Nghiên cứ thu nhận enzyme protease có trong phụ phẩm của ngành chế biến thủy sản

- 59 - ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRẦN QUỐC HIỀN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU THU NHẬN ENZYME PROTEASE CÓ TRONG PHỤ PHẨM CỦA NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM MÃ SỐ NGÀNH: 2.11.00 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 09 năm 2005 - 60 - LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cám ơn: - Thầy Tiến só Lê Văn Việt Mẫn - Thầy Cô Bộ Môn Công Nghệ Thực Phẩm, Trường Đại Học Bách Khoa Thành Phố Hồ Chí Minh - Các đồng nghiệp Trung Tâm Công Nghệ Sau Thu Hoạch, Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản II - Các thành viên gia đình bạn lớp cao học thực phẩm K14 Đã tận tình hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ động viên suốt thời gian khóa học Trần Quốc Hiền - 61 - TÓM TẮT Chế biến phụ phẩm ngành thủy sản thành sản phẩm giá trị gia tăng mang lại hiệu kinh tế cao cho nhà sản xuất giảm lượng phế liệu thủy sản gây ô nhiễm môi trường Nghiên cứu khảo sát trình trích ly tinh enzyme protease từ dày ruột cá Basa (Pangasius bocourti) Dịch trích ly protease acid thu từ dày có tổng hoạt tính cao 98,7796UI/gCKNT điều kiện: tỷ lệ nội tạng/dung môi: 1/3(w/w); pH 4,0; nhiệt độ 45oC; thời gian trích ly 10 phút Dịch trích ly protease kiềm thu từ ruột có tổng hoạt tính cao 15,7795UI/g CKNT điều kiện trích ly: tỷ lệ nội tạng/dung môi: 1/1(w/w); pH 9,5; nhiệt độ 35oC; thời gian trích ly 10 phút Dung môi isopropanol tác nhân thích hợp để kết tủa portease từ nội tạng cá Basa Với tỷ lệ thể tích dịch trích ly enzyme thể tích isopropanol: 15/85, mức tinh chế phẩm protease acid 1,44 lần hiệu suất thu hồi enzym 89,53% Trong đó, chế phẩm protease kiềm đạt mức tinh 1,65 lần hiệu suất thu hồi enzyme 90,42% Chế phẩm protease acid thu có Topt= 55oC pHopt 2,0 Chế phẩm protease kiềm thu có Topt= 55oC pHopt 10,0 Sử dụng chế phẩm protease để thủy phân protein cá nục (Protein:21,83%, độ ẩm 74,30%) với hàm lượng chế phẩm protease bổ sung 10UI/g protein cá nục Sau 15 phản ứng, hàm lượng N-amin mẫu thủy phẩn chế phẩm protease kiềm acid đạt 193,26mg/gNtổng 140,95mg N-amin/g N-tổng tương ứng - 62 - ABSTRACT EXTRACTION AND PURIFICATION OF PROTEASE FROM STOMACH AND INTESTINE OF BASA CATFISH (Pangasius bocourti) Tranformation of fish by-products to food and products with bioactivity brings about economic effects and reduces waste ratio in fishsery industry This study, focussed on the extraction and purification of protease from stomach and intestine of Basa catfish (Pangasius bocourti) Optimal conditions for protease extraction from Basa catfish stomach were as follows: stomach and puffer ratio-1/3(w/w); pH 4,0; temperature- 45oC; extraction time-10 minutes Optimal conditions for protease extraction from Basa catfish intestine were as follows: intestine and puffer ratio-1/1(w/w); pH 9,5; temperature- 35oC; extraction time-10 minutes Isopropanol was a suitable precipitating agent for protease purification The optimal ratio of enzyme extract and isopropanol was 15/85(v/v) The acid protease recovery yield was 89,53% and the purity degree was 1,44; the alkaline protease recovery yield was 90,42% and the purity degree was 1,65 The pHopt and Topt of the acid protease were 2,0 and 55oC The pHopt and Topt of the alkaline protease were 2,0 and 55oC Proteolysis of Laying scad (Decapterus macrosoma) was carried out by the two produced proteases above The exoenzyme dose was 10 UI/g fish protein After 15 hours, the free amino nitrogen content in the two samples catalyzed by the acid and alkaline proteases was 140,95 and 193,26mg amino-nitrogen/g totalnitrogen respectively - 63 - MỘT SỐ CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN CKNT: Chất khô nội tạng CP: Chế phẩm HTR: Hoạt tính riêng HS: Hiệu suất KT: Kết tủa M: Mẫu thí nghiệm N-amin: Nitơ amin N-tổng Nitơ tổng OD0: Độ hấp thu mẫu trước phản ứng OD1: Độ hấp thu mẫu sau phản ứng OD0: Trung bình độ hấp thu mẫu trước phản ứng OD1: Trung bình độ hấp thu mẫu sau phản ứng pHopt: pH tối thích THT: Tổng hoạt tính TN: Thí nghiệm Topt: Nhiệt độ tối thích Vm: Thể tích mẫu Vdm: Thể tích dung môi V/V: Tỷ lệ tính theo thể tích W/W: Tỷ lệ tính theo khối lượng - 64 - DANH MỤC BẢNG Bảng1.1: Nguồn protease động vật, thực vật vi sinh vật Bảng1.2: Sự phân bố hệ enzyme protease hệ tiêu hóa loài cá 10 Bảng1.3: Hoạt tính enzyme protease có hệ tiêu hóa Brazilian catfish .12 thay đổi theo mức protein (%) có phần Bảng 1.4: Hoạt tính enzyme protease có hệ tiêu hóa South American catfish .13 thay đổi theo mức protein (%) có phần Bảng 3.1: Ma trận qui hoạch thực nghiệm trình trích ly enzyme protease 34 từ dày cá Basa Bảng 3.2: Ma trận qui hoạch thực nghiệm trình trích ly enzyme protease 36 từ ruột cá Basa Bảng 3.3: Các mẫu dịch chiết từ dày cá Basa với nồng độ protease khác 48 Bảng 3.4: Các mẫu dịch chiết từ ruột cá Basa với nồng độ protease khác 49 - 65 - DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cơ chế khái quát thủy phân protein hệ enzyme protease Hình 1.2: Hệ tiêu hoá cá Basa 12 Hình 2.1: Caù Basa (Pangasius bocourti) 18 Hình 3.1: nh hưởng tỷ lệ nội tạng/dungmôi (w/w) đến tổng hoạt tính protease .27 dịch trích Hình 3.2: nh hưởng pH dung môi đến trình trích protease acid từ dày .28 Hình 3.3: nh hưởng pH dung môi đến trình trích protease kiềm từ ruột 29 Hình 3.4: nh hưởng nhiệt độ đến tổng hoạt độ protease dịch trích từ nội tạng cá 31 Hình 3.5: nh hưởng thời gian trích đến trình trích protease từ nội tạng cá .32 Hình 3.6: Tổng hoạt tính protease dịch trích thu từ dày cá Basa 35 thí nghiệm tối ưu hóa qui hoạch thực nghiệm Hình 3.7: Tổng hoạt tính protease dịch trích thu từ ruột cá Basa 37 thí nghiệm tối ưu hóa qui hoạch thực nghiệm Hình 3.8: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease acid dịch trích từ 39 dày cá Basa (tác nhân kết tủa (NH4)2SO4) Hình 3.9: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease kiềm dịch trích ruột 39 cá Basa (tác nhân kết tủa (NH4)2SO4) Hình 3.10: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease acid dịch trích 41 từ dày cá Basa (tác nhân kết tủa: ethanol) Hình3.11: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease kiềm dịch trích .42 từ ruột cá Basa (tác nhân kết tủa: ethanol) Hình 3.12: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease acid dịch trích .43 từ dày cá Basa (tác nhân kết tủa: aceton) Hình 3.13: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease kiềm dịch trích 44 từ ruột cá Basa (tác nhân kết tủa: aceton) Hình 3.14: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease kiềm dịch trích 44 từ ruột cá Basa (tác nhân kết tủa: isopropanol) - 66 - Hình 3.15: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease kiềm dịch trích 45 từ ruột cá Basa (tác nhân kết tủa: isopropanol) Hình3.16: Tổng hoạt tính protease khác mẫu dịch diết .46 từ dày cá Basa Hình3.17: Tổng hoạt tính protease khác mẫu dịch diết .46 từ dày cá Basa Hình 3.18: nh hưởng nồng độ protease acid ban đầu dịch trích từ dày 49 Cá Basa đến hiệu suất thu hồi enzyme độ tinh chế phẩm (Vmẫu/Visopropanol 15/85) Hình 3.19: nh hưởng nồng độ protease acid ban đầu dịch trích từ ruột 50 cá Basa đến hiệu suất thu hồi enzyme độ tinh chế phẩm (Vmẫu/Visopropanol 15/85) Hình 3.20: nh hưởng pH đến hoạt tính chế phẩm protease acid có nguồn goác 51 từ dày cá Basa Hình 3.21: nh hưởng pH đến hoạt tính chế phẩm protease kiềm có nguồn gốc 52 từ ruột cá Basa Hình 3.22: nh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính chế phẩm protease giá trị 53 nhiệt độ khác Hình 3.24: Sự biến đổi hàm lượng N-amin dịch thủy phân protein cá nục .55 theo thời gian - 67 - DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục 1: nh hưởng tỷ lệ nội tạng /dung môi (w/w) đến hoạt tính 62 protease acid chiết từ dày cá Basa Phụ lục 2: nh hưởng tỷ lệ nội tạng /dung môi (w/w) đến hoạt tính 62 protease kiềm chiết từ ruột cá Basa Phụ lục 3: nh hưởng pH đến hoạt tính protease acid chiết từ dày cá Basa 63 Phụ lục 4: nh hưởng pH đến hoạt tính protease kiềm chiết .63 từ ruột cá Basa Phụ lục 5: nh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính protease acid chiết 64 từ dày cá Basa Phụ lục 6: nh hưởng pH đến hoạt tính protease kiềm chiết 64 từ ruột cá Basa Phụ lục 7: nh hưởng thời gian đến hoạt tính protease acid chiết 65 từ dày cá Basa Phụ lục 8: nh hưởng thời gian đến hoạt tính protease kiềm chiết 65 từ ruột cá Basa Phụ lục 9: Tối ưu hóa điều kiện chiết protease acid (pH, ToC) từ dày cá 66 phương pháp qui hoạch thực nghiệm Phụ lục 10: Tối ưu hóa điều kiện chiết protease kiềm (pH, ToC) từ ruột cá 67 phương pháp qui hoạch thực nghiệm Phụ lục11: Tinh protease acid từ dịch chiết nội tạng cá Basa 68 tác nhân(NH4)2SO4 Phụ lục12: Tinh protease kiềm từ dịch chiết nội tạng cá Basa 68 tác nhân(NH4)2SO4 Phụ lục13: Tinh protease acid từ dịch dày tạng cá Basa .69 tác nhân Ethanol Phụ lục 14: Tinh protease kiềm từ dịch chiết ruột cá Basa 70 - 68 - tác nhân ethanol Phụ lục15: Tinh protease acid từ dịch chiết dày cá Basa 71 tác nhân Acetone Phụ lục 16: Tinh protease kiềm từ dịch chiết ruột cá Basa 72 tác nhân Acetone Phụ lục17: Tinh protease acid từ dịch chiết dày cá Basa 73 tác nhân Isopropanol Phụ lục 18: Tinh protease kiềm từ dịch chiết ruột cá Basa 74 tác nhân Isopropanol Phụ lục 19: nh hưởng pH môi trường đến hoạt tính chế phẩm protease acid 75 Phụ lục 20: nh hưởng pH môi trường đến hoạt tính chế phẩm protease kiềm 75 Phụ lục 21: nh hưởng nhiệt độ môi trường đến hoạt tính chế phẩm 76 protease acid Phụ lục 22: nh hưởng nhiệt độ môi trường đến hoạt tính chế phẩm 76 protease kiềm Phụ lục 23: Thủy phân protein cá nục chế phẩm Protease acid thu nhận 77 Phuï lục 24: Thủy phân protein cá nục chế phẩm Protease kiềm thu nhận 78 Phụ lục 25: Các thông số phương trình hồi qui 78 -5- V VI Phụ lục 6: nh hưởng nhiệt độ trìnhtrích ly protease từ ruột cá Basa To C 20 30 40 50 60 OD1 OD0 0,312 0,319 0,315 0,398 0,398 0,394 0,404 0,409 0,404 0,381 0,389 0,380 0,316 0,312 0,314 0,096 0,097 0,096 0,095 0,097 0,102 0,097 0,103 0,099 0,097 0,095 0,095 0,099 0,103 0,101 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) THT UI/g CKNT gProtein/gCKNT 1,027 0,0594 11,1898 0,1885 1,450 0,0808 15,7801 0,1954 1,489 0,0808 16,2148 0,2007 1,391 0,0737 15,4197 0,2093 0,995 0,0517 10,5132 0,2033 Phụ lục 7: nh hưởng thời gian trích ly đến tổng hoạt tính protease thu nhận từ dày cá Basa Thời gian 10 15 20 VII Thời gian OD1 0.482 0.482 0.491 0.518 0.514 0.514 0.506 0.506 0.510 0.502 0.508 0.504 OD0 0.124 0.121 0.123 0.126 0.121 0.125 0.121 0.119 0.123 0.122 0.122 0.122 Ñvht(UI/ml) UI/mg protein UI/g CK gProtein/gCK 1.788 0.234 87.3525 0.3738 1.942 0.248 92.1392 0.3714 1.916 0.239 91.4059 0.3826 1.896 0.233 89.6263 0.3842 Phụ lục 8: nh hưởng thời gian trích ly đến tổng hoạt tính protease thu nhận từ ruột cá Basa OD1 OD0 THT HTR THT gProtein/gCKNT -6- 10 15 20 0.400 0.396 0.407 0.416 0.412 0.418 0.413 0.415 0.403 0.411 0.405 0.406 0.113 0.112 0.113 0.112 0.113 0.114 0.114 0.112 0.114 0.112 0.113 0.111 (UI/ml) (UI/mg protein) UI/g CKNT 1.395 0.078 14.8055 0.1903 1.452 0.079 15.7872 0.1986 1.441 0.078 15.4263 0.1989 1.432 0.075 15.4068 0.2052 Phụ lục 9: Tối ưu hóa điều kiện trích ly protease acid (pH, nhiệt độ) từ dày cá phương pháp qui hoạch thực nghiệm pH-T 3,5-35 3,5-45 4,0-35 4,0-45 4,5-35 4,5-45 3,5-40 4,5-40 OD1 OD0 0,398 0,407 0,410 0,427 0,435 0,451 0,475 0,479 0,464 0,490 0,492 0,089 0,091 0,088 0,093 0,091 0,091 0,090 0,091 0,090 0,090 0,089 0,493 0,444 0,446 0,440 0,450 0,460 0,448 0,417 0,422 0,425 0,465 0,467 0,470 0,091 0,088 0,088 0,088 0,091 0,090 0,089 0,090 0,090 0,090 0,081 0,081 0,081 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) THT UI/g CKNT gProtein/gCKNT 1,540 0,1834 78,1213 0,4259 1,701 0,2055 82,9428 0,4035 1,894 0,2338 90,1753 0,3857 1,997 0,2426 98,7796 0,4071 1,751 0,2129 84,7486 0,3980 1,790 0,2115 91,3779 0,4320 1,623 0,1898 77,0987 0,4062 1,916 0,2223 88,9295 0,4001 -7- 4,0-40 4,0-40 4,0-40 4,0-40 0,452 0,454 0,454 0,450 0,090 0,089 0,090 0,090 0,455 0,092 0,454 0,091 0,454 0,453 0,091 0,093 0,464 0,090 0,457 0,093 0,455 0,452 0,094 0,091 1,795 0,2150 88,1482 0,4100 1,786 0,2100 90,7370 0,4321 1,806 0,2096 91,9190 0,4386 1,786 0,2120 90,3820 0,4262 Phụ lục 10: Tối ưu hóa điều kiện trích ly protease kiềm (pH, nhiệt độ) từ nội tạng cá phương pháp qui hoạch thực nghiệm pH-T 8,5-35 8,5-45 9,0-35 9,0-45 9,5-35 9,5-45 8,5-40 9,5-40 OD1 OD0 0,496 0,506 0,518 0,512 0,504 0,483 0,521 0,521 0,525 0,514 0,524 0,499 0,557 0,557 0,560 0,522 0,494 0,499 0,474 0,467 0,473 0,512 0,482 0,522 0,109 0,106 0,107 0,118 0,118 0,117 0,112 0,108 0,111 0,112 0,117 0,119 0,107 0,114 0,113 0,106 0,113 0,112 0,108 0,112 0,106 0,112 0,112 0,116 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) THT UI/g CKNT gProtein/gCKNT 1,3231 0,0724 13,6161 0,1881 1,2617 0,0690 13,5490 0,2009 1,3679 0,0748 14,4855 0,1940 1,3125 0,0718 14,0125 0,1995 1,4907 0,0815 15,7796 0,1947 1,3066 0,0715 13,6581 0,1950 1,1932 0,0653 12,6888 0,1954 1,2971 0,0709 13,7048 0,1972 -8- 9,0-40 9,0-40 9,0-40 9,0-40 0,502 0,501 0,515 0,505 0,522 0,499 0,507 0,510 0,505 0,505 0,500 0,515 0,117 0,114 0,113 0,113 0,113 0,114 0,110 0,106 0,115 0,116 0,112 0,109 1,2947 0,0708 14,1111 0,2033 1,3089 0,0716 14,2650 0,2022 1,3148 0,0719 14,0330 0,1987 1,3054 0,0714 14,0985 0,1990 Phụ lục11: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ dày cá Basa tác nhân(NH4)2SO4 Bước TS Dịch Sau tủa Sau TT OD1 OD0 0,799 0,200 0,782 0,200 0,795 0,200 0,691 0,208 0,701 0,202 0,705 0,205 0,671 0,205 0,671 0,200 0,675 0,202 THT UI/ml HTR UI/mg protein HS Thu hoài Tinh saïch 2,005 0,2381 100,0000 1,0000 1,658 0,2908 82,6931 1,2214 1,573 0,3879 78,4547 1,6293 Phụ lục12: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ ruột cá Basa tác nhân (NH4)2SO4 Bước TS OD1 OD0 THT UI/ml HTR (UI/mg protein) HS Thu hoài(%) Tinh Dịch 0,693 0,692 0,694 0,240 0,244 0,246 1,501 0,0817 100,0000 1,0000 0,638 0,240 Sau Tuûa 0,641 0,655 0,238 0,238 1,347 0,1140 89,6992 1,3953 Sau TT 0,584 0,238 1,132 0,1427 75,3882 1,7459 0,585 0,235 -9- 0,576 0,236 Phụ lục13: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ dày cá Basa tác nhân Ethanol Tỷ lệ 100:0 10:90 15:85 20:80 25:75 30:70 35:75 OD1 OD0 0,700 0,124 0,712 0,124 0,722 0,489 0,491 0,494 0,499 0,501 0,504 0,124 0,096 0,096 0,098 0,097 0,095 0,099 0,541 0,545 0,549 0,096 0,095 0,097 0,595 0,591 0,597 0,555 0,558 0,555 0,098 0,098 0,097 0,096 0,098 0,099 0,493 0,485 0,096 0,097 THT UI/ml HTR (UI/mg protein) HS Thu hoài(%) Tinh saïch 1,989 0,2353 100,0000 1,0000 1,307 0,1920 65,6922 0,8159 1,341 0,2020 67,4135 0,8586 1,499 0,2339 75,3672 0,9940 1,668 0,2682 83,8551 1,1400 1,532 0,2673 77,0292 1,1358 1,305 0,2362 65,6328 1,0038 - 10 - 40:60 45:55 50:50 0,495 0,097 0,442 0,096 0,441 0,097 0,444 0,098 0,360 0,096 0,362 0,094 0,363 0,095 0,259 0,094 0,251 0,095 0,256 0,092 1,132 0,2104 56,9075 0,8942 0,853 0,1573 42,8994 0,6686 0,481 0,0920 24,2023 0,3910 Phuï luïc 14: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ ruột cá Basa tác nhân ethanol Tỷ lệ THT UI/ml HTR (UI/mg protein) HS Thu hồi(%) Tinh 1,499 0,0810 100,0000 1,0000 1,199 0,0925 79,9960 1,1412 1,223 0,0985 81,5711 1,2153 0,093 0,095 0,092 1,327 0,1101 88,5016 1,3588 0,444 0,455 0,443 0,092 0,091 0,092 1,168 0,0985 77,9484 1,2164 0,387 0,388 0,388 0,089 0,091 0,091 0,962 0,0814 64,1661 1,0051 OD1 OD0 0,547 0,096 0,546 0,094 0,540 0,096 0,453 0,093 0,458 0,092 0,458 0,091 0,463 0,092 0,468 0,458 0,092 0,092 20:80 0,487 0,502 0,492 25:75 30:70 100:0 10:90 15:85 - 11 - 35:75 0,319 0,316 0,321 0,091 0,092 0,090 0,715 0,0681 47,7061 0,8401 40:60 0,256 0,253 0,257 0,092 0,091 0,092 0,488 0,0485 32,5850 0,5989 45:55 0,237 0,238 0,238 0,089 0,091 0,091 0,431 0,0447 28,7259 0,5512 50:50 0,228 0,228 0,229 0,091 0,090 0,090 0,398 0,0426 26,5208 0,5259 Phuï lục15: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ dày cá Basa tác nhân Acetone Tỷ lệ 100:0 10:90 15:85 20:80 25:75 30:70 OD1 OD0 0,720 0,138 0,715 0,134 0,718 0,540 0,538 0,541 0,575 0,591 0,580 0,505 0,502 0,503 0,416 0,412 0,423 0,387 0,130 0,116 0,118 0,115 0,116 0,115 0,117 0,117 0,118 0,119 0,117 0,115 0,119 0,117 THT UI/ml HTR (UI/mg protein) HS Thu hồi(%) Tinh 1,976 0,2340 100,0000 1,0000 1,408 0,2167 71,2621 0,9263 1,559 0,2821 78,9096 1,2059 1,273 0,2537 64,4510 1,0845 0,971 0,1997 49,1560 0,8534 0,873 0,1961 44,1971 0,8382 - 12 - 35:75 40:60 45:55 50:50 0,389 0,391 0,116 0,117 0,298 0,117 0,303 0,300 0,116 0,118 0,270 0,115 0,270 0,116 0,268 0,115 0,241 0,114 0,237 0,117 0,238 0,112 0,224 0,114 0,231 0,113 0,227 0,095 0,558 0,1407 28,2448 0,6012 0,454 0,1264 22,9872 0,5403 0,349 0,0994 17,6697 0,4249 0,334 0,0992 16,8930 0,4240 VIII IX X XI XII XIII Phụ lục 16: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ ruột cá Basa tác nhân Acetone Tỷ lệ 100:0 10:90 15:85 20:80 OD1 OD0 0,555 0,115 0,552 0,115 0,590 0,117 0,453 0,113 0,457 0,443 0,462 0,453 0,470 0,478 0,111 0,112 0,114 0,114 0,112 0,112 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) HS Thu hồi(%) Tinh 1,503 0,0814 100,0000 1,0000 1,109 0,0997 73,8361 1,2236 1,142 0,1131 76,0361 1,3884 1,184 0,1230 78,7860 1,5100 - 13 - 25:75 30:70 35:75 40:60 45:55 50:50 0,465 0,472 0,423 0,428 0,421 0,391 0,394 0,396 0,365 0,357 0,354 0,329 0,321 0,315 0,231 0,235 0,239 0,211 0,205 0,201 0,111 0,112 0,109 0,112 0,110 0,110 0,113 0,110 0,112 0,111 0,112 0,110 0,110 0,111 0,111 0,112 0,108 0,110 0,111 0,110 1,020 0,1101 67,8648 1,3524 0,910 0,1041 60,5577 1,2778 0,784 0,0912 52,1507 1,1192 0,657 0,0786 43,7437 0,9656 0,350 0,0437 23,3155 0,5371 0,246 0,0331 16,4013 0,4068 XIV XV XVI XVII Phụ lục17: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly từ dày cá Basa tác nhân Isopropanol Tỷ lệ 100:0 10:90 15:85 20:80 OD1 OD0 0,721 0,124 0,725 0,124 0,713 0,585 0,570 0,586 0,652 0,653 0,651 0,506 0,124 0,117 0,115 0,119 0,117 0,115 0,116 0,118 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) HS Thu hồi(%) Tinh 2,018 0,2384 100,0000 1,0000 1,550 0,2478 76,7802 1,0395 1,807 0,3444 89,5306 1,4448 1,265 0,2657 62,6845 1,1146 - 14 - 25:75 30:70 35:75 40:60 45:55 50:50 0,501 0,495 0,472 0,461 0,453 0,361 0,363 0,373 0,118 0,117 0,116 0,118 0,119 0,116 0,117 0,117 0,282 0,116 0,272 0,272 0,117 0,118 0,231 0,116 0,244 0,114 0,247 0,115 0,236 0,114 0,232 0,115 0,230 0,112 0,239 0,114 0,226 0,113 0,222 0,115 1,128 0,2150 55,8999 0,9021 0,791 0,1616 39,1723 0,6777 0,470 0,1337 23,2635 0,5609 0,354 0,1281 17,5316 0,5375 0,330 0,1460 16,3619 0,6125 0,316 0,1583 15,6600 0,6639 Phụ lục 18: Hiệu suất thu hồi mức tinh protease dịch trích ly ruột cá Basa tác nhân Isopropanol Tỷ lệ 100:0 10:90 15:85 OD1 OD0 0,561 0,116 0,560 0,576 0,114 0,116 0,496 0,112 0,501 0,491 0,521 0,520 0,112 0,112 0,113 0,115 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) HS Thu hồi(%) Tinh 1,504 0,0815 100,0000 1,0000 1,269 0,1140 84,3768 1,3982 1,360 0,1343 90,4220 1,6481 - 15 - 20:80 25:75 30:70 35:75 40:60 45:55 50:50 XVIII 0,528 0,501 0,498 0,493 0,460 0,458 0,471 0,425 0,436 0,426 0,403 0,404 0,401 0,356 0,355 0,346 0,276 0,271 0,282 0,216 0,214 0,217 0,112 0,112 0,113 0,111 0,109 0,111 0,111 0,111 0,112 0,110 0,112 0,111 0,112 0,109 0,111 0,111 0,111 0,110 0,110 0,109 0,112 0,110 1,273 0,1326 84,6908 1,6263 1,158 0,1311 76,9970 1,6078 1,035 0,1247 68,8321 1,5295 0,026 0,1173 1,7288 1,4392 0,766 0,1017 50,9322 1,2478 0,497 0,0719 33,0322 0,8825 0,282 0,0409 18,7437 0,5021 Phụ lục 19: nh hưởng pH môi trường đến hoạt tính chế phẩm protease có nguồn gốc từ dày cá Basa pH 1,5 2,0 2,5 OD1 OD0 0,724 0,742 0,731 0,750 0,771 0,757 0,737 0,736 0,111 0,111 0,110 0,113 0,109 0,110 0,108 0,110 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) 2,133 0,405 2,229 0,423 2,159 0,410 - 16 - 3,0 3,5 4,0 0,740 0,108 0,683 0,688 0,615 0,635 0,618 0,621 0,534 0,537 0,541 0,112 0,109 0,108 0,103 0,107 0,106 0,110 0,110 0,110 1,885 0,358 1,767 0,335 1,438 0,273 XIX XX XXI Phụ lục 20: nh hưởng pH môi trường đến hoạt tính chế phẩm protease có nguồn gốc từ dày cá Basa pH OD1 OD0 8,5 0,873 0,903 0,129 0,126 0,886 0,127 0,895 0,128 0,911 0,905 0,915 0,921 0,907 0,928 0,929 0,930 0,905 0,900 0,891 0,879 0,869 0,872 0,128 0,127 0,122 0,128 0,121 0,120 0,120 0,126 0,127 0,134 0,130 0,126 0,123 0,123 9,5 10 10,5 11 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) 5,256 0,518 5,370 0,530 5,475 0,540 5,592 0,551 5,315 0,524 5,179 0,511 XXII XXIII Phụ lục 21: nh hưởng nhiệt độ môi trường đến hoạt tính chế phẩm protease có nguồn gốc từ dày cá Basa XXIV To C OD1 OD0 THT HTR - 17 - 35 45 50 55 60 65 70 0,614 0,614 0,620 0,779 0,790 0,785 0,780 0,801 0,128 0,127 0,129 0,128 0,122 0,124 0,120 0,126 0,795 0,820 0,834 0,826 0,823 0,830 0,827 0,788 0,762 0,770 0,627 0,624 0,620 0,122 0,127 0,127 0,127 0,127 0,129 0,130 0,129 0,128 0,127 0,127 0,123 0,130 (UI/ml) (UI/mg protein) 1,655 0,281 2,270 0,386 2,303 0,392 2,412 0,410 2,406 0,409 2,218 0,377 1,687 0,287 XXV XXVI Phụ lục 22: nh hưởng nhiệt độ môi trường đến hoạt tính chế phẩm protease có nguồn gốc từ dày cá Basa XXVII To C 35 45 50 55 60 OD1 0,688 0,681 0,678 0,849 0,884 0,857 0,903 0,921 0,917 0,981 0,973 0,980 0,866 0,903 0,891 OD0 0,117 0,119 0,119 0,117 0,117 0,118 0,115 0,117 0,118 0,119 0,114 0,117 0,116 0,116 0,118 THT (UI/ml) HTR (UI/mg protein) 1,927 0,1837 2,578 0,2458 2,760 0,2631 2,990 0,2851 2,664 0,2539 - 18 - 0,869 0,879 0,872 0,724 0,735 0,731 65 70 0,118 0,118 0,118 0,115 0,117 0,118 2,611 0,2489 2,103 0,2005 Phụ lục 23: Thủy phân protein cá nục chế phẩm Protease acid thu nhận Cá nục (đệm pH 2,0) Thời gian giờ giờ 12 15 OD 0,576 0,569 0,560 0,595 0,573 0,578 0,594 0,585 0,574 0,611 0,605 0,610 0,635 0,627 0,630 0,644 0,640 0,643 Cá nục (đệm pH 2,0) + chế phẩm proease acid mg NOD P,loãng amin/g Ntổng CP protease acid P,loãng mg Namin/g Ntổng 500 110,7339 0,576 0,569 0,560 500 110,7339 0,0 500 113,4633 0,511 0,526 0,515 1000 201,7125 88,2492 500 113,9182 0,572 0,574 0,580 1000 224,3272 110,4090 500 118,6621 0,607 0,600 0,615 1000 236,8043 118,1422 500 122,9511 0,651 0,669 0,660 1000 257,3394 134,3884 500 125,2255 0,683 0,685 0,680 1000 266,1774 140,9518 mg N-amin/g Ntoång Phụ lục 24: Thủy phân protein cá nục chế phẩm Protease kiềm thu nhận Cá nục (đệm pH 10,0) Thời gian 0giờ OD 0,632 0,627 0,620 0,670 0,670 0,664 CP protease Cá nục (đệm pH 10,0) + chế phẩm kiềm proease acid mg N-amin/g mg N-amin/g OD Pha loãng Ntổng Ntổng Pha loãng mg N-amin/g Ntổng 500 122,1063 0,632 0,627 0,620 500 122,1063 0,0 500 130,2294 0,631 0,628 0,630 1000 245,5122 115,2829 - 19 - giờ 12 15 0,679 0,704 0,685 0,726 0,700 0,694 0,746 0,740 0,740 0,754 0,759 0,741 500 134,3884 0,692 0,704 0,690 1000 271,1162 136,7278 500 137,7676 0,803 0,814 0,807 1000 315,0459 177,2783 500 144,6560 0,843 0,854 0,847 1000 330,6422 185,9862 500 146,4755 0,863 0,874 0,877 1000 339,7401 193,2645 Phụ lục 25: Các thông số phương trình hồi qui a Đối với điều kiện trích ly dịch enzym từ dày Basa b0=86,7024 b1=4,4822 b2=3,3425 b12=0,4520 b11=-8,4979 b22=2,9654 (sb0)2=0,0720 (sb1)2=0,1079 (sb2)2=0,1079 (sb12)2=0,1619(sb11)2=0,3238 (sb22)2=0,3238 t1=13,6433 t2=10,1743 t12=-1,1233 t11=14,9341 (Sth)2=0,6476 (Sdư)2=3,0082 F=4,6452 F0,95(9-2,3-1)=19,3 t22=5,2114 tp(f)=4,3 b Đối với điều kiện trích ly dịch enzym từ ruột Basa b0=13,9562 b1=0,5481 b2=-0,4436 b12=-0,5136 b11=-0,3703 b22=0,6819 (sb11)2=0,007 (sb0)2=0,0016 (sb1)2=0,0024 (sb2)2=0,0024 (sb12)2=0,0036 (sb22)2=0,0072 t1=11,2215 t2=9,0819 t12=8,5853 t11=4,3769 tp(f)=4,3 (Sth)2=0,0134 (Sdö)2=0,0614 F=4,2861 F0,95(9-2,3-1)=19,3 t22=8,0606 ... chế biến phụ phẩm thủy sản Một số phụ phẩm có giá trị dinh dưỡng cao dùng để chế biến thành bột cá, dầu cá… Ngoài sản phẩm như: chế phẩm enzyme, peptide có hoạt tính sinh học, màng sinh học chế. .. protease kiềm Phụ lục 23: Thủy phân protein cá nục chế phẩm Protease acid thu nhận 77 Phụ lục 24: Thủy phân protein cá nục chế phẩm Protease kiềm thu nhận 78 Phụ lục 25:... lượng thủy sản đánh bắt trở thành phụ phế phẩm Để giải lượng lớn phụ phế phẩm nay, Việt Nam giới có xu hướng phải cố gắng tận thu phần phụ phẩm để chế biến thành sản phẩm có giá trị gia tăng Có