CNSH với bảo vệ sức khỏe cộng đồng Truong Văn Lung nghiệm sử dụng thuốc của người dân, sau đó dùng các phương pháp hiện đại để tách chiết, thường là các loại dịch chiết, được đưa[r]
(1)Trước đây, để phát bệnh thai nhi người ta phải lấy máu thử trực tiếp từ thai nhi Điều nhiều gây tổn hại cho thai nhi Gần đây, người ta bắt đầu phát vấn đề sử dụng phương pháp di truyền kĩ thuật DNA tái tổ hợp để chẩn đoán chữa trị bệnh người bắt đầu quan tâm từ đầu thập kỉ 80 kỉ trước Lần kĩ thuật áp dụng để chẩn đốn xem thai nhi có bị bệnh thiếu máu hồng cầu lưỡi liềm hay không Hiện bệnh phương pháp cắt phân đoạn đa hình RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) DNA tế bào dịch xung quanh thai nhi Sau so sánh chúng với phân đoạn DNA bổ trợ tách từ tế bào hồng cầu bình thường để phát có mặt gene bị hỏng Phương pháp an toàn khơng gây nguy hiểm cho thai nhi (Hình III.7)
Nội dung phương pháp RFLP sau: tách DNA từ tế bào hồng cầu bố mẹ có bị thiếu máu hồng cầu lưỡi liềm, từ người khỏe mạnh từ dịch bào quanh thai nhi người mẹ nói Dùng enzyme endonuclease cắt DNA nói thành phân đoạn khác tách chúng điện di Mặt khác, từ tế bào hồng cầu lưới tách m-RNA, cho tổng hợp ngược để tạo DNA bổ trợ cDNA (complementary DNA) gắn 32p Trộn đoạn DNA với cDNA nhằm tạo đoạn lai (đoạn hòa hợp với thứ tự nucleotid cDNA) đoạn chứa gene mã hóa tổng hợp globulin Ở người khỏe mạnh gene β -glubolin nằm phần đoạn có độ dài 7.6 kb Ở đứa bé bị thiếu máu hồng cầu lưỡi liềm, gene nói nằm phân đoạn có độ dài 13,0 kb, bố mẹ thai nhi phát thấy gene có mặt đoạn 7,6 kb 13,0 kb Điều chứng tỏ ba dạng dị hợp tử mang gene bệnh thiếu máu hồng cầu lưỡi liềm
4.2 Vai trị tác nhân di truyền bệnh lí học
(2)thể rối loạn teo Duchenne bệnh tâm thần trí tuệ phát triển Huntington
Triển vọng việc chữa trị bệnh có liên quan đến di truyền lớn Trong vài năm trở lại xuất số cách tiếp cận để giải vấn đề Đó việc gắn bổ sung gene bình thường vào máy di truyền người bệnh lai cấy tế bào khỏe mạnh vào thể người bệnh để chữa trị số bệnh hiểm nghèo bệnh di truyền Tuy phải khắc phục nhiều trở ngại, biện pháp chữa trị có triển vọng tương lai
5 Kháng thể đơn dòng (monoclonal antibody)
Hybridoma kháng thể đơn dòng
Các kháng thể đơn dòng từ tế bào ung thư: người ta tiêm vào chuột hay thỏ chất lạ, thể phản ứng tạo loại phản ứng đặc hiệu để chống lại kháng nguyên Một kháng thể có tính đặc hiệu cao chống lại kháng nguyên Trong thể có loại tế bào đặc biệt sản xuất kháng thể Nếu ta tách mơ để ni chọn dòng cho kháng nguyên mà ta cần người ta dịng tạo kháng thể đặc hiệu với loại kháng nguyên Nhưng tế bào mà ta tách tế bào bình thường nên sinh sản có hạn (chỉ phân chia số chết) Trong đó, dịng tế bào ung thư
Như đề cập đến, năm 1975, Kohler Milsstein phát minh kháng thể đơn dịng
Ngun lí là:
+ Gây tế bào bình thường có khả tạo kháng thể + Lai tế bào với tế bào myeloma (tế bào tủy) ung thư Quá trình có hiệu dùng virus Sendaii phương pháp dung hợp tế bào
+ Chọn lồi mà ta cần, dịng lai vừa mang tính chất tạo kháng thể, vừa có tính chất sinh sản vơ hạn (gọi dịng hybrodoma)
Chúng ứng dụng nhiều lĩnh vực:
- Tăng độ nhạy phép thử dùng phản ứng miễn nhiễm kháng nguyên không dung nạp (histocompability) thử kháng nguyên nhóm máu, tinh trùng, thử có progesterol không, thử yếu tố làm đông máu
- Chẩn đốn xem bệnh có truyền theo đường sinh dục hay khơng việc chẩn đốn ung thư
- Về liệu pháp, chỉnh đốn lại thuốc liều, giảm nguy hiểm trường hợp ghép tủy sống, chữa trị ung thư chỗ , vị trí cần thiết
(3)- Trong nghiên cứu giúp người ta phát vị trí protein - Việc sử dụng kháng thể đơn dịng nhanh chóng thay phương pháp miễn dịch huyết học thông thường xét nghiệm sau:
Thứ xác định mức độ hormone để đánh giá chức tuyến nội tiết thay đổi tổng hợp hormone khối u
Thứ hai phát số protein có ý nghĩa chuẩn đoán khối u số điều kiện đặc biệt trước sinh đẻ
Thứ ba xác định vi khuẩn gây bệnh
Phát thuốc bị cấm máu kiểm tra nồng độ thuốc máu tổ chức nhằm đảm bảo liều dùng thuốc không vượt ngưỡng gây độc
Các ứng dụng khác bao gồm:
Ức chế phản ứng thải loại ghép quan
Miễn dịch hóa thụ động chống lại kháng nguyên tham gia vào sinh sản (chống thụ thai phương pháp miễn dịch)
Định vị khối u với kháng thể đặc hiệu
Tác động độc tố định hướng tới tế bào ung thư, độc tố hóa học gắn với kháng thể
Các chất sau dùng kháng thể đơn dòng để phát hiện: vitamin, thuốc giảm đau, thuốc ngủ, kháng sinh, thuốc chống viêm, thuốc chống tân sản (chống ung thư), thuốc tim mạch, thuốc gây ảo giác, thuốc hạ đường huyết, hormone động vật thực vật, thuốc làm dịu an thần , thuốc lợi tiểu, steroid (androgene, estrogene, progestin), thuốc trừ sâu, độc tố (aflatoxin)
Nhờ tính đặc hiệu xác cao, sử dụng dễ dàng, kháng thể đơn dòng tạo nên nhánh phát triển mau lẹ CNSH Theo tạp chí “High Technology magazine" thị trường kháng thể đơn dòng từ 15 triệu USD năm 1982 đến năm 1992 vượt tỉ USD
Loại sản phẩm kháng thể đơn dòng dùng chủ yếu thuốc thử
nghiên cứu, thuốc thử cho chẩn đoán in vitro và kháng thể dùng để
phân lập chất sinh học
Kháng thể đơn dòng nhà khoa học Nhật Bản sử dụng chẩn đoán ung thư đường tiêu hóa, cơng ti CNSH Centocor Inc Hoa Kì dùng chẩn đốn ung thư tụy, trường Đại học Y khoa Nhật Bản, trung tâm Ung thư Quốc gia công ti Kureha Chemical Industries dùng chẩn đoán ung thư tiền liệt tuyến
(4)Đại học California trung tâm Y học Albert Einstein (Philadelphia) dùng iode phóng xạ gắn vào kháng thể đơn dịng để sau cơng phá đặc hiệu tế bào ung thư gan
Kháng thể đơn dòng chống kháng nguyên đặc hiệu lymphocyte T có ứng dụng quan trọng dự phòng phản ứng thải ghép truyền tủy
Ngày với CNSH sản xuất cytokin (giống hormone tham gia điều hòa chặt chẽ trả lời miễn dịch dịch thể miễn dịch trung gian tế bào), người ta sản xuất kháng thể đơn dòng dùng chẩn đoán điều trị miễn dịch
Các kháng thể đơn dòng chuột dùng điều trị có số nhược điểm Một số nghiên cứu so sánh tần suất lai tạo tế bào lymphocyte người với dòng tế bào khác theo dõi tính bền chúng Myeloma (tế bào ung thư dẫn từ lymphocyte tiết kháng thể) chuột NS-I) hợp với tần suất cao bền tế bào lai người với người
Vấn đề tìm kiếm tế bào thành viên thích hợp để hợp với lymphocyte người hướng Hiện gặp số khó khăn việc tìm kiếm tế bào thành viên thích hợp
Người ta lựa chọn mơi trường thích hợp lai tạo hypoxanthine, aminopterine thymidine (HAT) tế bào lai myeloma lymphocyte có khả sử dụng hypoxanthine cung cấp môi trường HAT
Trong phương pháp phân tích miễn dịch phóng xạ RIA (Radio Immuno Assay), RAST (Radio Allergo Sorbent Test) RIST (Radio Immuno Sorbent Test), người ta xác định hàm lượng kháng nguyên độ đo phóng xạ phức kháng nguyên kháng thể Còn phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Test), người ta xác định hàm lượng kháng nguyên cách đo độ phóng xạ phức kháng nguyên kháng thể tạo enzyme đặc hiệu gắn Sau phương pháp RIA – phương pháp có độ nhạy cao (hình IV.8) Nội dung sau:
Gắn kháng nguyên lên ba thể nhạy cảm với Rửa, loại bỏ phân tử kháng ngun khơng gắn
Bổ sung kháng thể đơn dịng gắn đặc hiệu với kháng nguyên Rửa, loại bỏ phân tử kháng thể không gắn
(5)
Kháng nguyên
Kháng thể *
Cầu nối đánh dấu *
*
Hình III Phương pháp A phân tích miễn dịch phóng xạ RIA
Các phương pháp khác khác phần đuôi gắn vào kháng thể Thí dụ phương pháp RIA, RAST RIST - phần gắn có chứa đồng vị phóng xạ Cịn phương pháp ELISA - phần gắn chứa enzyme xúc tác phản ứng tạo màu Nghĩa là, thơng qua phản ứng tạo màu để biết có (hay khơng có) kháng ngun mẩu thử
Hiện phương pháp phân tích sử dụng kháng thể đơn dịng nhanh chóng thay phương pháp phân tích miễn dịch huyết truyền thống phân tích
6 Các vaccine vaccine đa trị 6.1 Các vaccine
Vaccine chế phẩm kháng nguyên gây trạng thái miễn dịch mà không gây bệnh Vaccine dùng để kích thích đáp ứng miễn dịch nguyên phát, làm tăng tế bào nhớ khả đáp ứng miễn dịch nhớ tiếp xúc với kháng nguyên lần sau
Từ đến 16 tháng 7- 1885, lần tìm cách tiêm chủng chống bệnh dại (một bệnh có khả tử vong 100%) cho em bé tuổi bị chó dại cắn, Louis Pasteur với cộng bác sĩ điều trị Grancher phải cấy truyền 13 lần virus dại tủy sống thỏ với độc tính tăng dần Ngày 27- -1885, em bé cứu sống khỏe mạnh Ngày 14-10-1888, viện Pasteur thành lập, Grancher trình bày phương pháp Pasteur số liệu thống kê chứng tỏ hiệu nó: 5374 người điều trị thời gian tư 16 - 7-1885 đến 01- 07-1888, tỷ lệ tử vong 1%
Như vậy, Pasteur mở đầu cho kỉ nguyên đấu tranh chống bệnh nhiễm trùng đề phòng chúng tiêm chủng
Các kháng nguyên Rửa Gắn kháng thể
Rửa Gắn cầu nối
(6)CNSH với bảo vệ sức khỏe cộng đồng Truong Văn Lung hai chẩn đốn Đơng Tây y để lựa chọn thuốc Khi phối hợp thuốc nên cách thời gian để theo dõi
Phương pháp đại hóa y học cổ truyền tiến hành dùng khoa học đại phân tích, chẩn đốn, phân biệt bệnh để từ chọn phương pháp điều trị thích hợp Chọn thuốc đặc trị từ dược thảo, tìm tác dụng mới, tìm hoạt chất áp dụng rộng rãi Sự kết hợp hai chẩn đốn Đơng-Tây y người bệnh tránh sai lầm
Một điều nhiều bệnh viện hay sử dụng để tránh hại sức khỏe cho người gây mê ca mổ, người ta dùng phương pháp châm cứu Chỉ cần số kim châm vào huyệt người bệnh nằm bàn mổ thấy hết, biết hết thao tác bác sĩ mổ cho khơng thấy đau đớn Đương nhiên, số người yếu “bóng vía” họ sợ trước thao tác bác sĩ đưa dao vào rạch da thịt
Chúng ta khơng nên quên lời dạy bác Hồ: “Thầy thuốc Tây y phải học Đông y, thầy thuốc ta phải học Tây y tốt”
Một điều cần phải quan tâm giai đoạn điều tra hoạt chất sinh học (bioprospecting)
Theo Ian Paterson (Giáo sư Đại học Cambridge, Mĩ) nói: Thế giới thể sống trải qua thời kì dài đấu tranh sinh tồn phát triển khả vô phức tạp ứng dụng nhiều khía cạnh y học Bộ gene sản phẩm tự nhiên khơng phí thời gian mà khơng tạo hợp chất không tác động tới hệ thống sinh học
Điều tra thăm dò hoạt chất sinh học sinh vật sống mang lại lợi ích to lớn y dược học thương mại Đương nhiên lĩnh vực đầu tư mạo hiểm, thất bại thu lợi nhuận lớn Vì thế, quốc gia phát triển thường khơng đủ tiềm lực tài chính, trang thiết bị đặc biệt chuyên gia để triển khai công việc này, tài nguyên thiên nhiên tính đa dạng sinh học nước phong phú to lớn Hoạt động điều tra thăm dò hoạt chất đòi hỏi kết hợp chặt chẽ kinh nghiệm cổ truyền việc sử dụng động vật, thực vật, nấm vi sinh vật làm thuốc trang thiết bị đại phân tích hóa học sinh học
(7)CNSH với bảo vệ sức khỏe cộng đồng Truong Văn Lung nghiệm sử dụng thuốc người dân, sau dùng phương pháp tách chiết, thường loại dịch chiết, đưa phịng thí nghiệm để tiến hành sàng lọc qua phép thử đặc trưng cho nhóm thuốc kháng khuẩn, kháng virus, chữa sốt rét, chữa rối loạn thần kinh, chữa bệnh lao, ức chế sinh trưởng tế bào ung thư Rất phải phối hợp nhiều phịng thí nghiệm để tổ chức sàng lọc cách có hệ thống có hiệu Những mẫu dương tính phân tích hóa học sắc kí cao áp, điện di, khối phổ để cuối đến hoạt chất Ví dụ, gần người ta tìm thấy chất chống HIV gọi conocurvone rễ Cotinus coggygria Rất nhiều quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa (NICs) cơng ti hóa dược chất muốn đầu tư cho loại công việc
Tại viện Nghiên cứu Eisai (bang Massachussets, Mĩ) nhà khoa học điều chế chất kí hiệu Halichondrin B, dẫn xuất từ loài bọt biển sống tầng nước sâu vùng biển New Zealand, cho đặc biệt công hiệu việc điều trị ung thư giai đoạn cuối Công ti Bristol-Myers Squibb thử nghiệm loại thuốc mang tên Ixabepilone , mô theo loại vi khuẩn có nhiều đất mùn bình thường chữa khỏi bệnh ung thư Tập đồn Wyeth gần giới thiệu thị trường sản phẩm biệt dược Rapamune phân lập từ loại giun đất đảo Easter có tác dụng phịng ngừa tượng thải loại ghép thận Rapamune chế phẩm chạy hãng thời gian qua (theo Tạp chí Thế giới số 664, tháng 12 năm 2005 trang55-58)
Thế giới sinh vật thật đa dạng phong phú Nếu khai thác giới dù phần nhỏ, y học thu thành công vượt bậc phục vụ đắc lực cho sức khỏe cộng đồng
Vì thế, nhiều tổ chức quốc tế cho đời văn nêu nguyên tắc chung bioprospecting, có việc thừa hưởng kết sử dụng phương pháp cổ truyền kết hợp phương pháp tạo nhiều sản phẩm dược học nhằm chữa trị ngày tốt bệnh mà trước cho vô phương cứu chữa