liều điều trị 2000mg/kg, phân đoạn ethylacetat có tác dụng mạnh làm giảm 14.76 % , vỏ cành làm giảm 33.92 % Như vậy, phân đoạn ethylacetat vỏ cành cho tác dụng làm giảm đường huyết tốt so với cao Mặc dù khả làm giảm đường huyết chúng thấp so với thuốc Metformin( làm giảm 38.24% ).Tuy nhiên cho rằng, kết tốt metformin loại thuốc nguyên chất qua tinh chế Chúng cho rằng, phân đoạn ethylacetat tinh chế cao liều điều trị tăng lên có khả có hiệu cao điều trị bệnh ĐTĐ cho chuột Kết giải thích vỏ cành sắn thuyền có chứa nhiều hợp chất có tác dụng giảm glucose huyết theo chế Bởi muốn phát triển thực phẩm chức chữa ĐTĐ từ vỏ cành sắn thuyền cần có thêm nhiều nghiên cứu sâu lớp chất phân đoạn Đặc biệt phân đoạn ethylacetat vỏ cành sắn thuyền thể hiệu tốt 3.8.4 Chỉ số GOT máu chuột Khi tiến hành tiêm màng bụng chuột béo phì STZ, ngồi việc gây tăng nồng độ glucose máu chuột tiếp tục xét nghiệm hai số quan trọng để đánh giá chức gan enzym GOT GPT Chúng nhận thấy lô chuột béo phì có tiêm STZ số GOT GPT tăng lên cao so với với lô đối chứng Điều chứng tỏ STZ gây độc cho tế bào gan hay nói cách khác làm rối loạn thẩm thấu màng tế bào gan Khi dẫn tới giải phóng vào huyết ion kim loại, quan trọng đặc hiệu enzym GOT GPT, coi tiêu sinh học đáng tin cậy tổn thương tế bào gan Sự hủy tế bào gan gây tăng cao hoạt tính GOT, GPT Chính ngồi việc nghiên cứu tác dụng hạ glucose lipid dịch chiết vỏ cành sắn thuyền định khảo sát tác dụng phân đoạn dịch chiết vỏ cành sắn thuyền tới enzym GOT GPT gan Bảng 3.8.4 Chỉ số GOT trước sau 21 ngày điều trị vỏ cành sắn thuyền Lô chuột Lá sắn thuyền Vỏ cành sắn thuyền GOT GOT sau % thay GOT GOT sau % thay trước 21 ngày đổi trước 21 ngày đổi ĐT ĐT ĐT ĐT Lô chuột BT 151,50 154,24  1,79 151,50 154,24  1,79 ĐTĐ không ĐT 249,13 250,32  0,48 249,13 250,32  0,48 ĐTĐ + Met 258,16 243,23  3,58 258,16 243,23  358 ĐTĐ + Ethanol 240,19 218,38  9,08 265,16 233,3  11,98 ĐTĐ + Chloroform 235,5 230,48  2,13 245,11 234,83  3,275 ĐTĐ + Ethyl acetat 260,11 227,36  12,59 268,23 199,40  25,66 Dựa vào kết bảng : Chúng nhận thấy lô chuột bình thường số GOT tương đối ổn định , cịn ĐTĐ typ khơng điều trị Chỉ số GOT thay đổi rõ nghĩa chuột ĐTĐ có số GOT có hoạt tính cao gấp đơi chuột khỏe bình thường Khi chuột ĐTĐ khơng điều trị số GOT tăng cao bền vững, khơng giảm Trong lô điều trị metformin cao phân đoạn dich chiết vỏ cành sắn thuyền số GOT giảm mức độ khác Giảm tốt lô điều trị cao ethylacetat vỏ cành sắn thuyền giảm 25.66% cao hẳn ethylacetat sắn thuyền(giảm 12.59% ) Cao nhiều so với điều trị metformin giảm3.58% Như lô điều trị cao phân đoạn vỏ cành sắn thuyền giúp cho hoạt độ enzyme GOT dần phục hồi lại Từ kết cho thấy việc điều trị phân đoạn ethylacetat vỏ cành sắn thuyên có hiệu có ý nghĩa thực tiễn quan trọng việc bảo vệ tránh tổn thương gan bệnh ĐTĐ typ 3.8.5 Chỉ số GPT máu chuột Cũng giống GOT, GPT môt số sinh học quan trọng việc đánh giá chức gan Sự phục hồi hoạt độ GPT dù hay nhiều có ý nghĩa sinh học quan trọng Bảng 3.8.5 Chỉ số GPT trước sau 21 ngày điều trị Lô chuột Lá sắn thuyền Vỏ cành sắn thuyền GOT GOT sau % thay GOT GOT sau % thay trước 21 ngày đổi trước 21 ngày đổi ĐT ĐT ĐT ĐT Lô chuột BT 47,50 45,97  3,22 47,50 45,97  3,22 ĐTĐ không ĐT 75,01 74,65  0,048 75,01 74,65  0,048 ĐTĐ + Met 76,62 71,33  6,81 76,62 71,3  6,81 ĐTĐ + Ethanol 76,12 69,97  8,08 74,55 66,32  11,04 ĐTĐ + Chloroform 74,01 71,32  3,63 75,13 70,52  6,24 ĐTĐ + Ethyl acetat 74,68 66,53  10,91 76,39 53,16  30,41 Kết bảng cho thấy lơ chuột BTchỉ số GPT trì mức ổn định mức bình thường, lơ chuột ĐTĐ khơng điều trị số GPT trì tương đối ổn định mức cao so với lô chuột khỏe Ở lô điều trị metformin giảm hoạt độ GPT mức thấp (giảm 6,81%) Trong lơ chuột điều trị cao phân đoạn vỏ cành sắn thuyền giảm hoạt độ GPT tốt tốt lô điều trị cao ethylaceta vỏ cành (giảm 30,41%) tiếp đến lô điều trị cao cao cồn vỏ cành (giảm 11,04%%) cao ethylaceta (giảm 10,93%) tốt điều trị Meforrmin (giảm 6,81%) Như vậy, lô chuột gây ĐTĐ type cho sử dụng cao phân đoạn ethylacetat từ vỏ cành sắn thuyềnthì số GOT GPT giảm gần tương đương với lô đối chứng (lô chuột khỏe) Điều chứng tỏ tác dụng hạ glucose lipid máu cao phân đoạn vỏ cành sắn thuyền thể tác dụng bảo vệ gan thông qua việc làm phục hồi hạ thấp dần hoạt độ emzym GOT GPT Trong phân đoạn ethylacetat vỏ cành có tác dụng tốt KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu q trình thực nghiệm, chúng tơi đưa kết luận sau: Kết phân tích thành phần hoá học hợp chất tự nhiên cho thấy thành phần vỏ cành sắn thuyền có mặt hầu hết hợp chất thiên nhiên quan trọng thường gặp flavonoid, tanin, ankanoid, glycoside, saponin polyphenol Xác định thành phần hoá học vỏ cành sắn thuyền với phương pháp tách chiết EtOH 700 Chúng tạo mơ hình chuột béo phì thực nghiệm chế độ ăn giàu lipid chlolesteron cao Sau tuần ni, trọng lượng thể chuột béo phì tăng lên so với chuột bình thường 42,9% Kết phân tích số tiêu hố sinh cho thấy, lô chuột nuôi chế độ ăn giàu lipid chlolesteron, nồng độ chlolesteron toàn phần, triglyceride, LDLc cao cách có ý nghĩa(P