Nghiên cứu đặc điểm của gen gmdreb2 phân lập từ cây đậu tương glycine max l merrill

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG THỊ XOAN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA GEN GmDREB2 PHÂN LẬP TỪ CÂY ĐẬU TƢƠNG Glycine max (L.) Merrill LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên - 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG THỊ XOAN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA GEN GmDREB2 PHÂN LẬP TỪ CÂY ĐẬU TƢƠNG Glycine max (L.) Merrill Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hoàng Mậu Thái Nguyên - 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Hồng Thị Xoan Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Trƣớc tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới GS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu để hồn thành Bản luận văn thạc sĩ Cơng nghệ sinh học Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Trƣởng khoa Khoa học Sự sống, Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin cảm ơn thầy cô tập thể cán phịng thí nghiệm Khoa Khoa học Sự sống, cảm ơn Lãnh đạo Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, cảm ơn bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên suốt thời gian qua Tác giả Hồng Thị Xoan Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Những chữ viết tắt luận văn v Danh mục bảng luận văn vi Danh mục hình luận văn vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY ĐẬU TƢƠNG 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại vị trí đậu tƣơng 1.1.2 Đặc điểm sinh học đậu tƣơng 1.1.3 Tình hình sản xuất đậu tƣơng giới Việt Nam 1.2 GEN VÀ ĐẶC TÍNH CHỊU HẠN CỦA CÂY ĐẬU TƢƠNG 1.2.1 Hạn tác động hạn đến sinh trƣởng phát triển thực vật 1.2.2 Đặc tính chịu hạn đậu tƣơng 11 1.2.3 Một số gen liên quan đến tính chịu hạn đậu tƣơng 13 1.2.3.1 Nhóm gen chức liên quan trực tiếp đến tính chịu hạn đậu tƣơng 13 1.2.3.2 Nhóm gen điều khiển q trình phiên mã nhóm gen chịu hạn 16 1.3 NHÂN TỐ PHIÊN MÃ DREB VÀ DREB2 18 1.3.1 Nhân tố phiên mã DREB 18 1.3.2 DREB2 gen GmDREB2 20 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 25 Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn iv 2.1 VẬT LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 25 2.1.1 Vật liệu 25 2.1.2 Hóa chất 26 2.1.3 Thiết bị 26 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.2.1 Phƣơng pháp đánh giá khả chịu hạn giai đoạn non điều kiện gây hạn nhân tạo 28 2.2.2 Phƣơng pháp sinh học phân tử 29 2.2.2.1 Phƣơng pháp tách chiết DNA tổng số 29 2.2.2.2 Kỹ thuật PCR 30 2.2.2.3 Phƣơng pháp tinh sản phẩm PCR 32 2.2.2.4 Phƣơng pháp gắn gen vào vector tách dòng 33 2.2.2.5 Biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào E.coli DH5 34 2.2.2.6 Tách chiết plasmid 34 2.2.2.7 Phƣơng pháp phân tích trình tự gen 35 2.2.2.8 Xử lý kết tính tốn số liệu 35 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HẠN CỦA CÁC GIỐNG ĐẬU TƢƠNG NGHIÊN CỨU 36 3.2 KẾT QUẢ PHÂN LẬP GEN GmDREB2 TỪ MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƢƠNG NGHIÊN CỨU 39 3.2.1 Tách chiết DNA từ non hạt đậu tƣơng 39 3.2.2 Kết nhân gen GmDREB2 kỹ thuật PCR 40 3.2.3 Kết tách dịng giải trình tự gen GmDREB2 41 3.2.4 So sánh trình tự nucleotide gen GmDREB2 ba giống đậu tƣơng BS, BG, HG1 trình tự công bố 43 Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn v 3.2.5 So sánh trình tự amino acid protein DREB2 ba giống đậu tƣơng BS, BG, HG1 trình tự công bố 45 3.3 PHÂN TÍCH SỰ ĐA DẠNG VỀ TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE VÀ TRÌNH TỰ AMINO ACID CỦA GEN DREB2 Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG 45 3.3.1 Sự đa dạng giống đậu tƣơng sở phân tích trình tự nucleotide gen DREB2 45 3.3.2 Phân tích đa dạng trình tự amino acid DREB2 48 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn vi NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT ABA Abscisis acid bp Cặp base CS Cộng DNA Deoxiribonucleic acid DREB Dehydration- Responsive Element Binding EDTA Ethyen Diamin Tetraacetic Acid HSP Heat shock protein kb Kilo base LEA Late Embryogenesis Abundant protein (Protein tích luỹ với số lƣợng lớn giai đoạn cuối q trình hình thành phơi) LTP Lipid Tranfer protein (Protein vận chuyển lipid) MGPT Môi giới phân tử PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) RNA Ribonucleic Acid TAE Tris acetat EDTA Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Tình hình sản xuất đậu tƣơng Việt Nam từ 2005- 2011 Bảng 2.1 Nguồn gốc giống đậu tƣơng nghiên cứu 25 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng 27 Bảng 2.3 Trình tự cặp mồi nhân gen DREB2 30 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR 31 Bảng 2.5 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 31 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng gắn gen vào vector tách dòng pBT 33 Bảng 3.1 Chỉ số chịu hạn giống đậu tƣơng nghiên cứu 38 Bảng 3.2 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự gen 46 GmDREB2 giống đậu tƣơng BS, BG HG1 trình tự gen GmDREB2 giống đậu tƣơng GenBank Bảng 3.3 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự amino 48 acid protein DREB2 giống đậu tƣơng BS, BG, HG1 trình tự amino acid protein DREB2 giống đậu tƣơng GenBank Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Hình 1.1 Tên hình Trang Sơ đồ mơ tả gen vùng mã hóa gen GmDREB2 23 đậu tƣơng Hình 1.2 Sơ đồ mơ tả protein GmDREB2 đậu tƣơng 23 Hình 1.3 Trình tự amino acid vùng AP2 protein DREB2 23 đậu tƣơng Hình 2.1 Hình ảnh hạt giống đậu tƣơng nghiên cứu 26 Hình 2.2 Sơ đồ vector tách dịng pBT 33 Hình 3.1 Hình ảnh đậu tƣơng non giống đậu tƣơng hạn 36 trƣớc gây hạn Hình 3.2 Hình ảnh đậu tƣơng non giống đậu tƣơng sau 37 ngày hạn Hình 3.3 Hình ảnh điện di DNA tổng số giống HG1, BG, 39 HG4 BS Hình 3.4 Hình ảnh điện di sản phẩm nhân gen GmDREB2 bốn 40 giống đậu tƣơng nghiên cứu Hình 3.5 Đĩa ni cấy dịng tế bào khả biến E.coli chủng DH5 41 chứa vector tái tổ hợp mang gen GmDREB2 Hình 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm colony – PCR gen 42 GmDREB2 trực tiếp từ khuẩn lạc Hình 3.7 Hình ảnh điện di tách plasmid tái tổ hợp mang gen 42 GmDREB2 Số hóa Trung tâm Học liệu http://lrc.tnu.edu.vn 42 Plasmid Extraction hãng Bioneer Sản phẩm tách plasmid đƣợc kiểm tra điện di gel agarose 1% đệm TAE 1X, với có mặt thang DNA chuẩn chụp ảnh dƣới ánh sáng cực tím M 1,0kb 0,5kb M 10 11 12 Hình 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm colony – PCR gen GmDREB2 trực tiếp từ khuẩn lạc (M: Thang DNA chuẩn 1kb; 1, 2- HG1, 3,4- BG, 5,6- BS, 7,8 – HG4) Hình ảnh điện di sản phẩm tách plasmid mang gen GmDREB2 giống đậu tƣơng nghiên cứu đƣợc thể Hình 3.7 BS BG HG1 HG4 Hình 3.7 Hình ảnh điện di tách plasmid tái tổ hợp mang gen GmDREB2 43 Kết điện di Hình 3.7 cho thấy, sản phẩm tách dịng gen plasmid đảm bảo chất lƣợng số lƣợng phục vụ giải trình tự gen DREB2 Để xác định trình tự nucleotide gen GmDREB2 tách dịng, chúng tơi tiến hành đọc trình tự nucleotide máy đọc trình tự tự động ABI- 3130 DNA capillary electrophoresis system Kết đọc trình tự nucleotide mẫu plasmid tái tổ hợp từ giống đậu tƣơng BS, BG, HG1 HG4 đƣợc so sánh BLAST NCBI cho thấy trình tự phân lập từ hai giống đậu tƣơng BS BG gen GmDREB2 Sử dụng phần mềm BioEdit để so sánh, kết thu đƣợc trình bày Hình 3.8 Hình 3.8 cho thấy kích thƣớc gen GmDREB2 phân lập từ hai giống đậu tƣơng BS, BG có kích thƣớc 480 nucleotide Từ kết đến kết luận nhân bản, tách dịng thành cơng xác định đƣợc trình tự đoạn gen GmDREB2 hai giống đậu tƣơng BS BG 3.2.4 So sánh trình tự nucleotide gen GmDREB2 hai giống đậu tƣơng BS, BG với trình tự cơng bố Kết so sánh Hình 3.8 cho thấy trình tự nucleotide gen GmDREB2 hai giống đậu tƣơng BS BG với trình tự nucleotide gen DREB2 cơng bố Ngân hàng gen quốc tế (NCBI) có mã số DQ054363 có sai khác vị trí nucleotide: 159, 163, 165, 178, 202, 219, 261 Trình tự gen GmDREB2 giống đậu tƣơng BS, BG trình tự mã số DQ054363 có độ tƣơng đồng cao, khoảng 99% Kết khẳng định gen GmDREB2 đƣợc phân lập thành công từ hệ gen đậu tƣơng 44 Hình 3.8 Trình tự gen GmDREB2 phân lập từ hai giống đậu tƣơng BG, BS 45 3.2.5 So sánh trình tự amino acid protein DREB2 hai giống đậu tƣơng BS, BG trình tự cơng bố Kết so sánh trình tự amino acid chuỗi polypeptide gen GmDREB2 mã hoá hai giống đậu tƣơng BS, BG đƣợc thể hình 3.9 Hình 3.9 Sơ đồ so sánh trình tự amino acid protein DREB2 suy diễn từ trình tự gen GmDREB2 Trình tự amino acid protein DREB2 giống đậu tƣơng BS BG với trình tự amino acid protein DREB2 có mã số AAY89658 có sai khác vị trí amino acid 68, mức độ tƣơng đồng cao 99% 3.3 PHÂN TÍCH SỰ ĐA DẠNG VỀ TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE VÀ TRÌNH TỰ AMINO ACID CỦA GEN DREB2 Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG 3.3.1 Sự đa dạng giống đậu tƣơng sở phân tích trình tự nucleotide gen DREB2 Kết xác định hệ số tƣơng đồng di truyền hệ số khác sở phân tích trình tự nucleotide gen DREB2 11 giống đậu tƣơng, là: 46 BS, BG, NM_001250325, DQ054363, FJ965341, JF946766, JF946767, JF946768, JF946769, JF946770, JF946771 đƣợc thể Bảng 3.2 Bảng 3.2 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự gen GmDREB2 hai giống đậu tƣơng BS, BG trình tự gen GmDREB2 giống đậu tƣơng GenBank Kết cho thấy hệ số tƣơng đồng di truyền trình tự gen GmDREB2 11 giống đậu tƣơng nghiên cứu cao, dao động từ 96,2% - 100% Độ tƣơng đồng trình tự gen GmDREB2 cơng bố ngân hàng gen quốc tế thấp 96,2% cao 99,8% Gen GmDREB2 giống đậu tƣơng BS có độ tƣơng đồng so với giống có mã số DQ054363, FJ965341, JF946766, JF946767, JF946768, JF946769, JF946770, JF946771 lần lƣợt 98,5%, 99,8%, 96,4%, 98,8%, 97,8%, 96,2%, 96,4%, 98,6% Gen GmDREB2 giống đậu tƣơng BG có độ tƣơng đồng so với giống có mã số DQ054363, FJ965341, JF946766, JF946767, JF946768, JF946769, JF946770, JF946771 lần lƣợt 98,5%, 99,8%, 96,4%, 98,8%, 97,8%, 96,2%, 96,4%, 98,6% 47 Hệ số sai khác giống đậu tƣơng BG BS với giống có mã số DQ054363, FJ965341, JF946766, JF946767, JF946768, JF946769, JF946770, JF946771 giao động từ 0,2% - 3,9% Mối quan hệ di truyền 11 giống đậu tƣơng sở phân tích trình tự gen GmDREB2 đƣợc thể sơ đồ hình Hình 3.10 Hình 3.10 Biểu đồ hình mô tả mối quan hệ di truyền 11 giống đậu tƣơng dựa mức độ tƣơng đồng trình tự gen GmDREB2 Biểu đồ hình Hình 3.10 cho thấy dựa trình tự nucleotide gen DREB2 11 giống đậu tƣơng phân bố nhóm, phân thành nhánh với khoảng cách di truyền 1,4% Nhánh I gồm giống BG, BS, FJ965341, NM_001250325, DQ054363, JF946767, JF946771, JF946768 Nhánh II gồm ba giống JF946766, JF946769, JF946770 48 3.3.2 Phân tích đa dạng 11 giống đậu tƣơng dựa trình tự amino acid suy diễn gen DREB2 Kết xác định hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác sở phân tích trình tự amino acid protein DREB2 11 giống đậu tƣơng BS, BG, NM_001250325, DQ054363, FJ965341, JF946766, JF946767, JF946768, JF946769, JF946770, JF946771 đƣợc trình bày Bảng 3.3 Bảng 3.3 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự amino acid protein DREB2 hai giống đậu tƣơng BS, BG trình tự amino acid protein DREB2 giống đậu tƣơng công bố GenBank Hệ số tƣơng đồng trình tự amino acid protein DREB2 11 giống đậu tƣơng khoảng từ 96,4%-100% Hệ số sai khác trình tự amino acid protein DREB2 11 giống từ 0% - 3,7% Mối quan hệ di truyền 11 giống đậu tƣơng sở phân tích trình tự amino acid protein DREB2 đƣợc thể sơ đồ hình Hình 3.11 49 Hình 3.11 Biểu đồ hình mô tả mối quan hệ di truyền 11 giống đậu tƣơng dựa mức độ tƣơng đồng trình tự amino acid protein DREB2 Sơ đồ hình Hình 3.11 cho thấy 11 giống đậu tƣơng phân bố nhóm, đƣợc chia làm nhánh lớn, nhánh thứ có giống JF946768; nhánh thứ hai gồm 10 giống, khoảng cách di truyền hai nhánh 1,4% Nhánh thứ hai lại chia làm hai nhánh phụ: Nhánh phụ I có giống: JF946769, JF946770, JF946766; Nhánh phụ II lại chia làm hai nhánh nhỏ: Nhánh nhỏ có giống JF946767 JF946771; Nhánh nhỏ gồm có giống NM_001250325 giống BS, BG, DQ054363, FJ965341 Nhƣ hai giống BS BG phân bố nhóm 50 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Khả giống giống BS h u đƣợc xác định 8821,36, HG1 u 4469,26 1.2 Đã nhân bản, tách dòng thành cơng xác định trình tự gen GmDREB2 phân lập từ hai giống đậu tƣơng BS BG Trình tự gen GmDREB2 có 480 nucleotide, mã hố 159 amino acid 1.3 So với trình tự gen DREB2 có mã số DQ054363 GenBank, trình tự nucleotide gen GmDREB2 giống BS BG có độ tƣơng đồng 98,5% có sai khác vị trí nucleotide: 159, 163, 165, 178, 202, 219, 261 Trình tự amino acid protein DREB2 hai giống đậu tƣơng BS BG so với trình tự amino acid có mã số AAY89658 GenBank có mức độ tƣơng đồng 99,4% sai khác vị trí amino acid (vị trí 68) 1.4 Đã xác định đƣợc đa dạng hai giống đậu tƣơng (BS, BG) giống đậu tƣơng có trình tự GenBank Khoảng cách di truyền 11 giống đậu tƣơng dựa trình tự nucleotide gen GmDREB2 trình tự amino acid protein DREB2 1,4% Đề nghị Tiếp tục phân lập gen GmDREB2 từ mRNA để thiết kế vector phục vụ tạo đậu tƣơng chuyển gen nhằm cải thiện khả chịu hạn đậu tƣơng 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998), Phân lập gen chọn dòng chống chịu ngoại cảnh bất lợi lúa, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội, 250 trang Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Giáo trình cao học Nơng nghiệp, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Ngô Thế Dân cs(1999), Cây đậu tương, Nxb Nông Nghiệp Nguyễn Đăng Khôi (1997), Các đậu ăn hạt Việt Nam, Tạp chí Sinh học, số 2, tr: 5-6 Trần Thị Phƣơng Liên (1999), Nghiên cứu đặc tính hố sinh sinh học phân tử số giống đậu tương có khả chịu nóng, chịu hạn Việt Nam, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội Trần Đình Long (2000), Cây đậu tương, Nxb Nông nghiệp Hà Nội Chu Hồng Mậu, Nơng Thị Man, Lê Trần Bình (2001), Đánh giá số tính trạng kinh tế quan trọngvà khả chịu hạn dòng đậu tương (Glycine max (L.) Merril) Đột biến, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ,1(13), Đại Học Thái Nguyên,16-21 Chu Hoàng Mậu (2008), Phương pháp phân tích di truyền đại chọn giống trồng, Nxb Đại học Thái Nguyên Nguyễn Thị Tâm (2004), Nghiên cứu khả chịu nóng chọn dịng chịu nóng lúa cơng nghệ tế bào thực vật, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ sinh học Hà Nội 10 Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2008), Nghiên cứu tính đa dạng di truyền phân lập số gen liên quan đến tính chịu hạn đậu xanh (Vigna 52 radiata (L.) Wilczeck), Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh 11 Barrett AJ, Rawlings ND, Davies ME, Machleidt W, Salvesen G, Turk V (1986), Cysteine proteinase inhibitor of the cystatin superfamily In: A.J Barrett, G Salvesen (Eds.), Proteinase Inhibitors Elsevier, Amsterdam, The Netherlands, 519- 569 12 Borbani O, Zhu J, Verslues PE, Sunkar R, and Zhu JK (2005), Endogenous siRNAs derived from a pair of natural cis- antisense transcripts regulate salt tolerance in Arabidopsis Cell 123: 1279- 1291 13 Cao Xin-You., You-Zhi M., (2008), Isolation and Identification of a GmGβ1 Interacting Protein with GmDREB5 Protein in Soybean (Glycine max), Acta agronomica sinica, 34 (10), pp 1688−1695 14 Chen F., Chen S.Y and Liu Q (2002), Isolation of a rice cDNA encoding a DREB-like protein induced by stresses NCBI, Gen Bank, Accession AY064403 15 Chen J, Xia X, Yin W (2009), Expression profiling and functional characterization of a DREB2-type gene from Populus euphratica College of Forestry, Beijing Forestry University, No 35, Qinghua East Road, Beijing 100083, China 16 Chen M., Wang Q Y, Cheng X G, Xu Z S, Li L C, Ye X G, Xia L Q, Ma Y Z., (2007) GmDREB2, a soybean DRE-binding transcription factor, conferred drought and high-salt tolerance in transgenic plants Biochem Biophys Res Commun 353(2):299-305 Epub 2006 Dec 13 17 Chen Y., Chen P and de los Reyes B.G (2004), Analysis of the expression of DREB1 gene orthologs in cultivated and wild species of 53 soybean NCBI, Gen Bank, Accession AY802779 18 Fujita Y., Fujita M., Satoh R., Maruyama K., Parvez M M., Seki M., Hiratsu K., Ohme-Takagi M., Shinozaki K., Yamaguchi-Shinozaki K., (2005), AREB1 is a transcription activator of novel ABRE-dependent ABA signaling that enhances drought stress tolerance in Arabidopsis, Plant Cel, 17(12), pp 3470-88 19 Gaiyun Zhang, Ming Chen, Liancheng Li, Zhaoshi Xu, Xueping Chen, JiamingGuo and Youzhi Ma, (2009), Overexpression of the soybean GmERF3 gene, an AP2/ERF type transcription factor for increased tolerances to salt, drought, and diseases in transgenic tobacco , Journal of Experimental Botany, 60(13), pp 3781-3796 20 Hartl F.U (1996), Moleculer chaperones in cellular protein folding, Nature, 381, pp 571- 580 21 Huang B., Jin,L and Liu J.(2007), Molecular cloning and functional characterization of a DREB1/CBF-like gene (GhDREB1L) from cotton, Sci China, C, Life Sci 50 (1), 7-14 22 Kobayashi F, Ishibashi M, Takumi S (2008) Transcriptional activation of Cor/Lea genes and increase in abiotic stress tolerance through expression of a wheat DREB2 homolog in transgenic tobacco Laboratory of Plant Genetics, Graduate School of Agricultural Science, Kobe University, 1-1 Rokkodai-cho, Nada-ku, Kobe, 657-8501, Japan 23 Lei T., Wang Q.Y., Zhai Y., Wang Y., Li J.W., Yan F., Su L.T., (2011), Characterization of a GmHSP70 Gene in Soybean, NCBI, Http://www.ncbi.nlm.nih.gov 54 24 Li X.P., Tian A.G., Luo G.Z., Gong Z.Z., Zhang J.S., Chen S.Y., (2005), Soybean DRE-binding transcription factors that are responsive to abiotic stresses, Theor Appl Genet, 110(8), pp 1355-62 25 Liao Y., Zou H.F., Wang H.W., Zhang W.K., Ma B., Zhang J.S., Chen S.Y., (2008), Soybean GmMYB76, GmMYB92, and GmMYB177 genes confer stress tolerance in transgenic Arabidopsis plants, Cell Res, 18(10), pp 1047–1060 26 Lin R., Zhao W., Meng X., Wang M., Peng Y., (2007), Rice gene OsNAC19 encodes a novel NAC-domain transcription factor and responds to infection by Magnaporthe grisea, Plant Sci, 172 (1), pp 120-130 27 Liu K.H., Lin T.Y., (2004), Vigna radiata lipid trasfer protein I (ltp 1) mRNA, complete cds, EMBL GenBank, Accession AY300806 28 Liu K.H., Lin T.Y., (2004), Vigna radiata lipid trasfer protein II (ltp 2) mRNA, complete cds, EMBL Gen Bank, Accession AY300807 29 Liu L, Zhu K, Yang Y, Wu J, Chen F, Yu D.(2008), Molecular cloning, expression profiling and trans-activation property studies of a DREB2-like gene from chrysanthemum (Dendranthema vestitum) National Center for Soybean Improvement, National Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement, Nanjing Agricultural University, Nanjing, 210095, People's Republic of China 30 Liu W and Feng F (2008), Nicotiana tabacum DREB4 mRNA, complete cds, College of Life Science, Henan Agricultural University, Wenhua Road, Zhengzhou, Henan 450002, P.R China 31 Lucas S., Hammon N., Glavina del Rio T., Detter J., Dalin E., Tice H., Pitluck S., Tuskan G., Chapman J., Putnam N.H., (2005), Populus 55 trichocarpa AP2/ERF domain-containing transcription factor (DREB11), mRNA, US DOE Joint Genome Institute, 2800, Mitchell Drive B100, Walnut Creek, CA 94598-1698, USA 32 Mukai T., Sakaki T., Akiyama T., 2003, Oryza sativa (japonica cultivar-group) lipid transfer protein-like protein (LTP2) mRNA, complete cds, Accession AY466109 33 Nakashima K, Shinwari ZK, Skuma Y, Seki M, Miura S, Shinozaki K, Yamaguchi-Shinozaki K (2000), Organization and expression of two Arabidopsis DREB2 genes encoding DRE-binding proteins involved in dehydration- and high-salinity-responsive gene expression Biological Resources Division, Japan International Research Center for Agricultural Sciences, Tsukuba, Ibaraki 34 Nguyen H.T.T., Chu M.H., Le S.V., Nguyen C.H., Chu H.H., 2009, Glycine max mRNA for hypothetical protein (P5CS gene), isolate Song Ma-Son La (SL5), Accession FM999729 35 Porcel R., Azcon R., Ruiz-Lozano J.M., (2005), Evaluation of the role of genes encoding for delta1-pyrroline-5-carboxylate synthetase (P5CS) during drought stress in arbuscular mycorrhizal Glycine max and Lactuca sativa plants, NCBI, Accession AJ715851 36 Qin F., Li J., Zhao J., Chen S.-Y and Liu Q (2002) Isolation of a maize cDNA encoding an DREB-like protein induced by stress, NCBI, Gen Bank, Accession AF448789 37 Sohn KH, Lee SC, Jung HW, Hong JK, Hwang BK 2006 Expression snd functional roles of the pepper pathogen- induced transcription factor RAV1 in bacterial disease resistance, and drought and salt stress tolerance Plant Molecular Biology 61, 897- 915 38 Tran L.S., Nakashima K., Sakuma Y., Osakabe Y., Qin F., Simopson S D., Maruyama K., Fujita Y., Shinozaki K., Yamaguchi – Shinozaki K., (2007), 56 Co-expression of the stress- inducible zinc finger homeodomain ZFHD1 and NAC transcription factors enhances expression of the ERD1 gene in Arabidopsis Plant J, (1), pp 46-63 39 Wang P.R., Deng X.J., Gao X.L., Chen J., Wan J., Jiang H., Xu Z.J., (2006), “Progress in the study on DREB transcription factor”, Yi Chuan, 28(3), pp 369-74 40 Yang K., Moon J.K., Jeong N., Back K., Kim H.M., Jeong S.C., (2008), Genome structure in soybean revealed by a genomewide genetic map constructed from a single population NCBI, Accession EU036414, Http://www.ncbi.nlm.nih.gov 41 Zhen Y and Ungerer M C (2008), “Relaxed selection on the CBF/DREB1 regulatory genes and reduced freezing tolerance in the southern range of Arabidopsis thaliana”Mol Biol E, 25 (12), 2547-2555 42 Gawel, Jarre, (1991) Genomic DNA Weihenstephan.de/pbpz/bambra/html/dna.htmn isolation http://www ... chuyển gen nhằm cải thiện tính chịu hạn đậu tƣơng vấn đề đƣợc quan tâm nghiên cứu Xuất phát từ l? ? tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm gen GmDREB2 phân l? ??p từ đậu tƣơng [Glycine max (L. )... HỌC KHOA HỌC HOÀNG THỊ XOAN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA GEN GmDREB2 PHÂN L? ??P TỪ CÂY ĐẬU TƢƠNG ? ?Glycine max (L. ) Merrill? ?? Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ... Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY ĐẬU TƢƠNG 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại vị trí đậu tƣơng Cây đậu tƣơng hay cịn gọi đậu nành, tên khoa học Glycine max (L. ) Merill (2n= 40) thuộc họ đậu (Fabaceae),họ