Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase bằng phương pháp lên men aspergillus niger trên môi trường rắn xốp với năng suất 500 lít chế phẩm enzyme kĩ thuậtca

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA HĨA ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGÀNH: CƠNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI: THIẾT KẾ NHÀ MÁY SẢN XUẤT ENZYME CELLULASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN ASPERGILLUS NIGER TRÊN MÔI TRƯỜNG RẮN-XỐP VỚI NĂNG SUẤT 500 LÍT CHẾ PHẨM ENZYME KĨ THUẬT/CA Người hướng dẫn: TS BÙI XUÂN ĐÔNG Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ DUNG Số thẻ sinh viên: 107120245 Lớp: 12SH Đà Nẵng, 5/2017 Trang i TÓM TẮT Tên đề tài: Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men Aspergillus Niger môi trường rắn-xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kĩ thuật/ca Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Dung Số thẻ SV: 107120245; Lớp: 12SH Enzyme cellulase hệ phức hệ enzyme có tác dụng thủy phân cellulose thơng qua việc thủy phân liên kết 1,4-glucoside cellulose tạo sản phẩm glucose cung cấp cho công nghiệp lên men Enzyme cellulase enzyme có vai trị quan trọng chuyển hóa chất hữu có thiên nhiên có ý nghĩa lớn cơng nghiệp thực phẩm (rượu, bia ), bảo vệ môi trường Do có nhiều ứng dụng thực tế nên việc thực đề tài “thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase” việc cần thiết Từ luận giải đây, tiến hành “thiết kế nhà máy sản xuất enzyme Cellulase phương pháp lên men Aspergillus niger môi trường rắn- xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca” Để đạt sản lượng phải sử dụng nguyên liệu bã mía với khối lượng 483,7 kg/ca Để đảm bảo vận hành tiến hành tính tốn chọn thiết bị: xử lý nguyên liệu (máy nghiền bã mía, phối trộn nguyên liệu, hấp trùng làm nguội), lên men (nhân giống cấp I, II, nhân giống sản xuất lên men khay, thiết bị trùng khay, thiết bị định lượng khay), tinh chế sản phẩm (thiết bị nghiền mịn, trích ly, ly tâm, kết tủa, đặc) cuối đóng gói sản phẩm Nhà máy xây dựng khu đất với diện tích 13000 m2 gồm phân xưởng sản xuất có diện tích 3024 m2, cơng trình phụ (kho chưa ngun liệu, kho chứa thành phẩm, trạm biến áp, nhà hành chính, xưởng điện, gara tơ, nhà xe, nhà ăn, đài nước, xử lý nước, khu xử lý nước thải, phân xưởng lò hơi, kho vật tư thiết bị) khu đất mở rộng ( L x W: 540 m2) Nhà máy xây dựng khu công nghiệp Quảng Phú – Quảng Ngãi Trang ii ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Dung Số thẻ sinh viên: 107120245 Lớp: 12SH Khoa: Hóa Ngành: Công nghệ Sinh học Tên đề tài: Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men Aspergillus niger môi trường rắn-xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kĩ thuật /ca Đề tài thuộc diện: ☐ Có ký kết thỏa thuận sở hữu trí tuệ kết thực Các số liệu ban đầu: - Độ đường nguyên liệu: bã mía (phế liệu nhà máy đường), hàm lượng đường saccharose 5% - Sản phẩm: dạng lỏng, có nồng độ chất khô 30% - Hiệu suất hao tổn cơng đoạn + Bao gói: 0,5% + Cô đặc: 2% + Ly tâm 2: 0,5% + Kết tủa: 0,5% + Ly tâm 1: 0,5% + Trích ly: 2% + Nghiền mịn: 2% + Thu nhận chế phẩm: 0,5% + Lên men: 0,5% + Gieo giống: 0,5% + Làm nguội: 0,5% + Hấp trùng: 1% + Phối trộn: 1% + Nghiền định lượng: 3% Nội dung phần thuyết minh tính tốn: - Tóm tắt - Nhiệm vụ đồ án tốt nghiệp - Lời cảm ơn - Lời cam đoan liêm học thuật - Mục lục - Danh mục hình vẽ - Danh mục bảng Trang iii - Danh mục thuật ngữ viết tắt - Lời mở đầu - Chương 1: Lập luận kinh tế - Chương 2: Tổng quan tài liệu - Chương 3: Chọn thuyết minh dây chuyền công nghệ - Chương 4: Cân vật chất - Chương 5: Tính chọn thiết bị - Chương 6: Tổ chức - Chương 7: Tính xây dựng - Chương 8: Tính điện, nước - Chương 9: Kiểm tra sản xuất đánh giá chất lượng sản phẩm - Chương 10: An tồn lao động vệ sinh xí nghiệp - Kết luận - Tài liệu tham khảo Các vẽ: - 01 vẽ tổng mặt mặt cắt phân xưởng nấu (A0) - 01 vẽ tổng mặt mặt cắt phân xưởng lên men (A0) - 01 vẽ tổng mặt mặt cắt phân xưởng chiết (A0) - 01 vẽ sơ đồ hệ thống nước phân xưởng nấu (A0) - 01 vẽ tổng bình đồ (A0) Giáo viên hướng dẫn: TS Bùi Xuân Đông Ngày giao nhiệm vụ: 16/02/2017 Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 10/05/2017 Ngày …… tháng 05 năm 2017 Trưởng môn Người hướng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) TS Lê Lý Thùy Trâm TS Bùi Xn Đơng Trang iv LỜI CẢM ƠN Để hoàn thiện đồ án tốt nghiệp này, em xin cảm ơn người sau Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy TS.Bùi Xuân Đông người trực tiếp hướng dẫn em thực đề tài Với lòng yêu nghề, tận tâm, chu đáo trình hướng dẫn giúp em thực xong đề tài Tiếp theo, em xin gửi đến lời cảm ơn đến gia đình bạn bè Những người động viên, cổ vũ tinh thần vật chất trình em thực đề tài Luôn tạo điều kiện tối đa để em hoàn thành nhiệm vụ Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn đến tất thầy cô Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học - Khoa Hóa - Trường Đại học Bách Khoa Đà Nẵng truyền đạt kiến thức q báu để hồn thành đề tài tốt nghiệp mình, quan trọng kiến thức theo em suốt trình làm việc sau Xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày tháng 05 năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Thị Dung Trang v LỜI CAM ĐOAN LIÊM CHÍNH HỌC THUẬT Tơi xin cam đoan đồ án tơi thực Các số liệu, kết tính tốn trung thực, khơng chép từ cơng trình khác Người cam đoan Nguyễn Thị Dung Trang vi MỤC LỤC TÓM TẮT i NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP iii LỜI CẢM ƠN v LỜI CAM ĐOAN LIÊM CHÍNH HỌC THUẬT vi MỤC LỤC vii DANH MỤC HÌNH ẢNH xiv DANH MỤC BẢNG xvi DANH MỤC THUẬT NGỮ VIẾT TẮT xvii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG I LẬP LUÂN KINH TẾ 1.1 Sự cần thiết phải đầu tư 1.2 Vị trí xây dựng .2 1.3 Giao thông vận tải .2 1.4 Nguồn cung cấp nguyên liệu .2 1.5 Điện – Nước – Xử lý nước thải 1.6 Hợp tác hóa 1.7 Tiêu Thụ .3 1.8 Kết luận CHƯƠNG II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan enzyme cellulase 2.1.1 Cấu tạo cellulase 2.1.2 Tính đặc hiệu chất 2.1.3 Ứng dụng enzyme cellulase 2.2 Công nghệ sản xuất enzyme cellulase 2.2.1 Tình hình sản xuất enzyme cellulase Việt Nam Thế giới .8 2.2.2 Các phương pháp sản xuất .10 Trang vii 2.2.3 Các nguồn vi sinh vật sinh enzyme cellulase 13 2.2.4 Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật cellulose 15 2.3 Tổng quan nguyên liệu bã mía 17 2.3.1 Tình hình sản xuất 17 2.3.2 Ưu nhược điểm bã mía .18 CHƯƠNG III CHỌN VÀ THUYẾT MINH DÂY CHUYỀN CÔNG NGHỆ 19 3.1 Chọn dây chuyền công nghệ .19 3.2 Thuyết minh quy trình cơng nghệ 20 3.2.1 Nguyên liệu bã mía 20 3.2.2 Nghiền 20 3.2.3 Phối trộn 20 3.2.4 Hấp trùng .20 3.2.5 Làm nguội .20 3.2.6 Nhân giống sản xuất 21 3.2.7 Gieo giống .22 3.2.8 Lên men 22 3.2.9 Thu nhận sinh khối 23 3.2.10 Nghiền mịn 23 3.2.11 Trích ly 24 3.2.12 Ly tâm 24 3.2.13 Kết tủa 24 3.2.14 Ly tâm 25 3.2.15 Cô đặc 25 3.2.16 Bao gói 25 CHƯƠNG IV TÍNH TỐN CÂN BẰNG VẬT CHẤT 26 4.1 Kế hoạch sản xuất nhà máy 26 Trang viii 4.2 Các số liệu ban đầu 26 4.3 Hao hụt công đoạn 27 4.4 Cân vật chất trình sản xuất 27 4.4.1 Năng suất dây chuyền sản xuất sản phẩm enzyme kỹ thuật 27 4.4.2 Bao gói .28 4.4.3 Cô đặc 28 4.4.4 Kết tủa enzyme ly tâm thu kết tủa 29 4.4.5 Ly tâm .30 4.4.6 Trích ly 31 4.4.7 Nghiền mịn 31 4.4.8 Thu nhận canh trường 31 4.4.9 Lên men 32 4.4.10 Gieo giống 32 4.4.11 Làm nguội 32 4.4.12 Hấp trùng 32 4.4.13 Phối trộn .32 4.4.14 Lượng nguyên liệu sản xuất cho mẻ .33 4.4.15 Nghiền định lượng bã mía .33 4.4.16 Khoáng chất 33 4.4.17 Lượng nước cần cho dây chuyền sản xuất 34 4.4.18 Môi trường nhân giống 35 4.5 Tổng kết 38 CHƯƠNG V: TÍNH VÀ CHỌN THIẾT BỊ 39 5.1 Cơng thức tính số thiết bị sử dụng 39 5.2 Tính chọn thiết bị phân xưởng sản xuất 39 5.2.1 Máy nghiền bã mía 39 Trang ix 5.2.2 Thiết bị hấp trùng 40 5.2.3 Thiết bị làm nguội 41 5.2.4 Thiết bị nhân giống 42 5.2.5 Máy trộn giống 45 5.2.6 Thiết bị định lượng vào khay .46 5.2.7 Thiết bị lên men .46 5.2.8 Thiết bị tiệt trùng khay 47 5.2.9 Thiết bị nghiền búa 48 5.2.10 Thiết bị trích ly .49 5.2.11 Thiết bị ly tâm .50 5.2.12 Thiết bị kết tủa .50 5.2.13 Thiết bị ly tâm thu kết tủa 51 5.2.14 Thiết bị cô đặc 51 5.2.15 Thiết bị bao gói 52 5.3 Thùng chứa hình trụ đứng .53 5.3.1 Thùng pha chế môi trường .54 5.3.2 Thùng chứa canh trường enzyme sau lên men 54 5.3.3 Thùng chứa dịch enzyme thô 55 5.3.4 Thùng chứa enzyme sau kết tủa 55 5.4 Tính chọn Bunke 55 5.4.1 Tính chọn Bunke chứa sinh khối 56 5.5.2 Tính chọn Bunke chứa muối (NH4)2SO4 56 5.6 Thiết bị vận chuyển 57 5.6.1 Chọn bơm 57 5.6.2 Chọn vít tải .58 Trang x Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca 9.1.3 Những quy định an toàn thực phẩm Tùy mục đích sử dụng enzyme tùy nước Những quy định sử dụng enzyme chế biến thực phẩm, đặc biệt sử dụng phụ gia thực phẩm phức tạp chặt chẽ sử dụng enzyme q trình cơng nghiệp khác Đối với enzyme tách từ thể biến đổi di truyền (GMO) cịn có thêm quy định bổ sung khác Ví dụ: mơ tả cách thiết kế gen, sản phẩm phải khơng có GMO, khơng có DNA Độ chế phẩm enzyme dùng thực phẩm quy định nghiêm ngặt Quy định đánh giá, quy định việc đănh ký, phê chuẩn, cấp phép, quan chịu trách nhiệm vấn đề nước khác 9.2 Kiễm tra nguyên liệu 9.2.1 Bã mía Bã mía nguyên liệu dây chuyền sản xuất vâỵ chất lượng bã mía có ảnh hưởng lớn đến q trình sản xuất chất lượng sản phẩm Vì ta sử dụng bã mía phụ phẩm nhà máy đường nên bã mía trước đưa vào sử dụng cần xử lý sơ để đảm bảo đủ tiêu cho sản xuất Bã mía cần xử lý học để loại bỏ bớt tạp chất như: đất đá, kim loại,… 9.2.2 Nguồn muối vô Đây nguồn nitơ, loại khoáng đa lượng vi lượng cần thiết việc sinh tổng hợp enzyme cellulase Nấm mốc dễ bị mẫn cảm nồng độ thấp khoáng chất lạ cho sản phẩm khơng mong muốn làm giảm hiệu suất q trình sản xuất Cho nên cần đặt mua nơi có độ nhiễm tạp chất nồng độ cho phép 9.2.3 Nước Kiểm tra độ màu sắc, tiêu chuẩn vi sinh nước sau xữ lý.Kiểm tra độ cứng, pH, số coli độ oxy hoá nước 9.3 Kiễm tra công đoạn sản xuất 9.3.1 Công đoạn làm nghiền Kim loại loại bỏ trước nghiền Bột bã mía sau nghiền cần phải mịn, đều, tất đánh giá cảm quan 9.3.2 Kiễm tra trình lên men Trong q trình ni cấy pH mơi trường giảm phải điều chỉnh CaCO3 để trung hồ Kiểm tra tốc độ lưu thơng khí để đảm bảo trình sinh trưởng tổng hợp enzyme cellulase nấm mốc Trong q trình ni cấy, nhiệt độ thay đổi nhiều theo nhũng quy luật định Vì cần thường xuyên kiểm tra điều tiết cho phù hợp SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 86 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca Sau nuôi cấy khoảng thời gian 68 đến 72 kiểm tra hoạt độ enzyme đạt 300 đvhđ/g coi kết thúc q trình ni cấy Tốc độ sinh trưởng phát triển canh trường xác định phương pháp đếm số tế bào có 1ml canh trường 9.4 Kiễm tra chất lượng bán thành phẩm Thông qua hoạt độ để đánh giá chất lượng bán thành phẩm sau lọc cô đặc 9.5 Kiễm tra chất lượng sản phẩm 9.5.1 Nguyên tắc chung phương pháp xác định tọa độ Enzyme - Phản ứng enzyme khái quát đơn giản hóa phương trình phản ứng: - Có thể xác định hoạt độ enzyme cách phân tích biến đổi theo thời gian điều kiện phản ứng xác định của: chất lại; sản phẩm tạo thành; chất sản phẩm Tùy theo đặc trưng phản ứng, tiện lợi phương pháp, yêu cầu độ xác, điều kiện phịng thí nghiệm… mà chọn cách xác định phù hợp Tuy nhiên, cách đáng tin cậy trường hợp xác định sản phẩm tạo thành theo thời gian (vì hoạt độ enzyme cần xác định thấp, chuyển hóa chất khó đo xác xuất sản phẩm xác định cách đo đặc hiệu cho phép khẳng định có mặt enzyme cách tin cậy) 9.5.2 Các phương pháp xác định tọa độ Enzyme Phân tích liên tục: phương pháp đo chất bị biến đổi hay sản phẩm tạo thành cách liên tục theo thời gian Tuy nhiên yêu cầu thiết bị đo phải có phận ổn định nhiệt → mặt hạn chế phương pháp Đồng thời, phải theo dõi biến đổi chất phản ứng cách liên tục nên khó thực phân tích hoạt độ nhiều mẫu enzyme lúc Phân tích gián đoạn: phương pháp cho enzyme tác dụng với chất sau khoảng thời gian định ngừng phản ứng enzyme cách thích hợp sau đo lượng chất lại sản phẩm tạo thành Để ngừng phản ứng dùng tác nhân làm bất hoạt enzyme: nhiệt độ cao, thay đổi pH, dùng chất tạo phức hay tách enzyme khỏi hỗn hợp…Phương pháp khắc phục hạn chế phương pháp đo liên tục, phản ứng tiến hành tủ ấm hay bể nhiệt ổn định, tiến hành lúc nhiều mẫu…Tuy nhiên vấn đề đặt phải tìm cách làm ngưng phản ứng thích hợp Dựa theo nguyên tắc xác định hoạt độ trên, xác định theo phương pháp sau đây: 9.5.2.1 Phương pháp đo độ nhớt SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 87 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca Dùng nhớt kế đo biến đổi độ nhớt dung dịch phản ứng Áp dụng với enzyme mà chất có độ nhớt cao hẳn so với sản phẩm (chất có phân tử lớn acid nucleic, protein, cellulose…) 9.5.2.2 Phương pháp phân cực kế Sử dụng chất sản phẩm có khả làm quay mặt phẳng ánh sáng phân cực có góc quay riêng khác 9.5.2.3 Phương pháp quang phổ kế Được sử dụng phổ biến nay, dựa khả hấp thụ ánh sáng bước sóng xác định chất, sản phẩm phản ứng 9.5.2.4 Phương pháp hóa học Dùng phản ứng hóa học để định lượng chất hay lượng sản phẩm tạo thành Thông thường phải chọn phản ứng tạo nên phức chất màu có độ hấp thu ánh sáng cực đại vùng để từ định lượng hợp chất Phương pháp định lượng chất cịn lại hay sản phẩm tạo thành đơn giản đo chất lại hay sản phẩm tạo thành cách trực tiếp Tuy nhiên nhiều trường hợp, đo cách gián tiếp phép đo phức tạp 9.5.3 Một số lưu ý xác định hoạt độ hay thực phản ứng Enzyme - Khi xác định hoạt độ enzyme cần chọn điều kiện pH nhiệt độ phân tích vùng thích hợp Với enzyme lần nghiên cứu, nên chọn pH trung tính, 300C-370C Sau có điều chỉnh sau cần thiết - Bên cạnh pH nhiệt độ, cần lưu ý chất, thành phần đệm, lực ion hay nồng độ muối, chất làm bền - Các phân tích hoạt độ enzyme phải thực giá trị pH ổn định, nên phải dùng loại đệm hay hệ thống đệm thích hợp Nồng độ đệm thường dùng 20-50 nM Tuy phản ứng sinh acid, base cần phải dùng đệm nồng độ cao tránh thay đổi pH trình thí nghiệm Cần chọn loại đệm thích hợp tránh làm kết tủa yếu tố cần thiết cho hoạt động enzyme Ca2+, Zn2+ - Cơ chất sản phẩm, đệm phải đạt nhiệt độ phân tích tiếp xúc với để bắt đầu phản ứng Nếu phân tích nhiều mẫu, thời gian bắt đầu kết thúc phản ứng phải trì - Ln có mẫu kiểm tra thích hợp để tránh sai sót - Phải lựa chọn phương pháp làm ngừng phản ứng thích hợp, tránh làm biến đổi chất hay sản phẩm cần đo; hay can thiệp mạnh vào phép định lượng sản phẩm phản ứng enzyme (chất làm ngừng phản ứng có bước sóng hấp thụ ánh sáng cần đo với chất phản ứng, hay ức chế phản ứng tạo màu phân tích…) Tóm lại việc xác định hoạt độ enzyme cho số liệu tin cậy chọn SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 88 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca phương pháp thích hợp có bước tiến hành 9.6 Các phương pháp đo hoạt độ enzyme Cellulase 9.6.1 Phương pháp xác định hoạt độ enzyme carboxymethyl cellulase (CMCase) 9.6.1.1 Nguyên tắc Một đơn vị hoạt tính CMCase lượng enzyme cần thiết để giải phóng đường khử (như glucose) thủy phân CMC tốc độ µmol/phút điều kiện phản ứng Phương pháp dựa vào thủy giải chất carboxymethyl cellulose (CMC) enzyme carboxymethyl cellulase (CMCase) pH 5,0 nhiệt độ 400C Sau phản ứng tạo lượng đường khử, đường khử phản ứng với 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoic acid tạo thành phức màu đỏ sậm xác định máy đo mật độ quang bước sóng 540nm 9.6.1.2 Cách tiến hành Các hóa chất cần chuẩn bị: - Dung dịch chất CMC 1%: cân xác 1,0 g CMC, hòa tan 80ml đệm Na-acetate 50mM, pH 5,0 chuyển vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch đệm đến vạch lắc - Dung dịch enzyme: pha loãng dịch enzyme với dịch đệm Na-acetate 50mM, pH 5,0 đến độ pha lỗng thích hợp - Dung dịch acid 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoic (DNS) - Dung dịch lactose - Dung dịch DNS-lactose * Dựng đường glucose chuẩn: - Hòa tan 100 mg glucose với 80 ml nước cất chuyển vào bình định mức 100 ml, thêm nước cất đến vạch lắc đều, ta dung dịch glucose nồng độ 1mg/ml Thực loạt ống nghiệm theo bảng sau: Số thứ tự ống/ nồng 1/0 2/0,1 3/0,2 4/0,3 5/0,4 6/0,5 7/0,6 dd glucose 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 chất dd CMC 1% 1 1 1 bổ dd DNS- sung lactose 2 2 2 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 độ glucose (mg/ml) Các (ml) Nước cất SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 89 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca Lắc ống nghiệm này, đem đun sôi cách thủy 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng chậu nước mát So màu máy quang phổ UV/Visible Spectrophometer, bước sóng 540 nm Dựa vào tương quan nồng độ glucose chuẩn độ hấp phụ OD dựng đường biểu diễn biến thiên OD nồng độ glucose chuẩn Đường đường thẳng qua gốc tọa độ * Tiến hành phản ứng: - Hút 1ml enzyme cho vào ống nghiệm thử thật (ống TN), thay 1ml dung dịch đệm Na-acetate 50mM, pH 5,0 ống đối chứng (ĐC) - Đặt vào bể ổn nhiệt 400C/5 phút Đồng thời ta để chai chứa lượng dung dịch CMC 1% thích hợp 400C/5 phút - Sau thêm 1ml dung dịch CMC 1% vào ống nghiệm chứa enzyme lắc Để phản ứng 400C xác 10 phút - Thêm 2ml dung dịch DNS-lactose, lắc để phản ứng enzyme - Đem đun sôi cách thủy 15 phút Làm lạnh đến nhiệt độ phòng chậu nước mát - So màu bước sóng 540 nm, dựa theo đường glucose chuẩn tính nồng độ glucose mẫu thí nghiệm 9.6.1.3 Tính hoạt độ enzyme - Giá trị hệ số glucose trung bình (F): F= ( 0,1/ A G 0,1 + 0, / AG 0,2 + + 0, / AG 0,6 ) - Hoạt tính enzyme: CMCase (IU/g) = (AT – AB) × F × (1000/180) × (1/10 phút) × (1/C) Trong đó: F – Hệ số glucose (mg/ml) AG – Độ hấp thu OD dung dịch glucose chuẩn AT – Độ hấp thụ dung dịch có phản ứng enzyme (ống TN) AB – Độ hấp thụ dung dịch phản ứng enzyme (ống ĐC) 1000 – Hệ số chuyển đổi mg thành µg 180 – Trọng lượng phân tử glucose, đổi từ µg thành µmol 10 phút – Thời gian phản ứng 1.0 – Thể tích dịch enzyme (ml) C – Nồng độ dung dịch mẫu (g/ml SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 90 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca 9.6.2 Phương pháp xác định hoạt độ enzyme Cellulase cách đo đường kính vịng thủy phân 9.6.2.1 Ngun tắc Cho enzyme tác dụng lên chất môi trường thạch, chất bị phân hủy, độ đục môi trường giảm, môi trường trở nên suốt Độ lớn phần môi trường suốt phản ánh hoạt động enzyme Phương pháp định tính enzyme, đánh giá sơ 9.6.2.2 Tiến hành * Phương pháp khuếch tán môi trường thạch: - Thu dịch nuôi cấy: Lấy 10g môi trường nuôi cấy nấm sợi ủ ngày tủ ấm, sấy khô, nghiền với 100ml nước cất, ly tâm 10 phút tốc độ quay 10000 vịng/phút Thu dịch enzyme thơ - Dùng khoan nút chai (d=8mm) vô trùng, khoan lỗ thạch môi trường thử hoạt tính enzyme cellulase đĩa petri Dùng pipet vô trùng nhỏ 0,1 ml dịch enzyme vào lỗ khoan Giữ hộp petri tủ lạnh 40C 1-2 giờ, sau chuyển sang giữ tủ ấm 24 Sau 24 dùng thuốc thử lugol nhỏ lên bề mặt thạch đo đường kính vịng phân giải thước đo KL 9.6.2.3 Kiểm tra kết Nếu nấm sợi có hoạt tính cellulase tạo vòng suốt quanh lỗ khoan chứa dịch enzyme cellulase bị phân giải Vùng cellulase chưa bị phân giải có màu tím hồng nhạt 9.6.2.4 Đánh giá khả tạo enzyme Đặt sấp hộp petri, dùng thước đo đường kính vịng phân giải (D) đo đường kính lỗ thạch (d = 8mm) Dựa vào kết (D-d, mm) để đánh giá hoạt tính enzyme Nếu giá trị D-d lớn hoạt tính enzyme mạnh - Quy ước: D-d ≥ 25mm : hoạt tính enzyme mạnh D-d ≥ 20mm : hoạt tính enzyme mạnh D-d ≥ 15mm : hoạt tính enzyme trung bình D-d ≤ 10mm SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG : hoạt tính enzyme yếu GVHD: BÙI XN ĐƠNG Trang 91 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca CHƯƠNG X: AN TỒN LAO ĐỘNG VÀ VỆ SINH XÍ NGHIỆP 10.1 An toàn lao động 10.1.1 Tai nạn lao động nhóm yếu tố nguy hiểm sản xuất Tai nạn lao động tai nạn xảy trình lao động kết tác động đột ngột từ bên yếu tố nguy hiểm gây chết người làm tổn thương làm phá huỷ chức hoạt động bình thường phận thể Khi người lao động bị nhiễm độc đột ngột lượng lớn chất độc gây chết người huỷ hoại chức hoạt động phận thể (nhiễm độc cấp tính) coi tai nạn lao động Các nhóm yếu tố có tác động nguy hiểm đến người lao động trình sản xuất: - Thuộc nhóm đầu bao gồm: máy móc cấu chuyển động, phận di động thiết bị không bảo vệ tốt, vật liệu di chuyển, thành phẩm, tăng nhiệt độ bề mặt thiết bị, chi tiết, nguyên vật liệu, điện áp mạch điện, chập mạch qua thể người, mức tăng điện tĩnh, tăng áp suất quy định bình hoạt động áp suất - Nhóm thứ hai có quan hệ với chất độc gây thương tích xâm nhập vào thể người qua đường hô hấp, lớp da đường tiêu hố - Nhóm thứ ba bao gồm chất sinh học, vi sinh vật số sản phẩm hoạt hố sinh học - Nhóm thứ tư kết hợp yếu tố tải lý học tâm trạng thần kinh Quá tải lý học bao gồm tải động, tải tĩnh tải động Những tải trọng tâm trạng thần kinh xuất trí óc q mệt mỏi, hoạt động đơn điệu xúc cảm cao 10.1.2 Các biện pháp dự phòng đảm bảo an tồn - Cần có hướng dẫn kỹ thuật an toàn vận hành phác thảo riêng biệt cho loại thiết bị, công nghệ, cần nghiên cứu kỹ phù hợp với vị trí cơng tác thành viên - Những chất lỏng dễ cháy bảo quản bể cách nhiệt, tốt bảo quản đất - Khơng cho phép sử dụng khơng khí nén để tạo áp cho chất lỏng dễ cháy từ thiết bị vào thiết bị khác - Nước sản xuất trước xả vào hệ thống rãnh cần phải trung hoà, làm dầu mỡ, nhựa hợp chất độc khác thiết bị làm - Để an toàn cần sơn đường ống dẫn thành màu để đốn nhận theo nhóm chất vận chuyển: nước - màu xanh cây, - màu đỏ, khơng khí xanh, chất khác (mơi trường dinh dưỡng, chất lỏng canh trường, dung dịch enzim SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 92 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca .) - màu xám, ống chữa cháy - đỏ - Khi phát hỏng hóc thiết bị cần phải dừng lại để sửa chữa - Các thiết bị chứa CO2 lỏng, khí nén phải đặt xa nơi đơng người, có áp kế, rơ le nhạy Trước nén khí thiết bị phải kiểm tra kỹ - Kho xăng, dầu, nguyên liệu phải đặt xa nguồn nhiệt Trong kho phải có bình CO2 chống cháy vịi nước để chữa lửa Ngăn chặn người vô phận vào khu sản xuất kho tàng Không hút thuốc kho tránh gây cháy nổ 10.1.3 An toàn lao động công nghiệp vi sinh Các axit, kiềm, muối loại vi sinh vật sử dụng rộng rãi xí nghiệp để sản xuất chế phẩm hoạt hoá (vitamin, chế phẩm protein enzym, nấm men gia súc ), chúng gây nên dị ứng cho công nhân chất phụ sử dụng sản xuất dễ cháy dễ nổ Cho nên cần đặc biệt ý vấn đề an tồn lao động xí nghiệp vi sinh Điều kiện chung an toàn lao động Chúng bao gồm nhiệm vụ phát nghiên cứu thương tích sản xuất, thảo biện pháp làm tăng điều kiện lao động biện pháp vệ sinh sức khoẻ nhằm bảo đảm ngăn ngừa thương tích, bệnh nghề nghiệp, tai nạn, đám cháy, vụ nổ xí nghiệp 10.1.4 Trạm nén khí Các máy nén khí thường đặt riêng biệt tồ nhà tầng Nhiệt độ khơng khí sau bậc nén đoạn đun nóng khơng q 1800C Thiết bị có suất lớn 10 m3/phút trang bị máy lạnh máy tách ẩm Các máy nén khơng khí có suất 10 m3/ph với áp suất 0,8 MPa đặt tầng nhà nhiều tầng, không đặt phòng sinh hoạt, văn phòng phòng tương tự Trong trường hợp chúng cần phải tách biệt khỏi khu vực sản xuất loại tường chịu lửa Các máy nén khí có suất nhỏ 20 m3/phút cách biệt với phòng lân cận tường chắn có chiều cao m bề dày lớn 12 cm Mỗi trạm máy nén cần phải có phịng đặc biệt để bảo giữ kín vật liệu dụng cụ dễ mòn Các vỏ máy nén, máy lạnh, máy tách nước dầu cần phải nối đất Các máy nén có suất lớn 50 m3/ph cần phải trang bị thêm cấu để điều chỉnh tự động áp suất nạp vào Các van bảo hiểm cần phải thoả mãn yêu cầu quy luật thiết bị an tồn vận hành bình làm việc áp suất, hàng ngày kiểm tra áp suất 1,2 MPa 10.1.5 Máy lọc để làm khơng khí thu hồi bụi Sự nhiễm bẩn khơng khí xảy phịng tập trung loại thiết bị để cấy, lên men, sấy, nghiền (những loại thiết bị phải kín) Để làm khơng khí khỏi chất nhiễm bẩn cơng nghiệp thường sử dụng SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 93 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca thiết bị thu gom khí- bụi.Thiết bị để làm khí dễ bốc cháy hay chất dễ nổ trang bị phù hợp với luật an tồn có tính đến bảo đảm làm liên tục sản xuất chu kỳ hoạt động thiết bị Cấm xả khí vào khí 10.1.6 Máy nghiền Máy nghiền Trong cơng nghiệp vi sinh áp dụng lượng lớn loại máy sấy có kết cấu khác Trong trìnhnghiền, lượng đáng kể hạt nhỏ dạng bột tách ra, với khơng khí chúng tạo ta hỗn hợp dễ cháy, dễ nổ Nếu bụi có chứa lượng đáng kể dễ bốc cháy hay xuất cách ngẫu nhiên tia lửa bốc cháy gây tiếng nổ Việc áp dụng biện pháp phịng ngừa để loại trừ bốc cháy có ý nghĩa quan trọng, loại trừ việc trang bị thiết bị điện bên máy sấy, bên đường dẫn khí Trong trường hợp ngoại lệ thật cần thiết, thiết bị điện trang bị dạng phịng nổ Khơng cho phép q nhiệt, ma sát lớn tạo tia lửa ổ trục, cánh quạt Khi đun nóng máy sấy nên dùng nước hay nước nóng Các máy nghiền Các máy nghiền ly tâm va đập đặt phòng riêng biệt, xung quanh chúng có khoảng trống với chiều rộng lớn 1,5 m Cho phép nạp tháo liệu khí hố, cịn để tránh bụi bay ngồi cần phải có cấu tạo dạng kín Tất máy nghiền trang bị thêm thiết bị hút gió, mở sớm trước mở máy nghiền, tắt sau dừng máy Trước nghiền sản phẩm, máy nghiền kiểm tra chế độ khơng tải 10.1.7 An tồn thiết bị vận chuyển Các băng tải loại nghiêng trang bị cấu hãm đặt biệt để loại trừ khả chuyển động xuống sức nặng trọng lượng thân chúng hay vật tải Các băng tải đặt độ cao từ 0,5 đến m, cần phải có lưới ngăn tất cảcác vị trí vào Tốc độ chuyển động an toàn băng tải không lớn 0,2 m/s Khi vận hành cần theo dõi bình thường chi tiết quay cần bôi dầu chi tiết hoạt động Để an tồn cho hoạt động vít tải, tất cấu dẫn động (các bánh răng, truyền động, truyền động đai) cần phải có lưới chắn Khơng cho vít tải hoạt động nắp tháo rời Không cho phép tiến hành sửa chữa thời gian hoạt động vít tải, mở cửa nắp hay đẩy vật liệu bị hóc tay máng Vận chuyển khí nén vận hành thiết bị vận chuyển khí nén, hỗn hợp bụi hữu khơng khí hình thành, tạo phễu chứa đường ống dẫn, dễ gây nổ 10.1.8 Kỹ thuật an tồn ni cấy mơi trường rắn Kỹ thuật an tồn ni cấy vi sinh vật môi trường rắn Trong số xí SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XN ĐƠNG Trang 94 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca nghiệp nuôi cấy chủng nấm mốc vi khuẩn môi trường rắn xốp, tất dùng khay Phương pháp sản xuất làm nhiễm bẩn khơng khí bụi hữu tạo từ bào tử môi trường dinh dưỡng, bán thành phẩm thành phẩm Khi chuẩn bị canh trường, cấy vào môi trường, nuôi cấy, vận chuyển, tháo liệu , nghiền, sấy bao gói lượng lớn vi sinh vật bào tử chúng xâm nhập vào khơng khí phịng sản xuất Nếu khơng có cấu kín, trao đổi khí khơng mạnh khơng có phận hút khí hàm lượng bụi đạt từ 100 đến 150 mg/1m3 khơng khí, điều dẫn đến xuất nổ cháy Tất điều có ảnh hưởng khơng tốt đến sức khoẻ cơng nhân Hàm lượng bào tử khơng khí khoảng 20000/m3 cóthể làm cho cơng nhân bị bệnh niêm dịch, bệnh da quan bên thể Chính nên cần thiết phải có biện pháp bảo đảm an tồn cho cơng việc Việc ni cấy canh trường cần phải khí hố cần tiến hành thiết bị kín, điều kiện vô trùng Trong phân xưởng sản xuất cần phải tiến hành kiểm tra thường xuyên trạng thái mơi trường sản xuất, độ kín thiết bị, đường ống, phương tiện vận chuyển, hệ thống quạt hệ thống hút 10.2 Bảo vệ môi trường Bảo vệ thiên nhiên sử dụng hợp lý nguồn dự trữ điều kiện khai thác triệt để nhiệm vụ mang tính xã hội, kinh tế quan trọng quốc gia Việc thu nhận chế phẩm hoạt hố sinh học có liên quan với sử dụng vi sinh vật khác sản xuất Phân tích phế thải xí nghiệp vi sinh vật khẳng định rằng: khơng khí nước thải vào môi trường xung quanh cần phải tiến hành vô trùng Hệ thống bảo vệ môi trường xung quanh bao gồm thiết bị làm khơng khí thải, nước rửa thải 10.2.1 Làm khơng khí Khơng khí thải vào khí bị nhiễm tế bào vi sinh vật, bị nhiễm cát bụi protein sản phẩm khác tổng hợp vi sinh, tạo giai đoạn lên men Để giảm bụi khí thải, thường sử dụng máy lọc khí 10.2.2 Làm nước thải Q trình cơng nghệ thu nhận sản phẩm vi sinh tổng hợp đòi hỏi phải sử dụng lượng lớn nước, lượng nước bị nhiễm bẩn vi sinh vật độc hại, muối khoáng cấu tử hữu Độ nhiễm bẩn dòng nước đánh giá theo hai số: COD BOD (COD SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 95 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca – lượng Oxy (mg) để oxy hố hồn tồn tất chất nhiễm bẩn hố học có lít nước thải BOD – lượng Oxy (mg), mà vi sinh vật sử dụng để oxy hoá chất hữu có lít nước thải) SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 96 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca KẾT LUẬN Sau thực đồ án rút kết luận: Nhà máy sản xuất enzyme cellulase đặt khu công nghiệp Quảng Phú – Quảng Ngãi Việc thiết kế nhà máy sản xuất chế phẩm enzyme cellulase kỹ thuật đáp ứng phần cho nhu cầu số ngành công nghiệp, chăn ni, số ngành khác, góp phần thúc đẩy phát triển kinh tế đất nước nói chung khu vực miền trung nói riêng, tận dụng nguồn nguyên liệu có sẵn nước đồng thời xử lý phần lượng bã mía nhà máy đường Quảng Ngãi Dây chuyền sản xuất lựa chọn qua việc kế thừa nghiên cứu nước nước ngồi Để sản xuất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca phải sử dụng nguyên liệu bã mía với khối lượng 483,7 kg/ca với thành phần khác Để vận hành sản xuất quy trình cơng nghệ cần có thiết bị: xử lý ngun liệu (máy nghiền bã mía, phối trộn nguyên liệu, hấp trùng làm nguội), lên men (nhân giống cấp I, II, nhân giống sản xuất lên men khay, thiết bị trùng khay,thiết bị định lượng khay), tinh chế sản phẩm (thiết bị nghiền mịn, trích ly, ly tâm, kết tủa, đặc) cuối đóng gói sản phẩm Để vận quy trình cần số nhân lực sản xuất trực tiếp 90 người nhà máy sản xuất xây dựng diện tích 13000 m2 với phân xưởng sản xuất cơng trình phụ Đà Nẵng, ngày tháng 05 năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Thị Dung SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 97 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước [1] Trần Hồng Ân, Giáo trình Enzyme học NXB Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [2] Bùi Xn Đơng (2015) Giáo trình Cơng Nghệ Enzyme Đại học Bách Khoa – Đại học Đà Nẵng [3] Phan Thị Trân Châu, Phan Tuấn Nghĩa (2006) Công Nghệ Sinh Học Tập 3: Enzyme Ứng Dụng, NXB giáo dục Hà Nội [4] Trần Hữu Uyển Hoàng Kim Cơ, Lương Đức Phẩm, Lý Kim Bảng, Dương Đức Hồng (2001) Kỹ thuật môi trường, NXB Khoa Học Và Kỹ Thuật Hà Nội [5] Nguyễn Lân Dũng (1979) Vi sinh vật học tập I, Vi sinh vật học tập I, NXB Khoa học kỹ thuật [6] Nguyễn Đức Lượng (2002) Công Nghệ Vi Sinh 2, Vi Sinh Học Công Nghiệp, NXB Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [7] Nguyễn Đức Lượng (2004) Cơng Nghệ Enzyme NXB Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh [8] Mai Xn Lương, (2005) Giáo Trình Enzyme, NXB Trường đại học Đà Lạt [9] Trần Xuân Ngạch, (2003) Bài giảng Công Nghệ Enzyme [10] Cao Đăng Nguyên (2005) Công Nghệ Protein, NXB Đại học Huế [11] Lê Văn Hồng (2004) Các q trình thiết bị cơng nghệ sinh học công nghiệp NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [12] Lương Đức Phẩm (2004) Công nghệ vi sinh vật NXB Nông Nghiệp [13] Nguyễn Xuân Thành - Nguyễn Bá Hiên - Hoàng Hải – Vũ Thị Hoan, (2005) giáo trình “Vi Sinh Vật Học Cơng Nghiệp”, NXB giáo dục Thành phố Hồ Chí Minh [14] Trần Thế Truyền (2006) “Cơ Sở Thiết Kế Nhà Máy”, Đại học Bách Khoa – Đại học Đà Nẵng [15] Trần Xoa, Nguyễn Trọng Khuông, Hồ Lê Viên (1992) –‘Sổ tay q trình thiết bị cơng nghệ hóa chất thực phẩm’, Tập - NXB Đại học Kỹ thuật Hà Nội [16] Trần Xoa, Nguyễn Trọng Khuôn, Hồ Lê Viên (1992) –‘Sổ tay trình thiết bị cơng nghệ hóa chất thực phẩm’, Tập - NXB Đại học Kỹ thuật Hà Nội Tài liệu nước [17] Jan-Christer Janson, (2010) “Protein Purification: Principles, high resolution methods, and applications”, Volume 54, Wiley series in Methods of Biochemical Analysis [18] Matti Leisola, Jouni Jokela, Ossi Pastinen, Ossi Turunen (2009) “Industrial use of enzymes”, Physiology and maintenance – Vol II SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 98 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger mơi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca [19] Operating Manual “Bullet Magnet - High Intensity – Rare Earth”, Eclipse Magnetics Ltd, Atlas Way, Sheffield, S47QQ, England [20] Operating manual “the flottweg disk stack centrifuge”, Flottweg SE Industriestraße 6-8 84137, Vilsbiburg, Deutschland (Germany) [21] Kunio Ohmiya, Kazuo Sakka, Shuichi Karita, Tetsuya Kimura Structure of Cellulases and Their Applications Biotechnology and Genetic Engineering Reviews, 1997 [22] Dewey D.Y Ryu Mary Mandels (1980) Cellulase: biosynthesis and applications, Enzyme Microbiology Technology [23] Operating manual “the flottweg disk stack centrifuge”, Flottweg SE Industriestraße 6-8 84137, Vilsbiburg, Deutschland (Germany) [24] Operating manual “CM serie centrifugal electric pumps” pentax, Italia Tài liệu từ internet [25].http://www.indogulfgroup.com/AE%20-20Enzymes%20%20Cellulase.asp (20/02/2017) [26] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC167665/ (20/02/2017) [27] Máy tuyển từ tính khơ http://maythietbimo.vn/san-pham/may-tuyen-tu-khomot-tang-trong-tu-p53497a246069.htm, (18/03/2017) [28] Máy trộn http://cotantien.com.vn/product.aspx?id=43, (19/03/2017) [29] Thiết bị tiệt trùng liên tục dạng đường hầm http://www.thietbivpm.com/sanpham/chitiet/sp/196-May-thanh-trung-lam-nguoi-lientuc-dang-phun.VPM#Thông (18/03/2017) [30] Thiết bị cô đặc http://ttmindustry.vn/default.asp?prod=7&view=81, (25/03/2017) [31].http://thietbiphongsach.com/snphm.html?age=shop.product_details&catego ry id=4&flypage=flypage.tpl&product_id=440, (22/03/2017) [32].https://www.alibaba.com/product-detail/continuous-stirred-tankreactor_1692136229.html (24/04/2017) [33] http://www.indogulfgroup.com/AE%20-20Enzymes%20%20Cellulase.asp (30/04/2017) [34] https://en.wikipedia.org/wiki/Cellulase (17/02/2017) [35] http://www.sollichna.com/products/product-lines-by-sollich/thermo-flowplus-cooling-tunnels/stainless-steel-cooling-tunnels (26/04/2017) [36] http://www.acrison.com/pages/corp_europe.html (25/03/2017) [37] http://ducphatvn.com/san-pham/may-dong-goi-tra-tui-loc-yd-11-a27.html (25/03/2017) SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 99 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca [38] https://matran.vn/dia-ly/vi-tri-dia-hinh-thuy-van-va-khi-hau-quang-ngai- 46.html.(25/2/2017) [39] Máy nghiền bã mía: http://maynhanong.com/may-nghien-ba-mia-xo-dua (25/3/2017) [40] http://www.acrison.com/pages/corp_europe.html (30/3/2017) SVTH: NGUYỄN THỊ DUNG GVHD: BÙI XUÂN ĐÔNG Trang 100 ... ĐÔNG Trang Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca sản xuất enzyme từ Asp .niger Theo... 14 Thiết kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase phương pháp lên men aspergillus niger môi trường rắn – xốp với suất 500 lít chế phẩm enzyme kỹ thuật/ca Khuẩn lạc Asp .niger môi trường Czapek với. .. kế nhà máy sản xuất enzyme cellulase? ?? việc cần thiết Từ luận giải đây, tiến hành ? ?thiết kế nhà máy sản xuất enzyme Cellulase phương pháp lên men Aspergillus niger môi trường rắn- xốp với suất 500