TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO MÔ SẸO TỪ CUỐNG LÁ NON, PHIẾN LÁ NON VÀ ĐẾ HOA NON CỦA HOA ĐỒNG TIỀN (Gerbera jamsonii Bolus) BẰNG NUÔI CẤY IN VITRO Chủ nhiệm đề tài: Trương Thị Hằng An Giang, Tháng 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO MÔ SẸO TỪ CUỐNG LÁ NON, PHIẾN LÁ NON VÀ ĐẾ HOA NON CỦA HOA ĐỒNG TIỀN (Gerbera jamsonii Bolus) BẰNG NUÔI CẤY IN VITRO LÃNH ĐẠO ĐƠN VỊ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI CÁN BỘ HƯỚNG DẪN An Giang, Tháng 2013 CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI Lời cảm tạ Trước hết, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến BGH Phòng Quản lý Khoa học Trường Đại học An Giang cho phép em thực đề tài Xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Hội đồng Khoa học Khoa NN & TNTN hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện cho em thực đề tài nghiên cứu khoa học Em xin cảm ơn thầy cô Bộ môn Công nghệ Sinh học truyền đạt cho em kiến thức bổ ích kinh nghiệm quý báu Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Nguyễn Thị Mỹ Duyên, người tận tình giúp đỡ, dẫn, động viên tơi, giúp tơi có đủ niềm tin nghị lực để hoàn thành nghiên cứu khoa học Cảm ơn thầy phịng thí nghiệm tạo điều kiện thuận lợi để chúng tơi hồn thành tốt nghiên cứu khoa khoa học Lời cảm ơn chân thành đến bạn khóa (2009 – 2013) chia sẻ buồn vui khó khăn q trình học tập Bạn Trần Thị Niệm, Phùng Văn Tặng, Nguyễn Chí Lưu ln giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Cuối cùng, tận đáy lịng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến người thân yêu gia đình tơi, bạn bè tâm giao Họ, người bên lúc động lực để tơi hồn tất tốt khóa luận tốt nghiệp Sinh viên thực Trương Thị Hằng i Tóm lược Đề tài “Khảo sát khả tạo mô sẹo từ cuống non, phiến non đế hoa non hoa Đồng tiền (Gerbera jamsonii Bolus) nuôi cấy in vitro” thực phịng thí nghiệm ni cấy mơ Trường Đại học An Giang, thời gian thực tháng, từ tháng 10/2012 đến tháng 4/2013 Đề tài thực gồm hai thí nghiệm: nghiên cứu thời gian khử trùng thích hợp HgCl2 0,1% cho cuống non phiến non hoa Đồng tiền khảo sát ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến trình tạo mơ sẹo cuống lá, phiến đế hoa non Đồng tiền Sau khoảng thời gian nghiên cứu cho thấy chế độ khử trùng tốt khử trùng HgCl2 0,1% 10 phút thích hợp Vì thời gian 10 phút cho hiệu tạo mẫu in vitro cao hai loại mẫu cấy cuống non (50%) phiến non (62,5%) Môi trường MS + 1,5 mg/l 2,4D thích hợp cho việc tạo mơ sẹo từ mẫu cấy hoa Đồng tiền, tốt phiến non Ở mơi trường này, mẫu cảm ứng hình thành mô sẹo tốt, tỉ lệ phần trăm mẫu tạo mô sẹo đạt cao ba loại mẫu cấy cuống non (66,7%), phiến non (83,3%) đế hoa non (83,3%) ii Mục lục Nội dung Trang Lời cảm tạ i Tóm lược ii Mục lục iii, iv, v Danh sách hình vi Danh sách bảng vii Danh mục từ viết tắt viii Chương Giới thiệu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu Chương Lược khảo tài liệu 2.1 Giới thiệu hoa đồng tiền 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật học 2.1.3 Giá trị 2.1.4 Yêu cầu sinh thái hoa Đồng tiền 2.2 Công nghệ nhân giống in vitro 2.2.1 Giới thiệu lịch sử nuôi cấy mô 2.2.2 Ưu điểm hạn chế phương pháp nuôi cấy mô 2.2.2.1 Ưu điểm phương pháp nhân giống in vitro 2.2.2.2 Hạn chế phương pháp nhân giống in vitro 2.2.3 Ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.4 Quy trình vi nhân giống 2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy 2.3.1 Khoáng đa lượng 2.3.2 Khoáng vi lượng 2.3.3 Cacbon nguồn lượng 10 2.3.4 Vitamin 10 iii 2.3.5 Hợp chất hữu không xác định 11 2.3.6 Than hoạt tính 11 2.3.7 Yếu tố làm đặc môi trường 11 2.4 Các chất điều hòa sinh trưởng 12 2.4.1 Auxin 12 2.4.2 Cytokinin 13 2.5 pH môi trường 13 2.6 Một số vấn đề tạo mẫu in vitro 14 2.6.1 Mẫu bị nhiễm 14 2.6.2 Sự hóa nâu mẫu môi trường nuôi cấy 14 2.6.2.1 Các chất có thành phần phenol 14 2.6.2.2 Phản ứng hóa nâu mẫu cấy 14 2.7 Những nghiên cứu liên quan 15 2.7.1 Nghiên cứu nước 15 2.7.2 Nghiên cứu nước 16 Chương Phương tiện phương pháp nghiên cứu 19 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 3.2 Điều kiện phịng thí nghiệm 19 3.3 Môi trường nuôi cấy 19 3.4 Vật liệu 20 3.5 Phương pháp 20 3.5.1 Thí nghiệm 1: Nghiên cứu thời gian khử trùng thích hợp hóa chất khử trùng cho cuống non phiến non hoa Đồng tiền 20 3.5.1.1 Mục tiêu nghiên cứu 20 3.5.1.2 Vật liệu 20 3.5.1.3 Bố trí thí nghiệm 20 3.5.1.4 Cách tiến hành 21 3.5.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến khả tạo mô sẹo cuống lá, phiến đế hoa non Đồng tiền 22 3.5.2.1 Mục tiêu nghiên cứu 22 3.5.2.2 Vật liệu 22 3.5.2.3 Bố trí thí nghiệm 22 iv 3.6 Xử lý số liệu 23 Chương Kết thảo luận 24 4.1 Thí nghiệm 24 4.2 Thí nghiệm 27 Chương Kết luận kiến nghị 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Kiến nghị 35 Tài liệu tham khảo 36 Phụ chương a Phụ chương a Phụ chương b v Danh sách bảng Tên bảng Trang Bảng Kí hiệu nghiệm thức khử trùng 21 Bảng Môi trường nuôi cấy ký hiệu nghiệm thức tạo mô sẹo 22 Bảng Kết khử mẫu cuống non phiến non hoa Đồng tiền 24 Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến tạo mô sẹo cuống Bảng non, phiến non đế hoa non in vitro hoa Đồng tiền 27 14 ngày sau cấy Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến phần trăm mô sẹo tạo Bảng thành mẫu cuống non, phiến non đế hoa non in vitro 30 hoa Đồng tiền 14 ngày sau cấy Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến tạo mô sẹo cuống Bảng non, phiến non đế hoa non in vitro hoa Đồng tiền 32 28 ngày sau cấy Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến phần trăm mô sẹo tạo Bảng thành mẫu cuống non, phiến non đế hoa non in vitro 33 hoa Đồng tiền 28 ngày sau cấy vi Danh sách hình Tên hình Trang Hình Hoa Đồng tiền màu cam Hình Cuống non in vitro 26 Hình Phiến non in vitro 26 Hình Hình Hình Mơ sẹo cuống non tạo môi trường MS + 1,5 mg/l 2,4D (14 NSKC) Mô sẹo phiến non Đồng tiền tạo môi trường MS + 1,5 mg/l 2,4D (14 NSKC) Mô sẹo phiến non Đồng tiền tạo môi trường MS + 1,5 mg/l 2,4D (14 NSKC) 28 29 30 vii Danh mục từ viết tắt BA: – benzyladenine BAP: – benzylamino purine CĐHTT: Chất điều hòa tăng trưởng GA: Gibberellin IAA: Indolacetic acid IBA: Indol butyric acid Kinetin: – furfurryamino purine NAA: acid – naphtalenacetic TDZ: Thidiazuron (N – phenyl – N1 – 1, 2, – thiadizol – – ylurea) 2,4-D: acid 2,4 – diclorophenoxyacetic NSKC: Ngày sau cấy viii Qua 14 ngày sau cấy, quan sát mẫu tạo mơ sẹo ta thấy có khác tỉ lệ tạo mô sẹo mẫu Kết theo dõi ghi nhận bảng sau: Bảng 5: Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến phần trăm mô sẹo tạo thành mẫu cuống non, phiến non đế hoa non in vitro hoa Đồng tiền 14 ngày sau cấy CĐHTT (mg/l) Phần trăm mô sẹo mẫu cấy (%) Nghiệm thức Phiến Đế hoa 0,0 b 3,3 b 0,0 b 3,3 b 16,7ab 10,0 b 31,7a 25,0a BA TDZ 2,4D Cuống B1 0,0 0,0 0,0 B2 0,0 0,0 0,5 B3 0,0 0,0 1,5 B4 1,0 0,0 0,5 0,0 b 8,3 b 5,0 b B5 1,0 0,0 1,5 6,7 b 10,0 b 8,3 b B6 1,0 0,5 0,0 5,0 b 13,3ab 13,3ab Mức ý nghĩa ** * ** CV% 106,0 67,0 76,1 23,3a Ghi chú: Các số trung bình cột với mẫu tự theo sau giống khác biệt khơng ý nghĩa,* = khác biệt mức ý nghĩa 1%, ** = khác biệt mức ý nghĩa 5% Qua Bảng cho thấy, tỉ lệ % mô sẹo mẫu tạo thành khác nhau, tất mẫu tạo thành mô sẹo khơng hồn tồn, cao đạt 31,7% mẫu cấy phiến non, thấp đạt 3,3% không kể mẫu không tạo mô sẹo Xét cuống non, phần trăm tạo mô sẹo mẫu thấp, cao nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) khác biệt hoàn toàn với nghiệm thức khác mặt thống kê mức ý nghĩa 5%, nghiệm thức cịn lại khơng có khác biệt với mặt thống kê 31 Đối với phiến non, phần trăm tạo mô sẹo mẫu cao so với ba loại mẫu cấy, cao đạt 31,7% nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) khác biệt với tất nghiệm thức khác mức ý nghĩa 1% mặt thống kê ngoại trừ nghiệm thức B2 B6 (1 mg/l BA + 0,5 mg/l TDZ) đạt 13,3% Phần trăm tạo mô sẹo mẫu đế hoa non tốt, cao nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) đạt 25,0% khác biệt với nghiệm thức B1, B2, B4 B5 mức ý nghĩa 5% mặt thống kê Như vậy, ba loại mẫu cấy cuống lá, phiến đế hoa non Đồng tiền phiến non có biểu tốt việc tạo mơ sẹo, phần trăm tạo mô sẹo mẫu cao Đến giai đoạn 28 ngày sau cấy, khơng có tạo thành mô sẹo mẫu chưa tạo mô sẹo Các mơ sẹo tạo thành có tăng kích thước thay đổi màu sắc sau 28 ngày nuôi cấy Kết ghi nhận qua bảng sau: 32 Bảng 6: Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến đặc điểm mô sẹo cuống non, phiến non đế hoa non in vitro hoa Đồng tiền 28 ngày sau cấy Đặc điểm mô sẹo Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) Nghiệm thức Cuống Phiến Đế hoa B1 B2 B3 B4 B5 0,0 16,7 66,7 0,0 16,7 16,7 b 66,7ab 83,3a 16,7 b 16,7 b 0,0 b 33,3ab 83,3a 16,7 b 33,3ab B6 33,3 66,7ab 33,3ab Mức ý nghĩa ns ** ** 140,3 65,0 79,1 CV% Cuống Phiến Đế hoa Không tạo Trắng, Không tạo mô sẹo khối chặt mô sẹo Vàng nhạt, Xanh, Xanh, khối khối rời khối chặt chặt Trắng, Xanh, Xanh, khối khối rời khối chặt chặt Không tạo Xanh, Trắng, khối mô sẹo khối chặt chặt Vàng nhạt, Trắng, Trắng, khối khối rời khối chặt chặt Trắng, Trắng, Xanh, khối khối rời khối chặt chặt Qua 28 ngày theo dõi ghi nhận kết quả, nghiệm thức khơng có tạo thêm mơ sẹo ba loại mẫu cấy so với giai đoạn 14 ngày sau cấy Tuy nhiên, nghiệm thức tạo mơ sẹo có thay đổi kích thước màu sắc mô sẹo Đối với cuống non, nghiệm thức B2 B5 mô sẹo chuyển từ màu trắng sang màu vàng nhạt Các nghiệm thức cịn lại khơng có thay đổi màu sắc Trên phiến non, nghiệm thức B2, B3 B4 mô sẹo phát triển tốt, chuyển từ màu trắng sang màu xanh, theo thực tế thí nghiệm mơ sẹo có màu có khả bật chồi cao Cịn đế hoa non, nghiệm thức B2, B3 B6 màu sắc mô sẹo 33 chuyển từ màu trắng sang màu xanh, nghiệm thức cịn lại khơng có thay đổi màu sắc Ở giai đoạn này, phần trăm tạo mơ sẹo mẫu có thay đổi, nghiệm thức tăng tỉ lệ tạo mô sẹo, nhiên khơng có tạo thành mơ sẹo nghiệm thức chưa tạo mô sẹo mẫu cấy có dấu hiệu bị chết Kết theo dõi ghi nhận bảng sau: Bảng 7: Ảnh hưởng BA, TDZ 2,4D đến phần trăm mô sẹo tạo thành mẫu cuống non, phiến non đế hoa non in vitro hoa Đồng tiền 28 ngày sau cấy CĐHTT (mg/l) Phần trăm mô sẹo mẫu cấy (%) Nghiệm thức Phiến Đế hoa b 5,0 b 0,0 b 5,0 b 28,3a b 18,3 b 48,3a 48,3a BA TDZ 2,4D Cuống B1 0,0 0,0 0,0 0,0 B2 0,0 0,0 0,5 B3 0,0 0,0 1,5 45,0a B4 1,0 0,0 0,5 0,0 B5 1,0 0,0 B6 1,0 0,5 b 15,0 b 8,3 b 1,5 10,0 b 13,3 b 21,7 b 0,0 8,3 b 25,0a b 20,0 b Mức ý nghĩa * ** ** CV% 111,7 70,3 71,5 Ghi chú: Các số trung bình cột với mẫu tự theo sau giống khác biệt khơng ý nghĩa, ** = khác biệt mức ý nghĩa 5%, * = khác biệt mức ý nghĩa 1% So với giai đoạn 14 ngày sau cấy, giai đoạn nghiệm thức có gia tăng phần trăm mẫu tạo mô sẹo rõ rệt Qua Bảng cho thấy, tỉ lệ phần trăm cao đạt 48,3% mẫu cấy phiến non, thấp đạt 5,0% không kể mẫu không tạo mô sẹo 34 Xét cuống non, phần trăm tạo mô sẹo mẫu thấp so với ba loại mẫu cấy, cao nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) đạt 45,0% khác biệt hoàn toàn với nghiệm thức khác mặt thống kê mức ý nghĩa 1%, nghiệm thức cịn lại khơng có khác biệt với mặt thống kê Đối với phiến non, phần trăm tạo mô sẹo mẫu cao so với ba loại mẫu cấy, cao đạt 48,3% nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) khác biệt với tất nghiệm thức khác mức ý nghĩa 5% mặt thống kê ngoại trừ nghiệm thức B2 B6 (1 mg/l BA + 0,5 mg/l TDZ) Phần trăm tạo mô sẹo mẫu đế hoa non tốt, cao nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) đạt 48,3% khác biệt với tất nghiệm thức mức ý nghĩa 5% mặt thống kê Như vậy, ba loại mẫu cấy cuống lá, phiến đế hoa non Đồng tiền phiến non có biểu tốt việc tạo mô sẹo, phần trăm tạo mô sẹo mẫu cao 35 Chương Kết luận kiến nghị 5.1 Kết luận Từ kết thu được, rút số kết luận sau: Sau 14 ngày nuôi cấy thu nhận kết quả, để tạo nguồn nguyên liệu khởi đầu từ cuống non phiến non hoa Đồng tiền cho q trình ni cấy in vitro chế độ khử trùng tốt khử trùng HgCl2 0,1% 10 phút thích hợp Vì thời gian 10 phút cho hiệu tạo mẫu in vitro cao tên hai loại mẫu cấy cuống non (50%) phiến non (62,5%) Môi trường MS + 1,5 mg/l 2,4D thích hợp để tạo mô sẹo từ cuống non, phiến non đế hoa non hoa Đồng tiền in vitro Ở môi trường này, mẫu cảm ứng hình thành mơ sẹo tốt, tỉ lệ phần trăm mẫu tạo mô sẹo đạt cao ba loại mẫu cấy cuống non (66,7%), phiến non (83,3%) đế hoa non (83,3%) Phần trăm tạo mô sẹo mẫu cấy khác nghiệm thức ba loại mẫu cấy Hầu tất nghiệm thức khơng tạo mơ sẹo hồn tồn sau 28 ngày nuôi cấy, cao đạt 83,3% nghiệm thức B3 (1,5 mg/l 2,4D) phiến non đế hoa non 5.2 Kiến nghị Trên sở kết nghiên cứu thu thời gian thực đề tài, chúng tơi có số kiến nghị sau: Tiếp tục nghiên cứu tìm chế độ khừ trùng tốt nhất, đơn giản nhất, độc hại với người sử dụng Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp chất điều hịa sinh trường tới q trình nhân tái sinh mô sẹo thành chồi từ cuống non, phiến non đế hoa non hoa Đồng tiền 36 Tài liệu tham khảo Aswath C., Choudhary M.L (2002), Rapid plant regeneration from Gerbera jamesonii Bolus callus cultures, Acta Bot Croat 61 (2), 125–134, 2002 Bùi Bá Bổng (1995), Nhân giống nuôi cấy mô, An Giang: Khoa học cơng nghệ mơi trường An Giang Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang (2007), Chọn giống trồng phương pháp truyền thống phân tử, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Nông Nghiệp Bùi Trang Việt (2000), Sinh lý thực vật đại cương (phần II: phát triển), Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dương Cơng Kiên (2002), Ni cấy mơ thực vật, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dương Cơng Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật (II), Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dương Tấn Nhựt (2007), Cơng nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa Đặng Phương Trâm (2005), Giáo trình ni cấy mô thực vật ứng dụng, Cần Thơ: Đại học Cần Thơ Đặng Văn Đông Đinh Thế Lộc (2003), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao (tập 6), Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Lao động xã hội Kumar S., Kanwar J.K (2007), plant regeneration from cell suspensionsin Gerbera jamesonii Bolus, Journal of Fruit and Ornamental Plant Research, Vol 15, 2007: 157-166 Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nghị Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Hà Nội: NXB Nơng nghiệp Lê Văn Hịa, Nguyễn Bảo Tồn Đặng Phương Trâm (1999), Sinh lý thực vật, Cần Thơ: Đại học Cần Thơ Mir Imtiyaz Tahir Nazki (2011), In vitro Propagation and Mutagenesis in Gerbera (Gerbera jamesonii Bolus.) Nguyễn Thị Kim Lý ctv (2012), Kỹ thuật trồng chăm sóc hoa Đồng tiền, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 37 Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thủy Tiên (2002), Cơng nghệ tế bào, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Quang Thạch (chủ biên) ctv (2009), Cơ sở công nghệ sinh học tập ba – Công nghệ Sinh học tế bào Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2007), Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật, An Giang: Đại học An Giang Nguyễn Văn Hồng (2009), Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật nhân giống hoa đồng tiền phương pháp nuôi cấy mô Thái Nguyên Nguyễn Văn Uyển ctv (1984), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ cho công tác chọn giống trồng, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Thành phố Hồ Chí Minh Nor Azlina Hasbullah, Azani Saleh and Rosna Mat Taha (2011), Establishment of somatic embryogenesis from Gerbera jamesonii Bolus EX Hook F through suspension, African Journal of Biotechnology ISSN 1684–5315 © 2011 Academic Journals, Vol 10(63), pp 13762-13768, 17 October, 2011 Paduchuri, V.Y Deogirkar, G.V Kamdi, S.R Kale, M.C Rajurkar, MD (2010), in-vitro callus industion and root regeneration studies in Gerbera jamesonii, International Journal of Advanced Biotechnology and Research ISSN 09762612, Vol 1, Issue 2, Dec-2010, pp 87-90 Son, N V Mokashi, A N Hegde, R Patil, V S Lingaraju, S (2007), Response of gerbera (Gerbera jamesonii Bolus) varieties to micropropagation, Karnataka J Agric Sci.,24 (3) : (354 - 357) 2011 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học tế bào (tập hai), Hà Nội: NXB Giáo dục 38 39 Phụ Chương Phụ Chương Thành phần môi trường MS (Musrashige Skoog, 1962) Thành phần Khoáng đa lượng KNO3 NH4NO3 CaCl2.2H2O KH2PO4 MgSO4.7H2O Fe – EDTA FeSO4.7H2O Na2.EDTA Khoáng vi lượng 1.CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O MnSO4.4H20 KI Na2MoO4.2H2O ZnSO4.7 H2O H3BO3 Vitamin chất hữu Glycine Thiamin HCl (B1) Pyridoxin (B6) Acid nicotinic (B5) Hàm lượng (mg/l) 1.900,000 1.650,000 440,000 170,000 370,000 27,800 37,200 0,025 0,025 22,300 0,830 0,025 8,600 6,200 2,000 0,100 0,500 0,500 (Nguồn: Đặng Phương Trâm, 2005) a Phụ chương Kết thống kê thí nghiệm Bảng 1: ANOVA tỉ lệ mẫu sống phiến non Nguồn biến động Độ tự Tổng bình Trung bình phương bình phương Nghiệm thức 6016,7 3008,3 Sai số 1550,0 172,2 Tổng 11 7566,7 CV (%) 41,4 F tính P 17,5 0.0008 F tính P 3,37 0.0809 F tính P 34,42