Phân lập ASPERGILLUS FLAVUS trên bắp

Luận văn tốt nghiệp

B GIÁO DC VÀ ĐÀO TO TRƯNG ĐI HC NÔNG LÂM THÀNH PH H CHÍ MINH KHÓA LUN TT NGHIP PHÂN LP ASPERGILLUS FLAVUS TRÊN BP VÀ KHO SÁT KH NĂNG SINH AFLATOXIN CA CÁC CHNG PHÂN LP ĐƯC H và tên sinh viên : TRN CÚC PHƯƠNG Ngành : Thú Y Lp : DH03TY Niên khóa : 2003 – 2008 Tháng 09/2008 i PHÂN LP ASPERGILLUS FLAVUS TRÊN BP VÀ KHO SÁT KH NĂNG SINH AFLATOXIN CA CÁC CHNG PHÂN LP ĐƯC Tác gi TRN CÚC PHƯƠNG Khóa lun ñưc ñ trình ñ ñáp ng yêu cu cp bng Bác s ngành Thú Y Giáo viên hưng dn TS. LÊ ANH PHNG ThS. NGUYN TH THU NĂM Tháng 9/2008 ii LI CM ƠN Tôi xin chân thành cm ơn • Gia ñình là ch da, là ngun ñng lc giúp tôi hoàn thành khóa hc. • Ban ch nhim khoa Chăn Nuôi - Thú Y, cùng toàn th quý thy cô trưng Đi hc Nông Lâm TP. HCM ñã tn tình ch dy, truyn ñt kin thc cho tôi làm hành trang khi ra trưng. • TS. Lê Anh Phng và ThS. Nguyn Th Thu Năm ñã tn tình ch bo và hưng dn tôi trong su t thi gian thc hin ñ tài. • Quý thy cô thuc b môn Vi sinh ñã to ñiu kin cho tôi hoàn thành ñ tài này. • Các bn lp Thú Y 29, thy ch nhim Lê H!u Ngc ñã ñng viên, chia s" và giúp ñ# tôi trong su t thi gian hc tp và thc hin ñ tài. Sinh viên thc hin Trn Cúc Phương iii TÓM TT LUN VĂN Đ tài: “Phân lp Aspergillus flavus trên b$p và kho sát kh năng sinh aflatoxin ca các chng phân lp ñưc” thc hin ti Phòng Vi sinh, Khoa Chăn Nuôi Thú Y, trưng Đi Hc Nông Lâm, Tp. H Chí Minh trong thi gian t% tháng 02/2008 ñn tháng 06/2008. Chúng tôi kho sát 30 mu nguyên liu (b$p) ñưc ly ngu nhiên & c'a hàng thc ăn gia súc và tri chăn nuôi tư nhân: • Đm t(ng s khu)n lc nm m c trên môi trưng thch khoai tây. • Đm t(ng s khu)n lc nghi ng A. flavus trên môi trưng AFPA. • Đo kích thưc khu)n lc trên môi trưng Czapek. • Đnh tính kh năng sinh aflatoxin trên môi trưng thch nưc c t d%a. • Đnh lưng aflatoxin bng phương pháp s$c ký lp m*ng. Và thu ñưc kt qu như sau: - T+ l các mu b$p b nhim nm m c là 100% vi TSKL nm m c trung bình trong 1 g b$p là 17,38 x 10 4 . - T+ l mu b$p nghi ng nhim A. flavus là 100% vi TSKL nghi ng là A. flavus trung bình trong 1 g b$p 3,24 x 10 4 . - Kích thưc trung bình ca khu)n lc ngày th 3, th 5, th 7 ln lưt là 30,18 mm, 50,72 mm, 68,35 mm. - Sau khi phân lp, thu ñưc 60 chng nghi ng là A. flavus. - Sau khi ñnh danh có 100% chng phân lp ñu là A. flavus. - Có 23 trong 60 chng A. flavus có kh năng phát quang trên môi trưng thch nưc c t d%a (chim 38,33%). - T% nh!ng chng phát quang trên môi trưng thch nưc c t d%a, chúng tôi chn ra 5 chng phát quang vào ngày th 2 (chng sinh ñc t mnh) ñ kho sát kh năng sinh ñc t trên môi trưng tm go. Trong ñó, chng ñt hàm lưng AFB1 cao nht là 80645 ppb (chng 33) và thp nht là 81 ppb (chng 5). iv MC LC Trang Trang ta i Li cm ơn ii Tóm t$t lun văn iii Mc lc iv Danh sách các ch! vit t$t . vi Danh sách các bng vii Danh sách các biu ñ . viii Danh sách các hình ix Chương 1: M ĐU 1 1.1. Đ,t vn ñ 1 1.2. Mc ñích 2 1.3. Yêu cu 2 Chương 2: TNG QUAN 3 2.1. Nm m c và ñc t nm m c 3 2.1.1. Nm m c .3 2.1.2. Đc t nm m c (mycotoxin) 3 2.2. Nm m c A. flavus .6 2.2.1. Phân loi 6 2.2.2. Đ,c ñim hình thái 6 2.2.3. Đ,c ñim nuôi cy .7 2.2.4. Đ,c dim sinh thái .7 2.3. Đc t aflatoxin và bnh do aflatoxin gây ra .7 2.3.1. Đc t aflatoxin .7 2.3.2. Các bnh do aflatoxin gây ra (aflatoxicosis) .11 2.4. Phương pháp phát hin và ño lưng aflatoxin .13 2.4.1. Phương pháp sinh vt hc .13 2.4.2. Phương pháp lý hóa .14 2.4.3. Phương pháp min dch hc 15 2.5. Gii pháp phòng và ch ng ñc t nm m c .15 v Chương 3: NI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU 18 3.1. Thi gian và ña ñim thc hin ñ tài .18 3.2. Vt liu .18 3.3. Ni dung .19 3.4. Phương pháp nghiên cu .19 3.5. Ch tiêu kho sát .25 3.6. Phương pháp x' lý s liu .25 Chương 4: KT QU VÀ THO LUN .26 4.1. Đm t(ng s khu)n lc nm m c và t(ng s khu)n lc nhóm A. flavus .26 4.2. Phân lp – ñnh danh các chng A. flavus t% b$p .28 4.3. Kho sát kh năng sn sinh aflatoxin ca các chng A. flavus ñã ñnh danh 34 Chương 5: KT LUN VÀ Đ NGH .39 5.1. Kt lun 39 5.2. Đ ngh .39 TÀI LIU THAM KHO 41 PH LC 45 vi DANH SÁCH CÁC CH VIT TT Vit t$t Nguyên ch! Nghĩa A. flavus Aspergillus flavus AF aflatoxin AFPA Aspergillus flavus and parasiticus CYA Czapek Yeast extract agar ctv cng tác viên FAO Food and Agriculter Organization T( chc lương nông liên hip qu c IARC International Agency for Reseach of Cancer Cơ quan qu c t nghiên cu v ung thư LD – 50 Lethal dose - 50 Liu gây cht 50% t(ng ñàn ppb Part per billion Phn t+ TSKL T(ng s khu)n lc UV Ultra violet Tia cc tím vii DANH SÁCH CÁC BNG Trang Bng 2.1: Đc t nm, ngun g c và ñ ñc hi có th b nhim .5 Bng 2.2: Mt s tính cht lý hóa ca các AF quan trng .9 Bng 2.3: LD-50 ca aflatoxin B1 cho u ng mt ln duy nht trên ñng vt .12 Bng 2.4: Mc AFB1 t i ña trong thc ăn chăn nuôi & Vit Nam 13 Bng 3.1: Bng b trí ly mu .19 Bng 4.1: TSKL nm m c và TSKL nhóm A. flavus trong 1 g b$p 26 Bng 4.2: TSKL nm m c và TSKL nhóm A. flavus trong 1 g b$p & tri chăn nuôi tư nhân và c'a hàng thc ăn gia súc .27 Bng 4.3: T+ l phân lp các chng nghi ng A. flavus t% các mu b$p .29 Bng 4.4: Màu s$c và ñ,c ñim hình thái ca khu)n lc A. flavus 30 Bng 4.5: Đưng kính ca các chng A. flavus theo ngày nuôi cy .31 Bng 4.6: Đăc ñim hình thái các thành phn si nm 32 Bng 4.7: Kích thưc các thành phn ca si nm .32 Bng 4.8: T+ l các chng A. flavus phát huỳnh quang trên môi trưng thch nưc c t d%a theo thi gian nuôi cy 34 Bng 4.9: Hàm lưng AF khi nuôi cy các chng A. flavus trên môi trưng tm go.37 viii DANH SÁCH CÁC BI U Đ Trang Bi!u ñ# 4.1: T+ l B/A gi!a TSKL nm m c và TSKL nhóm A. flavus 28 Bi!u ñ# 4.2: T+ l các chng A. flavus phát huỳnh quang trên môi trưng thch nưc c t d%a 35 Bi!u ñ# 4.3: Hàm lưng AF thu ñưc khi nuôi cy các chng A. flavus trên môi trưng tm go 37 ix DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Quá trình sinh trư&ng và sinh sn ñc t ca nm m c .4 Hình 2.2: Hin tưng nhim ñc liên quan vi các mycotoxin .4 Hình 2.3: Cu to ca A. flavus .7 Hình 2.4: Công thc phân t' ca các AF .8 Hình 3.1: Chu)n b mu .20 Hình 4.1: Khu)n lc nghi ng A. flavus trên môi trưng AFPA .26 Hình 4.2: Gi! gi ng khu)n lc nghi ng A. flavus trong môi trưng CYA 30 Hình 4.3: A. flavus trên môi trưng Czapek 31 Hình 4.4: A. flavus dưi kính hin vi .34 Hình 4.5: A. flavus trên môi trưng thch nưc c t d%a 35 Hình 4.6: Các chai cha môi trưng tm go nuôi cy A. flavus 36 . Phân lp Aspergillus flavus trên b$p và kho sát kh năng sinh aflatoxin ca các chng phân lp ñưc”. 2 1.2. M'c Đích Tìm hiu tình hình nhim Aspergillus. Long Khánh. - Phân lp các chng Aspergillus flavus t% các mu b$p. - Kho sát kh năng sinh aflatoxin ca các chng Aspergillus flavus phân lp ñưc.