Xây dựng quy trình nhân giống hoa hồng nhung bằng kỹ thuật nuôi cấy mô

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== NGƠ THỊ QUỲNH XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA HỒNG NHUNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chun ngành: Sinh lý học thực vật HÀ NỘI - 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== NGƠ THỊ QUỲNH XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA HỒNG NHUNG BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY MƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Người hướng dẫn khoa học TS LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS La Việt Hồng – Khoa Sinh – KTNN tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ suốt q trình thực đề tài Tơi xin cảm ơn Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận Trong thời gian thực đề tài nhận giúp đỡ tận tình Mai Thị Hồng – Phịng thí nghiệm Sinh lý học thực vật giúp đỡ, đóng góp ý kiến để tơi hồn thành đề tài khóa luận, nhân xin gửi lời cảm ơn Cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên, góp ý kiến cho tơi q trình học tập hồn thành đề tài Trong q trình nghiên cứu khoa học khơng thể tránh khỏi thiếu sót Kính mong đóng góp ý kiến thầy, bạn đọc Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Sinh viên NGÔ THỊ QUỲNH LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi thực hướng dẫn TS La Việt Hồng Các số liệu, kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa công bố Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Sinh viên NGÔ THỊ QUỲNH MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Nguồn gốc phân loại 1.1.1.1 Nguồn gốc 1.1.1.2 Phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Điều kiện sinh thái 1.2 Tình hình sản xuất hoa hồng giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất hoa hồng giới 1.2.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ hoa hồng Việt Nam 1.3 Giá trị hoa hồng 1.3.1 Giá trị sử dụng hoa hồng 1.3.2 Giá trị kinh tế hoa hồng 10 1.4 Tình hình nghiên cứu nhân giống hoa hồng nuôi cấy mô giới Việt Nam 10 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 10 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 12 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Vật liệu nghiên cứu 14 2.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 14 2.3 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 14 2.3.1 Thiết bị 14 2.3.2 Dụng cụ 14 2.4 Môi trường nuôi cấy 14 2.5 Điều kiện phịng ni cấy 15 2.6 Phương pháp nghiên cứu 15 2.6.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 15 2.6.2 Phương pháp xử lý số liệu thống kê 18 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu 19 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro 21 3.3 Tạo in vitro hoàn chỉnh 29 3.4 Rèn luyện in vitro thích nghi điều kiện tự nhiên 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 Kết luận 32 Kiến nghị 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT BA Benzyl adenine C Than CS Cộng CT Công thức ĐC Đối chứng LSD0,05 Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MS Murashige and Skoog NAA – naphthalene acetic acid NXB Nhà xuất TB Trung bình DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Cơng thức thí nghiệm tạo vật liệu khởi đầu 15 Bảng 2.2 Cơng thức thí nghiệm ảnh hưởng sucrose agar đến trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro 17 Bảng 3.1 Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đốt thân cho nuôi cấy in vitro giống hoa hồng Nhung 19 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi in vitro giống hoa hồng Nhung (sau tuần) 21 Bảng 3.3 Ảnh hưởng agar, sucrose đến trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro 24 Bảng 3.4 Ảnh hưởng than hoạt tính đến đến q trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro 27 Bảng 3.5 Ảnh hưởng NAA đến trình rễ - tạo hoa hồng in vitro hoàn chỉnh 29 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Quy trình tạo vật liệu khởi đầu cho nhân giống in vitro giống hoa hồng Nhung 21 Hình 3.2 Kết tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa hồng sau 14 ngày 23 Hình 3.3 Ảnh hưởng agar, sucrose đến trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro 26 Hình 3.4 Ảnh hưởng than hoạt tính đến đến q trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro 28 Hình 3.5 Ảnh hưởng NAA đến trình rễ - tạo hoa hồng in vitro hoàn chỉnh 30 Hình 3.6 Rèn luyện hoa hồng cấy mơ thích nghi với điều kiện tự nhiên 31 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Hoa hồng loài hoa ưa chuộng giới màu sắc hương thơm [9] Riêng hoa hồng Nhung đẹp hút với màu đỏ thẫm, cánh hoa dày, đường kính hoa thường từ - 12 cm Khơng có hình dáng đẹp, hồng Nhung cịn có hương thơm dịu dàng, quyến rũ, tạo cảm giác lưu luyến khó phai cho người thưởng thức Hoa hồng Nhung từ lâu biểu tượng tình yêu nồng nhiệt, lãng mạn, vĩnh cửu qua nhiều câu chuyện, tích hay Vẻ đẹp đằm thắm, dịu dàng lồi hoa cịn trở thành biểu trưng cho người gái mang vẻ đẹp quyến rũ, sang trọng Vì vào dịp lễ trọng đại năm, hồng Nhung thường chàng trai lựa chọn dành tặng nửa mình, tặng người thân yêu gia đình với mong muốn gửi trao thông điệp yêu thương [19] Về kinh tế, hoa hồng loại hoa mang lại lợi nhuận kinh tế cao [4] Phương pháp giâm, chiết ghép cần nhiều công sức, kỹ thuật thời gian mà hiệu thấp Ngồi ra, phương pháp khơng nâng cao chất lượng giống, chưa tạo bệnh thường làm tính khiết giống [1] Trong vài năm gần đây, nhân giống in vitro, với lợi khả cung ứng nguồn bệnh đồng chất lượng, áp dụng nhiều đối tượng trồng quan trọng, có hoa hồng [11] Đây loại hoa thương mại quan trọng Nghiên cứu trình nhân giống hoa hồng kỹ thuật ni cấy mơ chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố, kiểu gen, thành phần môi trường, điều kiện vật lý bình ni cấy phịng ni cấy [15] Vùng trồng hoa Mê Linh vùng trồng hoa có truyền thống kinh nghiệm nước ta Hiện nay, huyện Mê Linh có 1.294 đất sản xuất hoa, diện tích canh tác hoa hồng chủ yếu (chiếm 93,4%), ngồi cịn lại hoa cúc, hoa loa kèn, hoa ly,…Hoa hồng trồng với diện tích khoảng 1.152 chủ yếu xã Mê Linh xã Văn Lâm, xã Đại Thịnh [18] Tuy nhiên giống hoa hồng chủ yếu nhân giống Hình 3.1 Quy trình tạo vật liệu khởi đầu cho nhân giống in vitro giống hoa hồng Nhung a) Cây hoa hồng Nhung thực địa b) Đốt thân hoa hồng (chứa chồi nách) dùng để khử trùng bề mặt c) Đốt thân hoa hồng sau khử trùng bề mặt nuôi môi trường MS 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro a Tái sinh chồi in vitro từ đốt thân Mẫu cấy sau khử trùng cho vào môi trường ni cấy khởi động với mơi trường có bổ sung BA với nồng độ khác (0 ÷ 1,5 mg/l) nhằm tạo môi trường cho chồi tái sinh phát triển tốt Kết thu được thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi in vitro giống hoa hồng Nhung (sau tuần) Công thức BA (mg/l) Đặc điểm chồi 0,0 Chồi ngủ phát triển chậm, sớm bị hoại tử 0,5 Chồi nhỏ, xanh nhạt, phát triển chậm 21 Công thức BA (mg/l) Đặc điểm chồi 1,0 Chồi mập, màu xanh đậm, phát triển nhanh 1,5 Chồi mập, màu xanh nhạt, phát triển chậm Kết cho thấy bổ sung BA vào môi trường nuôi cấy đặc điểm chồi tái sinh có khác biệt Khi ni cấy mơi trường đối chứng (MS) cho thấy chồi ngủ phát triển chậm, sớm bị hoại tử (hình 3.2a) Các cơng thức có bổ sung BA có tác dụng kích thích phát triển mắt ngủ (hình 3.2b, c, d) Với cơng thức bổ sung 0,5 mg/l BA chồi tái sinh nhỏ, có màu xanh nhạt, phát triển chậm Chồi tái sinh màu xanh đậm, phát triển nhanh công thức có bổ sung 1,0 mg/l BA Tuy nhiên tăng nồng độ BA lên 1,5 mg/l chồi tái sinh màu xanh nhạt, phát triển chậm chứng tỏ BA có tác dụng kích thích chồi ngủ phát triển nhiên nồng độ tăng cao lại ức chế phát triển chồi ngủ Như vậy, cơng thức thích hợp cho tái sinh chồi hoa hồng in vitro công thức MS bổ sung 30 g/l sucrose, g/l agar bổ sung mg/l BA Chồi tái sinh nguyên liệu cho thí nghiệm Một số nhà khoa học khác nghiên cứu khả tái sinh chồi hoa hồng in vitro từ đốt thân Nguyễn Thị Phương Thảo (2015) nghiên cứu hoa hồng cơm (Rosa sericea Lindl.) công bố môi trường tối ưu cho bật chồi đoạn thân hoa hồng môi trường MS bổ sung 2,0 mg/l BA kết hợp với 0,05 mg/l α- NAA Bùi Thị Thu Hương cs., (2017) cho môi trường tối ưu cho tái sinh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa (Rosa gallica L.) MS + 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l Kinetin + 30 g/l sucrose + 6,3 g/l agar (pH 5,8) Năm 2018, Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ nghiên cứu hoa hồng tỷ muội (Rosa chinensis Jacq Var minima Redh) đưa mơi trường ni cấy tạo chồi thích hợp mơi trường MS có bổ sung mg/l BA, 0,5 mg/l Kinetin, 0,5 mg/l than hoạt tính, 30 g/l sucrose 22 Hình 3.2 Kết tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa hồng sau 14 ngày a, b, c, d: đốt thân cấy môi trường MS0, MS0+BA 0,5, MS0+BA 1,0, MS0+BA 1,5 b Ảnh hưởng sucrose agar đến trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro Các chồi tái sinh đem cắt thành đoạn dài ÷ cm cấy mơi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) có bổ sung 20 ÷ 30 g/l sucrose kết hợp với 3,5 ÷ g/l agar bổ sung mg/l BA Sau tuần ni cấy, chúng tơi nhận thấy chồi in vitro có phản ứng khác môi trường Kết thu bảng 3.3 23 Bảng 3.3 Ảnh hưởng agar, sucrose đến trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro MS, BA 1,0 mg/l thức Chiều cao chồi/mẫu (cm) Số lá/mẫu 3,40ab 2,00a 3,80ab 3,80a 1,70ab 4,20a (pH 5,8) Công Saccarozơ (g/l) Số chồi/mẫu Agar (g/l) 20 25 30 3,20ab 1,34b 3,20abc 20 3,00abc 1,52ab 3,20abc 25 2,80bc 1,50ab 3,80ab 30 2,20c 1,34b 3,00bc 20 2,60bc 1,38b 3,40abc 25 2,80bc 1,14b 3,20abc 30 3,40ab 1,14b 2,60c LSD0.05 0,82 0,48 0,96 3,5 5,0 7,0 Với thí nghiệm, cột chữ a,b,c… thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α = 0,05 Trong nghiên cứu này, việc bổ sung agar với nồng độ khác có ảnh hưởng đến trình sinh trưởng chồi tái sinh tiêu số chồi/mẫu, chiều cao chồi, số lá/mẫu Công thức MS chứa 1,0 mg/l BA, 25 g/l sucrose 3,5 g/l agar cho kết nhân nhanh chồi tốt nhất, thể qua tiêu số chồi/mẫu đạt 3,80, chiều cao chồi đạt 1,70 cm số lá/chồi đạt 4,20 Công thức MS chứa 1,0 mg/l BA, 30 g/l sucrose 5,0 g/l agar cho kết nhân nhanh chồi thấp nhất, thể qua tiêu số chồi/mẫu đạt 2,20, chiều cao chồi đạt 1,34 cm số lá/chồi đạt 3,00 24 Với công thức MS bổ sung g/l agar kết hợp với 20 - 30 g/l sucrose (CT4 - 6) số chồi/mẫu giảm dần từ 3,0 chồi/mẫu (20 g/l sucrose) xuống 2,8 chồi/mẫu (25 g/l sucrose) 2,2 chồi/mẫu (30 g/l sucrose) Đối với công thức MS bổ sung g/l agar kết hợp với 20 - 30 g/l sucrose (CT - 9) số chồi/mẫu tăng lên từ 2,6 chồi/mẫu (20 g/l sucrose) đến 2,8 chồi/mẫu (25 g/l sucrose) 3,4 chồi/mẫu (30 g/l sucrose) nhiên chiều cao chồi số lá/mẫu lại giảm dần với chiều cao chồi giảm từ 1,38 cm (20 g/l sucrose) xuống 1,14 cm (25 30 g/l sucrose), số lá/mẫu giảm từ 3,4 lá/mẫu (20 g/l sucrose) xuống 3,2 lá/mẫu (25 g/l sucrose) 2,6 lá/mẫu (30 g/l sucrose) (bảng 3.3, hình 3.3) 25 Hình 3.3 Ảnh hưởng agar, sucrose đến trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro a-c: tương ứng với CT 1-3 (môi trường chứa 20, 25 30 g/l saccarozơ + 3,5 g/l agar) d-f: tương ứng với CT 4-6 (môi trường chứa 20, 25 30 g/l saccarozơ + 5,0 g/l agar) g-i: tương ứng với CT 7-9 (môi trường chứa 20, 25 30 g/l saccarozơ + 7,0 g/l agar) 26 Như vậy, môi trường bán lỏng (lượng agar 3,5 g/l) phù hợp với giai đoạn nhân nhanh chồi hoa hồng Nhung Điều giải thích mẫu dễ dàng hấp thụ dinh dưỡng, chất điều hòa sinh trưởng môi trường bán lỏng [12] c Ảnh hưởng than hoạt tính đến q trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro Theo số nghiên cứu, việc bổ sung than hoạt tính có tác dụng tăng sinh trưởng mẫu hoa hồng nuôi cấy mô [12, 15] chúng tơi bổ sung than hoạt tính vào mơi trường nhân nhanh với nồng độ 0,1 ÷ 0,4 mg/l than hoạt tính cho thấy phản ứng chồi hoa hồng khác công thức thể bảng 3.4 Bảng 3.4 Ảnh hưởng than hoạt tính đến đến q trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro Môi trường MS Công thức BA (mg/l) C hoạt tính (mg/l) Số chồi/mẫu Chiều cao chồi (cm) Số lá/mẫu 1,0 0,1 3,20ab 1,90b 3,20b 1,0 0,2 3,60a 2,70a 5,20a 1,0 0,3 2,60bc 1,84b 4,00ab 1,0 0,4 2,40c 1,90b 4,20ab 0,70 0,61 1,18 LSD0,05 Với thí nghiệm, cột chữ a,b,c… thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α = 0,05 Kết cho thấy bổ sung than hoạt tính vào mơi trường nuôi cấy làm cho chồi hoa hồng tăng lên chiều cao Công thức bổ sung 0,1 mg/l than hoạt tính chiều cao đạt 1,9 cm, cơng thức bổ sung 0,2 mg/l than hoạt tính chiều cao đạt 2,7 cm, công thức bổ sung 0,3 mg/l than hoạt tính chiều cao đạt 1,84 cm, cơng thức bổ sung 0,4 mg/l than hoạt tính chiều cao đạt 1,9 cm cao so với công thức tương tự (MS + 3,5 g/l agar + 25 g/l sucrose + 1mg/l 27 BA) khơng bổ sung than hoạt tính (1,7 cm) (bảng 3.3, bảng 3.4) Trong cơng thức bổ sung 0,2 mg/l than hoạt tính) cho chiều cao chồi lớn (đạt 2,70 cm), số đạt 5,2 lá/mẫu, cơng thức bổ sung 0,3 mg/l than hoạt tính cho chiều cao chồi thấp 1,84 cm, số đạt 4,0 lá/mẫu (bảng 3.4, hình 3.4) Tóm lại, mơi trường MS bổ sung 3,5 g/l agar, 25 g/l sucrose, 1,0 mg/l BA bổ sung 0,2 mg/l than hoạt tính môi trường tốt cho tăng chiều cao chồi hoa hồng in vitro Hình 3.4 Ảnh hưởng than hoạt tính đến đến q trình nhân nhanh chồi hoa hồng in vitro a,b,c,d: tương ứng với CT 1, 2, 3, 28 3.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh Chồi in vitro cứng cáp ni cấy mơi trường ½ MS có bổ sung 3,5 g/l agar, 25 g/l sucrose có bổ sung NAA với nồng độ khác (0 ÷ 1,0 mg/l) để hình thành rễ cho thấy tỷ lệ rễ, số rễ/chồi chiều dài rễ công thức khác khác Kết thu bảng 3.5 Bảng 3.5 Ảnh hưởng NAA đến trình rễ - tạo hoa hồng in vitro hồn chỉnh Cơng thức NAA (mg/l) Tỷ lệ rễ (%) Số rễ/chồi Chiều dài rễ (cm) 0,00 0,00c 0,00d 0,00c 0,25 41,75b 4,62a 2,00b 0,50 67,50a 2,25b 3,00b 0,75 41,50b 1,37c 4,75a 1,00 0,00c 0,00d 0,00c 6,54 0,56 1,17 LSD0,05 Với thí nghiệm, cột chữ a,b,c… thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α = 0,05 Hầu hết chồi hoa hồng ni cấy mơ có khả rễ cơng thức có bổ sung NAA (0,25; 0,50 0,75 mg/l), ngoại trừ CT (NAA 1,0 mg/l), Trong đó, CT cho tỷ lệ hình thành rễ cao nhất, đạt 67,50%; CT cho số rễ/chồi tốt nhất; đạt 4,62; CT cho chiều dài rễ tốt nhất; đạt 4,75 (hình 3.5 bảng 3.5) Theo nghiên cứu số nhà khoa học khác Naphaporn NakUdom cs., (2009) cho thấy mơi trường thích hợp cho rễ hoa hồng Rosa hybrid L cv “Perfume Delight” ¼ MS khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng cho tỷ lệ hình thành rễ 70,05% Trong nghiên cứu Bùi Thị Thu Hương cs., (2017), cho mơi trường ¼ MS mơi trường thích hợp cho rễ giống hoa hồng cổ Sapa (Rosa gallica L.) với 29 tỷ lệ rễ đạt 98,89% sau tuần nuôi cấy Theo Nguyễn Thị Kim Thanh (2005), hình thành rễ hoa hồng đạt hiệu tốt môi trường chứa mg/l NAA mg/l IBA cho tỷ lệ rễ 60% Như vậy, môi trường thích hợp cho rễ hoa hồng Nhung ½ MS, agar 3,5 g/l, 25 g/l đường saccarozơ NAA 0,5 mg/l Hình 3.5 Ảnh hưởng NAA đến trình rễ - tạo hoa hồng in vitro hoàn chỉnh a Ra rễ CT (NAA 0,25), b Ra rễ CT (NAA 0, 50), c Ra rễ CT (NAA 0,75) 3.4 Rèn luyện in vitro thích nghi điều kiện tự nhiên Trong nghiên cứu này, in vitro trồng lên giá thể khác nhau, che đậy túi nilon (hình 3.5a), sau ngày bắt đầu mở dần túi nilon cho thích nghi dần với điều kiện tự nhiên Kết cho thấy tỷ lệ sống sót sau 14 ngày rèn luyện đạt 66,2; 60,0 75,5 (%) tương ứng với giá thể đất + trấu hun (1:1), đất phù sa giá thể TS1 (hình 3.5 b, c, d) Đồng thời in vitro giá thể TS1 có màu xanh đậm, phát triển nhanh, giá thể đất + trấu hun (1:1) có màu xanh nhạt, phát triển chậm, cịi cọc, giá thể đất phù sa có màu xanh nhạt hơn, phát triển chậm Ở giống hồng khác nhau, tỷ lệ sống sót cho giai đoạn rèn luyện giá thể khác Cụ thể theo kết nghiên cứu Saklani 30 Kumud cs., (2015), giá thể rèn luyện chứa cát đất vườn với tỷ lệ 1:1 cho thấy tỷ lệ sống sót chồi hoa hồng in vitro cao đạt 60% Như vậy, giá thể TS1 giá thể phù hợp cho rèn luyện hoa hồng Nhung in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Hình 3.6 Rèn luyện hoa hồng cấy mơ thích nghi với điều kiện tự nhiên a, b, c: rèn luyện giá thể đất+trấu hun (1:1), đất phù sa, giá thể TS1 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Chất khử trùng thích hợp cho đốt thân hoa hồng Nhung khử trùng bề mặt cồn 70% 10 phút, xử lý tiếp dung dịch javen 5% phút cho tỷ lệ mẫu sống đạt 86,95% - Môi trường phù hợp để tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa Hồng nhung MS, 30 g/l sucrose, 7g/l agar, mg/l BA, chồi tái sinh có màu xanh đậm, phát triển nhanh - Mơi trường thích hợp để nhân nhanh chồi in vitro MS, 1,0 mg/l BA, 25 g/l sucrose 3,5 g/l agar (pH 5,8), bổ sung 0,2 mg/l than hoạt tính thể qua tiêu số chồi/mẫu đạt 3,60; chiều cao chồi đạt 2,70 cm số lá/chồi đạt 5,20 - Mơi trường ½ MS, 25 g/l saccarozơ 3,5 g/l agar, bổ sung NAA (0,5 mg/l) thích hợp cho tạo rễ in vitro, tỷ lệ hình thành rễ cao nhất, đạt 67,50% - Cây trồng giá thể hỗn hợp TS cho tỷ lệ sống sót cao 75,5 (%) sau tuần rèn luyện Kiến nghị - Thực nghiên cứu đánh giá sinh trưởng phát triển hoa hồng in vitro đưa vườn ươm 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Việt Chương, Lâm Thị Mỹ Hương (2006), Kỹ thuật giâm, chiết, ghép hoa hồng, NXB Thành phố Hồ Chí Minh, 36 trang Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc, Nguyễn Quang Thạch (2002), Cây hoa hồng Kỹ thuật trồng, NXB Lao động xã hội Đồng Huy Giới, Dương Thị Mến (2017), “Nghiên cứu sử dụng chế phẩm nano nuôi cấy mơ hoa hồng cổ Sapa”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam, (78): 59 – 65 Bùi Thị Thu Hương, Đồng Huy Giới, Nguyễn Thị Trang, Hồ Thị Quyên (2017), “Nhân nuôi Hồng cổ Sapa (Rosa gallica L.) kỹ thuật nuôi cấy mô invitro”, Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 7, trang 1229 – 1235 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Mai Thị Ngoan (2009), “Đánh giá đặc điểm sinh trưởng, phát triển số giống hoa Hồng (Rosa indica L.) nhập nội ảnh hưởng biện pháp cắt tỉa, xử lý chế phẩm đến suất chất lượng hoa Hồng VR41 Gia Lâm – Hà Nội”, Luận văn Thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, Nguyễn Quang Thạch (2000), “Trồng hoa xuất miền Bắc, hội thách thức”, Tạp chí Khoa học Tổ quốc, số 12 Nguyễn Thị Kim Thanh (2005), “Nhân giống hoa hồng kỹ thuật ni cấy invitro”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, 1: 39 – 41 Nguyễn Thị Phương Thảo, Đặng Quang Bích, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Thùy Linh, Phạm Thị Thu Hằng, Đặng Thị Thanh Tâm, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Lâm Hải, Nguyễn Thanh Hải (2015), “Nhân nhanh cảm ứng hoa invitro hoa hồng cơm (Rosa sericea Lindl.)”, Tạp chí Khoa học Phát triển, 13 (4): 606 – 613 Tiếng nước 33 10 A A Asadi, C Vedadi, M, Rahimi, B Naserian (2009), “Effect of plant growth hormones on root and shoot regeneration in Rose (Morrasia) under in vitro conditions”, Bioscience Research, (1): 40 – 45 11 Dhawan V, Bhojwani SS, (1986), Micropropagation in crop plants, Glimpses Plant Res, 7:1 – 75 12 Kumud S, Hem1 P, Vijay R (2015), “Micropropagation of rose cultivars: biotechnological application to floriculture”, J Environ Res Develop, 10 (01), 40 – 46 13 Naphaporn Nak-Udom, Kantamaht Kanchanapoom, Kamnoon Kanchanapoom (2009), “Micropropagation from cultured nodal explants of rose (Rosa hybrida L cv ‘Perfume Delight’)”, Songklanakarin Journal of Science and Technology, 31 (6): 583 – 586 14 Omidi M, Yadollahi A, Eftekhari M (2016), “Comparative study of Rosa damascenes Mill And R Gallica micro-propagation”, Biological Forum – An International Journal, (1): 135 -145 15 Pati P.K, Rath S.P, Sharma M, Sood A, Ahuja P.S (2006), In vitro propagation of rose – a review, Biotechnology Advances, 24: 94 – 114 16 Rashida S., Yasmin S and Aleem R (2003), “In vitro propagation of Rosa Indica”, Pakistan Journal of Biological Sciences, (9): 826 – 830 17 S K Senapati, G R Rout (2008), “Study of culture conditions for improved micropropagation of hybrid rose”, Hort Sci (Prague), 35 (1): 27 – 34 Tài liệu internet 18 https://www.vietnamplus.vn/ha-noi-phat-trien-thuong-hieu-hoa-hong-ganvoi-vung-dat-me-linh/291529.vnp 19 https://hoadepviet.com/cay-hoa-hong-nhung-hong-truyen-thong-cuanguoi-viet/ 20 https://nongnghiep.vn/benh-hai-cay-hoa-hong-bien-phap-phong-trupost62461.html 21 https://caytrongvatnuoi.com/cac-loai-hoa/san-xuat-hoa-o-viet-nam/ 22 https://caytrongvatnuoi.com/cac-loai-hoa/gia-tri-va-y-nghia-cua-hoahong/ 34 PHỤ LỤC Một số hình ảnh trình nuôi cấy Đốt thân hoa hồng Nhung sau tuần nuôi cấy Chồi hoa hồng môi trường MS bổ sung 3,5 g/l agar, 25 g/l sucrose bổ sung mg/l BA (pH 5,8) ... chọn đề tài ? ?Xây dựng quy trình nhân giống hoa hồng Nhung kỹ thuật ni cấy mơ” Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu - Mục đích: Xây dựng quy trình nhân giống hoa hồng Nhung kỹ thuật nuôi cấy mô phục vụ... KHOA SINH – KTNN ====== NGƠ THỊ QUỲNH XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA HỒNG NHUNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chun ngành: Sinh lý học thực vật Người hướng dẫn khoa... với điều kiện tự nhiên Ý nghĩa khoa học thực tiễn - Ý nghĩa khoa học: + Kết đề tài góp phần xây dựng quy trình ni cấy in vitro nhân giống hoa hồng Nhung giống hoa hồng khác + Cung cấp tài liệu