Nghiên cứu một số đặc tính sinh học và sinh học phân tử của virus care phân lập ở phía bắc việt nam

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THỊ HẠNH NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ CỦA VIRUS CARE PHÂN LẬP Ở PHÍA BẮC VIỆT NAM Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Thị Lan NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan.Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 26 tháng năm 2019 Tác giả luận văn Lê Thị Hạnh i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, giúp đỡ, bảo tận tình thầy cô giáo Học viện Nông Nghiệp Việt Nam, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi đươc bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc GS TS Nguyễn Thị Lan tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới thầy giáo Khoa Thú Y, Bộ môn Bệnh lý thú y, Bệnh viện thú y- Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học thú y- Bệnh viện thú y giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình thực đề tài Tôi xin chân thành ơn tập thể lãnh đạo, Khoa Dịch vụ thú y- Trường Cao Đẳng Công nghệ Môi Trường Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình cơng tác, học tập thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày 26 tháng năm 2019 Tác giả luận văn Lê Thị Hạnh ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục đồ thị ix Trích yếu luận văn x Thesis abstract xii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh care ngồi nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Care nước 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Care ngồi nước 2.2 Một số thông tin virus care 2.2.1 Phân loại virus gây bệnh Care 2.2.2 Hình thái virus Care 2.2.3 Cấu trúc virus Care 10 2.2.4 Sức đề kháng virus Care 10 2.2.5 Cơ chế sinh bệnh 11 2.2.6 Đặc tính sinh học virus Care 12 2.2.7 Đặc tính sinh học phân tử virus Care 13 2.3 Một số thông tin bệnh care 15 2.3.1 Đặc điểm dịch tễ bệnh Care 15 iii 2.3.2 Triệu chứng bệnh tích 17 2.3.3 Chẩn đoán bệnh Care 18 2.3.4 Phòng điều trị bệnh 20 Phần Vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 23 3.1 Địa điểm nghiên cứu 23 3.2 Thời gian nghiên cứu 23 3.3 Đối tượng/vật liệu nghiên cứu 23 3.4 Nội dung nghiên cứu 24 3.4.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng virus Care phân lập 24 3.4.2 Nghiên cứu số đăc điểm sinh học phân tử chủng Virus Care phân lập 24 3.5 Phương pháp nghiên cứu 25 3.5.1 Phương pháp quan sát, thống kê sinh họcxử lý số liệu phần mềm excel 25 3.5.2 Phương pháp mổ khám, quan sát bệnh tích đại thể 25 3.5.3 Phương pháp phân lập virus Care môi trường tế bào Vero-DST 26 3.5.4 Phương pháp xác định hiệu giá virus (TCID50/ml) 27 3.5.5 Phương pháp xác định đường biểu biễn nhân lên virus 27 3.5.6 Phương pháp Chẩn đoán phát bệnh Care kit chẩn đoán nhanh 27 3.5.7 Phương pháp RT-PCR PCR 28 3.5.8 Phương pháp giải trình tự gene xử lý liệu giải trình tự gene 30 3.5.9 Xử lý số liệu 31 Phần Kết thảo luận 32 4.1 Thu thập mẫu chó mắc bệnh care chẩn đốn kỹ thuật RT-PCR 32 4.1.1 Kết chẩn đoán chó mắc bệnh Care phương pháp RT-PCR 32 4.2 Kết nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng virus care phân lập 39 4.2.1 Thông tin chủng virus Care phân lập sử dụng nghiên cứu 39 4.2.2 Khả gây bệnh tích tế bào (CPE) hiệu giá chủng virus Care phân lập 40 iv 4.3 Kết nghiên cứu số đặc điểm sinh học phân tử chủng virus phân lập 46 4.3.1 Kết giải trình tự gene chủng virus nghiên cứu 46 4.3.2 Kết so sánh trình tự nucleotide chủng virus nghiên cứu 49 4.3.3 Kết so sánh trình tự axit amin chủng virus nghiên cứu 50 4.3.4 So sánh mức độ tương đồng trình tự nucleotide chủng virus nghiên cứu 52 4.3.5 So sánh mức độ tương đồng trình tự axit amin chủng virus nghiên cứu 53 4.3.6 Kết xây dựng sinh học phân tử 53 Phần Kết luận kiến nghị 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Kiến nghị 56 Tài liệu tham khảo 58 Phụ lục 61 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt CDV Canine distemper virus (Virus gây bệnh Care chó) CPE Cytophathogenic Effect (khả gây bệnh tích tế bào) CPV Canine Parvovirus (Virus gây bệnh Parvo chó) DAB 3,3-diaminobenzidine DNA Deoxyribonucleic acid (Axít deoxyribonucleic) EDTA Ethylene diamine tetra acetic acid (axít etylen diamin tetraaxetic) ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (Phương pháp miễn dịch gắn enzyme) FBS Fetal Bovine Serum (Huyết thai bò) FCS Fetal Calf Serum (Huyết thai bê) MOI Multiplicity Of Infection (Bội số gây nhiễm) PBS Phosphate Buffered Saline (Dung dịch muối đệm phosphat) PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi Polymerase) RNA Ribonucleic acid (Axít ribonucleic) RT-PCR Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (Phản ứng tổng hợp chuỗi phiên mã ngược) SLS Sample loading solution (Dung dịch pha mẫu) vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các virus thuộc giống Morbillivirus bệnh chúng gây Bảng 3.1 Chó mắc bệnh care theo giống chó khác 23 Bảng 3.2 Chó mắc bệnh care theo địa phương nghiên cứu khác 23 Bảng 3.3 Mồi sử dụng cho phản ứng RT-PCR giải trình tự gene P 24 Bảng 4.1 Kết chẩn đốn chó mắc Care phương pháp RT-PCR 32 Bảng 4.2 Kết chẩn đoán phương pháp RT-PCR PCR 33 Bảng 4.3 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu chó mắc bệnh Care 34 Bảng 4.4 Bệnh tích đại thể chó mắc care 35 Bảng 4.5 Thông tin chủng virus Care sử dụng nghiên cứu 39 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu khả gây bệnh tích tế bào (CPE) chủng virus Care 40 Bảng 4.7 Hiệu giá chủng virus Care phân lập 43 Bảng 4.8 Các chủng virus Care lựa chọn nghiên cứu quy luật nhân lên 44 Bảng 4.9 Sự tương đồng trình tự nucleotide gene P chủng virus Care nghiên 52 Bảng 4.10 Sự tương đồng axit amin mã hóa từ gene P chủng virus nghiên cứu 53 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Kết điện di sản phẩm RT-PCR chẩn đoán ca rê 32 Hình 4.2 Chó bỏ ăn, ho, sốt, có biểu thần kinh 37 Hình 4.3 Chó mắc care sốt, ho, khó thở, dỉ mắt, mũi 37 Hình 4.4 Chó tiêu chảy, phân màu cà phê 37 Hình 4.5 Hình ảnh thu mẫu mổ khám chó mắc care 37 Hình 4.6 BK-HN05 Phổi viêm, xuất huyết, gan hóa 38 Hình 4.7 BK-HN06 Ruột xuất huyết, xung huyết chứa căng phồng 38 Hình 4.8 BH- HG06 Gan to xung huyết 38 Hình 4.9 Ph- HD04 Hạch lympho màng treo ruột sưng, tụ máu 38 Hình 4.10 CPE CDV1-PHN gây sau 24 gây nhiễm tế bào Vero-DST 42 Hình 4.11 CPE CDV1-PHN gây sau 48 gây nhiễm tế bào Vero-DST 42 Hình 4.12 CPE CDV1-PHN gây sau 36 gây nhiễm tế bào Vero-DST 42 Hình 4.13 Tế bào Vero-DST không gây nhiễm virus Ca rê 42 Hình 4.14 Kết khuếch đại gene P phục vụ giải trình tự 47 Hình 4.15 Giản đồ giải trình tự tự động thành phần nucleotide gen Phosphor protein chủng virus CDV1-PHN 48 Hình 4.16 Các vị trí sai khác nucleotide gene P chủng virus nghiên cứu 49 Hình 4.17 Kết so sánh trình tự axitamin gen P chủng CDV nghiên cứu 51 Hình 4.18 Cây sinh học phân tử dựa trình tự nucleotide gene P chủng virus Care nghiên cứu 55 viii DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 4.1 Đường biểu diễn nhân lên chủng CDV1-PHN 45 Đồ thị 4.2 Đường biểu diễn nhân lên chủng CDV19-RHN 45 Đồ thị 4.3 Đường biểu diễn nhân lên chủng CDV28-HHN 46 ix Hình 4.17 Kết so sánh trình tự axitamin gen P chủng CDV nghiên cứu Ghi chú: Các vị trí amino acid giống biểu thị dấu (.); vị trí có sai khác biểu thị amino acid tương ứng chủng virus Trong kí hiệu amino acid là: Alanine: A; Aspartic acid Asparagine: B; Cysteine: C; Aspartic acid: D; Glutamic acid: E; Phenylalanine: F; Glycine: G; Histidine: H; Isoleucine: I; Lysine: K; Leucine: L; Methionine: M; Asparagine: N; Proline: P; Glutamine: Q; Arginine: R; Serine: S; Threonine: T; Valine: V; Tryptophan: W; Tyrosine: Y; Glutamic acid glutamine: Z Kết hình 4.17, cho thấy chủng virus nghiên cứu chủng virus vacxin có trình tự axit amin mã hóa từ gene P có độ dài 129 axit amin Khi so sánh chủng virus nghiên cứu thu số lượng vị trí sai khác là: - Chủng CDV1-PHN có vị trí sai khác với chủng CDV19-HHN là: 2, 17, 19, 32, 56, 61, 128 - Chủng CDV1-PHN có vị trí sai khác với chủng CDV28-RHN là: 2, 9, 17, 19, 32, 33,56, 61 - Chủng CDV28-RHN có vị trí sai khác với chủng CDV19-HHN là: 9, 32, 133 (Giải thích: axit amin có nghĩa có sai khác axit amin vị trí thứ trình tự 129 axit amin theo thứ tự trình tự axit amin thu nhân được) Khi so sánh kết vị trí sai khác trình tự axit amin trình tự nucleotide chủng virus nghiên cứu, nhận thấy có sai khác Điều lý giải có nhiều ba nucleotide mã hóa cho axit 51 amin nhất, dẫn đến sai khác so sánh kết so sánh trình tự nucleotide axit amin chủng virus Care nghiên cứu So sánh kết nghiên cứu với kết nghiên cứu Iwatsuki et al (1997); Lan et al (2005c, 2006a, 2006b, 2007, 2009a) Điều cho thấy khơng có thay đổi số lượng vị trí chứa cysteine chủng virus Care phân lập trước chủng phân lập nghiên cứu 4.3.4 So sánh mức độ tƣơng đồng trình tự nucleotide chủng virus nghiên cứu Qua kết giải trình đoạn gene P chủng virus Care nghiên cứu, tiến hành thu thập xử lý chương trình MEGA6 để so sánh mức độ tương đồng nucleotide chủng nghiên cứu tham chiếu với chủng virus vacxin Kết trình bày bảng 4.9 Bảng 4.9 Sự tƣơng đồng trình tự nucleotide gene P chủng virus Care nghiên Chủng virus CDV CDV1-PHN CDV1-PHN CDV19-RHN CDV28-HHN 100,0 CDV19-RHN 93,6 100,0 CDV28-HHN 93,0 99,4 100,0 Qua kết bảng 4.9 cho thấy chủng virus nghiên cứu có mức độ tương đồng nucleotide gene P đạt tỷ lệ cao 93,00%, 93,6 - 99,4% Trong đó: - Ở gene P chủng CDV1-PHN CDV19 –RHN có mức độ tương đồng 93,6%; chủng CDV1-PHN CDV28-HHN có mức độ tương đồng 93,0% chủng CDV19-RHN CDV28-HHN có mức độ tương đồng tương đối cao 99,75%; Điều cho thấy gần gũi mối quan hệ di truyền chủng virus CDV19-RHN CDV28-HHN nghiên cứu Kết nghiên cứu tương đương với kết nghiên cứu Lan et al (2006a) Guo et al (2013) tỷ lệ tương đồng nucleotide 52 4.3.5 So sánh mức độ tƣơng đồng trình tự axit amin chủng virus nghiên cứu Dùng phần mềm MEGA6 để phân tích tương đồng trình tự axit amin chủng virus Care nghiên cứu với Dựa mã hóa nên axit amin tương ứng gene P, phần mềm phân tích kết trình bày bảng 4.10 Bảng 4.10 Sự tƣơng đồng axit amin mã hóa từ gene P chủng virus nghiên cứu Chủng virus CDV CDV1-PHN CDV19-RHN CDV28-HHN CDV1-PHN CDV19-RHN 100,0 90,1 88,1 100,0 98,0 CDV28-HHN 100,0 Kết cho thấy chủng virus CDV nghiên cứu có mức độ tương đồng axit amin tương ứng gene P đạt tỷ lệ cao 88,01% - 90,1% 98,0% Trong đó: Ở gene P chủng CDV1-PHN CDV19 –RHN có mức độ tương đồng 80,1%; chủng CDV1-PHN CDV28-HHN có mức độ tương đồng 90,10% chủng CDV19-RHN CDV28-HHN có mức độ tương đồng tương đối cao 98,00%; Kết nghiên cứu thấp so với kết nghiên cứu Lan et al (2006a) mức độ tương đồng gene P chủng P94S, Ac96I S124C thuộc genotype Asia Nhưng tương đương với kết nghiên cứu Guo et al (2013) mức độ tương đồng gene P chủng virus Care thuộc genotype Asia 4.3.6 Kết xây dựng sinh học phân tử Sau so sánh mức độ tương đồng nucleotide chủng virus Care nghiên cứu dựa vào phần mềm MEGA6 tiến hành xây dựng sinh học phân tử để xác định phân tích nguồn gốc phát sinh chủng virus nghiên cứu với việc sử dụng chủng virus Care tham chiếu lấy từ ngân hàng gene giới 53 Kết phân tích nguồn gốc phát sinh chủng virus Care nghiên cứu dựa sai khác nucleotide axit amin đoạn gene P thể bảng 4.10, bảng 3.1, 3.2 (phụ lục 3) hình 4.18 Từ kết phân tích nguồn gốc phát sinh loài theo sai khác nuclecotide gene P bảng 4.10 kết phân tích nguồn gốc cho thấy: chủng virus Care nghiên cứu nằm nhánh phát sinh khác Trong đó, chủng virus nằm nhánh phát sinh thuộc genotype Asia là: CDV19-RHN CDV28-HHN nằm nhánh phát sinh với chủng virus Vietnam HCM 2014.LC 159587, Vietnam VNUA-CDV-03 LC1139392009; Japan 2012 AB 755426; China 2012 KJ 466106; China 2010 JN896331 + Chủng CDV1-PHN nằm nhánh phát sinh với chủng virus Thailand 2014 MH 496773 thuộc genotype Asia Như dựa kết phân tích nguồn gốc phát sinh loài theo sai khác nucleotide đoạn gen P chủng virus Care nghiên cứu, nhận thấy chủng virus nghiên cứu nằm nhánh phát sinh khác nhau, thuộc genotype Asia Kết nghiên cứu có sai khác so với nghiên Guo et al (2013) virus Care gây bệnh gấu trúc chó hoang thuộc genotype Classic Bên cạnh đó, nghiên cứu Lan et al (2009a) chủng virus phân lập Việt Nam thuộc Genotype Asia1 nhánh phát sinh với chủng CDV19-RHN CDV28-HHN nghiên cứu Điều cho thấy có truyền lây bệnh vùng địa lý khác nước truyền lây bệnh quốc gia giới có nhiều nguyên nhân khác Kết nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng việc lựa chọn chủng virus để nhập vacxin chế tạo kít chẩn đốn, làm kháng ngun cho chẩn đốn làm giống để cơng cường độc đánh giá hiệu bảo hộ kiểm nghiệm vacxin., Kết nghiên cứu tạo tiền đề giúp thúc đẩy nghiên cứu phát triển sản xuất vacxin nước từ chủng virus lưu hành thực địa, từ nâng cao hiệu phịng bệnh Kết phân tích nguồn gốc phát sinh chủng virus Care nghiên cứu dựa sai khác nucleotide axit amin đoạn gene P thể hình 4.18 54 Asia1 Hình 4.18 Cây sinh học phân tử dựa trình tự nucleotide gene P chủng virus Care nghiên cứu 55 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 1) Đã xác định 37 chó mắc phương pháp RT-PCR với triệu chứng lâm sàng điển gầy yếu, biếng ăn, ủ rũ, sốt, ho, tiêu chảy màu cà phê, nôn mửa, có dử mắt, dử mũi nhiều Bệnh tích đại thể chủ yếu: Phổi xuất huyết, viêm ruột, xuất huyết, hạch lympho sung huyết, xuất huyết Nghiên cứu đặc tính sinh học virus Care: Đã phân lập 23 chủng virus Care môi trường tế bào Vero – DST Lựa chọn 12 chủng virus để nghiên cứu số đặc điểm sinh học cho thấy: Bệnh tích tế bào xuất sau 24 đến 36 sau gây nhiễm virus tế bào Vero-DST bị phá hủy hoàn toàn sau 96 Virus Care phân lập có hiệu giá cao từ 1,44 x 102 đến 3,16x105 TCID50/ml Trong chủng virus Care CDV1-RHN, CDV19-PHN, CDV28HHN nhân lên ổn định môi trường nuôi cấy tế bào Vero- DST cho thấy hàm lượng virus tế bào thường cao hàm lượng virus tế bào Hàm lượng virus đạt mức cao 48 đến 60 sau gây nhiễm 2) Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử virus Care chủng virus Care CDV1-RHN, CDV19-PHN, CDV28- HHN phân lập dựa kết giải trình tự gene P Kết giải trình tự gene đoạn gene P có độ dài 387 bp Mức độ tương đồng nucleotide axit amin gene P chủng virus nghiên cứu đạt tỷ lệ từ 93,00% - 99,4% 88,01% - 98,0% chủng virus Care CDV1-RHN, CDV19-PHN, CDV28- HHN phân lập nằm nhánh phát sinh khác thuộc genotype Asia1 5.2 KIẾN NGHỊ 1) Tiếp tục thu thập chó mắc bệnh Care địa phương nghiên cứu giống chó khác để phân lập nhiều mẫu virus Care phục vụ cho việc sàng lọc lựa chọn chủng virus từ thực địa 2) Tiếp tục nghiên cứu đánh giá ổn định đặc tính sinh học chủng virus Care phân lập môi trường nuôi cấy dòng tế bào Vero-DST qua nhiều đời đánh giá độc lực chó thí nghiệm 3) Tiếp tục nghiên cứu giải trình tự tồn genome chủng virus Care phân lập nhằm xác định khác liệu di truyền chủng virus nghiên cứu 56 4) Nghiên cứu lựa chọn chủng vacxin Care thích hợp cho việc sản xuất kháng thể đơn dịng phục vụ chẩn đốn chế tạo Kit chẩn đốn nhanh chó mắc bệnh Care 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Hồ Đình Chúc (1993) Bệnh Care đàn chó Việt Nam kinh nghiệm điều trị, Cơng trình nghiên cứu, Hội thú y Việt Nam Lê Thị Tài (2006) Một số bệnh virus NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (2009) Giáo trình Miễn dịch học thú y NXB Nông nghiệp tr 79 - 84 Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (2010) Giáo trình Miễn dịch học ứng dụng NXB Nông nghiệp tr.153 - 156 Nguyễn Hữu Nam (2011) Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp bộ, tr 16, 30-34 Nguyễn Thị Lan Khao Keonam (2012) Đặc điểm bệnh lý chó phú quốc mắc bệnh care ứng dụng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang để chẩn đốn bệnh Tạp chí Khoa học Phát triển 10 (6) tr 913-918 Nguyễn Thị Lan Trần Trung Kiên (2010) Nghiên cứu bệnh Care chó vùng Hà Nội phương pháp giải phẫu bệnh lý mô hóa miễn dịch Tạp chí Khoa học Kỹ thuật thú y XVII (2) tr 14-18 Nguyễn Thị Lan, Bounheuang Sihoungvanh, Nguyễn Thị Yến Nguyễn Hữu Nam (2015) Một số đặc điểm bệnh lý chó gây bệnh thực nghiệm chủng virus Care (CDV-768) Tạp chí Khoa học Phát triển 13 (1) tr 56-64 Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Hữu Nam Nguyễn Thị Huyên (2012) Nghiên cứu số đặc điểm sinh học virus gây bệnh Care phân lập đàn chó ni Hà Nội Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 19 (4) tr 11-17 10 Nguyễn Văn Dũng, Vũ Kim Chiến Phạm Xuân Thảo (2018) Phân lập xác định đặc tính di truyền virus gây bệnh care chó ni thành phố Hồ Chí Minh Tạp chí Khoa học Kỹ thuật thú y tr 19-24 11 Nguyễn Văn Thanh (2007) Bài giảng Bệnh chó mèo NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 12 Tô Du Xuân Giao (2006) Kỹ thuật ni chó mèo phịng trị bệnh thường gặp, NXB Lao động xã hội, Hà Nội 13 Trần Thanh Phong (1996) Một số bệnh truyền nhiễm chó, Tủ sách trường Đại học Nơng lâm thành phồ Hồ Chí Minh tr 54-68 58 14 Trần Văn Nên, Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Văn Thanh Lương Quốc Hưng (2017) Nghiên cứu số đặc điểm sinh học phân tử virus Care phân lập số tỉnh phía Bắc Việt Nam Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 15 (1) tr 44-45 15 Vương Đức Chất Lê Thị Tài (2004) Bệnh chó mèo cách phịng trị NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội II Tài liệu tiếng Anh: 16 An D., K Tae-Young, S Dae-Sub, K Bo-Kyu and P Bong-Kyun (2008) An Immunochromatography assay for rapid antemortem diagnosis of dogs suspected to have canine distemper Journal of Virological Methods 147 pp 244-249 17 Angelika K L., D.P Morné, L.D Desiré, M Emily and H.V Estelle (2017) Genome Sequences of Three Vaccine Strains and Two Wild-Type Canine Distemper Virus Strains from a Recent Disease Outbreak in South Africa pp 23-25 18 Bell S.C., S.D Carter and D Bennett (1991) Canine distemper viral antigenes and antibodies in dogs with rheumatoid arthritis Res Vet Sci.50.(1) pp.64-68 19 Blixenkrone M., V Svansson, P Have, C Orvell, M Appel, P.I Rode and P Henriksen (1993) Studies on manifestations of canine distemper virus infection in an urban dog population Veterinary Microbiology 37 pp 163-173 20 Carpenter M.A., M.J Appel, M.N Roelke-Parker, L Munson, H Hofer, M East and S.J O'Brien (1998) Geneetic characterization of canine distemper virus in Serengeti carnivores Vet Immunol Immunopathol 65(2-4) pp 259-66 21 Diallo A (1990) Morbillivirus gruop: geneome organisation and protiens Veterinary Microbiology 23 pp 155-163 22 Griffin D.E (2001) Measles virus In Fields Virology, 4th edn, pp 1401-1441 Edited by Knipe, D M Philadelphia, PA: Lippincott Williams and Wilkins 23 Haas L., W Marthens, I Greiser-Wilke, L Mamaev, T Butina, D Maack and T Barrett (1997) Analysis of the haemagglutinin genee of current wild-type canine distemper virus isolates from Germany Virus Research 48 pp 165-171 24 Haas L., H Liermann, T.C Harder, T Barrett, M Lochelt, M.V Von, W Baumgarner and I Greiser-Wilke (1999) Analysis of the H genee, the central untranslated region and the proximal coding part of the F genee of dild-type and vacxin canine distemper viruses Veterinary Microbiology 69 pp 15-18 59 25 Keawcharoen J., A.Theamboonlers, P.Jantaradsamee, A.Rungsipipat, Y Poovorawan and K Oraveerakul (2005) Nucleotide sequence analysis of nucleocapsid protein genee of canine distemper virus isolates in Thailand Division of Virology, Deparment of Pathology, Faculty of Veterinary Science, Chulalongkorn University, Bangkok 10330 Thailand, Veterinary Microbiology pp 137-142 26 Lamb R.A and D Kolakofsky (2001) Paramyxoviridae: The viruses and their replication In FundaDMEMtal Virology, 4th edn pp 689-724 Edited by Kinpe D M and Howley, P M Philadelphia: Lippincoot Williams and Wilkins 27 Lan N.T., R Yamaguchi, A Inomata, Y Furuya, K Uchida, S Sugano and S Tateyama (2006) Comparative analyses of canine distemper viral isolates from clinical cases of canine distemper in vaccinated dogs Vet Microbiol pp 32-42 Epub 2006 Feb 28 28 Lan N.T., R Yamaguchi, Y Furuya, A Inomata, S Ngamkala, K Naganobu, K Kai, M Mochizuki, Y Kobayashi, K Uchida and S Tateyama (2005) Pathogeneesis and phylogeneetic analyse of canine distemper virus strain 007Lm, a new isolate in dogs Vet Microbiol 110 pp 197-207 29 Latha D., M Geetha, P Ramadass and R.B Narayanan (2007) Evaluation of ELISA based on the conserved and functional middle region of nucleocapsid protein to detect distemper infection in dogs Vet Microbiol pp 251-260 Epub 2006 Nov 26 30 Martella V., F Cirone, G Elia, E Lorusso, N Decaro, M Campolo, C Desari, M.S Lucente, A.L Bellacicco, M Blixenkrone-Møller, L.E Carmichael and C Buonavoglia (2006) Heterogeneeity within the hemagglutinin genees of canine distemper virus (CDV) strains detected in Italy Vet Microbiol pp.301-309 31 Martella V., G Elia, M.S Lucente, N Decaro, E Lorusso, K Banyai, M Blixenkrone-Møller, N.T Lan, R Yamaguchi, F Cirone, L.E Carmichael and C Buonavoglia (2007).Geneotyping canine distemper virus (CDV) by a heminested multiplex PCR provides a rapid approach for investigation of CDV outbreaks Vet Microbiol pp 32-42 32 Nguyen Thi Lan, R Yamaguchi, T.T Kien, H Takuya, H Yuichi and N.H Nam (2008) First Isolation and Characterization of Canine Distemper Virus in Vietnam with the Immunohistochemical Examination of the Dog J Vet Med Sci.pp 155-162 60 PHỤ LỤC PHỤ LỤC MẪU HỒ SƠ BỆNH ÁN GIA SÚC TẠI BỆNH VIỆN THÚ Y HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc KHOA THÚ Y - BỆNH VIỆN THÚ Y Hà Nôi, ngày … tháng…năm 20… HỒ SƠ BỆNH ÁN GIA SÖC SỐ B/A:… Chủ gia súc:……………………………………………………………………… Địa chỉ:………………………………………………………………………… Điện thoại: …………………………………………………………………… Loại gia súc: ….………………………………………………………………… Tên gia súc:…………………………Tính biệt : ….Đực… Cái……………… Tuổi:……………………Trọng lượng………………………………………… Giống:………………….Màu lơng:……………………………………………… Tiêm phịng vácxin: Chưa tiêm phịng;…… Đã tiêm phòng:………………… Lịch sử điều trị:……….Triệu chứng lâm sàng:……………………………… Thân nhiệt:……………………… Lông:…………………………………… Mắt: ……………………………… Niêm mạc: … ………………………… Mũi:…………………………… Phân: …………………………………… Da:……………………………… Nước tiểu: ……………………………… Các biểu khác:………… … Yêu cầu xét nghiệm: Kết chẩn đoán:…… BÁC SĨ CHẨN ĐOÁN 61 Bảng 1.1 Hồ sơ mẫu thu thập nghi mắc Care STT Lứa tuổi < tháng Số lƣợng Triệu chứng lâm sàng 18 Sốt cao, chảy nước mắt, khó thở, nơn mửa liên tục, dịch mũi, ỉa chảy phân thối khắm, nôn mửa 3-6 tháng 16 Sốt cao, viêm kết mạc mắt, dịch mũi, khó thở, da bụng có nốt sài, ỉa chảy phân thối khắm, nôn mửa 6-12 tháng Sốt cao, bỏ ăn, chảy nước mắt, mũi, khó thở, ỉa chảy, nơn mửa >12 tháng Sốt cao, chảy nước mắt, ỉa chảy, nôn mửa Tổng số 46 62 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH VỀ BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA CHĨ MẮC BẸNH CARE Hình 2.1 Xuất huyết địa não Hình 2.2 Phổi xuất huyết tiểu não Hình 2.3 Gan xuất huyết, mật sƣng to, màng mật mỏng 63 Hình 2.4 Ruột xung huyết, xuất huyết PHỤ LỤC Bảng 3.1 So sánh tƣơng đồng nucleotide gen P chủng CDV nghiên cứu số chủng tham chiếu giới Chủng virus CDV CDV1-PHN 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 100.0 CDV19-RHN 93.6 100.0 CDV28-HHN 93.0 99.4 100.0 American.2003.AY286483 91.8 94.1 93.5 100.0 China.2010.JN896331 93.8 99.7 99.1 94.4 100.0 China.2012.KJ466106 93.8 99.7 99.1 94.4 100.0 China.2016.MH337872 94.1 98.8 98.2 94.1 Japan.2012.AB755426 93.8 99.7 99.1 94.4 100.0 Kazakhstan.2007.EU594261 91.8 94.7 94.1 99.4 95.0 95.0 94.7 95.0 100.0 Russia.2016.DQ237863 92.7 95.0 94.4 93.3 95.3 95.3 95.0 95.3 93.8 100.0 Thailand.2014.MH496773 98.5 94.4 93.8 92.7 94.7 94.7 95.0 94.7 92.7 93.5 100.0 Vietnam.HCM.2014.LC159587 93.5 100.0 99.4 94.1 99.7 99.7 98.8 99.7 94.7 95.0 94.4 100.0 Vietnam.VNUA_CDV_03.LC113939.2009 93.8 99.1 94.4 100.0 100.0 99.1 100.0 95.0 95.3 94.7 64 99.7 99.1 100.0 99.1 100.0 100.0 99.1 100.0 99.7 100.0 Bảng 3.2 So sánh tương đồng axitamin gen P chủng CDV nghiên cứu số chủng tham chiếu giới Chủng virus CDV CDV1-PHN 10 11 12 13 100.0 CDV19-RHN 89.9 100.0 CDV28-HHN 87.9 98.0 100.0 American.2003.AY286483 85.9 88.9 86.9 100.0 China.2010.JN896331 90.9 99.0 97.0 89.9 100.0 China.2012.KJ466106 90.9 99.0 97.0 89.9 100.0 100.0 China.2016.MH337872 90.9 96.0 93.9 88.9 Japan.2012.AB755426 90.9 99.0 97.0 89.9 100.0 100.0 97.0 100.0 Kazakhstan.2007.EU594261 86.9 89.9 87.9 99.0 90.9 90.9 89.9 90.9 100.0 Russia.2016.DQ237863 86.9 89.9 87.9 88.9 90.9 90.9 89.9 90.9 89.9 100.0 Thailand.2014.MH496773 97.0 90.9 88.9 86.9 91.9 91.9 91.9 91.9 87.9 87.9 100.0 Vietnam.HCM.2014.LC159587 89.9 100.0 98.0 88.9 99.0 99.0 96.0 99.0 89.9 89.9 90.9 100.0 Vietnam.VNUA_CDV_03.LC113939.2009 90.9 97.0 89.9 100.0 100.0 97.0 100.0 90.9 90.9 91.9 65 99.0 97.0 97.0 100.0 99.0 100.0 ... Nghiên cứu đặc tính sinh học sinh học phân tử virus Care phân lập số tỉnh phía Bắc Việt Nam Kết nghiên cứu đặc tính sinh học sinh học phân tử virus Care giúp cho việc sàng lọc lựa chọn chủng virus. .. văn: Nghiên cứu số đặc tính sinh học sinh học phân tử virus Care phân lập Phía Bắc Việt Nam Mã số: 8640101 Ngành: Thú y Tên sở đào tạo: Học Viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu. .. ? ?Nghiên cứu số đặc tính sinh học sinh học phân tử virus Care phân lập Phía Bắc Việt Nam? ?? Kết nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng cung cấp liệu khoa học cụ thể xác nhóm virus Care lưu hành Miền Bắc