Đang tải... (xem toàn văn)
Xác định trình tự DNA là phương pháp xác định trật tự sắp xếp của các nucleotide trong phân tử DNA... Các mốc giải mã hệ gen của các sinh vật khác nhau.[r]
(1)CHƯƠNG II: CÁC KỸTHUẬT NỀN CỦA CNSH HIỆN ĐẠI
(10 TIẾT)
1. Chức ứng dụng enzyme giới hạn
2. Giới thiệu vector nhân dòng kỹ thuật nhân dòng gen 3. Các phương pháp lai phân tử
4. Phương pháp PCR, ứng dụng 5. Kỹ thuật xác định trình tự DNA
(2)KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ DNA
(3)Khái niệm
(4)Các mốc giải mã hệ gen sinh vật khác
Cho đến nay, hệ gen 100 tổ chức sinh vật đã giải mã trình tự
(5)Maxam-Gilbert (1977) Sanger (1977)
Các phương pháp xác định trình tự
Xác định trình tự tự động
(6)Phương pháp Maxam-Gilbert
• Là phương pháp phân giải hóa học • Sử dụng hóa chất để biến đổi DNA
ở vị trí base đặc hiệu tạo
các đoạn có chiều dài khác Walter Gilbert
(7) Dimethyl sulfat methyl hóa G
Axit formic pH=2 gây biến đổi loại A + G Hydrazin gây biến đổi C T
Hydrazin + NaCl nồng độ cao gây biến
đổi C
Piperidine dùng để loại bỏ
base sau bị biến đổi cắt mạch
(8)Base specificity
Chemical used for base alteration
Chemical used for altered base
removal
Chemical used for strand
cleavage
G Dimethylsulphate Piperidine Piperidine
A+G Acid Acid Piperidine
C+T Hydrazine Piperidine Piperidine
C Hydrazine + alkali Piperidine Piperidine
A>C Alkali Piperidine Piperidine
(9)G C T G C T A
A T
C T
C G
G CH3 T C T C
G A
DNA labeled at one end with 32P
Base modification
Release or displace- ment of reacted bases
Maxam and Gilbert chemical method
(10)