Nghiên cứu ảnh hưởng các phương pháp cấy, nguồn mẫu, mật độ, dung dịch NANO (đồng, bạc), và môi trường hai lớp đến sự tăng trưởng tạo cây hoàn chỉnh loài hoa chuông

Nghiên cứu ảnh hưởng các phương pháp cấy, nguồn mẫu, mật độ, dung dịch NANO (đồng, bạc), và môi trường hai lớp đến sự tăng trưởng tạo cây hoàn chỉnh loài hoa chuông Nghiên cứu ảnh hưởng các phương pháp cấy, nguồn mẫu, mật độ, dung dịch NANO (đồng, bạc), và môi trường hai lớp đến sự tăng trưởng tạo cây hoàn chỉnh loài hoa chuông

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CÁC PHƢƠNG PHÁP CẤY, NGUỒN MẪU, MẬT ĐỘ, DUNG DỊCH NANO (ĐỒNG, BẠC), VÀ MÔI TRƢỜNG HAI LỚP ĐẾN SỰ TĂNG TRƢỞNG TẠO CÂY HỒN CHỈNH LỒI HOA CHNG (SINNINGIA SPECIOSA) IN VITRO Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC GVHD: TS TRỊNH THỊ LAN ANH SVTH: NGUYỄN HỒNG ANH SANG MSSV: 1611100157 Lớp: 16DSHA1 TP Hồ Chí Minh, 2020 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiêp cơng trình nghiên cứu em thực hướng dẫn TS Trịnh Thị Lan Anh – giảng viên trường Đại học Cơng Nghệ TP Hồ Chí Minh Đề tài thực cở sở nghiên cứu lý thuyết, tiến hành nghiên cứu phịng thí nghiệm Cơng nghệ Sinh học Thực vật - Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH, trường Đại học Công Nghệ TP HCM Các số liệu kết nghiên cứu đồ án tốt nghiệp trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tất nguồn thơng tin trích dẫn luận án liệt kê tài liệu tham khảo Đồ án khơng chép hình thức nào, phát có gian lận em xin hồn tồn chịu trách nhiệm TP Hồ Chí Minh, ngày 29 tháng 09 năm 2020 Sinh viên thực Nguyễn Hồng Anh Sang LỜI CẢM ƠN Lời em xin chân thành cảm ơn Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH ngành Công Nghệ Sinh Học tạo điều kiện cho em thực đồ án tốt nghiệp sở Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Trịnh Thị Lan Anh nhiệt tình quan tâm, hướng dẫn, bảo, định hướng tạo điều kiện cho em hoàn thành đồ án Cơ khơng giảng dạy kiến thức, mà truyền cảm hứng, động viên em khơi dậy đam mê làm nghiên cứu khoa học Qua tạo động lực cho em theo đuổi đến khơng ngừng học hỏi, tìm hiểu thêm kiến thức Em thực biết ơn Cô giúp đỡ ln hỗ trợ em suốt q trình thực đề tài để có kết thành cơng hôm Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Công Nghệ TP HCM, Ban Lãnh đạo Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH ngành Công Nghệ Sinh Học, phịng bạn thầy trường nhiệt tình hướng dẫn dạy em suốt trình học tập Em xin bày tỏ lịng biết ơn đến tồn thể ban lãnh đạo, tập thể cán phịng thí nghiệm Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH, Trường Đại học Công nghệ TP HCM, đặc biệt thầy Nguyễn Phước Sinh giúp đỡ tận tình, tạo điều kiện thời gian hướng dẫn máy móc thiết bị giúp em thực tốt đồ án Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè ln quan tâm, chia sẻ khó khăn, động viên để em hoàn thành tốt đồ án Em xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, ngày 29 tháng 09 năm 2020 Sinh viên thực Nguyễn Hồng Anh Sang MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG 10 Đặt vấn đề 12 Mục tiêu nghiên cứu 13 Nhiệm vụ nghiên cứu 13 Đối tượng nghiên cứu 14 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài nghiên cứu 14 5.1 Ý nghĩa khoa học 14 5.2 Ý nghĩa thực tiễn 14 Phương pháp nghiên cứu 15 Kết đạt 15 Kết cấu đề tài 16 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 17 1.2 Giới thiệu chung hoa chuông (Sinningia speciosa) 17 1.2.1 Nguồn gốc phân loại 17 1.2.2 Phân loại 19 1.2.3 Đặc điểm sinh học họ Gesneriaceae 19 1.2.4 Đăc điểm sinh học loài Sinningia speciosa 20 1.2.5 Một số đặc điểm sinh học loài Sinningia speciosa 20 1.2.6 Yêu cầu ngoại cảnh hoa chuông 22 1.2.7 Những vấn đề thường gặp trồng hoa môi trường bên ngồi 23 1.3 Tình hình sản xuất, tiêu thụ hoa kiểng giới Việt Nam 24 1.3.1 Trên giới 24 1.3.2 Ở Việt Nam 25 1.4 Các phương pháp nhân giống hoa chuông 26 1.4.1 Nhân giống hữu tính 26 1.4.2 Nhân giống vơ tính 27 1.4.3 Áp dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro vào nhân giống hoa chuông 28 1.4.4 Một số thành tựu nghiên cứu nhanh giống in vitro hoa chuông 28 1.5 Tổng quan nguồn mẫu nghiên cứu 32 1.5.1 Mô sẹo 32 1.5.2 Củ 33 1.6 Giới thiệu chất ứng dụng nghiên cứu 34 1.6.1 Alginate 34 1.6.2.Carboxymethyl cellulose 36 1.6.3 Nano đồng 37 1.6.4 Nano bạc 38 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 39 2.1 Vật liệu phương pháp 39 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 39 2.1.2 Hóa chất sử dụng 39 2.1.3 Môi trường nuôi cấy 39 2.2 Thiết bị dụng cụ 39 2.2.1 Thiết bị 39 2.2.2 Dụng cụ 40 2.3 Điều kiện thí nghiệm 40 2.4 Phương pháp nghiên cứu 40 2.4.1 Pha môi trường nuôi cấy 40 2.4.2 Hấp khử trùng môi trường 41 2.4.3 Hấp khử trùng dụng cụ cấy 41 2.4.4 Các thao tác thực phòng cấy 41 2.5 Nội dung nghiên cứu 42 2.6 Bố trí thí nghiệm 42 2.6.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng kích thước đến khả phát sinh hình thái hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro 42 2.6.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng đến khả phát sinh hình thái hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro 43 2.6.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nguồn mẫu đến khả phát sinh hình thái hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro 44 2.6.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng mật độ cấy chồi đến khả phát sinh hồn chỉnh hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro 45 2.6.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) hoàn chỉnh in vitro 46 2.6.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng nano bạc đến phát sinh hình thái hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro 47 2.6.7 Thí nghiệm 7: Khảo sát ảnh hưởng nano đồng đến phát sinh hoàn chỉnh hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro 48 2.6.8 Thí nghiệm 8: Khảo sát ảnh hưởng alginate môi trường lớp đến phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) hồn chỉnh in vitro 48 2.6.9 Thí nghiệm 9: Khảo sát ảnh hưởng CMC môi trường lớp đến phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) hoàn chỉnh in vitro 49 2.7 Chỉ tiêu theo dõi 51 2.8 Thống kê xử lý số liệu 51 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng kích thước đến khả phát sinh hình thái hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro sau 10 tuần nuôi cấy 52 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau 10 tuần nuôi cấy 57 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nguồn mẫu đến khả phát sinh hình thái hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần nuôi cấy 62 3.4 Thí nghiệm Ảnh hưởng mật độ cấy đến khả phát sinh hồn chỉnh hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro 67 3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến phát sinh chồi hoa chng (Sinningia speciosa) hồn chỉnh in vitro 72 3.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần nuôi cấy 77 3.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng nồng độ nano đồng đến phát sinh chồi hoa chng (Sinningia speciosa) hồn chỉnh in vitro 84 3.8 Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng nồng độ alginate đến phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) hồn chỉnh in vitro mơi trường hai lớp 90 3.9 Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng nồng độ CMC đến phát sinh chồi hoa chng (Sinningia speciosa) hồn chỉnh in vitro sau tuần nuôi cấy 96 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 102 4.1 Kết luận 102 4.2 Kiến nghị 102 TÀI LIỆU THAM KHẢO 103 PHỤ LỤC A/C DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT : Auxin/Cytokinin AVG : Aminoethoxyvinlglycine BA : 6-Benzyladenine BAP : 6-Benzylaminopurin DNA : Deoxyribonucleic Acid IAA : Indole-3-Acetic Acid IBA : Indole-3-Butyric Acid MS : Môi trường MS (Murashige Và Skoog, 1962) NAA : 1-Naphthaleneacetic acid NT : Nghiệm thức SAS : Statistical Analysis System TP.HCM : Thành Phố Hồ Chí Minh STS Silver Thiosuphate 2,4-D : : 2,4-Dichlorophenoxyacetic DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Bức họa hoa chuông (Sinningia speciosa) 17 Hình 1.2 Sự đa dạng màu sắc hoa chng 18 Hình 1.3 .Cấu tạo phân tử alginate (Nguồn: Internet) 36 Hình 1.4 Carboxymethyl cellulose (Nguồn: Internet) 37 Hình 3.1 Ảnh hưởng kích thước đến khả phát sinh hình thái hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau 10 tuần ni cấy 54 Hình 3.2 Ảnh hưởng kích thước đến khả phát sinh hình thái hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro sau 10 tuần nuôi cấy 55 Hình 3.3 Ảnh hưởng mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái hoa Chng (Sinningia speciosa) in vitro sau 10 tuần nuôi cấy 59 Hình 3.4 Ảnh hưởng mẫu cấy đến khả phát sinh hình thái hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau 10 tuần nuôi cấy 60 Hình 3.5 Ảnh hưởng nguồn mẫu đến khả phát sinh hình thái hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần ni cấy 64 Hình 3.6 Ảnh hưởng nguồn mẫu đến khả phát sinh hình thái hoa Chng (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần ni cấy 65 Hình 3.7.Ảnh hưởng mật độ cấy chồi đến khả phát sinh hồn chỉnh hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần nuôi cấy 69 Hình 3.8.Ảnh hưởng mật độ cấy chồi đến khả phát sinh hồn chỉnh hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần nuôi cấy 70 Hình 3.9 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần nuôi cấy 74 Hình 3.10 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát sinh chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro sau tuần ni cấy 75 Hình 3.11.Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát hình thái hoa chng in vitro sau tuần nuôi cấy 79 Hình 3.12 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát hình thái hoa chuông in vitro sau tuần nuôi cấy 80 Hình 3.13 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát hình thái hoa chng in vitro sau tuần nuôi cấy 81 Hình 3.14.Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả phát hình thái hoa chuông in vitro sau tuần nuôi cấy 82 Hình 3.15 Ảnh hưởng nồng độ nano đồng lên trình tạo chồi hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro 86 Hình 3.16.Ảnh hưởng nồng độ nano đơng lên q trình tạo chồi hoa chng (Sinningia speciosa) in vitro 87 Hình 3.17.Ảnh hưởng nồng độ nano đồng lên hoa chuông (Sinningia speciosa) in vitro 88 Hình 3.18.Ảnh hưởng nồng độ alginate đến phát sinh chồi hoa chng hồn chỉnh mơi trường hai lớp 92 Hình 3.19.Ảnh hưởng nồng độ alginate đến phát sinh chồi hoa chng hồn chỉnh môi trường hai lớp 93 Hình 3.20.Ảnh hưởng nồng độ alginate đến phát sinh chồi hoa chng hồn chỉnh môi trường hai lớp 94 Hình 3.21.Ảnh hưởng nồng độ CMC lên q trình tạo chồi hoa chng sau tuần nuôi cấy 98 Hình 3.22 Ảnh hưởng nồng độ CMC lên trình tạo chồi hoa chuông sau tuần nuôi cấy 99 Hình 3.23.Ảnh hưởng nồng độ CMC lên trình tạo chồi hoa chuông sau tuần nuôi cấy 100 SO RE/ MAU 00:00 Monday, February 10, 2014 70 The ANOVA Procedure R-Square Coeff Var Root MSE N Mean Class Level Information 0.774730 5.079396 0.126672 2.493833 Class Levels Values Source T DF T CHIEU DAI RE SO RE/ MAU Anova SS Mean Square F Value Pr > F F0 F1 F2 F3 3.09025833 1.03008611 64.20 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 56 Error Mean Square 0.016046 Critical Value of t 2.00324 Least Significant Difference 0.0927 2297.107322 3449.16 F 6891.321965 2297.107322 3449.16 F 4.60 0.0060 2.5843464 180.3935733 00:00 Monday, February 10, 2014 73 The ANOVA Procedure R-Square Coeff Var Root MSE N Mean Class Level Information 0.197735 131.8417 1.607590 1.219333 Class Levels Values Source T DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F F0 F1 F2 F3 T DUONG KINH CU Number of Observations Read 60 Number of Observations Used 60 CHIEU DAI RE 00:00 Monday, February 10, 2014 74 35.67017333 11.89005778 4.60 0.0060 00:00 Monday, February 10, 2014 78 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N The ANOVA Procedure NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Dependent Variable: N Source DF Model Error Sum of Squares Mean Square F Value 3.09025833 56 Corrected Total 1.03008611 0.89856000 59 Pr > F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 56 Error Mean Square 2.584346 Critical Value of t 2.00324 Least Significant Difference 1.1759 64.20 F 63.41 F 0.05147318 0.01029464 63.41 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 Error Mean Square 0.000162 Critical Value of t 1.98861 Least Significant Difference 0.0093 167.60 F T 14.44368938 2.88873788 167.60 F B 3.9800 15 G3 12.96366667 2.59273333 51.89 F 65.65 F 1272.888889 254.577778 65.65 F A 55.25466667 11.05093333 65.37 F 6.09788889 1.21957778 56.50 F 96.44 F t Grouping 11.68722222 2.33744444 96.44 F 90.15 F 13.97344556 2.79468911 90.15 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 Error Mean Square 0.031001 Critical Value of t 1.98861 Least Significant Difference 0.1279 56.50 F 130.71 F The ANOVA Procedure The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Dependent Variable: N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Sum of Squares Mean Square F Value DF Anova SS T 93.05288889 18.61057778 130.71 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 Error Mean Square 0.142381 Critical Value of t 1.98861 Least Significant Difference 0.274 103.43 F A T DIEN TICH LA Mean N T 5.8867 A 5.7533 15 G4 15 G2 15 G1 15 G3 61.14039556 12.22807911 103.43 F 370.72 F t Grouping 25109.25556 5021.85111 370.72 F 288.49 F 147.2152222 29.4430444 210.52 F 0.05414098 0.01082820 55.88 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 Error Mean Square 0.000194 Critical Value of t 1.98861 Least Significant Difference 0.0101 82.83 F B 0.146500 B 0.143640 The ANOVA Procedure C 0.129160 15 H2 t Tests (LSD) for N D 15 H3 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate D 0.104980 D 0.104640 T TRONG LUONG TUOI 6.40218953 1.28043791 82.83 F 102.99 F 44.80830333 8.96166067 102.99 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 55.88 F 659.193588 1539.65 F 3295.967939 659.193588 1539.65 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 Error Mean Square 0.428146 Critical Value of t 1.98861 Least Significant Difference 0.4751 31.2167664 1634.96 F B 21.0007 15 H3 156.0838322 31.2167664 1634.96 F 68.09 F A T CHIEU DAI LA 2.20343222 0.44068644 68.09 F 34.01 F Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 84 Error Mean Square 0.109603 Critical Value of t 1.98861 Least Significant Difference 0.2404 F B T DUONG KINH LA Pr > F 18.63710222 3.72742044 34.01